專利名稱:來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬人類食品添加劑領(lǐng)域，涉及來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒及其制備方法。
背景技術(shù)：
硒存在于肌體的多種功能蛋白酶中。是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、磷脂氫谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、5’-脫碘酶活性中心關(guān)鍵的組成元素，參與體內(nèi)過(guò)氧化物及碘的代謝，硒具有清除自由基、預(yù)防癌癥、抗衰養(yǎng)顏、保護(hù)肝臟、抵抗有害重金屬、抗輻射，調(diào)節(jié)免疫功能等作用，硒對(duì)肝炎、心血管病、以及對(duì)腫瘤病人的放療、化療的輔助治療均有明顯促進(jìn)恢復(fù)的作用。1973年，世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)為硒是人類和動(dòng)物生命中必需的微量元素，補(bǔ)硒可以有效預(yù)防多種疾病。中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)的“每日膳食營(yíng)養(yǎng)素供給量”已將硒列為15種每日膳食營(yíng)養(yǎng)素之一。
研究表明硒的生理需要量40ug/d，界限中毒量800ug/d，建議膳食補(bǔ)充量50ug/d～250ug/d，最高安全攝入量400ug/d，兒童為150ug/d。WHO等國(guó)際組織均采用了此數(shù)據(jù)。
現(xiàn)在預(yù)防和治療由于缺硒引起的疾病主要方法是人工補(bǔ)硒。所用的硒主要有兩種形式無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒。而硒鹽的毒理分析表明，無(wú)機(jī)硒毒性較強(qiáng)，一般僅用于醫(yī)藥品，不用于食品，其使用范圍和計(jì)量都受到限制。通過(guò)生物將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，不但可以提高硒的生理活性與吸收率，而且可以降低其毒性，才具有普遍的食用和保健價(jià)值。
現(xiàn)在主要應(yīng)用植物和微生物將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)硒。轉(zhuǎn)化方法主要為(1)微生物合成轉(zhuǎn)化法，如富硒酵母、富硒食用菌等；(2)植物天然合成轉(zhuǎn)化法，如富硒茶葉、富硒蘋(píng)果、富硒藻類等；(3)植物種子發(fā)芽轉(zhuǎn)化法，如富硒麥芽、富硒豆芽等?，F(xiàn)在應(yīng)用的有機(jī)硒主要通過(guò)微生物合成轉(zhuǎn)化法制備，應(yīng)用的微生物有酵母和一些食用真菌如靈芝、香菇等。這些真菌還沒(méi)有真正深入到人們的一日三餐中，不能達(dá)到補(bǔ)硒的目的。
與本發(fā)明最相近的現(xiàn)有技術(shù)是公開(kāi)號(hào)為CN1252835A的發(fā)明專利，名稱為“添加了來(lái)源于酵母的硒鹽的食品以及來(lái)源于酵母的硒鹽的制備方法”。其公開(kāi)的用于生產(chǎn)硒富集酵母產(chǎn)物的方法，包括以下步驟制備酵母生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)物的混合物(含水培養(yǎng)基)；通過(guò)將硒化合物溶解在蒸餾水中然后將得到的硒溶液過(guò)濾制備在蒸餾水中的硒溶液；將該硒溶液加入酵母生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)物中并混合形成一種硒生長(zhǎng)混合物；將該硒生長(zhǎng)混合物加入活的酵母培養(yǎng)物中，形成一種硒酵母生長(zhǎng)溶液，并在振蕩下溫?。粡奈湍干L(zhǎng)溶液中回收并濃縮酵母細(xì)胞；將回收的酵母細(xì)胞洗滌，除去胞外硒；和將洗滌的酵母細(xì)胞干燥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是提供一種來(lái)源于米曲霉有機(jī)硒及其制備方法。來(lái)源于米曲霉有機(jī)硒為人群提供一種較無(wú)機(jī)硒鹽更容易吸收利用的有機(jī)硒鹽，克服了直接補(bǔ)無(wú)機(jī)硒的缺點(diǎn)。在食品工業(yè)生產(chǎn)中，以含有機(jī)硒的米曲霉代替普通的米曲霉，使其生產(chǎn)的產(chǎn)品，如醬油、醋、黃酒等均含有有機(jī)硒，成一種補(bǔ)硒的保健食品。
