專利名稱:一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，具體地說，涉及水蛭和/或地龍5800道爾頓以下分子量的提取物，以及其藥物組合物、制備方法和用于制備預(yù)防或治療血栓性疾病的藥物的用途。
背景技術(shù)：
水蛭作為經(jīng)典的破血逐淤藥物，為中國藥典所收載。中國藥典收載的水蛭藥材品種有三種，即水蛭科動(dòng)物螞蟥 Whitmania pigra Whitman、7jC蛭 Hirudo mpponica Whitman 或柳葉螞蟥Whitmania ac-ranulata Whitman，其中作為藥用主要品種為水蛭科動(dòng)物螞蟥 (ffhitmania pigra Whitman)。水蛭的主要成分為蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核酸、酶、糖類以及微量元素等。對(duì)水蛭中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類及微量元素等成分的定性、定量研究已多有報(bào)道，主要方法為薄層色譜法、高效液相色譜法、電泳法等。其中小分子成分主要為次黃嘌呤、 黃嘌呤、尿嘧啶、尿苷等，嘧啶和嘌呤均為含有N原子的不飽和的雜環(huán)化合物。
地龍作為傳統(tǒng)中藥，具有清熱定驚、通絡(luò)、平喘、利尿之功效，為中國藥典所收載。中國藥典收載的地龍藥材品種有四種，即鉅蚓科動(dòng)物參環(huán)毛頓Pheretima aspergillum(E. Perrier)、通俗環(huán)毛蟲引 Pheretima vulgaris Chen、威廉環(huán)毛蟲引 Pheretima guillelmi (Michaelsen)或木節(jié)盲環(huán)毛蟲引Pheretimapectinifera Michaelsen,其中作為藥用主要品種為鉅引科動(dòng)物參環(huán)毛蚓(Pheretima aspergillum(E. Perrier))，習(xí)稱廣地龍。地龍的主要成分為蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、酶、糖類等。對(duì)地龍中蛋白質(zhì)、氨基酸等成分的定性、 定量研究已有報(bào)道。其中小分子成分主要為次黃嘌呤及含氮化合物。
臨床上使用的藥品疏血通注射液，是由水蛭、地龍兩味藥材的水提取物作為藥物活性成分的中藥注射劑是一種高效速效的治療心腦血管疾病的注射劑。中國專利申請(qǐng) 03148281. 3,200410101538. 8以及200510000266. 7分別公開了疏血通注射液及其制備過程，前述申請(qǐng)的全部內(nèi)容，引入本申請(qǐng)作為參考。
具有免疫原性的物質(zhì)通常為大分子物質(zhì)，相對(duì)分子量越大，免疫原性越強(qiáng)。而小分子多肽則免疫原性較弱或無免疫原性?？乖ǔ榇蠓肿游镔|(zhì)的可能原因是(1)抗原相對(duì)分子量越大，表面特殊化學(xué)基因(抗原決定簇)就越多，因而就越能有效地刺激免疫細(xì)胞，產(chǎn)生免疫應(yīng)答；( 大分子抗原物質(zhì)化學(xué)組成復(fù)雜、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易被破壞和清除，在體內(nèi)停留時(shí)間較長，故可持續(xù)刺激免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答。醫(yī)藥學(xué)上，通常將由51個(gè)氨基酸組成的人胰島素(人胰島素標(biāo)準(zhǔn)分子量為5800道爾頓)作為分界限，將分子量大于5800 道爾頓的物質(zhì)統(tǒng)稱為高分子量物質(zhì)，在注射劑中受到嚴(yán)格的限量控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，具體地說，提供一種水蛭和/或地龍分子量5800道爾頓以下的提取物及其制備方法和用于制備藥物的用途。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的提取物在臨床上應(yīng)用更加安全和放心。[0007]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，其以水蛭和/或地龍作為原料經(jīng)提取而制成的，其特征在于所述提取物的分子量5800道爾頓(dalton)以下。
上述所述的提取物，可以是水蛭的提取物、地龍的提取物或者水蛭和地龍混和在一起的提取物，其中，所述的水蛭和地龍混合在一起的提取物，可以是水蛭和地龍分別提取所得到的提取物混合后的提取物，也可以是水蛭和地龍混合在一起提取得到的提取物。
并且，所述的水蛭，可以是水蛭科動(dòng)物螞蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭 Hirudo mpponica Whitman 或柳葉蟲馬蟥 Whitmania ac-ranulataffhitman,所述的地龍，可以是鉅蚓科動(dòng)物參環(huán)毛蚓Pheretimaaspergillum (E. Perrier)、通俗環(huán)毛蚓 Pheretima vulgaris Chen、威廉環(huán)毛蟲引Pheretima guillelmi (Michaelsen)或木節(jié)盲環(huán)毛蟲引 Pheretima pectiniferaMichaelsen。其中，作為優(yōu)選,水蛭為水蛭科動(dòng)物螞蟥(Whitmania pigraffhitman)的干品或鮮品，地龍為鉅引科動(dòng)物參環(huán)毛蚓(Pheretima aspergillum(E. Perrier))的干品或鮮品。
