專利名稱：新穎酯類的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具抗癌活性的新穎酯類。更具體講本發(fā)明涉及雌二醇氮芥的新穎酯類。
雌二醇氮芥即雌-1，3，5(10)-三烯-3，17-β-二醇3-[N，N-雙(2-氯乙基)氨基甲酸酯]及其多種酯是以前已知的抗腫瘤藥，例如USP3299104所述。其中一種酯，即17-雌二醇氮芥二氫磷酸酯(簡寫為EMP)是進(jìn)一步研制的產(chǎn)物，并且其水溶性鹽Estracyt 現(xiàn)已廣泛用于治療前列腺癌。當(dāng)EMP的水溶性鹽用于口服時(shí)有一個(gè)問題，就是與食品及飲料中的鈣離子起作用。在鈣離子存在下，EMP鹽產(chǎn)生沉淀，并形成不溶性復(fù)合物，在胃腸道中不能吸收，因此在體內(nèi)的活性很低。為克服此問題已作過數(shù)方面嘗試，包括以EMP鹽和雌二醇氮芥本身用于藥物制劑。但是，尚未能找到用于口服的EMP改進(jìn)產(chǎn)物，這些產(chǎn)物應(yīng)在鈣離子存在下和水溶性EMP二鈉鹽在無鈣條件下服用時(shí)，產(chǎn)生相同的主要EMP代謝物雌二醇氮芥和相應(yīng)的17-酮化合物estromustine的血漿濃度。
意外地發(fā)現(xiàn)，若將該雌二醇氮芥以某種氨基酸酯的形式給藥，可以避免與鈣相互作用的問題，并且雌二醇氮芥和estromustine的血漿濃度以及其抗癌活性可保持不變，甚至更高。
用作藥物的氨基酸酯類在英國專利962797和歐洲專利申請0104746中已有描述。但這些申請案的發(fā)明目的與本發(fā)明目的不同，并且那些經(jīng)酯化的醇雖然包含甾族骨架，但與雌二醇氮芥的結(jié)構(gòu)有很多不同點(diǎn)。
本發(fā)明涉及具如下通式化合物及其可藥用鹽的制造方法
其中R1、R2、R3是選自氫和C1-C4低級烷基，R2和R3一起可與該N原子形成C2-C5的環(huán)，n是0、1或2。優(yōu)選化合物是n＝0，R1是氫，R2和R3相同或不同并且是氫、甲基或乙基。
特別優(yōu)選的有以下各化合物17-雌二醇氮芥N，N-二乙基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥4-(N，N-二甲基氨基)丁酸酯，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥2-氨基丙酸酯，17-雌二醇氮芥N-乙基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥N-(2-丙基)氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥3-氨基丙酸酯，17-雌二醇氮芥N-(1-丙基)氨基乙酸酯。
這些新穎化合物一般是應(yīng)用常規(guī)方法由雌二醇氮芥制備，下面提出其中兩種。雌二醇氮芥本身的制備例如可見于USP3299104。
其中一種方法是將雌二醇氮芥用一種含反應(yīng)活性部分的酸進(jìn)行酯化，所述活性部分例如是氯、溴、碘，或有機(jī)磺酰氧基，其有機(jī)部分為C1-C6烴的殘基，酯化后得到式Ⅱ的中間物
其中R4是上述反應(yīng)活性部分。然后將此中間物與式HNR2R3的胺反應(yīng)，得到式Ⅰ的新穎化合物。
另一種方法是將雌二醇氮芥用具如下通式的氨基酸酯化
其中R5是R3或任選一種保護(hù)基團(tuán)，酯化后得到其中R4是-NR2R5的式Ⅱ中間物，然后從其中除掉該保護(hù)基，制備得到通式Ⅰ的化合物。用于保護(hù)氨基的取代基R5例如可以是叔丁氧羰基和芐氧羰基。
酯化是采用公知的方法。一類方法是與酸的反應(yīng)活性衍生物反應(yīng)，如?；?、酰基溴以及與有機(jī)酸的混合酸酐，包括從低級烷基氯甲酸所得的酸酐反應(yīng)。另一類方法是在脫水劑存在下(如1，1-羰基二咪唑和N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺)與酸反應(yīng)。