米曲霉是食品工業(yè)中常用的一種真菌，生產(chǎn)上用于釀造醬油、黃酒的糖化劑，還應(yīng)用于發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶、淀粉酶、果膠酶、曲酸等，有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)和應(yīng)用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)，米曲霉與酵母、靈芝、香菇一樣具有強(qiáng)的富硒能力。
本發(fā)明的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒，是以米曲霉為載體，存在的形式為，干燥的米曲霉細(xì)胞形式或水溶液形式或干粉形式的有機(jī)硒。
有機(jī)硒在米曲霉水溶液中含量5ug/ml～200mg/ml。在米曲霉干粉中含量10ug/mg～300ug/mg。
本發(fā)明的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒制備方法，以硒化合物為原料，硒化合物包括亞硒酸鈉或/和硒酸鈉，經(jīng)過(guò)制備含硒培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)、收集洗滌、細(xì)胞自溶、滅菌、制成成品的過(guò)程；其特征在于，所說(shuō)的制備含硒培養(yǎng)基，是將濃度為10mg/L～300g/L硒化合物的生理鹽水溶液加入到豆汁或/和豆芽汁的米曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中，形成硒化合物的含量在10mg/L～10g/L的含硒培養(yǎng)基；所說(shuō)的接種培養(yǎng)，是將米曲霉孢子接種到含硒培養(yǎng)基中，在30～40℃溫度范圍，培養(yǎng)15～90小時(shí)；所說(shuō)的收集洗滌，是將含有機(jī)硒的米曲霉細(xì)胞通過(guò)離心或過(guò)濾從含硒培養(yǎng)基中分離出來(lái)；用與米曲霉細(xì)胞等滲的生理鹽水溶液或葡萄糖水溶液或磷酸鹽緩沖液將分離的米曲霉細(xì)胞洗滌2～12次，除去胞外硒；所說(shuō)的自溶，是應(yīng)用高鹽細(xì)胞自溶法，或者酸熱細(xì)胞自溶法，裂解細(xì)胞，將細(xì)胞內(nèi)有機(jī)硒、氨基酸、蛋白質(zhì)、核糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)釋放出來(lái)，制成水溶液形式的有機(jī)硒。高鹽細(xì)胞自溶法是使自溶體系中的NaCl濃度達(dá)到1％～5％，溫度在20℃～80℃之間，自溶5h～40h。酸熱細(xì)胞自溶法是使自溶體系的pH值在2～7范圍內(nèi)，溫度范圍為20℃～70℃，自溶10min～30h，自溶完成后用NaOH調(diào)節(jié)自溶體系pH值到6.3～7.3。
所說(shuō)的滅菌，是在90～135℃溫度下滅菌15～30分鐘；所說(shuō)的制成成品，是制成干燥的米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒；使米曲霉細(xì)胞自溶制成水溶液形式的有機(jī)硒；將水溶液干燥，制成干粉形式的有機(jī)硒產(chǎn)品。
在接種培養(yǎng)中，可以是挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、在30～45℃和100～200rpm下培養(yǎng)20～40h，培養(yǎng)出一級(jí)種子液；再將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到含硒培養(yǎng)基中，在30～45℃和100～200rpm下培養(yǎng)20～40h，作為二級(jí)種子液；最后將二級(jí)種子液按照10％的接種量接種到含硒培養(yǎng)基中。
更詳細(xì)的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒制備方法，分為7個(gè)步驟(1)制備可以支持米曲霉生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。
(2)制備硒化合物的母液；(3)將硒化合物母液加入米曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中，使之形成一種含硒的培養(yǎng)基；(4)接種和培養(yǎng)米曲霉，通過(guò)培養(yǎng)條件使米曲霉發(fā)酵生長(zhǎng)；(5)從米曲霉生長(zhǎng)培養(yǎng)基中收集米曲霉細(xì)胞；(6)將回收的米曲霉細(xì)胞洗滌，除去胞外硒；(7)滅菌和/或干燥，制成干燥的米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒；使菌體細(xì)胞自溶制成水溶液形式的有機(jī)硒；將水溶液干燥，制成干粉形式的有機(jī)硒產(chǎn)品。