本發(fā)明所述提取物可通過包含用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾步驟的方法制備的。例如，本發(fā)明所述的原料通過用現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)方法制備得到的提取物(半成品或中間體)，用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾，以得到分子量5800道爾頓以下的水蛭和/或地龍?zhí)崛∥铩?br>其中，作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的提取物是通過包含如下步驟的方法制備的
(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，低溫浸漬，過濾，得到濾液和藥渣；
(2)藥渣破碎后，與步驟(1)的濾液混合，形成勻漿，將勻漿反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；
(3)將步驟⑵所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；
(4)將步驟C3)所得透過液或?yàn)V液，用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
其中，如果需要，可以反復(fù)用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。并且，如果需要，還可以在過濾前進(jìn)行熱壓處理，例如濾液在溫度105 136°C熱壓10 45分鐘處理。
其中，作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的提取物是也可以通過包含如下步驟的方法制備的
(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，破碎形成勻漿，經(jīng)反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；
(2)將步驟(1)所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；
(3)將步驟( 所得透過液或?yàn)V液用離子交換柱層析處理；
(4)將步驟C3)所得洗脫液經(jīng)脫鹽處理后，用截留分子量小于或等于6000道爾頓、 優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾；或者將步驟(3)所得洗脫液用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾后，進(jìn)行脫鹽處理。
其中，如果需要，可以反復(fù)用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
超濾膜或超濾柱可以選用本技術(shù)領(lǐng)域：
種常見的超濾膜或超濾柱，例如材質(zhì)為聚砜材料的中空纖維超濾柱，切割分子量小于或等于6000道爾頓，優(yōu)選切割分子量為6000道爾頓；以及粗濾時(shí)使用切割分子量10000 100000道爾頓的中空纖維超濾柱，優(yōu)選為10000 道爾頓或50000道爾頓。
上述所述的離子交換柱，可以為陽離子交換柱，也可以為陰離子交換柱。其中，陽離子交換柱例如選用CM-交聯(lián)葡聚糖、CM-瓊脂糖、CM-纖維素、SP-交聯(lián)葡聚糖、SP-瓊脂糖、SP-纖維素等；陰離子交換柱例如可選用DEAE-交聯(lián)葡聚糖、DEAE-瓊脂糖、DEAE-纖維素、Q-交聯(lián)葡聚糖、Q-瓊脂糖、Q-纖維素等。
本發(fā)明所述的提取物，其中含有多肽、氨基酸和次黃嘌呤的成份。
本發(fā)明所述的水蛭和/或地龍的提取物，原料水蛭和/或地龍可以是干品，也可以是鮮品。水蛭、地龍可以分別提取，分別得到水蛭提取物、地龍?zhí)崛∥?，也可以水蛭和地龍混合在一起進(jìn)行提取，得到水蛭和地龍混和在一起的提取物。
本發(fā)明所述的提取物，可以為提取液，也可以經(jīng)脫水干燥后形成固體形式。
本發(fā)明還提供一種所述提取物的制備方法，所述方法包括用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾的步驟。例如，所述原料水蛭和/或地龍可通過用現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)方法提取、分離，將所得到的提取物(也稱半成品或中間體)最后用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾，以得到分子量5800道爾頓以下的水蛭和/或地龍?zhí)崛∥铩?br>作為優(yōu)選，制備本發(fā)明的提取物的方法，包括
(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，低溫浸漬，過濾，得到濾液和藥渣；