該等新化合物的鹽是由堿形式的該化合物與可藥用的酸來制備，這些酸例如在InternationalJournalofpharmaceutics3，202(1986)中所列者，并作為本發(fā)明的參考資料。優(yōu)選的酸是鹽酸、氫溴酸、甲磺酸和乙磺酸。
此類新化合物的鹽以下列為優(yōu)選17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯鹽酸鹽，
17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯鹽酸鹽，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯甲磺酸鹽，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯甲磺酸鹽，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯乙磺酸鹽，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯乙磺酸鹽。
雖然按本發(fā)明的化合物首先是供口服之用，但顯然其它給藥途徑也是在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
制備藥物制劑通常是使用本發(fā)明的一種或多種化合物按預(yù)定的含藥量配制。這些制劑可以是粉末、顆粒、栓劑、丸劑或片劑、懸浮液等等;可帶有或不帶有，而優(yōu)選是帶有極多種可供藥用的賦形劑中的任一種。當(dāng)含有藥用載體時(shí)，其活性成分含量通常占該組合物的約0.01-95%，較好為約0.05-80%。在這些制劑中可使用的載體例如有纖維素、糖、滑石粉、常用的合成和天然膠、合成及天然油類、乳化及分散劑、水等等。制造片劑時(shí)可使用粘結(jié)劑，如聚乙烯吡咯烷酮，以及潤滑劑如硬脂酸鎂。片劑中還可含有崩解劑，如淀粉。
該組合物最好制成單位劑量形式，每一劑中活性物含量約0.05-1000毫克，更常見為約5-300毫克。“單位劑量形式”一詞是指適于人類患者和其他哺乳動物作為一次用劑量的形體上可分開的單位，每一單位中含有按產(chǎn)生所需治療效果計(jì)的預(yù)定含量的這類新穎酯類，并連同所需的藥物載體。
按本發(fā)明的化合物在很廣劑量范圍內(nèi)具有藥效。例如，每日劑量一般在每千克體重約0.1-100毫克范圍。在醫(yī)治成年人時(shí)，優(yōu)選劑量是每千克體重約0.5-50毫克，可一次或分開給藥。不講自明的是，實(shí)際給藥量是由醫(yī)生規(guī)定的，醫(yī)生要考慮若干因素，包括所醫(yī)治的病情、所選給藥途徑、年齡、體重、以及個(gè)別患者對藥的響應(yīng)和患者癥狀嚴(yán)重程度，因此上述劑量范圍并非對本發(fā)明的限定。此處所用名詞“藥物組合物”和“可藥用的”包括用于人類和獸醫(yī)的組合物和成分。
在以下實(shí)例中，雖然所命名的化合物是特別適用于所述的目的，但只供闡明而非對本發(fā)明的限定。
實(shí)例117-雌二醇氮芥氯乙酸酯將雌二醇氮芥(4.4克，0.01摩爾)溶解于甲苯(100毫升)，加入氯乙酰氯(1.7克，0.015摩爾)，并將此溶液加熱至70℃歷時(shí)1.5小時(shí)。然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于30℃除去溶劑，剩余物用乙醇(40毫升)處理并使產(chǎn)物結(jié)晶。過濾收集產(chǎn)物并用數(shù)毫升乙醇洗滌，室溫干燥，所得氯乙酸酯熔點(diǎn)95℃，收得量4.9克。
實(shí)例217-雌二醇氮芥溴乙酸酯按實(shí)例1的相同方法，由雌二醇氮芥與溴乙酰溴制成本化合物，熔點(diǎn)109℃。
