專利名稱:動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的制作方法
本發(fā)明涉及在體內(nèi)促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，更具體地講，是關(guān)于一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其生產(chǎn)方法以及增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法。
過去，通過在動(dòng)物飼料中加入分解代謝的甾族物質(zhì)，如雌激素已經(jīng)獲得了在動(dòng)物，特別是家畜中的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。最近，已開始不贊成這種做法了，不受歡迎之處在于大量甾類化合物堆積在動(dòng)物組織中。結(jié)果產(chǎn)生不良影響，如引起食用喂以大量雌激素的小雞的女孩胸部發(fā)育。
另一種普遍的做法是將抗生素?fù)饺雱?dòng)物飼料。這有助于控制機(jī)會(huì)細(xì)菌感染，使牲畜自始至終保持良好的健康狀況，隨之發(fā)生體重增加。這種做法已經(jīng)受到衛(wèi)生部門的密切監(jiān)視，并且由于促進(jìn)抗生素抗性微生物菌株的生產(chǎn)而遭到反對(duì)。由于用作飼料添加劑的抗生素通常被建議治療人類疾病，所以是特別值得關(guān)注的。
已進(jìn)一步提出的建議是用各種消化酶作為飼料添加劑促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。這些酶有助于在腸內(nèi)使粗飼料分解，從而使從定量給定的食物中得到的營(yíng)養(yǎng)物的量增加，超過在正常消化條件下可得到的營(yíng)養(yǎng)物。
將酶摻入飼料的缺點(diǎn)是酶常常會(huì)變性并在通過胃或瘤胃時(shí)失活，因?yàn)樵谖富蛄鑫钢杏龅降膒H是極端的。由于酶對(duì)pH，溫度，輔助因子等有特定的要求以保持其生物學(xué)活性，所以最適值的偏差可導(dǎo)致酶活性的降低或酶的不可逆失活。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在動(dòng)物飼料中加入消化酶在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)方面一般已不起作用。此外，由于只有一小部分摻入的酶在經(jīng)過瘤胃或胃后保持活性，所以需要大量的酶，這樣就使得這種處理方法不夠經(jīng)濟(jì)。
澳大利亞專利516，072號(hào)提出通過使消化酶與粘合系統(tǒng)，穩(wěn)定劑，和崩解劑混合，然后用腸衣包被該混合物使消化酶免于在胃中失活。腸衣可經(jīng)過胃，此后其在十二指腸的堿性環(huán)境中分解。粘合劑和崩解劑促使酶迅速釋放到十二指腸中。這一提議的缺點(diǎn)是在有機(jī)溶劑，如異丙醇和二氯甲烷存在下，消化酶在與粘合劑和崩解劑混合時(shí)部分失活。此外，加腸衣的消化酶也被有機(jī)溶劑部分失活。根據(jù)澳大利亞專利516，072號(hào)生產(chǎn)的顆粒粒度一般不能令人滿意，這是由于防止均勻分布于飼料中而粒度大之故。
因此對(duì)酶促的動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的一個(gè)要求就是應(yīng)克服一個(gè)或多個(gè)上述缺點(diǎn)。
本發(fā)明試圖提供一種有效地利用飼料成分的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
根據(jù)本發(fā)明所提供的生長(zhǎng)促進(jìn)劑包括具有一個(gè)核心的微粒，該核心由選自下列的一種或多種酶組成(ⅰ)蛋白水解酶(ⅱ)糖水解酶(ⅲ)脂肪水解酶，或(ⅳ)以固定化形式存在的纖維水解酶，該核心用一水溶性薄膜囊包住，并包上含有一種堿溶而酸不溶性聚合物，或高分子量聚合物的腸衣，聚合物的結(jié)構(gòu)可用能被腸液溶解的脂肪酸或其它物質(zhì)的通道所取代或含有這些通道。
“固定化形式”一詞是指被固定在膠聯(lián)物內(nèi)的，封入半透膜內(nèi)的，吸附到吸附劑上的或結(jié)合到螯合劑上的那些酶。
例如，可用下述任何一種方法使酶固定化(a)截留法將酶摻入到膠聯(lián)物的核心或封入半透膜內(nèi);
(b)交聯(lián)法用交聯(lián)劑進(jìn)行酶的分子間交聯(lián);或(c)載體結(jié)合法通過離子鍵和(或)共價(jià)鍵使酶與水不溶性物質(zhì)物理或化學(xué)結(jié)合。
進(jìn)行固定化要使酶保持其生物活性。
通過酶與膠凝劑在某些條件下混合可進(jìn)行酶在核心內(nèi)的截留，以便使酶滯留在所形成的凝膠基質(zhì)中。
膠凝劑的例子包括K-角叉藻聚糖，明膠，藻酸鹽，纖維素或其衍生物，或各種膠凝合成聚合物(如聚酰胺或脫乙酰殼多糖)。若使用吸附劑，則最好用細(xì)小的活性炭。
適用于酶固定化的螯合劑包括EDTA，它的鹽或衍生物，和高分子量親水聚合物(如聚丙烯酰胺)或能在水溶液或水(親水)溶劑中使其離子鍵離解的高分子量鹽類。
微粒的粒度最好為25～500μm，更好為50～350μm。
可用于本發(fā)明的酶的例子包括(1)蛋白水解酶組織蛋白酶a，b和c腺激肽釋放酶，蛋白酶K，枯草溶菌素，無花果蛋白酶，鏈道酶，木瓜蛋白酶，凝乳酶，胰蛋白酶，菠蘿蛋白酶和任何來自細(xì)菌，真菌，植物或動(dòng)物的蛋白酶，(2)糖水解酶淀粉酶，葡糖淀粉酶，麥芽糖酶，乳糖酶，β-葡聚糖酶，葡糖異構(gòu)酶，葡糖氧化酶，蔗糖酶和任何來自細(xì)菌，真菌，植物或動(dòng)物的糖水解酶，(3)脂肪水解酶胰脂肪酶，細(xì)菌和真菌脂肪酶，