(2)藥渣破碎后，與步驟(1)的濾液混合，形成勻漿，將勻漿反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；
(3)將步驟( 所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；
(4)將步驟C3)所得透過液或?yàn)V液，用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
其中，如果需要，可以反復(fù)用截留分子量小于或等于6000道爾頓、優(yōu)選截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。并且，如果需要，還可以在過濾前進(jìn)行熱壓處理，例如濾液在溫度105 136°C熱壓10 45分鐘處理。
本發(fā)明提取物中物質(zhì)分子量的測(cè)定，通過用人胰島素(分子量為5800)作為參照物，測(cè)定分子量大于人胰島素的物質(zhì)的含量作為高分子量物質(zhì)含量。
例如，本發(fā)明采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，具體方法如下
一、試驗(yàn)材料與儀器
1、標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量物質(zhì)人胰島素ansulin)，分子量5800，規(guī)格Img/支，購自中國藥品生物制品檢定所。
2、儀器[0041]可見紫外分光光度計(jì)(日本日立U-3210)
高效液相色譜儀Waters 600系統(tǒng)
高效液相色譜儀Agilent HpllOO
3、試劑
三氟醋酸化學(xué)純(理工大學(xué)化工與材料學(xué)院)
乙腈色譜純(迪馬公司)
二、色譜條件
色譜柱凝膠色譜柱(TSKGEL 2000Sffxl 7. 8mmX 300mm)；
流動(dòng)相三氟醋酸-乙腈-水，按體積比為0.025 30 70；
紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長為214 士 Inm ；
流速為 0. 7ml/min。
三、測(cè)定
精密量取供試品適量，用流動(dòng)相制成供試品溶液；精密稱取人胰島素適量，用流動(dòng)相制成對(duì)照品溶液；分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定分子量大于人胰島素的物質(zhì)的含量，即計(jì)算保留時(shí)間小于人胰島素峰保留時(shí)間的色譜峰所對(duì)應(yīng)的物質(zhì)的含量，作為供試品中高分子量(分子量大于5800道爾頓)的物質(zhì)含量。
本發(fā)明提取物中物質(zhì)分子量的分布，也可以通過質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定。例如通過如下方法測(cè)定提取物中組分的分子量分布情況。
取本發(fā)明提取物樣品適量(或據(jù)需要作脫鹽處理)，用0. 5% TFA(三氟乙酸)水溶液溶解。將樣品和基質(zhì)按1 1混合后，點(diǎn)靶，室溫干燥。所述的基質(zhì)為DHBO，5-二羥基苯甲酸)、CCA (a-氰基-4-羥基肉桂酸)。
用Autoflex (Bruker公司)儀器測(cè)定。質(zhì)譜條件(MALDI-TOF-MS) ；N2激光源，波長337nm ；線性掃描(飛行管長1. 6m，加速電壓20kv)；離子類型正離子(或負(fù)離子)。
測(cè)定結(jié)果表明本發(fā)明提取物中所含組份分子量均小于5800道爾頓。
本發(fā)明所述的提取物，經(jīng)過上述方法測(cè)定，未發(fā)現(xiàn)分子量大于5800道爾頓的物質(zhì)，因此本發(fā)明所述的具有預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物分子量不超過5800道爾頓。
本發(fā)明所述的提取物中，含有多肽、氨基酸和次黃嘌呤成分。其中多肽、氨基酸可以用適宜的氨基酸分析儀或高效液相色譜儀適宜系統(tǒng)進(jìn)行分析。例如可以按照中國藥典 2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行氨基酸測(cè)定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以A、B液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長33811111和沈211111，柱溫30°C 40°C。其中
A液醋酸鈉適量加注射用水溶解后，加入三乙胺適量，混勻，調(diào)節(jié)pH至中性，再加入四氫呋喃適量混勻。
B液醋酸鈉適量加注射用水溶解，加醋酸適量調(diào)節(jié)pH至中性，加乙腈-甲醇 (1 1)的混合液適量混勻。
氨基酸對(duì)照品適量加ρΗΙΟ. 4的硼酸緩沖液適量混勻，加鄰苯二甲醛和9-芴基甲基氯甲酸酯衍生試劑，攪拌均勻，使充分反應(yīng)生成鄰苯二甲酸-9-芴基甲基氯甲酸酯氨基酸，作為對(duì)照品溶液。本發(fā)明提取物作為供試品，依法操作，采用高效液相色譜儀測(cè)定氨基酸。