實(shí)例317-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯鹽酸鹽將17-雌二醇氮芥氯乙酸酯(5.2克，0.01摩爾)于室溫溶解于乙腈(40毫升)。將甲胺(3.1克，0.1摩爾)于0℃溶于乙腈(10毫升)后加入上述溶液中。反應(yīng)3小時(shí)后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除掉過量的胺和溶劑。剩余物溶于二氯甲烷(50毫升)并用50毫升水洗滌3次，用碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7-9。將此二氯甲烷溶液用無水硫酸鈉干燥，小心蒸發(fā)除去溶劑。剩余物溶于乙腈(40毫升)，加入HCl在乙醚中的溶液(0.012摩爾)使該種N-甲基氨基乙酸酯沉淀。這時(shí)生成體積膨大的沉淀物，攪拌數(shù)分?jǐn)?shù)后解體成為細(xì)小晶體。過濾收集產(chǎn)物并用乙酸乙酯和乙腈的1∶1混合物洗滌。然后在室溫和真空條件干燥該鹽酸鹽，得到3.7克，熔點(diǎn)226℃(分解)。NMR(核磁共振)光譜表明，該產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)是雌二醇氮芥17-N-甲基氨基乙酸酯。
實(shí)例417-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯甲磺酸鹽及乙磺酸鹽應(yīng)用實(shí)例3的相同方法，不同之處是應(yīng)用甲磺酸或乙磺酸在乙醚中的溶液替代HCl的乙醚溶液，分別得到一種甲磺酸鹽(熔點(diǎn)212℃)和乙磺酸鹽(熔點(diǎn)170℃)(化合物編號分別為4∶1和4∶2)。
實(shí)例517-雌二醇氮芥N-R2-N-R3-氨基乙酸酯鹽酸鹽應(yīng)用實(shí)例3的方法加以少許改動，從17-雌二醇氮芥溴乙酸酯制備表1所列具有R2和R3氨基取代基的酯類。
實(shí)例617-雌二醇氮芥氨基乙酸酯鹽酸鹽和甲磺酸鹽將雌二醇氮芥(4.4克，0.01摩爾)和N-叔丁氧羰基甘氨酸(1.75克，0.01摩爾)溶解于二氯甲烷(35毫升)。加入二環(huán)己基碳化二亞胺(2.1克0.01摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(0.1克，0.001摩爾)，并將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)。過濾除掉所生成的二環(huán)己基脲并小心蒸發(fā)除去溶劑。將剩余的油狀物溶解于乙腈(10毫升)，加入含HCl(0.03摩爾)的乙腈(40毫升)，將混合物攪拌16小時(shí)。過濾收集生成的沉淀物并從甲醇/乙醚中重結(jié)晶。得到3.2克17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯鹽酸鹽(熔點(diǎn)220℃，化合物編號6∶1)，并由NMR光譜加以確證。
按同上方法，用甲磺酸(0.03摩爾)替代HCl并省去17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯的重結(jié)晶步驟，得到其甲磺酸酯(化合物編號6∶2)，熔點(diǎn)206℃。
實(shí)例717-雌二醇氮芥氨基丙酸酯鹽酸鹽應(yīng)用實(shí)例6的方法，得到以下的鹽從叔丁氧羰基-L-丙氨酸得到17-雌二醇氮芥2-L-氨基丙酸酯鹽酸鹽，熔點(diǎn)248℃，從N-叔丁氧羰基-β-丙氨酸得到17-雌二醇氮芥3-氨基丙酸酯鹽酸鹽，熔點(diǎn)223℃。