本發(fā)明的制備步驟(1)米曲霉生長(zhǎng)培養(yǎng)基包括豆芽汁培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、富含蛋白質(zhì)的豆類，包括黃豆、黑豆、綠豆等，和富含淀粉的谷類，包括大麥、小麥、玉米等，及其副產(chǎn)品為主要原料做成的液體培養(yǎng)基，也包括可支持米曲霉生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，也可以是以上兩種或兩種以上培養(yǎng)基的混合物組成。在培養(yǎng)基中加入可支持米曲霉生長(zhǎng)的維生素、生物素、生物小分子物質(zhì)、有機(jī)和無(wú)機(jī)鹽、礦物質(zhì)、單質(zhì)金屬等，這些物質(zhì)包括但不限于生物素，維生素B1，維生素B6，泛酸鈣，肌醇，銅，硫酸銅，鋅，硫酸鋅，鐵，和硫酸鐵。培養(yǎng)基中還添加適量的抗生素防止染菌，抗生素包括四環(huán)素、鏈霉素等其他抗生素。培養(yǎng)基的pH控制在3～9之間，優(yōu)選的范圍控制在4～7之間。
本發(fā)明制備步驟(2)涉及硒化合物母液的制備，將硒化合物如硒酸鈉、亞硒酸鈉等硒鹽溶解在生理鹽水中，通過(guò)濾過(guò)得到硒母液。硒化合物包括硒酸鈉、亞硒酸鈉等硒鹽或有機(jī)硒化合物形式。硒母液含有10mg/L～300g/L的硒化合物。
本發(fā)明制備步驟(3)涉及將硒化合物母液加入米曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中，使之形成一種含硒的培養(yǎng)基。最終硒化合物的含量在10mg/L～10g/L。
本發(fā)明制備步驟(4)涉及米曲霉的接種和培養(yǎng)。接種方式包括種子液接種，使用孢子直接接種，米曲霉生產(chǎn)時(shí)做成的曲接種，但不限于以上幾種接種方法。培養(yǎng)溫度在30℃～40℃，優(yōu)選在35℃～38℃。培養(yǎng)時(shí)間是15h～90h，優(yōu)選范圍是40h～70h。在生產(chǎn)過(guò)程中使用液體培養(yǎng)基時(shí)，要在振蕩器或者搖床上培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速在50rpm～200rpm，優(yōu)選范圍在120rpm～170rpm。生產(chǎn)富硒米曲霉中所選用的米曲霉可以是從環(huán)境中篩選出來(lái)的，可以是直接從菌種收藏中心購(gòu)買的，也可以是從工業(yè)生產(chǎn)中所用的曲或者發(fā)酵液中分離出來(lái)的。
本發(fā)明制備步驟(5)涉及從米曲霉生長(zhǎng)培養(yǎng)基中收集米曲霉細(xì)胞。將含有機(jī)硒的米曲霉細(xì)胞通過(guò)離心或者過(guò)濾從硒米曲霉培養(yǎng)基中分離出來(lái)。離心的轉(zhuǎn)速是1000rpm～10000rpm，優(yōu)選方案在4000rpm～8000rpm。過(guò)濾可以選用濾紙、紗布、脫脂棉、過(guò)濾漏斗、抽濾等方法。
本發(fā)明制備步驟(6)涉及將回收的米曲霉細(xì)胞洗滌，除去胞外硒。用與細(xì)胞等滲的水溶液將分離的米曲霉細(xì)胞洗滌2～12次，優(yōu)選為3～6次，洗滌溶液的核心問(wèn)題是與米曲霉細(xì)胞的滲透壓保持一致，可以達(dá)到最佳的洗滌效果。水溶液的溶質(zhì)可以選用NaCl、KCl、MgSO4、KH2PO4、Na2HPO4等無(wú)機(jī)鹽，也可以選用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等生物小分子溶液和選用聚乙二醇、聚乙烯醇、淀粉等生物大分子溶液，還可以使用兩種或兩種以上的溶質(zhì)將水溶液的滲透壓調(diào)節(jié)到與米曲霉細(xì)胞滲透壓一致。溶質(zhì)的濃度范圍在其與細(xì)胞等滲濃度的基礎(chǔ)上下調(diào)90％到上調(diào)200％。以NaCl為例說(shuō)明等滲水溶液的組成等滲NaCl水溶液的濃度為0.9％，但NaCl的濃度范圍可以是0.11％～2.7％，使用此范圍內(nèi)的水溶液均可達(dá)到較好的洗滌效果，有效的除去胞外硒。
本發(fā)明制備步驟(7)涉及將米曲霉細(xì)胞滅菌和/或干燥，得到干燥的米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒產(chǎn)品。滅菌步驟可在90℃～135℃進(jìn)行，優(yōu)選在115℃～125℃。干燥選用自然干燥、烘干、真空干燥、凍干等任何干燥形式，但不限于以上幾種。所得到的干燥米曲霉產(chǎn)品含有約10ug/mg～300ug/mg有機(jī)硒。