所述提取物中次黃嘌呤測(cè)定，也可以按照中國藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相，0. 磷酸氫二鈉水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長254nm。理論板數(shù)按次黃嘌呤計(jì)算應(yīng)不低于3000。
本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，通過家兔的局部刺激性試驗(yàn)，將所述提取物配制成含生藥0. 5g/ml的藥液，家兔左右兩腿股四頭肌內(nèi)各注射1ml，注射后48 小時(shí)處死動(dòng)物，解剖取出兩側(cè)股四頭肌，縱向切開，觀察注射局部刺激反應(yīng)，并放入10%甲醛溶液固定，按常規(guī)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。結(jié)果肉眼檢查發(fā)現(xiàn)家兔股四頭肌均無充血、壞死現(xiàn)象，根據(jù)刺激反應(yīng)中反應(yīng)級(jí)的分值計(jì)為0分，即為無明顯變化，病理檢查證實(shí)無明顯炎癥反應(yīng)。結(jié)果為本發(fā)明提取物局部刺激性反應(yīng)無明顯變化。
本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，通過家兔的血管刺激性試驗(yàn)，將所述提取物配制成含生藥0. 5g/ml的藥液，按lg/kg劑量(相當(dāng)于臨床用藥量25倍)，每日作耳靜脈注射一次，連續(xù)三次。取注射部位耳片固定，按常規(guī)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，觀察局部注射的靜脈是否有炎癥反應(yīng)。結(jié)果病理檢查表明家兔耳靜脈均無組織變性或壞死的刺激反應(yīng)，說明多次靜脈注射本發(fā)明的提取物對(duì)局部血管無明顯炎癥反應(yīng)。
本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，通過豚鼠的過敏性試驗(yàn)，將所述提取物配制成含生藥0. 5g/ml的藥液，取健康豚鼠6只，分第1組和第2組，每組3只。本實(shí)驗(yàn)第1組第2組豚鼠于實(shí)驗(yàn)第1天、第3天和第5天腹腔注射本發(fā)明的提取物注射液，每只0. 5ml。第1組于第1次注射后第14天每只豚鼠靜脈注射本發(fā)明的提取物注射液1ml。 第2組于第1次注射后第21天每只豚鼠靜脈注射本發(fā)明的提取物注射液1ml。在靜脈注射后15分鐘內(nèi)，立即觀察每只豚鼠是否有豎毛、呼吸困難、打噴嚏、干嘔或咳嗽，或有鑼音、抽搐、虛脫或死亡等現(xiàn)象。結(jié)果第1組豚鼠于第14天和第2組豚鼠于第21天靜脈注射本發(fā)明提取物注射液后15分鐘內(nèi)均未出現(xiàn)豎毛、呼吸困難、打噴嚏、咳嗽、抽搐、死亡等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)觀察到末次給藥的第2天，豚鼠均未出現(xiàn)明顯過敏反應(yīng)現(xiàn)象，說明本發(fā)明的提取物對(duì)豚鼠過敏試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。
此外，本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，通過家兔的溶血性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明未發(fā)現(xiàn)有溶血現(xiàn)象，也未見有紅細(xì)胞凝集作用。說明本發(fā)明的提取物溶血試驗(yàn)為陰性結(jié)果。
因此，本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，可以作為制備各種制劑的原料。本發(fā)明也涉及一種包含上述所述的提取物作為活性成分的藥物組合物。其中所述的藥物組合物，可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、膜劑、貼劑、貼片、栓劑、丸劑、散劑、軟膏劑、合劑 (如口服液)、糖漿劑、酊劑、眼用制劑、鼻用制劑、注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液或者它們的緩釋、控釋制劑。所述的制劑為常規(guī)藥物制劑，因此，通過本領(lǐng)域的常規(guī)制藥技術(shù)可以制得上述所述的制劑。
上述所述的提取物或藥物組合物，具有預(yù)防、治療血栓性疾病的作用，可用于制備預(yù)防、治療血栓性疾病的藥物。例如，可以用于預(yù)防、治療高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心絞痛、動(dòng)脈硬化性腦梗死、腦栓塞、靜脈血栓形成、肺栓塞、肺梗死、血栓閉塞性脈管炎、動(dòng)脈硬化性閉塞癥、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、外科手術(shù)并發(fā)血栓形成和血栓栓塞、肝梗死、腎臟梗死、膽囊梗死、腸系膜梗死、肢體壞疽、糖尿病外周神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜血管阻塞或突發(fā)性聾等疾病。