實(shí)例817-雌二醇氮芥氨基乙酸酯甲磺酸鹽將雌二醇氮芥(4.4克，0.01摩爾)溶解于二氯甲烷(30毫升)，向其中加入N-芐氧羰基甘氨酸(2.2克，0.001摩爾)、二環(huán)己基碳化二亞胺(2.25克，0.011摩爾)、4-二甲基氨基吡啶(0.12克，0.001摩爾)。將此混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾除掉所生成的二環(huán)己基脲。濾液用鹽酸(2M，10毫升)、水(10毫升)、碳酸鈉溶液(1M，25毫升)、水(25毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸脫溶劑，將剩余的油狀物溶于乙醇(125毫升)。加入鈀炭(1克，含鈀5%)，混合物于常壓和室溫用氫處理。反應(yīng)停止后，將混合物過濾，小心蒸脫溶劑。剩余物溶于乙腈(75毫升)。加入甲磺酸(1克，0.01摩爾)?；旌衔飻嚢?8小時(shí)后，過濾收集沉淀物，用乙腈洗滌并于室溫干燥，得3.7克17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯鹽酸鹽，熔點(diǎn)204℃。
實(shí)例917-雌二醇氮芥4-(N，N-二甲基氨基)丁酸酯鹽酸鹽將雌二醇氮芥(4.4克，0.01摩爾)溶于二氯甲烷(50毫升)，向其中加入4-二甲基氨基丁酰氯鹽酸鹽(1.3克，0.01摩爾)。將此溶液回流2小時(shí)，蒸脫溶劑并使所得油狀物結(jié)晶。在乙醇液中用活性炭處理此產(chǎn)物，并從乙醇/乙醚中重結(jié)晶，得6.5克，熔點(diǎn)205℃。此產(chǎn)物是17-雌二醇氮芥4-(N，N-二甲基氨基)丁酸酯鹽酸鹽，并由NMR光譜加以確證。
實(shí)例10與鈣離子的相互作用溶液A0.3M二乙磺酸鈣。將碳酸鈣(1.38克，15毫摩爾)加入1.0M乙磺酸溶液溶解之，直至達(dá)到穩(wěn)定pH＝5.3為止。用水將此溶液稀釋至50毫升。
溶液B0.03M二乙磺酸鈣。將1份溶液A用9份水稀釋。
溶液CpH＝4.5的0.05M乙酸鈉/乙酸緩沖溶液。將冰乙酸(3.0克，0.05摩爾)溶于800毫升水，用1M氫氧化鈉溶液滴定至pH＝4.5，然后稀釋至1升。
將受試化合物溶于50毫升溶液C中。數(shù)分鐘內(nèi)得到透明溶液。5分鐘后加入1毫升溶液A或B，即加入等摩爾量的鈣離子。觀察此混合物，歷時(shí)3小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)這類新穎化合物濃度是雌二醇氮芥磷酸酯二鈉鹽濃度的10倍，并且所遇鈣離子濃度也是前者10倍于后者，前者完全不產(chǎn)生沉淀物，而后者立即形成不溶性雌二醇氮芥磷酸酯鈣鹽。
實(shí)例11雌二醇氮芥磷酸酯與新穎雌二醇氮芥酯類為狗口服提供雌二醇氮芥生物可得量之比較。
為不同組(每組4頭)的小獵兔犬口服不同的制劑。給藥劑量相當(dāng)于140毫克雌二醇氮芥磷酸酯。試驗(yàn)動物在給藥前禁食，給藥后再給以50毫升0.01M鹽酸。取血樣用氣相色譜法分析雌二醇氮芥。(Andersson，S-B等，Acta，pharm.Suec.19，1(1982))。
使用以下的制劑;
1.雌二醇氮芥磷酸酯二鈉鹽水溶液，2.6∶2化合物水溶液，3.4∶2化合物水溶液。
表3示出狗的雌二醇氮芥血漿濃度與時(shí)間的關(guān)系曲線之下的面積(AUC)。對于雌二醇氮芥磷酸酯、化合物6∶2和4∶2分別是54±62、118±60和83±62毫微克/毫升·小時(shí)。
表3狗口服后的雌二醇氮芥生物可得量。
口服各種雌二醇氮芥酯類溶液后的AUC值。
狗編號雌二醇氮芥磷酸酯二鈉鹽化合物號6∶2化合物號4∶28727147100-872916.414094.0873134.045.879.8873319.5184.8-8735--2.68742--153.4平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差54.3±62.4118±5982.6±62.0實(shí)例12配方制劑，普通片劑Ⅰ.化合物6∶2160毫克玉米淀粉15毫克Ⅱ.聚乙烯吡咯烷酮8毫克乙醇適量Ⅲ.玉米淀粉15毫克硬脂酸鎂2毫克將Ⅰ與溶液Ⅱ混合并造粒，干燥并用1毫米篩過篩后，加入Ⅲ。將此混合物壓制成每片200毫克的片劑。
