本發(fā)明屬于藥品或保健品領(lǐng)域，具體涉及nadph在制備抗焦慮藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

焦慮癥是一種以急性焦慮反復(fù)發(fā)作為特征的神經(jīng)官能癥，包括廣泛性焦慮及發(fā)作性驚恐狀態(tài)等6種臨床表現(xiàn)形式，常伴有頭暈、胸悶、心悸、呼吸困難、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫和運(yùn)動(dòng)性不安以及睡眠障礙等，并伴有植物神經(jīng)功能紊亂。焦慮癥不僅直接影響人們的生活質(zhì)量和身心健康,而且還可引起其他性質(zhì)的疾病，如恐懼癥、疑病癥、神經(jīng)衰弱等精神性疾病。隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏普遍加快，人們將面臨來(lái)自于社會(huì)、生活和工作等方面的壓力，因此患焦慮癥的人數(shù)呈增多趨勢(shì)。無(wú)論是焦慮癥或焦慮狀態(tài)，臨床上多用抗焦慮藥物治療，以苯并二氮卓類、丁螺環(huán)酮及其類似物為主。

還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(triphosphopyridinenucleotide，nadph)由葡萄糖經(jīng)過(guò)磷酸戊糖途徑(ppp)代謝產(chǎn)生，作為細(xì)胞內(nèi)最為重要的電子供體和生物合成的還原劑，可為還原性生物合成提供氫離子。nadph是谷胱甘肽(gsh)的還原酶的輔酶，可使氧化型谷胱甘肽(gssg)生成還原型gsh，維持還原型的gsh的正常含量。gsh是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，可保護(hù)一些含巰基的蛋白質(zhì)、脂肪和蛋白酶類免受氧化劑的破壞，特別在維持紅細(xì)胞膜的完整性方面起著重要作用。nadph除了參與膽固醇、脂肪酸、單加氧酶系、類固醇激素等的生物合成，還參與體內(nèi)羥化反應(yīng)和藥物、毒物及某些激素的生物轉(zhuǎn)化。例如，nadph可利用解毒細(xì)胞的電子供體，通過(guò)體內(nèi)代謝減少生物體氧化型化合物，維持其氧化還原的平衡，在氧化防御系統(tǒng)發(fā)揮重要作用。nadph也可以借助于異檸檬酸穿梭作用進(jìn)入呼吸鏈產(chǎn)生atp：由于線粒體內(nèi)膜對(duì)物質(zhì)的通透性很低，線粒體外產(chǎn)生的nadph不能直接進(jìn)入呼吸鏈被氧化。nadph上的h可以在異檸檬酸脫氫酶的作用下被交給nad+，然后由nad+進(jìn)入呼吸鏈產(chǎn)生能量。細(xì)胞能量代謝的維持和減少ros(活性氧簇)對(duì)細(xì)胞生存，特別對(duì)缺血缺氧的組織至關(guān)重要，普遍認(rèn)為能量代謝障礙和氧化應(yīng)激是心腦缺血疾病的重要機(jī)制，研究表明增加細(xì)胞能量代謝能力，降低細(xì)胞ros產(chǎn)生可減輕缺血缺氧引起的細(xì)胞損傷。

目前，尚無(wú)nadph用于焦慮癥治療的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明提供nadph在制備抗焦慮藥物中的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供nadph在制備抗焦慮藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供nadph在預(yù)防或治療焦慮中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述焦慮為廣泛性焦慮障礙。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物包括藥學(xué)上有效量的nadph和藥學(xué)上可接受的載體。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述載體選自常用的藥用輔料、或者生理鹽水、或者蒸餾水。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物為nadph按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、合劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、貼膏劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑或注射劑。

所述藥學(xué)上可接受的輔料為：填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括：淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括：淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素納等；潤(rùn)滑劑包括：硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括：糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括：甜味劑及各種香精；防腐劑包括：尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括：peg6000、peg4000、蟲蠟等。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述應(yīng)用，所述藥物的給藥方式選自口服給藥、注射給藥、舌下給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥、噴霧吸入中的至少一種。