本發(fā)明所述的預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，其突出的優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在其組分的分子量分布均在5800道爾頓以下，相對(duì)分子質(zhì)量(分子量)較小，因此免疫原性較弱或無免疫原性。而且，在不溶性微粒的數(shù)量、粒徑方面，與已有的水蛭和/或地龍?zhí)崛∥锵啾容^， 本發(fā)明的水蛭和/或地龍?zhí)崛∥镏胁蝗苄晕⒘５臄?shù)量少得多、粒徑小得多，因而安全性顯著提高。相對(duì)于已有的水蛭和/或地龍?zhí)崛∥?，在藥物活性或治療作用絲毫不減弱甚至是有所提高的情況下，藥物的安全性被顯著地提高，本發(fā)明的提取物制成的注射液使用前可以不經(jīng)過皮試試驗(yàn)，從而節(jié)省了搶救病人時(shí)間以及減輕患者的痛苦等。


圖1 人胰島素(分子量5800道爾頓)高效液相色譜檢測(cè)圖。
圖2 本發(fā)明提取物(水蛭地龍?zhí)崛∥?高效液相色譜檢測(cè)圖。
圖3 本發(fā)明提取物(水蛭提取物)質(zhì)譜檢測(cè)圖。
其中基質(zhì)為CCA，檢測(cè)為正離子。
圖4 本發(fā)明提取物(地龍?zhí)崛∥?質(zhì)譜檢測(cè)圖。
其中基質(zhì)為DHB，檢測(cè)為負(fù)離子。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
取等量的水蛭(干品)、地龍(干品)，用生理鹽水或注射用水浸泡，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水或注射用水洗凈，置于2-4倍的生理鹽水或注射用水中于低溫 0_4°C浸漬M小時(shí)，過濾，濾液和藥渣分別存放備用。
將藥渣用組織搗碎機(jī)搗碎，再用膠體磨與上述濾液混合勻漿，磨成直徑小于0.5 微米的勻漿液，將勻漿液在零下15°C以下冷凍15-30小時(shí)后取出，于低溫0-4°C條件下解融，再按上述條件反復(fù)冷凍解融至少2次。
將上述凍融液置于離心機(jī)離心分離，得到上清液，通過分子量5萬道爾頓的超濾柱進(jìn)行粗濾，濾液再通過分子量1萬道爾頓的超濾柱過濾純化
取通過分子量1萬道爾頓超濾柱的濾液，再通過分子量6000道爾頓的超濾柱進(jìn)一步純化，濾液經(jīng)105-136°C熱壓10-45分鐘處理，再通過分子量6000的超濾柱過濾，得到提取液。
如果需要，可以將上述得到的提取液脫水干燥成固體。
采用上述所述方法測(cè)定，提取液中含有多肽、氨基酸和次黃嘌呤成分。通過前述的高效液相色譜檢測(cè)，上述提取物中未發(fā)現(xiàn)分子量大于5800道爾頓的物質(zhì)，因而所得到的提取物的分子量均分布在5800道爾頓以下。色譜檢測(cè)結(jié)果見圖1和2。
圖1和2各峰數(shù)據(jù)分別見表1和2。
表1圖1人胰島素檢測(cè)結(jié)果[0087]
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，其以水蛭和地龍為原料經(jīng)提取而制成的，其特征在于所述提取物的分子量5800道爾頓以下，并且是通過包含如下步驟的方法制備的(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，低溫浸漬，過濾，得到濾液和藥渣；(2)藥渣破碎后，與步驟(1)的濾液混合，形成勻漿，將勻漿反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；(3)將步驟( 所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；(4)將步驟C3)所得透過液或?yàn)V液，用截留分子量小于或等于6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的提取物，其中所述步驟(4)中，用截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的提取物，其中所述的步驟(4)中，反復(fù)用所述的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的提取物，其中所述的步驟中，在過濾前進(jìn)行熱壓處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的提取物，其中所述的熱壓處理為濾液在溫度105 136°C熱壓10 45分鐘處理。
6.一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，其以水蛭和地龍為原料經(jīng)提取而制成的，其特征在于所述提取物的分子量5800道爾頓以下，并且是通過包含如下步驟的方法制備的(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，破碎形成勻漿，經(jīng)反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；(2)將步驟(1)所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；(3)將步驟( 所得透過液或?yàn)V液用離子交換柱層析處理；(4)將步驟C3)所得洗脫液經(jīng)脫鹽處理后，用截留分子量小于或等于6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾；或者將步驟C3)所得洗脫液用截留分子量小于或等于6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾后，進(jìn)行脫鹽處理。