(4)纖維水解酶纖維素酶，果膠酶，半纖維素酶。
封裝包括薄膜或機(jī)械屏障在核心上的沉積使每個(gè)微粒的核心能與其環(huán)境物理分離。該屏障或薄膜可溶于水溶液。可形成適宜的機(jī)械屏障的化合物的例子是明膠。
腸衣最好為乙酸鄰苯二甲酸纖維素。然而，任何其它的耐酸，堿溶性聚合物都可被利用。
甲基丙烯酸丁酯或其它高分子量聚合物都可用能被腸液溶解的硬脂酸或任何其它的脂肪酸衍生物(如C12-24脂肪酸)的通道所取代或含有這些通道。
消化酶在凝膠內(nèi)的固定化是一個(gè)最有利的特征。特別是，凝膠基質(zhì)限制變性劑進(jìn)入酶，變性劑如那些用于包被腸衣(一種酸不溶性，堿溶性包衣，如乙酸鄰苯二甲酸纖維素)的有機(jī)溶劑。因而大部分固定在凝膠基質(zhì)中的消化酶最終都具有催化活性。這將與在先有技術(shù)中所獲得的結(jié)果形成鮮明的對(duì)照，在先有技術(shù)中，當(dāng)包被腸衣時(shí)發(fā)生酶活性的重大喪失。
可使消化酶固定于其中的凝膠基質(zhì)是多孔和具滲透性的。因此，當(dāng)凝膠處于含水條件時(shí)，如處于十二指腸的環(huán)境下時(shí)，由于腸液進(jìn)入凝膠基質(zhì)而使凝膠溶脹，并且使具有催化活性的消化酶從凝膠中釋放出來。
按照本發(fā)明的做法可按50μm～500μm的等級(jí)生產(chǎn)具有極小粒度的微粒而不喪失消化酶的生物學(xué)活性。特別是，固定在凝膠中，或存在于能形成凝膠的溶液中的消化酶易于處理和加工，并且可經(jīng)過細(xì)心操作生產(chǎn)所需的小粒度微粒。例如，含有消化酶的凝膠可通過極小孔徑的篩網(wǎng)擠壓成形，或者可被冷凍干燥制成所需大小的顆粒。通過一個(gè)合適的噴嘴可噴灑存在于能形成凝膠的溶液中的消化酶形成細(xì)小的液滴，這些液滴可進(jìn)入使液滴形成凝膠的溶液，從而使消化酶固定在所形成的凝膠基質(zhì)中。用這種方法所形成的顆粒的大小可由噴嘴的孔徑大小和可使溶液霧化的壓力來決定。與之相比，這樣的結(jié)果不能用先有技術(shù)的方法得到。在先有技術(shù)中，僅使酶與不易受到上述處理的常規(guī)粘合劑混合生產(chǎn)出所需粒度的微粒。
小粒度的微粒是最合乎需要的，因?yàn)樗鼈兛删鶆蚍植加陲暳现?，并且由于微粒表面積的增加，使得酶迅速釋放出來。
在含有酶的核心周圍有一層水溶性屏障，可使酶不因在包被腸衣過程中使用有機(jī)溶劑而變性。由于前述的凝膠基質(zhì)的保護(hù)性，可有效地保持消化酶的生物學(xué)活性。而這就意味著可大大節(jié)約用來促進(jìn)生長(zhǎng)的消化酶的量。
本發(fā)明的生長(zhǎng)促進(jìn)劑使得pH敏感消化酶在胃或瘤胃中不會(huì)失活，而可在腸道內(nèi)起作用，特別是在十二指腸內(nèi)起作用。當(dāng)生長(zhǎng)促進(jìn)劑到達(dá)單胃動(dòng)物腸的堿性區(qū)域時(shí)，外面的包衣就會(huì)被溶解，或者脂肪酸通道被消化。然后腸液能夠到達(dá)水溶性包衣而使之發(fā)生降解。這樣就可使核心暴露，使之溶脹并釋放消化酶。
在反芻動(dòng)物中，高分子量聚合物(如具有脂肪酸通道的甲基丙烯酸丁酯)，最好是C12-24，允許生長(zhǎng)促進(jìn)劑通過瘤胃和胃。在腸區(qū)，特別是在十二指腸中，脂肪酸通道被脂肪酶所消化，因而可使水溶性包衣降解并使核心暴露，使之溶脹并釋放消化酶。在這方面應(yīng)該注意的是可按照本發(fā)明的做法獲得的小粒度的微?？纱偈刮⒘Ｍㄟ^瘤胃。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種通過給動(dòng)物服用有效量的如前所述的生長(zhǎng)促進(jìn)劑來增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法。
按上述方法處理的動(dòng)物表現(xiàn)出體重增加和提高的飼料利用率。
可用本發(fā)明方法處理的動(dòng)物包括豬，綿羊，山羊，馬，雞，鴨和其它家畜。
可給動(dòng)物喂食本發(fā)明的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
本發(fā)明的另一方面，提供了一種增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的組合物，該組合物含有如前所述的與可藥用，或可獸用的載體或賦形劑結(jié)合的動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑。例如，生長(zhǎng)促進(jìn)劑可與水，高嶺土，滑石，碳酸鈣，乳糖，氯化鈉，硫酸銅，硫酸鋅，硫酸亞鐵，硫酸鎂，碘化鉀，硫，氯化鉀，硒和(或)維生素(如生物素，膽堿，氯化物，煙酰胺，葉酸，及維生素A，D，E，K，B1，B2，B6和B12)一起服用。
根據(jù)本發(fā)明的再一方面，提供了一種促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的飼料組合物，該組合物含有與適當(dāng)?shù)膭?dòng)物飼料結(jié)合的前面提到的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
適當(dāng)?shù)膭?dòng)物飼料的例子包括下列一種或多種物質(zhì)玉米，小麥，麥麩，大豆粉，魚粉，禾草粉，脫脂乳，磷酸三鈣，麥芽，谷物，大米，魚精，乳清，苜蓿粉等等。
對(duì)摻入到生長(zhǎng)促進(jìn)劑中的不同的酶量(w/w)沒有嚴(yán)格限制。摻入到生長(zhǎng)促進(jìn)劑中的最適酶量不用做大量試驗(yàn)即可很快地確定。