本發(fā)明的技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，nadph可以顯著提高探索興趣，顯著降低大鼠的焦慮水平，逆轉(zhuǎn)對(duì)慢性應(yīng)激造成的焦慮樣表現(xiàn)。這表明，nadph具有抗焦慮的作用，可以作為潛在的預(yù)防或治療廣泛性焦慮障礙的藥物。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹：

圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中：與空白對(duì)照組相比，^*p＜0.05，p＜0.01；與模型對(duì)照組相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01；

圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中：與空白對(duì)照組相比，^*p＜0.05；與模型對(duì)照組相比，^#p＜0.05。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1nadph膠囊劑的制備

本實(shí)施例nadph膠囊劑的組成為：nadph20g，助懸劑微晶纖維素60g，防腐劑叔丁基-4-羥基苯甲醚0.04g，潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂2g，填充劑乳糖加至200g。

其制備方法包括以下步驟：分別稱取上述處方量的nadph和各藥用輔料，混合均勻，60目篩過(guò)篩3次，裝入膠囊殼，即得。

實(shí)驗(yàn)例1nadph對(duì)應(yīng)激焦慮模型大鼠的抗焦慮作用研究

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

研究nadph的抗焦慮作用。

2、實(shí)驗(yàn)方法

2.1實(shí)驗(yàn)試劑與動(dòng)物

nadph，購(gòu)自碧云天，純度≥97％；nadph用0.9％的生理鹽水溶解，置于4℃冰箱避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用；

健康雄性3月齡spraguedawley(sd)大鼠40只，體重250±15g，由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

動(dòng)物首先在光照時(shí)間8:00am-8:00pm，室溫22±2.5℃，相對(duì)濕度45％-55％的環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由進(jìn)食進(jìn)水，為減少非實(shí)驗(yàn)因素對(duì)結(jié)果的影響，每日撫摸動(dòng)物數(shù)次，以使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)人員的操作。

2.2實(shí)驗(yàn)分組和給藥方法

2.2.1實(shí)驗(yàn)分組

所有動(dòng)物進(jìn)行為期一周的糖水實(shí)驗(yàn)篩選，剔除對(duì)糖水偏愛(ài)測(cè)試極不敏感的大鼠，采用曠場(chǎng)試驗(yàn)測(cè)試5min內(nèi)的大鼠的活動(dòng)情況，將過(guò)于興奮或安靜的的大鼠篩除，再將篩選過(guò)后的大鼠按體重隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1組、實(shí)驗(yàn)組2組，每組10只。

空白對(duì)照組每3-4只為一籠喂養(yǎng)，其他3組動(dòng)物每只單籠喂養(yǎng)，所有的給藥和行為學(xué)測(cè)試時(shí)間在上午8點(diǎn)至12點(diǎn)間進(jìn)行。

2.2.2給藥方法

實(shí)驗(yàn)組1組和實(shí)驗(yàn)組2組分別在每天上午9點(diǎn)給予nadph4mg/kg、8mg/kg腹腔注射給藥，腹腔注射體積為0.01ml/g體重，連續(xù)給藥8周。

空白對(duì)照組和模型對(duì)照組均給予等體積的生理鹽水。

2.3建模方法

慢性不可預(yù)料應(yīng)激模型是目前最能結(jié)合表面效度、結(jié)構(gòu)效度、預(yù)測(cè)效度復(fù)制做出的焦慮癥模型，是觀察焦慮發(fā)病機(jī)理、評(píng)價(jià)抗焦慮化學(xué)試劑的有效性的常用方法。

除空白對(duì)照組外，其他各組均建模。

參照文獻(xiàn)，空白對(duì)照組動(dòng)物除特定行為學(xué)實(shí)驗(yàn)需要與模型組動(dòng)物飼養(yǎng)在同一個(gè)房間之外，其余時(shí)間均飼養(yǎng)在單獨(dú)的房間里，由實(shí)驗(yàn)人員每隔兩天撫摸五分鐘，一方面減少焦慮模型組動(dòng)物對(duì)對(duì)照動(dòng)物潛在的干擾，一方面減少由實(shí)驗(yàn)人員操作對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的影響；模型對(duì)照組動(dòng)物每天遭受一種模擬人類社會(huì)環(huán)境中會(huì)出現(xiàn)的應(yīng)激，刺激方式包括束縛、噪音、強(qiáng)光、頻閃燈、食物剝奪、水分剝奪、傾斜鼠籠、足底電擊、高溫刺激、冷水刺激、顛倒日夜周期、夾尾等，這些應(yīng)激是慢性且不可預(yù)料的，且同種刺激兩天之內(nèi)不重復(fù)出現(xiàn)。

各種刺激的具體操作如下：

束縛：大鼠被強(qiáng)制塞進(jìn)一個(gè)與之體積差不多大的白色pvc圓柱體瓶子中(19cm高×9cm底面直徑)束縛1h，然后被放回原來(lái)的籠子里；

白噪音：使用刺激分貝為110db的噪聲錄音刺激2h，揚(yáng)聲器距離動(dòng)物30cm；

頻閃燈：使用頻閃燈照射3h(每秒1次)；

食物剝奪：撤去大鼠飼料，禁食時(shí)間為前一天上午8點(diǎn)至次日上午8點(diǎn)；

水分剝奪：23小時(shí)分水剝奪后，空瓶放置1h，共計(jì)24h；

傾斜鼠籠：鼠籠傾斜45°，持續(xù)3h；

強(qiáng)光照射：冷光燈持續(xù)照射2h；

足底電擊：將大鼠限制于特制的箱子中，給箱底通電，電壓為25v，每隔1min刺激1次，每次持續(xù)刺激15s，共30次；

高溫?fù)頂D：將大鼠(7-9只1籠，除去水瓶)放于40°培養(yǎng)箱中，持續(xù)1h；

冷水刺激：將大鼠放于裝有4°冷水的水箱中游泳10min，水深以大鼠既可以腳觸地又可以游起來(lái)為宜；

顛倒日夜周期：前一天上午8點(diǎn)至當(dāng)日上午8點(diǎn)白天將大鼠置于黑暗無(wú)光的環(huán)境中，在當(dāng)日上午8點(diǎn)至次日上午8點(diǎn)將大鼠置于光照充足的環(huán)境中；

夾尾：用帶彈簧的塑料夾子夾于動(dòng)物尾巴末端1cm處持續(xù)夾尾1min(注意力度不能過(guò)大以?shī)A破鼠尾)；

震蕩擁擠環(huán)境：將5只大鼠放置在一個(gè)小盒子中在搖床上以240hz的速度水平搖晃1小時(shí)。

2.4行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.4.1曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(openfieldtest，oft)是用來(lái)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物神經(jīng)精神變化、評(píng)價(jià)動(dòng)物進(jìn)入開(kāi)闊環(huán)境后的各種活動(dòng)、探索行為與緊張度的一種方法。

嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的焦慮情緒主要基于其探索本性與外界環(huán)境的矛盾沖突，可分為狀態(tài)焦慮和特質(zhì)焦慮2類，其中oft是評(píng)價(jià)嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)狀態(tài)焦慮行為的經(jīng)典方法。通常，抗焦慮藥物可明顯增加oft中央?yún)^(qū)(ctime％，ccross％)探索活性比例。

敞箱裝置為無(wú)蓋的立方體(100cm×100cm×42cm)，由不透明材料制成，底面的正方形被等分成4×4個(gè)等邊方格，底面中央?yún)^(qū)域的正上方固定有攝像機(jī)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)與之相連接，可自動(dòng)記錄大鼠的活動(dòng)軌跡和位置。實(shí)驗(yàn)在安靜的環(huán)境下進(jìn)行，由固定的實(shí)驗(yàn)員將每只大鼠放入箱內(nèi)底面中心的方格內(nèi)，與此同時(shí)由另一名實(shí)驗(yàn)員操作軟件進(jìn)行攝像和計(jì)時(shí)，觀察大鼠5分鐘內(nèi)在中央格停留的時(shí)間(thetimeinthecentralsquare)、穿越的格子數(shù)(thenumberofcrossingsquares，四爪均進(jìn)入的方格方可計(jì)數(shù)，為水平運(yùn)動(dòng)得分)、兩前爪騰空或攀附墻壁使后肢直立的次數(shù)(thetimesofrearing，為垂直運(yùn)動(dòng)得分)、理毛次數(shù)(thetimesofgrooming)和糞便粒數(shù)。

實(shí)驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)員將大鼠取出，清理干凈箱底和四壁，并用75％的酒精擦拭以除去前一只大鼠的氣味，更換大鼠，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4.2新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)

新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)(novelty-suppressedfeedingtest，nsft)是觀察動(dòng)物禁食后在饑餓狀態(tài)下想要攝食的欲望和進(jìn)入中央明亮區(qū)域的恐懼相矛盾沖突的行為，是觀察給予抗焦慮藥物后對(duì)動(dòng)物的焦慮樣行為和神經(jīng)發(fā)生相關(guān)的行為影響的有效方法，以攝食潛伏期作為判定藥物的抗焦慮的指標(biāo)。該模型目前被廣泛應(yīng)用于抗焦慮藥物的長(zhǎng)期效應(yīng)評(píng)價(jià)。

實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)，具體如下所示：大鼠禁食24h(不禁水)之后，由固定的實(shí)驗(yàn)員將大鼠放入木制的頂部開(kāi)放的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱(敞箱大小為：76.5cm×76.5cm×40cm)，底部中央擺放一小部分食物，敞箱正上方架有一臺(tái)攝像機(jī)，放入動(dòng)物的同時(shí)開(kāi)始攝像，記錄大鼠8min內(nèi)開(kāi)始攝食的潛伏期(攝食的判定標(biāo)準(zhǔn)是動(dòng)物開(kāi)始咀嚼食物，而不是僅僅嗅聞或擺弄食物)，若8min仍未攝食的大鼠，攝食潛伏期記為8min。

實(shí)驗(yàn)測(cè)試環(huán)境為不同于飼養(yǎng)環(huán)境的全新環(huán)境，測(cè)試環(huán)境的光線強(qiáng)度大于飼養(yǎng)環(huán)境，測(cè)試時(shí)應(yīng)盡量保持安靜，每次放鼠的位和方向保持一致，每做完一只鼠清理糞便并以75％的酒精擦拭以減少動(dòng)物留下的氣味，實(shí)驗(yàn)員將動(dòng)物放回原來(lái)的鼠籠子里，大鼠在籠子里1小時(shí)的食物攝入量也做為一個(gè)參考。

2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

所有的結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組件的數(shù)據(jù)比較用one-wayanova，p＜0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，(1)與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠的水平得分、垂直得分、穿越中央格次數(shù)、中央格停留時(shí)間顯著減少(p＜0.05、p＜0.05、p＜0.05、p＜0.05)，糞便粒數(shù)顯著增多(p＜0.05)；

(2)與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的水平得分(p＜0.05)和垂直得分(p＜0.01)顯著增加，穿越中央格的次數(shù)(p＜0.01)顯著增加，在中央各停留的時(shí)間(p＜0.05)顯著延長(zhǎng)，這表明實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的探索興趣顯著提高；

(3)與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組1組和實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的糞便粒數(shù)明顯減少(p＜0.05、p＜0.05)，這表明實(shí)驗(yàn)組1組和實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的焦慮水平顯著降低。

3.2新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。

由圖2可知，(1)在陌生環(huán)境中，與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠的攝食潛伏期顯著延長(zhǎng)(p＜0.05)，顯示出應(yīng)激組大鼠焦慮樣表現(xiàn)，對(duì)陌生環(huán)境表現(xiàn)為矛盾沖突樣恐懼，探究行為明顯減弱；

(2)與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的攝食潛伏期顯著縮短(p＜0.05)，這表明實(shí)驗(yàn)組2組大鼠的慢性應(yīng)激造成的焦慮樣表現(xiàn)有所逆轉(zhuǎn)。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

nadph具有抗焦慮的作用，可以作為潛在的預(yù)防或治療廣泛性焦慮障礙的藥物。

顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。