7.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的提取物，其中所述的步驟(4)中，用截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的提取物，其中所述的步驟(4)中，反復(fù)用所述的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
9.根據(jù)權(quán)利要求
1-8任一項(xiàng)所述的提取物，其中含有多肽、氨基酸和次黃嘌呤成份。
10.根據(jù)權(quán)利要求
1-8任一項(xiàng)所述的提取物，其中所述原料為水蛭和地龍的干品或鮮品O
11.根據(jù)權(quán)利要求
1-8任一項(xiàng)所述的提取物，其中水蛭、地龍是分別提取或者混合在一起進(jìn)行提取。
12.根據(jù)權(quán)利要求
1-8任一項(xiàng)所述的提取物，其中所述提取物為提取液或脫水干燥后的固體。
13.一種制備權(quán)利要求
1所述提取物的方法，其中包括(1)原料用注射用水或生理鹽水洗凈，低溫浸漬，過濾，得到濾液和藥渣；(2)藥渣破碎后，與步驟(1)的濾液混合，形成勻漿，將勻漿反復(fù)冷凍和解融，離心分離，取上清液；(3)將步驟( 所得上清液用截留分子量10000 100000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行超濾，得到透過液或?yàn)V液；(4)將步驟C3)所得透過液或?yàn)V液，用截留分子量小于或等于6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
14.根據(jù)權(quán)利要求
13所述的方法，其中所述的步驟中，用截留分子量6000道爾頓的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
15.根據(jù)權(quán)利要求
13或14所述的方法，其中所述的步驟中，反復(fù)用所述的超濾膜或超濾柱進(jìn)行過濾。
16.根據(jù)權(quán)利要求
13或14所述的方法，其中所述的步驟(4)中，在過濾前進(jìn)行熱壓處理。
17.根據(jù)權(quán)利要求
16所述的方法，其中所述的熱壓處理為濾液在溫度105 136°C熱壓10 45分鐘處理。
18.包含權(quán)利要求
1-12任一項(xiàng)所述的提取物作為活性成分的藥物組合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求
18所述的藥物組合物，其為片劑、膠囊劑、顆粒劑、膜劑、貼劑、貼片、 栓劑、丸劑、散劑、軟膏劑、合劑、糖漿劑、酊劑、眼用制劑、鼻用制劑、注射液、注射用無菌粉末或注射用濃溶液。
20.根據(jù)權(quán)利要求
18所述的藥物組合物，其為口服液。
21.根據(jù)權(quán)利要求
18所述的藥物組合物，其為緩釋制劑或控釋制劑。
22.權(quán)利要求
1-12任一項(xiàng)所述的提取物或權(quán)利要求
18-21任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備預(yù)防或治療血栓性疾病的藥物中的用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求
22所述的用途，其中所述的血栓性疾病選自由血栓引起或者導(dǎo)致血栓形成的高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心絞痛、動(dòng)脈硬化性腦梗死、腦栓塞、靜脈血栓形成、肺栓塞、肺梗死、血栓閉塞性脈管炎、動(dòng)脈硬化性閉塞癥、彌散性血管內(nèi)凝血、外科手術(shù)并發(fā)癥血栓形成和血栓栓塞、肝梗死、腎臟梗死、膽囊梗死、腸系膜梗死、肢體壞疽、糖尿病外周神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜血管阻塞、突發(fā)性聾。
專利摘要
本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療血栓性疾病的提取物，具體地說，提供一種水蛭和/或地龍分子量不超過5800道爾頓的提取物，以及它的制備方法、藥物組合物、用途。本發(fā)明的提取物和現(xiàn)有的同類產(chǎn)品相比，在藥物活性或治療作用不被減弱的前提下，藥物安全性被顯著地提高。
文檔編號(hào)A61P7/02GKCN101340921 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200780000844
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2007年6月26日
發(fā)明者李振國 申請(qǐng)人:李振國導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2),