實(shí)例13配方制劑，膠囊劑將實(shí)例12的混合物填裝入1號大小的硬膠囊中。
權(quán)利要求
1.具如下通式的新穎化合物及其可藥用的鹽。
其中R1、R2和R3是選自氫或C1-C4低級烷基，其中R2和R3一起與該N原子也可形成C2-C5的環(huán)，其中n是0、1或2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其特征在于n為0。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1是氫。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于R2和R3相同或不同，并且是氫、甲基或乙基。
5.按權(quán)利要求1，選自以下的化合物17-雌二醇氮芥N，N-2-二乙基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥4-(N，N-二甲基氨基)丁酸酯，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥2-氨基丙酸酯，17-雌二醇氮芥N-乙基氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥N-(2-丙基)氨基乙酸酯，17-雌二醇氮芥3-氨基丙酸酯，17-雌二醇氮芥N-(1-丙基)氨基乙酸酯。
6.按權(quán)利要求1，選自以下的化合物17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯鹽酸鹽，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯鹽酸鹽，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯甲磺酸鹽，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯甲磺酸鹽，17-雌二醇氮芥N-甲基氨基乙酸酯乙磺酸鹽，17-雌二醇氮芥氨基乙酸酯乙磺酸鹽。
7.制備具通式Ⅰ的化合物的方法，其特征在于a)將雌二醇氮芥用一種帶有反應(yīng)活性取代基的酸進(jìn)行酯化，得到式Ⅱ的化合物
其中R4是一種反應(yīng)活性取代基，然后將式Ⅱ化合物與具通式HNR2R3的一種胺進(jìn)行反應(yīng)，或者b)將雌二醇氮芥用具有如下通式的一種氨基酸進(jìn)行酯化
其中R5是R3或任選一種保護(hù)基，得到具通式Ⅱ的一種中間產(chǎn)物，然后從其上除掉該保護(hù)基，制備成具通式Ⅰ的化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其特征在于制備成其中n＝0的化合物。
9.權(quán)利要求7或8的方法，其特征在于制備成其中R1是氫的化合物。
10.權(quán)利要求7或8的方法，其特征在于所制備的化合物中R2和R3是相同或不同，并且是選自氫、甲基或乙基。
11.含有一種或多種通式Ⅰ化合物作為活性物質(zhì)的藥物組合物，最好是還含有一種可用于藥物的載體，并在需要時(shí)還含有其他有藥物活性的藥劑。
12.對于所患病癥在用抗癌藥劑時(shí)有治療效果的活體的治療方法，包括為所述活體給以一種具通式Ⅰ化合物作為治療藥劑的治療步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及具下式通式的化合物及其藥用鹽的制造方法其中R本發(fā)明的化合物可用作抗癌藥劑。
文檔編號A61K31/56GK1045792SQ89104490
公開日1990年10月3日 申請日期1989年6月27日 優(yōu)先權(quán)日1988年6月28日
發(fā)明者貝蒂爾·瓦爾迪馬·漢森, 佩-奧洛夫·岡納·岡納遜, 享利·勤內(nèi)·莫爾堡, 斯溫-阿基·約翰遜 申請人:法馬西亞制藥公司