按照本發(fā)明的做法，每千克生長(zhǎng)促進(jìn)劑最好含有下列酶蛋白酶2×103～2×107Vitapharm蛋白酶單位淀粉酶1×104～4.3×108Vitapharm淀粉酶單位脂肪酶0.5～5×103Vitapharm脂肪酶單位纖維素酶2×102～2×106Vitapharm纖維素酶單位。
更好的是，1千克本發(fā)明的生長(zhǎng)促進(jìn)劑含有蛋白酶2×105蛋白酶單位淀粉酶4.3×106淀粉酶單位脂肪酶5×101脂肪酶單位纖維素酶2×104纖維素酶單位。
每種上述酶均為食物級(jí)，如在“食物化學(xué)索引”，第111版所定義的。
上面所給出的酶單位均為Vitapharm標(biāo)準(zhǔn)單位，并可按照實(shí)施例3所述的方法計(jì)算。
根據(jù)本發(fā)明的再一方面，提供了一種動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的生產(chǎn)方法，該方法包括下列步驟(a)使選自下列一組酶的一種或多種酶固定化
(ⅰ)蛋白水解酶;
(ⅱ)脂肪水解酶;
(ⅳ)糖水解酶;
這些酶都在一個(gè)核心內(nèi)，(b)使固定化酶微粒化，(c)用一水溶性機(jī)械屏障囊包住這些微粒，和(d)用堿溶而酸不溶性聚合物，或高分子量聚合物包被步驟(c)的微粒，聚合物的結(jié)構(gòu)可被脂肪酸的間隙和通道所阻斷。
這些微粒最好噴涂上步驟(c)的水溶性機(jī)械屏障和步驟(d)的包衣。
在核心內(nèi)的固定化最好適用于在膠聯(lián)物中固定化的酶。
本發(fā)明的動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑可提高動(dòng)物的增重和提高飼料的利用率。此外，動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑可使動(dòng)物尸體的背部脂肪減少。這樣可提供便于銷售的較瘦的肉。
用下列非限制性實(shí)施例將進(jìn)一步描述和說明本發(fā)明。
實(shí)例1動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的制備方法(a)在65℃的溫度下，將2%～5%(w/v)的K-角叉藻聚糖與純化水混合，直至角叉藻聚糖完全溶解。然后將該溶液冷卻至50℃。
(b)在50℃下，將1%(w/v)的等酶活性(等酶活性是指能夠水解與其特定底物等重量的酶的量)的淀粉酶、纖維素酶、蛋白酶和脂酶溶解于等滲磷酸緩沖液(40% 0.067M Na H2PO4+60% 0.67M Na2HPO4)(pH6)。將這一溶液加到溶液(a)中，且在500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下均化15分鐘，然后將2～5%(w/v)在水中電離的鈣加到該溶液中，再以50轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速將產(chǎn)生的溶液進(jìn)一步均化一小時(shí)，然后冷卻到20℃，結(jié)果產(chǎn)生一凝膠和一水相。
(c)將產(chǎn)生的凝膠和水相冷卻到5℃，經(jīng)析、過濾后凍干。將凍干材料研磨成25～100微米大小的顆粒后，再用一種硬化劑〔如2.5%(w/w)的戊二醛或甲醛〕進(jìn)行洗滌。
或者，用3KP/cm2的壓力擠壓步驟(b)的凝膠相，通過50微米大小的孔進(jìn)行噴灑，且讓它滴落1～5米后進(jìn)入2.5%(w/w)的戊二醛或福爾馬林溶液，形成顆粒。
(d)過濾顆粒后用軟化劑(如甘油)洗滌。任何薄膜軟化劑均可使用。
(e)將產(chǎn)生的顆粒過濾、流化后，于40℃加熱干燥。
(f)于40℃下用1～2%(w/v)的白明膠水溶液噴灑涂布本步驟的顆粒。
(g)將一種耐酸、堿溶性涂料噴灑涂布顆粒，至其最終重量為120%(w/w)。該涂料包括6%(w/w)乙酸鄰苯二甲酸纖維素30%(w/w)異丙醇0.5%(w/w)蓖麻油其余均為丙酮(h)作為步驟(g)的替代步驟，是將一種大分子量聚合物(其結(jié)構(gòu)被脂肪酸的間隙或通道打斷)噴灑涂布顆粒，至其最終重量為105%(w/w)。該涂料包括3%甲基丙烯酸丁酯0.15%(w/w)鄰苯二甲酸二丁酯0.05%(w/w)硬脂酸其余均為乙基乙酸在步驟(a)中，K-角叉藻聚糖可被任何凝膠劑(如藻酸、白明膠或纖維素)及其衍生物取代。
在步驟(b)中，可取代鈣的物質(zhì)包括其它堿性金屬離子(如K，Rb2+，Cs+)，堿金屬離子(如Mg2+，Sr2+)，二價(jià)或三價(jià)金屬離子(Al3+，Mn2+，Ba2+，Co2+，Ni2+，Zn2+，Pb2+等)，NH+4，脂族胺或芳香二胺(如三乙胺，亞甲基二胺，乙胺，六亞甲基二胺)，等等。
實(shí)例2促進(jìn)豬的生長(zhǎng)給“生長(zhǎng)期”的豬(活重22～50千克)以及“成熟期”的豬(活重50～80千克)喂食各種數(shù)量的本發(fā)明實(shí)例1的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。每千克生長(zhǎng)促進(jìn)劑包括2×105蛋白酶單位，4.3×106淀粉酶單位，5×101脂酶單位和2×104纖維素酶單位。將該生長(zhǎng)促進(jìn)劑加到一小麥、大麥、香白羽豆種和肉粉的標(biāo)準(zhǔn)原飼料中。該原飼料每千克含有13.4MJ可水解能量，18.3%粗蛋白(含有0.95%賴氨酸，0.54%用硫氨酸和0.56%蘇氨酸)以及適當(dāng)水平的無機(jī)物和纖維素。
六種食物試驗(yàn)方法是將生長(zhǎng)促進(jìn)劑以每噸飼料0，1.0，2.0，4.0，8.0和16千克的量加進(jìn)飼料。用每種處理的飼料三次喂養(yǎng)正在生長(zhǎng)的豬，每次喂養(yǎng)的量分別為生長(zhǎng)期(22～50千克)和成熟期(50～80千克)全食欲的84%和87%。
這一試驗(yàn)的結(jié)果見表Ⅰ
表Ⅰ用與基本飼料混合的生長(zhǎng)促進(jìn)劑喂養(yǎng)的豬的情況生長(zhǎng)促進(jìn)劑(千克/噸) 0 1 2 4 8 16輕重增加20-50千克，克/天 570 578 575 569 588 57750-80千克，克/天 732 759 812 791 794 800飼料轉(zhuǎn)化率20-50千克 2.75 2.69 2.79 2.70 2.66 2.7150-80千克 3.10 2.99 2.72 2.84 2.83 2.81背部脂肪，P2毫米 14.1 13.4 12.9 12.8 13.1 12.1軀體凈重百分?jǐn)?shù) 68 68 68 68 68 68從表1所示的結(jié)果明顯可以看出，本發(fā)明的生長(zhǎng)促進(jìn)劑既改善了試驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，又改善了飼料轉(zhuǎn)化。生長(zhǎng)期豬的活重增加沒有成熟期豬的增加明顯。在成熟期，不用生長(zhǎng)促進(jìn)劑喂養(yǎng)的豬每天輕重增加732克，用每噸含2千克生長(zhǎng)促進(jìn)劑的飼料喂養(yǎng)的豬每天活重增加812克。從這一結(jié)果可以明顯地看出本方法的功效。
雖然對(duì)照動(dòng)物與用生長(zhǎng)促進(jìn)劑喂養(yǎng)的動(dòng)物之間的軀體凈重百分?jǐn)?shù)沒有明顯不同，但是看來，隨著生長(zhǎng)促進(jìn)劑劑量的增加，軀體背部脂肪減少(用標(biāo)準(zhǔn)卡鉗測(cè)量)。
實(shí)例3與酶活性有關(guān)的Vitapharm標(biāo)準(zhǔn)單位的測(cè)定A.蛋白酶單位一個(gè)Vitapharm蛋白酶單位就是指在30分鐘的比色血紅蛋白測(cè)定中釋放0.0447毫克非蛋白氮的酶量。這一測(cè)定可在pH4.7、40℃的條件下用變性血紅蛋白進(jìn)行。
測(cè)定試劑1.血紅蛋白2.浮石粉3.血紅蛋白底物稱取16.0克Difco Brand Bacto血紅蛋白(干基準(zhǔn)物)加到一個(gè)1升的燒杯中。加入3勺浮石粉后徹底混合干成分。然后一邊攪動(dòng)，一邊加入大約400毫升蒸餾水和1至2滴Dow-Corning消泡劑。將-pH電極浸入血紅蛋白溶液，一邊攪動(dòng)，一邊用2N Na OH將pH調(diào)至10.0。再將溶液的體積調(diào)至500毫升。然后將該溶液以3000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，獲取上清液，用作底物。
4.乙酸鈉緩沖儲(chǔ)液，2M將164克無水乙酸鈉溶于大約700毫升蒸餾水。使用一標(biāo)準(zhǔn)pH儀，通過加入冰醋酸將緩沖液pH調(diào)至4.70±0.05。然后再用蒸餾水將溶液調(diào)至1升。
5.乙酸鈉緩沖液，0.2M用移液管吸取50毫升乙酸鈉緩沖儲(chǔ)液至500毫升容量瓶中，然后用蒸餾水稀釋至刻度。
6.溶于蒸餾水的70%三氯乙酸(TCA)7.氫氧化鈉，2N8.氫氧化鈉，0.5N9.福林試劑用2體積的蒸餾水稀釋1體積的Folin-Ciocalteau酚試劑，稀釋的酚試劑能夠穩(wěn)定一周。
步驟1.吸取25毫升血紅蛋白底物和25毫升0.2M乙酸鈉緩沖液至150毫升燒杯。用一標(biāo)準(zhǔn)pH儀測(cè)定緩沖底物的值。如果底物的pH不是4.70±0.05，那么就必須調(diào)整0.2M乙酸鈉緩沖液的pH，以使25毫升血紅蛋白底物和25毫升0.2M乙酸鈉緩沖液的pH為4.70±0.05。
2.吸取25毫升血紅蛋白底物和25毫升0.2M乙酸鈉緩沖液至125毫升錐形瓶中。將該錐形瓶在40±0.1℃的水浴中平衡15分鐘。
3.在零時(shí)，迅速吸取5毫升適當(dāng)酶稀釋液至平衡底物中。在零時(shí)按動(dòng)秒表。
4.準(zhǔn)三分鐘后，向每一錐瓶中加入5毫升TCA溶液。為了安全，使用了滴定管或移液管。用力搖動(dòng)每一錐瓶。
5.做一空白對(duì)照，它含有25毫升血紅蛋白底物，25毫升乙酸鈉緩沖液，5毫升蒸餾水，以及5毫升TCA溶液。
6.將錐瓶在室溫下放置30分鐘，讓蛋白質(zhì)完全凝固。再用Whatman42號(hào)濾紙過濾每種溶液。最好用同樣的濾紙對(duì)最初的一半濾液再次過濾。濾液必須絕對(duì)澄清。
7.吸取1毫升每種濾液，4毫升0.5N氫氧化鈉和1毫升稀釋酚試劑至一試管中，然后充分混合。
8.10分鐘之后(但不遲于20分鐘)，在660納米處，通過與空白對(duì)照，測(cè)定每種濾液的吸收度。
計(jì)算一個(gè)血紅蛋白單位(HU)是在檢測(cè)條件下釋放67.08毫克(5312×6＝67.08)的非蛋白氮的酶量。
HU/克＝ (△A×F)/(W)△A＝酶解濾液在660納米的吸收值F＝酚試劑的顯色與蛋白酶水解之間的固定關(guān)系。見標(biāo)準(zhǔn)化程序的說明。
W＝加到5毫升等分水解液中的酶的毫克數(shù)。
標(biāo)準(zhǔn)化程序不同的蛋白酶打斷不同的肽鍵。酚試劑的顯色與水解程度之間沒有普遍關(guān)系。但是，對(duì)于每一類型的蛋白酶，確實(shí)都存在著一種固定的關(guān)系。該固定關(guān)系(即F因子)可通過將血紅蛋白底物與已知其活性的血紅蛋白樣品一起保溫來測(cè)定。保溫之后就進(jìn)行凱氏定氮。
試劑1.硼酸溶液，2%2.硫酸鉀3.濃硫酸4.1%酚酞溶液(溶于95%乙醇)5.用于定氮的Hengar顆粒6.甲基紅指示劑酶的制備用已知活性的血紅蛋白樣品制備酶溶液，使5毫升最終稀釋的等分溶液產(chǎn)生10～12個(gè)△N1.5。參考有助于確定酶稀釋度的計(jì)算。
凱氏方法1.通過比色法中所述的步驟1～6進(jìn)行測(cè)定。制備兩份空白和三份酶水解液。
2.吸取10毫升空白濾液，加到100毫升的凱氏燒瓶中，該燒瓶盛有4.0克硫酸鉀和1個(gè)硒化顆粒。按同樣方式在燒瓶中用4毫升濾液制備每一種酶水解樣品。
3.待溶液澄清后，吸取4毫升濃硫酸至每個(gè)燒瓶中，且水解30分鐘。停止加熱，使燒瓶冷卻。然后加入40毫升蒸餾水和1滴酚酞溶液。再將燒瓶置于冰浴上放置10～30分鐘。
4.在檢測(cè)2%硼酸溶液的pH值之后，立即進(jìn)行一系列蒸餾。硼酸溶液的pH值應(yīng)為4.3至4.7。將蒸餾冷凝器的導(dǎo)管放在適當(dāng)位置，使得冷凝液能夠滴到含有40毫升硼酸的150毫升燒杯中。
5.將7.0克的氫氧化鈉加到冷卻的凱氏燒瓶中。不要混合，立即用一橡皮套將燒瓶與一蒸餾裝置相連。用力混合后蒸餾3分鐘，降下硼酸燒杯，繼續(xù)蒸餾1分鐘。如果發(fā)生暴沸，則立即繼續(xù)進(jìn)行下列步驟如同已完成蒸餾。用蒸餾水沖洗導(dǎo)管至硼酸溶液中，從燒瓶下移去支架。
6.加入兩滴甲基紅指示劑，用0.02N鹽酸滴定每一餾出液至pH4.5。測(cè)定空白和酶水解液的平均滴定度，用它計(jì)算HU/克。
計(jì)算按下列方法計(jì)算由于蛋白酶的水解而得到的10毫升濾液中氮的毫克數(shù)。
毫克氮(△N)＝(樣品滴定度×10/4-空白滴定度)(0.02N)(14)毫克氮(△N)＝(樣品滴定度×2.5-空白滴定度)(0.28)10/4＝4毫升樣品濾液換算為10毫升基準(zhǔn)物0.02N＝鹽酸的當(dāng)量濃度14＝氮的分子量將△N的量乘1.5次方，即△N3/2，若將△N3/2對(duì)酶的毫克數(shù)作圖，就會(huì)得到一條直線。從這一直線圖就可測(cè)得精確釋放5毫克氮所需要的酶量。
(△N)1.5＝log-1(1.5×log，△N)每克的血紅蛋白單位(HU/克)按下列公式計(jì)算HU/克=( △N)1. 5× 1,000 × 60E × 10=11.18 × 6,000E]]>(△N)1.5＝10毫升濾液中釋放的5毫克氮1，000＝將酶的毫克數(shù)換算為克數(shù)60/10＝將10毫升的等分溶液換算為60毫升基準(zhǔn)物總體積E＝產(chǎn)生5毫克氮的酶的毫克數(shù)對(duì)于蛋白酶類型的F因子按下列公式計(jì)算F＝ (W)/(△A) ×HU/克W＝加到5毫升等分水解液中的酶的毫克數(shù)△A＝酶解濾液在660納米處的吸收值HU/克＝按凱氏標(biāo)準(zhǔn)化程度測(cè)得每克蛋白酶的血紅蛋白單位一個(gè)Vitapharm蛋白酶單位(1VPPV＝1HU)B.淀粉酶單位一個(gè)Vitapharm淀粉酶單位定義的是在以下所述的Vitapharm淀粉酶檢測(cè)的條件下于30分鐘內(nèi)產(chǎn)生1毫克還原糖(麥芽糖)的活性。
檢測(cè)試劑淀粉底物4%w/v可溶性淀粉溶液可溶性淀粉(干基準(zhǔn)物)漿20.00克(適用于碘量法的Merck試劑可溶性淀粉，Merck & CO.，Rahway，N.J.)存在于75ml蒸餾水中。攪拌條件下向其中加入沸騰蒸餾水至300ml，再使淀粉溶液沸騰并微沸3分鐘。從加熱器上取下并定量轉(zhuǎn)移到500ml派熱克斯容量瓶中。用自來水使其冷卻至室溫并補(bǔ)足至該體積。
淀粉指示劑溶液150克分析純Na Cl溶于480ml蒸餾水并加熱至沸騰。用電動(dòng)攪拌器劇烈攪拌。將5.7克(干重約5.0克)可溶性淀粉加到20ml蒸餾水中所獲的均勻懸浮液緩慢加入其中。沸騰至少5分鐘，再冷卻。
碳酸鈉溶液 10.6%碳酸鈉溶液 1.06%儲(chǔ)備的碘溶液 0.1N12.7克碘(I2)和48克碘化鉀(KI)溶于約900ml蒸餾水中。定量轉(zhuǎn)移到1升容量瓶中并用蒸餾水補(bǔ)足至該體積。
碘溶液 0.02N硫酸 0.5N硫代硫酸鈉 0.005N酶溶液酶溶液的濃度應(yīng)當(dāng)是1ml該酶溶液能在保溫期間產(chǎn)生大約20%理論值的麥芽糖。稀釋的淀粉酶不穩(wěn)定。因而，適宜的酶溶液應(yīng)當(dāng)在使用前才配制。不要在40℃平衡酶溶液，因?yàn)橛惺Щ畹奈ｋU(xiǎn)。
程序1.將25ml 4%淀粉底物移入50ml容量瓶中。加入5ml適宜的緩沖液和18ml水。以水浴在40℃±0.5°平衡該瓶15分鐘。
2.在0時(shí)，迅速吸取1ml適宜的酶溶液移至已平衡過的淀粉混合物中。用蒸餾水補(bǔ)足體積并顛倒混勻。對(duì)底物空白而言，加入1ml蒸餾水取代酶溶液。
3.在每個(gè)反應(yīng)瓶準(zhǔn)確地保溫30分鐘后，吸取5ml淀粉酶解液移至含1ml10.6%碳酸鈉的10ml容量瓶中。用蒸餾水補(bǔ)足體積并顛倒混合。
4.按下述確定酶解液的還原值吸取2ml碳酸鈉酶解液等分試樣移至50ml帶塞的玻璃燒瓶中。所有測(cè)定均重復(fù)。吸取3ml 0.02N碘溶液移入該玻璃燒瓶中，用3ml蒸餾水洗燒瓶壁。以水浴在20℃±0.5℃平衡碘混合物30分鐘。加入1ml 0.5N硫酸，用標(biāo)定的0.005N硫代硫酸鈉滴定。當(dāng)溶液變?yōu)榛尹S時(shí)加入三滴淀粉液指示劑。繼續(xù)滴定直至淀粉-碘復(fù)合物消失。
5.對(duì)碘空白而言，滴定3ml 0.02N碘溶液，2ml 1.06%硫酸鈉和3ml水。
計(jì)算按下述方法計(jì)算酶解液的還原值1.用碘空白滴定值減去淀粉液滴定值計(jì)算出淀粉空白。
2.按下式計(jì)算麥芽糖毫克值麥芽糖毫克值＝(I2空白-淀粉空白-Na2S2O3滴定值)×50×0.855滴定的樣品的還原值等于碘空白減去淀粉空白再減去酶解液的硫代硫酸鈉滴定值再乘以0.855。1ml 0.005N硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.855mg麥芽糖。滴定的樣品相當(dāng)于1ml初始酶解液。被滴定樣品的還原值乘以50給出了從1克淀粉中得到的以麥芽糖計(jì)算的還原糖的實(shí)際毫克值。
3.用表2中的修正因子將水解值修正為20%水解值。用下述等式計(jì)算淀粉酶效力
效力(mg/mg)＝ (麥芽糖(mg)×修正因子)/(酶(mg/ml))
C.脂酶單位1.Vitapharm脂酶單位定義為在下述Vitapharm淀粉酶檢測(cè)中2小時(shí)釋放出1毫克當(dāng)量脂肪酸的活性。
檢測(cè)試劑1.緩沖液，0.1M磷酸鹽，pH7.32.780克Na H2PO4·H2O溶于水并稀釋至100ml。將2.839克無水Na2HPO4溶于水并稀釋至100ml量取23.0ml該Na H2PO4溶液和77.0ml該Na2HPO4溶液移至200ml容量瓶中，用蒸餾水補(bǔ)足體積。
2.底物，橄欖油乳液在慢速運(yùn)行的韋林氏攙合器(調(diào)壓變壓器定在25～30那一檔)中的93ml 0.1M磷酸鹽緩沖液內(nèi)緩慢加入200mg苯甲酸鈉和7.0克USP阿拉伯樹膠。當(dāng)這些試劑完全溶解后，緩慢地加入93mlUSP橄欖油。當(dāng)全部油加入后，以該速攙合3分鐘，然后再以高速攙合5分鐘。
3.緩沖的底物向100ml配衡的容量瓶中加入54.4克橄欖油乳液，用0.1M磷酸鹽緩沖溶液補(bǔ)足體積。該緩沖的底物應(yīng)當(dāng)為pH7.3。
4.乙醇，95%5.百里酚酞，1%(w/v)在95%乙醇中6.氫氧化鈉，0.05N程序1.吸取5.0ml被緩沖的底物的等分試樣移入50ml錐形燒瓶中。每種待測(cè)樣品各用一個(gè)燒瓶。把它們放在特殊的夾具上，并放在37℃水浴中。
2.制備適宜的酶稀釋液。樣品的稀釋應(yīng)根據(jù)該酶制劑的脂酶活性而定。
3.在一個(gè)含底物的燒瓶中加入5.0ml蒸餾水，即成分酶空白。然后在其它的底物燒瓶中各加入一種酶樣品5.0ml。充分?jǐn)嚢?，?7℃保溫2小時(shí)，其間不時(shí)回蕩燒瓶。
4.向各燒瓶中加入3.0ml乙醇終止反應(yīng)，加入4滴百里酚酞并充分混合。
5.用0.05N Na OH滴定各燒瓶至灰蘭色終點(diǎn)。最好是滴定出空白，然后將樣品與其對(duì)比。從樣品滴定中減去底物空白測(cè)得酶反應(yīng)。
計(jì)算不同水平的酶對(duì)底物的水解程度不是線性的。為了獲得良好的重復(fù)性，能給出4.0ml 0.05N Na OH滴定差異(樣品滴定度一定白滴定度)的酶量是正確的酶量。有兩種方法可以用來確定這一酶量。
A.三樣品法三種酶制劑樣品嚴(yán)格按本方法進(jìn)行，樣品重量的選擇應(yīng)這樣進(jìn)行，一種給出少于4.0ml的滴定差異，另一種給出大于4.0ml的滴定差異，第三種則給出約等于4.0ml的滴定差異。在座標(biāo)紙上相對(duì)滴定差異畫出酶的毫克量點(diǎn)，各點(diǎn)之間以直線相連。由圖中讀出滴定差異正好為4ml所對(duì)應(yīng)的酶毫克值，并用于按下式計(jì)算脂酶單位(4.0×N×1000)/(酶樣品(毫克)) ＝脂酶單位(LU)/克其中N為Na OH的當(dāng)量濃度。
B.標(biāo)準(zhǔn)曲線法以預(yù)先經(jīng)準(zhǔn)確測(cè)定了其活性的制劑作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，使用幾種不等重量的標(biāo)準(zhǔn)樣品嚴(yán)格地按方法進(jìn)行檢測(cè)。以得到的滴定差異值對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品毫克值作圖，在各點(diǎn)之間作出平滑的曲線。得到這條標(biāo)準(zhǔn)曲線后，則在確定未知樣品的脂酶活性時(shí)，則按照方法選用方便的樣品重量進(jìn)行檢測(cè)。由標(biāo)準(zhǔn)曲線確定給出與未知檢測(cè)樣品相同滴定差異值的標(biāo)準(zhǔn)樣品重量值，按下述計(jì)算脂酶活性LU/克＝ (標(biāo)準(zhǔn)樣品(mg))/(未知樣品(mg)) ×標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測(cè)值D.纖維素酶單位一個(gè)Vitapharm纖維素酶單位定義的是在檢測(cè)條件下5分鐘使給定的羧甲基纖維素底物產(chǎn)生相對(duì)流動(dòng)性改變?yōu)?的活性。該檢測(cè)基于的是在pH4.5，40℃使給定羧甲基纖維素底物的內(nèi)部β-1，4-糖苷鍵被酶水解。
試劑和溶液1.乙酸溶液，2N2.乙酸鈉溶液，2N3.乙酸溶液，0.4N4.乙酸鈉溶液，0.4N5.乙酸焉鹽緩沖液(pH4.5)使用標(biāo)準(zhǔn)使用前用紗網(wǎng)過濾底物。
酶制劑制備一種酶制劑，使其在檢測(cè)條件下，5分鐘能產(chǎn)生0.18至0.22的相對(duì)流動(dòng)性的改變。稱量該酶用的羧甲基纖維素鈉是CMC 7HP型(Hercules，Inc.，910Market Street，Wihmington，Delaware 19899)。
7.羧甲基纖維素鈉底物，0.2%w/v將200ml蒸餾水移入韋林氏攙合器的碗中。攙合器定于低速運(yùn)行，將1.0gCMC 7HP小心地加到該碗中，不要有任何液體濺出。用橡膠棒將蒸餾水沿玻璃碗邊向下清洗。蓋上碗蓋，以高速混合1分鐘。定量轉(zhuǎn)移到500ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至該體積。使用前用紗網(wǎng)過濾底物。
酶制劑制備一種酶制劑，使其在檢測(cè)條件下，5分鐘能產(chǎn)生0.18至0.22的相對(duì)流動(dòng)性的改變。稱量該酶并定量轉(zhuǎn)移到玻璃研缽中。用蒸餾水滴定并定量轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萘科恐?。用蒸餾水稀釋至該體積，使用前，用1號(hào)Whatman濾紙過濾酶溶液。
檢測(cè)程序1.將校準(zhǔn)的粘度計(jì)以垂直位置放入40°±0.1℃水浴中。應(yīng)使用經(jīng)嚴(yán)格清洗過的粘度計(jì)。清洗是先吸入大量清潔劑，然后再吸入蒸餾水來完成。還可用帶橡皮管的吸氣器連接到粘度計(jì)的細(xì)臂來完成。
2.吸取20ml經(jīng)過過濾的CMC 7HP底物和4.0ml乙酸鹽緩沖液(pH4.5)移入到50ml錐形燒瓶中。每種酶樣品至少有2瓶，并有一瓶底物空白對(duì)照。蓋好錐形瓶，放在水浴中平衡15分鐘。
3.在0時(shí)，吸取1ml酶溶液移入經(jīng)平衡的底物中。打開1號(hào)秒表并充分混合溶液。然后，立即吸取10ml反應(yīng)混合物移入粘度計(jì)的粗臂中。
4.約2分鐘后，用橡皮管連在粘度計(jì)的細(xì)臂上抽吸，使反應(yīng)混合物超過上標(biāo)記進(jìn)入流體頭。讓反應(yīng)混合物通過上標(biāo)記自由流下，測(cè)定其時(shí)間。當(dāng)反應(yīng)混合物的彎月面降過上標(biāo)記時(shí)，開動(dòng)2號(hào)秒表。同時(shí)，由1號(hào)秒表按分記錄反應(yīng)時(shí)間(Tr)。當(dāng)反應(yīng)混合物的彎月面降過下標(biāo)記時(shí)，從2號(hào)秒表上按秒記錄下時(shí)間(Tt)。
5.立即再將反應(yīng)混合物吸過上標(biāo)記進(jìn)入流體頭部。當(dāng)反應(yīng)混合物的彎月面自由下降超過上標(biāo)記時(shí)，再重新開動(dòng)2號(hào)秒表。同時(shí)，由1號(hào)秒表上按分記錄下反應(yīng)時(shí)間(Tr)，由2號(hào)秒表按秒記錄時(shí)間(Tt)。
6.重復(fù)步驟5，直至完成4次測(cè)定，歷時(shí)(Tr)不超過15分鐘。
7.吸取1ml蒸餾水移入24ml徑緩沖的底物中制備底物空白。再吸取10ml反應(yīng)混合物移入粘度計(jì)的粗臂內(nèi)。按秒記錄彎月面下降經(jīng)過兩個(gè)標(biāo)記之間所需的時(shí)間(Ts)。以5次測(cè)定的平均值作為Ts。
8.吸取10ml經(jīng)平衡的蒸餾水移入粘度計(jì)的粗臂內(nèi)制成水空白。按秒測(cè)定彎月面下降經(jīng)過2個(gè)標(biāo)記之間所需時(shí)間(Tw)。以5次測(cè)定的平均值作為Tw。
計(jì)算1個(gè)纖維素酶單位(CU)定義的是在檢測(cè)條件下5分鐘使給定的羧甲基纖維素底物產(chǎn)生相對(duì)粘度改變?yōu)?的活性。
按下述對(duì)四次流出時(shí)間(Tt)和反應(yīng)時(shí)間(Tr)各計(jì)算其相對(duì)流動(dòng)性(Fr)和(Tm)值Fr＝(Ts-Tw)(Tt-Tw)Tm＝1/2(Ts/60秒/分)+Tr＝(T2/120)+Tr其中Fr＝每一反應(yīng)時(shí)間的相對(duì)流動(dòng)性Ts＝按秒記錄的底物空白流出時(shí)間的平均值Tw＝按秒記的水空白流出時(shí)間的平均值Tt＝按秒記的反應(yīng)混合物的流出時(shí)間Tr＝從0時(shí)開始的按分記的花費(fèi)的時(shí)間，即從向經(jīng)緩沖的底物加入酶溶液直至開始測(cè)定流出時(shí)間(Tt)的時(shí)間。
Tm＝按分記的反應(yīng)時(shí)間(Tr)加上二分之一轉(zhuǎn)換成分的流出時(shí)間(Tt)。
以四次相對(duì)流動(dòng)性(Fr)為縱座標(biāo)，以四次反應(yīng)時(shí)間(T)為橫座標(biāo)作圖。應(yīng)得到一條直線，其斜率相當(dāng)于每分鐘相對(duì)流動(dòng)性的改變，而且是與酶濃度成比例的。通過一系列實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的最優(yōu)直線的斜率作為酶活性標(biāo)準(zhǔn)比單一相對(duì)流動(dòng)性數(shù)值更好。從圖中確定Fr值為10和5分鐘。它們?cè)诹鲃?dòng)性上的差異不應(yīng)大于0.22，也不應(yīng)小于0.18。未知酶活性的計(jì)算按下式進(jìn)行
CU/g=1000F (Fr10-Fr5)W]]>其中Fr＝反應(yīng)時(shí)間為5分鐘的相對(duì)流動(dòng)性Fr＝反應(yīng)時(shí)間為10分鐘的相對(duì)流動(dòng)性1000＝每克為1000毫克W＝加到反應(yīng)混合物中的1毫升酶溶液等分試樣中的酶毫克量
權(quán)利要求
1.一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑，該促進(jìn)劑由具有一個(gè)包含選自下列的一種或多種酶的核心的微粒組成(i)蛋白水解酶；(ii)糖水解酶；(iii)脂肪水解酶；和(iv)以固定化形式存在的纖維水解酶；用水溶性薄膜囊包裹核心，并用含有堿溶性，酸不溶性聚合物，或高分子量聚合物的腸衣包被核心，聚合物的結(jié)構(gòu)可用能被腸液溶解的脂肪酸或其它物質(zhì)的通道所取代或含有這些通道。
2.一種權(quán)利要求
1所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中核心包括固定在膠聯(lián)基質(zhì)內(nèi)的酶。
3.一種權(quán)利要求
2所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中凝膠基質(zhì)包括K-角叉藻聚糖，明膠，藻酸鹽，纖維素或其衍生物;或膠凝合成聚合物。
4.一種權(quán)利要求
1～3中任一項(xiàng)所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中微粒的大小為25～500μm。
5.一種權(quán)利要求
4所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中顆粒的大小為50～350μm。
6.一種權(quán)利要求
1所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中脂肪酸薄膜包括C12-24脂肪酸。
7.一種權(quán)利要求
1所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中水溶性薄膜是明膠。
8.一種權(quán)利要求
1所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中堿溶性，酸不溶性聚合物是乙酸鄰苯二甲酸纖維素。
9.一種權(quán)利要求
1所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其中高分子量聚合物是甲基丙烯酸丁酯。
10.一種權(quán)利要求
1～9中任一項(xiàng)所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，每千克所述生長(zhǎng)促進(jìn)劑含有2×103～2×107蛋白酶單位4.1×104～4.3×108淀粉酶單位0.5～5×103脂肪酶單位2×102～2×106纖維素酶單位。
11.一種增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，該方法包括供給生長(zhǎng)促進(jìn)量的權(quán)利要求
1～10中任一項(xiàng)所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
12.一種權(quán)利要求
11所要求的方法，其中生長(zhǎng)促進(jìn)劑以與動(dòng)物飼料混合的方式給動(dòng)物服用。
13.一種權(quán)利要求
1～10中任一項(xiàng)所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，該促進(jìn)劑與可藥用或可獸用的載體或賦形劑結(jié)合。
14.一種增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，該方法包括供給權(quán)利要求
13所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)組合物。
15.動(dòng)物飼料，該飼料與權(quán)利要求
1～10中任一項(xiàng)所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)劑混合。
16.動(dòng)物飼料，該飼料混有權(quán)利要求
13所要求的生長(zhǎng)促進(jìn)組合物。
17.一種動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的生產(chǎn)方法，該方法包括下列步驟(a)使選自下列酶的一種或多種酶固定化(ⅰ)蛋白水解酶;(ⅱ)脂肪水解酶;(ⅲ)纖維水解酶;(ⅳ)糖水解酶;這些酶都在一個(gè)核心內(nèi);(b)使固定化酶微粒化;(c)用一水溶性機(jī)械屏障囊包住這些微粒;和(d)用包括一種堿溶性，酸不溶性聚合物，或高分子量聚合物的腸衣包被步驟(c)的微粒，聚合物的結(jié)構(gòu)可用能被腸液所溶解的脂肪酸或其它物質(zhì)的通道取代或含有這些通道。
18.一種權(quán)利要求
17所要求的方法，其中使酶在膠聯(lián)物內(nèi)固定化。
19.一種權(quán)利要求
17所要求的方法，其中用步驟(c)的水溶性屏障和步驟(d)的包衣噴涂微粒。
20.一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑，生長(zhǎng)促進(jìn)組合物，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，或動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的生產(chǎn)方法，基本上如上文所述。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑，它由具有一個(gè)包含選自下列的一種或多種酶的核心的微粒組成(i)蛋白水解酶；(ii)糖水解酶；(iii)脂肪水解酶；和(iv)固定化形式的纖維水解酶；用水溶性薄膜囊包囊核心，并用含有堿溶性，酸不溶性聚合物，或高分子量聚合物的腸衣包被核心，聚合物的結(jié)構(gòu)可用能被腸液溶解的脂肪酸或其它物質(zhì)的通道取代或含有這些通道。本發(fā)明還描述一種增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的方法，該方法包括供給生長(zhǎng)促進(jìn)量的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，還描述一種生產(chǎn)生長(zhǎng)促進(jìn)劑的方法。
文檔編號(hào)A61K9/58GK87105846SQ87105846
公開日1988年5月4日 申請(qǐng)日期1987年8月27日
發(fā)明者索馬斯·科·薩·英格 申請(qǐng)人:索馬斯·科·薩·英格導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan