本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體為中藥組合物在制備預(yù)防或治療阿爾茨海默癥藥物或保健品中的用途。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默癥(alzheimer'sdisease,ad)是慢性退行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性病導(dǎo)致的癡呆，是癡呆最常見(jiàn)的病因和最常見(jiàn)的老年期癡呆。ad以漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙、人格改變以及語(yǔ)言障礙等神經(jīng)精神癥狀為特征。alzheimer病是最常見(jiàn)和最重要的腦變性疾病，隨著全球人口老齡化，ad的發(fā)病率呈逐年顯著上升趨勢(shì)。多數(shù)資料顯示65歲以上患病率約為5％，85歲以上為20％，婦女患病率約3倍于男性。目前在世界范圍內(nèi)約有1500萬(wàn)人罹患ad，65歲以上老年人中ad發(fā)病率以每年0.5％的速度穩(wěn)定增加，85歲以上老年人則以每年8％的速度增長(zhǎng)。嚴(yán)重危害老年人的身心健康并影響生存質(zhì)量，給病人造成深重的痛苦，給家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題，引起各國(guó)政府和醫(yī)學(xué)界的普遍關(guān)注。作為老年癡呆的主要類(lèi)型，阿爾茨海默癥的病理特征包括大腦局部尤其是海馬和皮層神經(jīng)元退行性病變，細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)和細(xì)胞外老年斑沉淀[1,2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)ad的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了多年的研究，但是由于其病因復(fù)雜，該病的發(fā)病機(jī)制至今仍不明確，在對(duì)ad的病因研究中，很多證據(jù)表明aβ(β-淀粉樣蛋白，老年斑的主要成分)是誘導(dǎo)ad發(fā)生的主要病理環(huán)節(jié)。首先，aβ自身的清除和降解代謝障礙導(dǎo)致aβ沉積形成淀粉樣斑塊，幾乎在所有ad病人的腦中都發(fā)現(xiàn)了大量的淀粉樣斑塊沉積[3]。其次，aβ能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡[4]。再次，aβ還可以激活神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，釋放細(xì)胞因子和炎癥反應(yīng)介質(zhì)，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，aβ作為刺激物通過(guò)激活周?chē)∧z質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和神經(jīng)系統(tǒng)免疫炎癥應(yīng)答，加速神經(jīng)細(xì)胞死亡，導(dǎo)致記憶減退和認(rèn)知障礙[5]。因此，β淀粉樣蛋白已成為公認(rèn)的篩選抗ad藥物靶標(biāo)。ad病因復(fù)雜、病程漫長(zhǎng)、且發(fā)病環(huán)節(jié)較多，需要長(zhǎng)期服藥，目前主要的抗阿爾茨海默癥藥物乙酰膽堿酯酶抑制劑(如加蘭他敏)和n-甲基-d-天冬氨酸受體(nmda受體)拮抗劑(如美金剛)，但上述藥物價(jià)格昂貴，服藥后幻覺(jué)、意識(shí)混沌、頭暈、頭痛和疲倦等副作用顯著，且只能控制卻不能逆轉(zhuǎn)患者病情。到目前為止，治療ad還沒(méi)有特效藥，絕大部分藥物尚處于基礎(chǔ)研究及臨床試驗(yàn)階段。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的應(yīng)用實(shí)踐證實(shí)天然藥物對(duì)ad的治療有一定優(yōu)勢(shì)。且ad的發(fā)病機(jī)理非常復(fù)雜，中藥對(duì)ad的治療是多靶點(diǎn)、多途徑的，因此引起了多方面的重視。本發(fā)明公開(kāi)的中藥組合物，包括炙黃芪6份，炙甘草1份，出自《太平惠民和劑局方》卷五，別名：黃芪湯(《普濟(jì)方》卷二二九)。處方：黃芪(去蘆，蜜炙)180g，甘草(炙)30g。主要用于補(bǔ)氣生津。大治男子、婦人諸虛不足，肢體勞倦，胸中煩悸，時(shí)常焦渴，唇口干燥，面色萎黃，不能飲食；或先渴而欲發(fā)瘡癤，或病癰疽后而渴者尤宜服此。常服平補(bǔ)氣血，臓腑。炙黃芪味甘，溫。歸肺、脾經(jīng)。益氣補(bǔ)中。用于氣虛乏力，食少便溏。炙甘草，味甘，平。歸心、肺、脾、胃經(jīng)。補(bǔ)脾和胃，益氣復(fù)脈。用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心動(dòng)悸，脈結(jié)代。秀麗隱桿線蟲(chóng)(caenorhabditiselegans)是一個(gè)非常有用的多功能藥物篩選和藥物作用機(jī)制的研究平臺(tái)。它廉價(jià)、易培養(yǎng)；世代周期短、后代數(shù)目多，同時(shí)可獲得大量背景一致的個(gè)體，保證實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和采用大樣本量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從而排除個(gè)體差異的影響；與高等生物在基因和分子通路方面高度保守[6]。它作為一個(gè)從細(xì)胞體外水平藥物初篩到小鼠體內(nèi)水平藥物復(fù)篩的一個(gè)橋梁，越來(lái)越受到藥學(xué)家的青睞。美國(guó)devgen公司利用人源化線蟲(chóng)篩選的抗心律不齊藥物已被fda批準(zhǔn)進(jìn)入臨床研究。人源化秀麗隱桿線蟲(chóng)ad病理模型的建立是將人源aβ1-42基因轉(zhuǎn)入肌球蛋白啟動(dòng)子下游并受溫度控制表達(dá)，該線蟲(chóng)株系可在15℃正常生長(zhǎng)，當(dāng)轉(zhuǎn)移至25℃條件下aβ1-42表達(dá)并在其肌肉內(nèi)累積，導(dǎo)致線蟲(chóng)失去運(yùn)動(dòng)能力而麻痹。加入受試藥物可延緩肌肉麻痹表型，其結(jié)果以肌肉麻痹線蟲(chóng)數(shù)量占受試線蟲(chóng)群體數(shù)量的百分比表示。未麻痹線蟲(chóng)比率越高，藥物抗ad效果越顯著。這一模型早已被用于抗ad疾病發(fā)生機(jī)制和抗ad藥物及候選物的篩選及其作用機(jī)制研究[7]。發(fā)明人經(jīng)采用秀麗隱桿線蟲(chóng)ad病理模型對(duì)大量中藥組合物進(jìn)行篩選后，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明公開(kāi)的中藥組合物有抗ad的作用。因此，本發(fā)明現(xiàn)提供的中藥組合物具有治療阿爾茨海默癥的潛力，可在制備預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的藥物或保健品中應(yīng)用。參考文獻(xiàn)[1]mattsonmp.pathwaystowardsandawayfromalzheimer’sdisease.nature,2004,430；631-639.[2]hardyj,selkoedj.theamyloidhypothesisofalzheimer’sdisease:progressandproblemsontheroadtotherapeutics.science,2002,297:353-356.[3]fuhj,liub,frostjl,etal.amyloid-betaimmunotherapyforalzheimer’sdisease[j].cnsneuroldisorddrudtargets,2010,9(2):197-206.[4]nelsontj,alkondl.oxidationofcholesterolbyamyloidprecursorproteinandbeta-amyloidpeptide[j].jbiolchem,2005,280(8):7377-7387.[5]韋美丹，林繼宗，朱寧，等。aβ(1-42)作用的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞生存的影響[j]。中國(guó)病理生理雜志，2012(4)：683-688。[6]kalettat,hengartnermo.findingfunctioninnoveltargets:c.elegansasamodelorganism.natrevdrugdiscov2006,5:387e398.[7]linkcd.transgenicinvertebratemodelsofage-associatedneurodegenerativediseases.mechageingdev2001,122:1639e1649.技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種中藥組合物的新用途。其中，所述的用途為在制備預(yù)防或治療阿爾茨海默癥藥物或保健品中的應(yīng)用。其中，所述中藥組合物按重量份計(jì)，包括炙黃芪6份，炙甘草1份。優(yōu)選地，所述中藥組合物中炙黃芪為15g，炙甘草為2.5g。其中，所述中藥組合物是通過(guò)下列方法制備得到的：按配方稱(chēng)取炙黃芪15g，炙甘草2.5g，混勻加水150ml，浸泡30min，加熱煮沸并保持30min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，將濾液和濾渣分離，濾渣再用100ml去離子水浸泡10分鐘，再用大火加熱至沸騰后，再加熱25min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，棄掉濾渣，合并兩次濾液，定容至50ml，過(guò)濾除菌，即得到中藥組合物。另外，將所述中藥組合物加入適宜的輔料即可制備成為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液、丸劑及其他任一種劑型，這是本領(lǐng)域研究人員可以理解的。本發(fā)明以秀麗隱桿線蟲(chóng)作為阿爾茨海默癥病理模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，本發(fā)明公開(kāi)的中藥組合物能顯著延緩阿爾茨海默癥秀麗隱桿線蟲(chóng)的肌肉麻痹表型，表明該中藥組合物對(duì)于罹患阿爾茨海默癥的秀麗隱桿線蟲(chóng)具有顯著的治療作用，提示本發(fā)明提供的中藥組合物具有治療阿爾茨海默癥的潛力，可在制備預(yù)防或治療阿爾茨海默癥的藥物或保健品中應(yīng)用。炙黃芪單用時(shí)，在本發(fā)明所采用的濃度下，對(duì)ad線蟲(chóng)治療作用較弱；炙甘草單獨(dú)使用時(shí)，對(duì)ad線蟲(chóng)無(wú)治療作用。而二者組合使用時(shí)，具有顯著抗ad效果。說(shuō)明本發(fā)明提供的中藥組合物水煎液中炙黃芪和炙甘草發(fā)揮協(xié)同作用抗ad。說(shuō)明書(shū)附圖圖1為中藥組合物延緩ad秀麗隱桿線蟲(chóng)肌肉麻痹的結(jié)果。其中，a組為含35mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、b組為含7mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、c組為含3.5mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、對(duì)照組為加有與中藥組合物水煎液等體積無(wú)菌水的ngm培養(yǎng)基。圖2為中藥組合物中的各成分發(fā)揮協(xié)同作用延緩ad秀麗隱桿線蟲(chóng)的肌肉麻痹的結(jié)果。其 中，中藥組涂布有op50并含有7mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、炙黃芪組涂布有op50并含有6mg/ml炙黃芪水煎液的ngm培養(yǎng)基、炙甘草組涂布有op50并含有1mg/ml炙甘草水煎液的ngm培養(yǎng)基和對(duì)照組為涂布有op50并加有與炙黃芪水煎液等體積無(wú)菌水的ngm培養(yǎng)基。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。實(shí)施例一中藥組合物水煎液顯著延緩ad秀麗隱桿線蟲(chóng)的肌肉麻痹1.生物材料(1)秀麗隱桿線蟲(chóng)cl4176購(gòu)自caenorhabditisgeneticscenter(cgc)；為轉(zhuǎn)基因品系，在25℃溫度誘導(dǎo)下肌肉特異性表達(dá)人類(lèi)aβ1-42，aβ1-42在肌肉組織聚集，最終導(dǎo)致線蟲(chóng)麻痹，本實(shí)施例采用秀麗線蟲(chóng)cl4176株系作為篩選抗ad藥物的病理模型。(2)大腸桿菌op50(尿嘧啶滲漏突變株)，購(gòu)自caenorhabditisgeneticscenter(cgc)，作為秀麗隱桿線蟲(chóng)的食物。2.試劑(1)固體ngm(nematodegrowthmedium)培養(yǎng)基成分與制作(以1升為例)：成分含量nacl3.00gk2hpo42.34gkh2po417.23g蛋白胨2.50g瓊脂17.00g補(bǔ)充h2o至1000ml固體ngm培養(yǎng)基配制好后，121℃下高壓恒溫滅菌20min，在無(wú)菌操作臺(tái)下加入5mg/ml膽固醇1ml，1mmgso41ml,1mcacl21ml搖勻，趁熱倒入已滅菌的9cm培養(yǎng)板，約20ml/板。靜置等待培養(yǎng)基凝固，備用。(2)m9液配方(3)裂解液的配制：6.4％naclo溶液和1mnaoh溶液按體積比1:1混合。3.配制含有中藥組合物水提物的ngm平板中藥組合物水煎液的制備：炙黃芪15g，炙甘草2.5g，混勻加水150ml，浸泡30min，加熱煮沸并保持30min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，將濾液和濾渣分離，濾渣再用100ml去離子水浸泡10min，再用大火加熱至沸騰后，再加熱25min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，棄掉濾渣，合并兩次濾液，定容至50ml，過(guò)濾除菌，備用。配制含有藥物水煎液的ngm平板：取不同稀釋度的炙黃芪水煎液、炙甘草水煎液或中藥組合物水煎液，分別加入ngm培養(yǎng)基中，倒板。最終制備成含有炙黃芪30mg/ml水煎液的ngm培養(yǎng)基；含有炙甘草5mg/ml水煎液的ngm培養(yǎng)基；含有中藥組合物35mg/ml、7mg/ml、3.5mg/ml水煎液的ngm培養(yǎng)基；靜置等待培養(yǎng)基凝固。在培養(yǎng)基上均勻涂布大腸桿菌op50作為線蟲(chóng)的食物。4.實(shí)施步驟(1)線蟲(chóng)的培養(yǎng)：將線蟲(chóng)接在涂有大腸桿菌op50的固體ngm板上，然后置于16℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)線蟲(chóng)長(zhǎng)到成蟲(chóng)時(shí)進(jìn)行同步化處理。(2)線蟲(chóng)同步化：挑選含有大量成蟲(chóng)并且有部分線蟲(chóng)卵已經(jīng)孵出的ngm培養(yǎng)基，用m9液將線蟲(chóng)從培養(yǎng)基上沖下，轉(zhuǎn)移到離心管中，靜置使線蟲(chóng)自由沉降至管底，棄上清。視線蟲(chóng)量多少向離心管中加入裂解液，在渦旋攪拌器上振蕩5-7min待線蟲(chóng)全部斷裂時(shí)停止渦旋,并分裝于1.5ml離心管中，用m9溶液洗線蟲(chóng)卵三次。(3)中藥組合物水煎液對(duì)阿爾茨海默癥秀麗隱桿線蟲(chóng)cl4176的作用將同步化后分裝于離心管中的線蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)移到a組為含35mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、b組為含7mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、c組為含3.5mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基，對(duì)照組為加有與中藥組合物水煎液等體積無(wú)菌水的ngm培養(yǎng)基，每組培養(yǎng)皿中均涂布有等量的op50作為線蟲(chóng)食物，每個(gè)培養(yǎng)皿60條線蟲(chóng)，每個(gè)藥物濃度三個(gè)平行，16℃培養(yǎng)3天至l3期。為了使線蟲(chóng)表達(dá)aβ，之后將l3期線蟲(chóng)轉(zhuǎn)在25℃下進(jìn)行誘導(dǎo)，35h后開(kāi)始計(jì)數(shù)線蟲(chóng)麻痹條數(shù)。每?jī)尚r(shí)計(jì)數(shù)一次，直至所有線蟲(chóng)都麻痹(麻痹是指機(jī)械刺激線蟲(chóng)身體時(shí)，線蟲(chóng)不能運(yùn)動(dòng)或者只有頭部運(yùn)動(dòng))。結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1的縱坐標(biāo)表示沒(méi)有麻痹的秀麗隱桿線蟲(chóng)占的百分比，在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，此值越大，表明該處理組中沒(méi)有麻痹的秀麗隱桿線蟲(chóng)比例越大，即藥物延緩麻痹的作用越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥組合物水煎液可延緩ad秀麗隱桿線蟲(chóng)的肌肉麻痹，并在中等濃度時(shí)效果較好。通過(guò)以上實(shí)施例證明，本發(fā)明提供的中藥組合物水煎液對(duì)ad秀麗隱桿線蟲(chóng)發(fā)揮治療作用，提示本發(fā)明提供的中藥組合物具有抗阿爾茨海默癥潛力，可在制備防治阿爾茨海默癥的藥物中應(yīng)用。實(shí)施例二炙黃芪和炙甘草發(fā)揮協(xié)同作用延緩ad秀麗隱桿線蟲(chóng)的肌肉麻痹(1)炙黃芪水煎液的制備：炙黃芪15g，加水150ml，浸泡30min，加熱煮沸并保持30min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，將濾液和濾渣分離，濾渣再用100ml去離子水浸泡10min，再用大火加熱至沸騰后，再加熱25min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，棄掉濾渣，合并兩次濾液，定容至50ml，過(guò)濾除菌，備用。(2)炙甘草水煎液的制備：炙甘草2.5g，加水150ml，浸泡30min，加熱煮沸并保持30min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，將濾液和濾渣分離，濾渣再用100ml去離子水浸泡10min，再用大火加熱至沸騰后，再加熱25min，自然冷卻至室溫后進(jìn)行過(guò)濾，棄掉濾渣，合并兩次濾液，定容至50ml，過(guò)濾除菌，備用。中藥組涂布有op50并含有7mg/ml中藥組合物水煎液的ngm培養(yǎng)基、炙黃芪組涂布有op50并含有6mg/ml炙黃芪水煎液的ngm培養(yǎng)基、炙甘草組涂布有op50并含有1mg/ml炙甘草水煎液的ngm培養(yǎng)基和對(duì)照組為涂布有op50并加有與炙黃芪水煎液等體積無(wú)菌水的ngm培養(yǎng)基。其它操作同實(shí)施例一。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，圖2的縱坐標(biāo)表示沒(méi)有麻痹的秀麗隱桿線蟲(chóng)占的百分比，在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，此值越大，表明該處理組中沒(méi)有麻痹的秀麗隱桿線蟲(chóng)比例越大，即藥物延緩麻痹的作用越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在本實(shí)施例中單用炙黃芪對(duì)ad線蟲(chóng)肌肉麻痹的延緩作用較弱，單用炙甘草未顯示對(duì)ad線蟲(chóng)肌肉麻痹的延緩作用，而中藥組合物組對(duì)ad線蟲(chóng)肌肉麻痹的延緩作用要明顯強(qiáng)于單用炙黃芪或單用炙甘草的效果，可以看出，當(dāng)將二者組合應(yīng)用后，組合物對(duì)ad線蟲(chóng)肌肉麻痹的延緩作用顯著增強(qiáng)。這表明炙黃芪和炙甘草在質(zhì)量比為6:1時(shí)可發(fā)揮協(xié)同作用抗ad作用，所述中藥組合物可用于制備預(yù)防或治療阿爾茨海默癥保健品或藥物。當(dāng)前第1頁(yè)12