水溶液形式的有機(jī)硒將洗去細(xì)胞外硒的米曲霉細(xì)胞自溶，裂解細(xì)胞，將細(xì)胞內(nèi)有機(jī)硒、氨基酸、蛋白質(zhì)、核糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)釋放出來(lái)，制成水溶液形式的有機(jī)硒。菌體細(xì)胞自溶采用高鹽細(xì)胞自溶法，或者酸熱細(xì)胞自溶法。菌體細(xì)胞自溶后濾過(guò)除去細(xì)胞壁等不溶物質(zhì)，將得到的物質(zhì)滅菌，滅菌溫度在90℃～135℃之間，優(yōu)選在115℃～125℃之間。滅菌時(shí)間在10min～2h，優(yōu)選時(shí)間在20min～25min。最終水溶液有機(jī)硒產(chǎn)品中含有5ug/ml～200mg/ml的有機(jī)硒。高鹽細(xì)胞自溶法中的鹽選用NaCl，添加固體形式的NaCl，或者高濃度的NaCl水溶液，使自溶體系中的NaCl濃度達(dá)到1％～5％，優(yōu)選的濃度為2.5％～3.5％。恒溫自溶，自溶的溫度可以在20℃～80℃之間，優(yōu)選范圍為50℃～60℃之間，自溶時(shí)間可以在5h～40h，優(yōu)選時(shí)間為20h～30h。
酸熱細(xì)胞自溶法是在洗去胞外硒的米曲霉細(xì)胞中添加HCl，使自溶體系的pH值在2～7范圍內(nèi)，優(yōu)選的PH值在3.5～4.5，溫度范圍為20℃～70℃，優(yōu)選的溫度為40℃～50℃，自溶時(shí)間為10min～30h，優(yōu)選自溶時(shí)間為30min～2h。自溶完成后用NaOH調(diào)節(jié)自溶體系pH值到6.3～7.3。
干粉形式的有機(jī)硒將細(xì)胞自溶后得到的水溶液通過(guò)自然干燥、烘干、真空干燥、凍干等手段制成干粉形式的有機(jī)硒，干粉滅菌后保存，滅菌溫度可在90℃～135℃之間進(jìn)行，優(yōu)選在115℃～125℃，滅菌時(shí)間為10min～2h，優(yōu)選時(shí)間為20min～25min。干粉中含10ug/mg～300ug/mg的有機(jī)硒。
本發(fā)明的有機(jī)硒是以米曲霉為載體的，米曲霉具有強(qiáng)的硒富集能力，并且具有菌種生長(zhǎng)快，富硒米曲霉菌胞內(nèi)有機(jī)硒含量高的特點(diǎn)。本發(fā)明的方法中，米曲霉在發(fā)酵過(guò)程可以把無(wú)機(jī)態(tài)的硒轉(zhuǎn)變成為有機(jī)硒，這種有機(jī)硒存在于米曲霉菌體細(xì)胞中，容易為人體所代謝和吸收，是供給人類使用的最優(yōu)的硒營(yíng)養(yǎng)源。用含有機(jī)硒的米曲霉代替普通米曲霉應(yīng)用于食品工業(yè)生產(chǎn)中，可以為缺硒人群提供一種簡(jiǎn)便、持續(xù)的補(bǔ)充微量元素硒的方法；作為食品和保健品的添加劑，可以達(dá)到微量、持續(xù)補(bǔ)硒，有效的防治因缺硒引起的各種疾病。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明具體實(shí)施步驟如下，但并不意味著對(duì)本發(fā)明范圍的限制實(shí)施例1首先配制液體豆芽汁培養(yǎng)基。再制備10g/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為150mg/L。挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、150rpm培養(yǎng)24h，作為一級(jí)種子液；將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、150rpm培養(yǎng)24h，作為二級(jí)種子液；將二級(jí)種子液按照10％的接種量接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)培養(yǎng)基也是含有亞硒酸鈉豆芽汁培養(yǎng)基，37℃、150rpm培養(yǎng)60h，8000rpm，離心30min收集米曲霉細(xì)胞。用生理鹽水洗滌3次，洗去胞外的硒化合物，121℃濕熱滅菌20min。將滅完菌的米曲霉細(xì)胞在60℃烘干，制成干燥的米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒。
在實(shí)施例1中，一級(jí)種子液和二級(jí)種子液的培養(yǎng)溫度可以在30～45℃、100～200rpm培養(yǎng)20～40h。在上述的溫度、轉(zhuǎn)速、時(shí)間范圍內(nèi)培養(yǎng)效果相同。
實(shí)施例2首先配制液體豆汁培養(yǎng)基。再制備5g/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為100mg/L。挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、130rpm，培養(yǎng)20h，作為一級(jí)種子液；將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)培養(yǎng)基也是含有亞硒酸鈉豆芽汁培養(yǎng)基，30℃、130rpm，培養(yǎng)90h，8層紗布過(guò)濾收集米曲霉細(xì)胞。用葡萄糖水溶液洗滌12次，洗去胞外的硒化合物，加固體NaCl直至濃度達(dá)到3％，55℃，自溶24h，濾紙過(guò)濾，除去細(xì)胞壁等不溶物，121℃濕熱滅菌25min。制成水溶液形式的有機(jī)硒。
實(shí)施例3首先配制液體豆汁培養(yǎng)基。再制備50mg/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為10mg/L。挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、100rpm，培養(yǎng)20h，作為一級(jí)種子液；將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)培養(yǎng)基也是含有亞硒酸鈉豆芽汁培養(yǎng)基，37℃、100rpm，培養(yǎng)48h，8層紗布過(guò)濾收集米曲霉細(xì)胞。用葡萄糖水溶液洗滌2次，洗去胞外的硒化合物，加固體NaCl直至濃度達(dá)到2.5％，50℃，自溶30h，濾紙過(guò)濾，除去細(xì)胞壁等不溶物，121℃濕熱滅菌25min。制成水溶液形式的有機(jī)硒。
實(shí)施例4首先配制液體豆汁培養(yǎng)基。再制備100g/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為5g/L。挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、100rpm，培養(yǎng)20h，作為一級(jí)種子液；將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)培養(yǎng)基也是含有亞硒酸鈉豆芽汁培養(yǎng)基，40℃、300rpm，培養(yǎng)15h，8層紗布過(guò)濾收集米曲霉細(xì)胞。用葡萄糖水溶液洗滌10次，洗去胞外的硒化合物，加固體NaCl直至濃度達(dá)到4％，60℃，自溶20h，濾紙過(guò)濾，除去細(xì)胞壁等不溶物，115℃濕熱滅菌30min。制成水溶液形式的有機(jī)硒。
實(shí)施例5首先配制液體豆芽汁培養(yǎng)基。再制備15g/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為100mg/L。在保存的米曲霉菌種上挑取一些孢子接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、150rpm，培養(yǎng)70h，抽濾收集米曲霉細(xì)胞。用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，洗去胞外的硒化合物，加HCl至pH值到4.5，50℃，自溶1.5h，4000rpm，除去不溶物，將上清用凍干法制成干粉，121℃，滅菌20min。得到干粉形式的有機(jī)硒。
實(shí)施例6首先配制液體豆芽汁培養(yǎng)基。再制備100mg/L的亞硒酸鈉母液，吸取一定量的母液加入到豆芽汁培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉的最終濃度為20mg/L。在保存的米曲霉菌種上挑取一些孢子接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、150rpm，培養(yǎng)24h，抽濾收集米曲霉細(xì)胞。用磷酸鹽緩沖液洗滌2次，洗去胞外的硒化合物，加HCl至pH值到3.5，40℃，自溶1h，4000rpm，除去不溶物，將上清用凍干法制成干粉，125℃，滅菌20min。得到干粉形式的有機(jī)硒。
權(quán)利要求
1.一種來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒，其特征在于，是以米曲霉為載體，存在形式為，干燥的米曲霉細(xì)胞形式或水溶液形式或干粉形式的有機(jī)硒。
2.按照權(quán)利要求
1所述的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒，其特征在于，在米曲霉水溶液中含有5ug/ml～200mg/ml的有機(jī)硒；或在米曲霉干粉中含有10ug/mg～300ug/mg的有機(jī)硒。
3.一種權(quán)利要求
1的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒的制備方法，以硒化合物為原料，硒化合物包括亞硒酸鈉或/和硒酸鈉，經(jīng)過(guò)制備含硒培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)、收集洗滌、細(xì)胞自溶、滅菌、制成成品的過(guò)程；其特征在于，所說(shuō)的制備含硒培養(yǎng)基，是將濃度為10mg/L～300g/L硒化合物的生理鹽水溶液加入到豆汁或/和豆芽汁的米曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中，形成硒化合物的含量在10mg/L～10g/L的含硒培養(yǎng)基；所說(shuō)的接種培養(yǎng)，是將米曲霉孢子接種到含硒培養(yǎng)基中，在30～45℃溫度范圍，培養(yǎng)15～90小時(shí)；所說(shuō)的收集洗滌，是將含有機(jī)硒的米曲霉細(xì)胞通過(guò)離心或過(guò)濾從含硒培養(yǎng)基中分離出來(lái)；用與米曲霉細(xì)胞等滲的生理鹽水溶液或葡萄糖水溶液或磷酸鹽緩沖液將分離的米曲霉細(xì)胞洗滌2～12次，除去胞外硒；所說(shuō)的細(xì)胞自溶，是應(yīng)用高鹽細(xì)胞自溶法，或者酸熱細(xì)胞自溶法，裂解細(xì)胞，將細(xì)胞內(nèi)有機(jī)硒、氨基酸、蛋白質(zhì)、核糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)釋放出來(lái)，制成水溶液形式的有機(jī)硒。高鹽細(xì)胞自溶法是使自溶體系中的NaCl濃度達(dá)到1％～5％，在20℃～80℃自溶5h～40h。酸熱細(xì)胞自溶法是使自溶體系的pH值在2～7，20℃～70℃，自溶10min～30h，自溶完成后用NaOH調(diào)節(jié)自溶體系pH值6.3～7.3。所說(shuō)的滅菌，是在90～135℃溫度下滅菌15～30分鐘；所說(shuō)的制成成品，是制成干燥的米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒；或使米曲霉細(xì)胞自溶制成水溶液形式的有機(jī)硒；或?qū)⑺芤焊稍?，制成干粉形式的有機(jī)硒產(chǎn)品。
4.按照權(quán)利要求
3所述的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒的制備方法，其特征在于，所說(shuō)的接種培養(yǎng)，是挑取米曲霉孢子直接接種到含有亞硒酸鈉的豆芽汁培養(yǎng)基中，37℃、在30～45℃和100～200rpm下培養(yǎng)20～40h，培養(yǎng)出一級(jí)種子液；再將一級(jí)種子液按照10％的接種量接種到含硒培養(yǎng)基中，在30～45℃和100～200rpm下培養(yǎng)20～40h，作為二級(jí)種子液；最后將二級(jí)種子液按照10％的接種量接種到含硒培養(yǎng)基中。
專利摘要
本發(fā)明的來(lái)源于米曲霉的有機(jī)硒及其制備方法屬于食品、保健品添加劑領(lǐng)域。本發(fā)明的有機(jī)硒以米曲霉為載體，以米曲霉細(xì)胞或水溶液或干粉形式存在。其制備方法是以硒化合物為原料，經(jīng)過(guò)制備含硒培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)米曲霉、收集米曲霉、洗滌除去胞外硒、滅菌或/和干燥的過(guò)程；通過(guò)干燥得米曲霉細(xì)胞形式的有機(jī)硒、或菌體自溶得水溶液形式的有機(jī)硒、或?qū)⑺芤焊稍镏频酶煞坌问降挠袡C(jī)硒。米曲霉具有菌種生長(zhǎng)快，富硒米曲霉菌胞內(nèi)有機(jī)硒含量高的特點(diǎn)。米曲霉在發(fā)酵過(guò)程可以把無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)硒，容易為人體代謝和吸收。用含有機(jī)硒的米曲霉代替普通米曲霉作食品和保健品的添加劑，可以微量、持續(xù)補(bǔ)硒，有效的防治因缺硒引起的疾病。
文檔編號(hào)C12P9/00GKCN1632128SQ200410011255
公開(kāi)日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2004年11月25日
發(fā)明者逯家輝, 滕利榮, 高朝輝, 孟慶繁, 陳亞光, 王貞佐 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan