葉酸-葡聚糖綴合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了葉酸-葡聚糖綴合物及其制備方法，該方法包括，合成琥珀酰化葡聚糖；合成胺基化葉酸類似物；以及，合成葉酸-葡聚糖綴合物。本發(fā)明還公開(kāi)了該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應(yīng)用等。
【專利說(shuō)明】葉酸-葡聚糖綴合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是中國(guó)專利申請(qǐng)第201210543504.9號(hào)分案的發(fā)明，享有2012年12月14
目的申請(qǐng)日。
[0002]本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及葉酸-葡聚糖綴合物，該葉酸-葡聚糖綴合物能提升用其包裹的藥物化合物(如，紫杉醇)的理化性質(zhì)，甚至可以協(xié)同起效，并能提高藥物的耐受性。另外，本發(fā)明還涉及該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應(yīng)用及其制備方法等。
【背景技術(shù)】
[0003]目前臨床使用的大多數(shù)抗癌藥物，如紫杉醇，Docetaxel(多西他賽)，阿霉素等在生理鹽水中的溶解度比較差，無(wú)法在臨床上直接使用，需要一些輔料配合。例如，Taxol?,用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇的混合物來(lái)配制紫杉醇，Taxotere? (泰索帝)用聚山梨酯和乙醇來(lái)配制，但是都會(huì)引起強(qiáng)烈的副作用，如過(guò)敏反應(yīng)、腎臟毒性、神經(jīng)和心臟毒性等；最近的Abmxane?.使用血清白蛋白為載體來(lái)配制紫杉醇，毒副作用也明顯降低，然而血清白蛋白無(wú)論是提取還是DNA重組獲得，純化難度大，造成成本居高不下，一個(gè)劑量就需US$5，100，而一個(gè)療程需要至少3劑，無(wú)法在我國(guó)推廣。
[0004]日本專利JP2010126533A披露了，把紫杉醇與葡聚糖等共價(jià)綴合在一起，然后再通過(guò)非共價(jià)吸附在藥物顆粒表面固定葉酸，以達(dá)到靶向抗腫瘤的目的，然而本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，紫杉醇作為藥效活性化合物，與葡聚糖綴合，尤其是與葡聚糖上大量基團(tuán)的副反應(yīng)，由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的改變，會(huì)顯著降低紫杉醇的藥效，如果要消除結(jié)構(gòu)相近的副產(chǎn)物，需要復(fù)雜的純化過(guò)程(如層析過(guò)柱)，成本降不下來(lái)，而且葉酸吸附在表面，容易洗脫。中國(guó)專利20121002970.5公開(kāi)了共價(jià)結(jié)合的葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，其具有體外靶向作用，其沒(méi)有報(bào)道這種顆粒本身的抗腫瘤效果(實(shí)際基本沒(méi)有)，而且本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其是先合成葡聚糖-氧化鐵納米顆粒，然后再進(jìn)行葉酸綴合，合成效率低，且輔料對(duì)藥物的適應(yīng)性喪失。
[0005]為此，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)艱苦的研究，并結(jié)合一些運(yùn)氣，偶然發(fā)現(xiàn)通過(guò)一些連接基團(tuán)將葉酸直接共價(jià)結(jié)合到 葡聚糖上，雖然一定程度上喪失了葉酸對(duì)腫瘤的靶向性，目前其經(jīng)測(cè)試體外沒(méi)有抗腫瘤細(xì)胞的毒性(活性)，但是卻能夠很穩(wěn)定地非共價(jià)地包裹住諸如紫杉醇等藥物，復(fù)溶性和穩(wěn)定性俱佳，且不必改變紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)，還無(wú)需使用復(fù)雜的純化工藝(如，柱層析)。更令人意想不到的是，該輔料本身雖然沒(méi)有體外抗腫瘤細(xì)胞的毒性，但是能夠協(xié)同紫杉醇起效，提高體內(nèi)的抗腫瘤的效果，并且能提高受試動(dòng)物的藥物耐受性，使得在臨床使用中可以更大劑量地給藥，從而進(jìn)一步提高抗腫瘤效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供新的葉酸-葡聚糖綴合物，該葉酸-葡聚糖綴合物包裹藥物的適應(yīng)性良好，無(wú)需復(fù)雜的純化工藝，包裹形成的藥物組合物復(fù)溶性和穩(wěn)定性俱佳，甚至可以與紫杉醇等協(xié)同起效，并能提高藥物的耐受性。另外，本發(fā)明還提供了該葉酸-葡聚糖綴合物制備藥物組合物的應(yīng)用及其制備方法等。
[0007]具體而言，在第1方面，本發(fā)明提供了葉酸-葡聚糖綴合物，其由如下制備方法制備而得，該方法包括，
[0008](I)合成琥珀?；暇厶?；
[0009](2)合成胺基化葉酸類似物，所述胺基化葉酸類似物是如下化合物
[0010]
【權(quán)利要求】
1.葉酸-葡聚糖綴合物，其由如下制備方法制備而得，該方法包括，(1)合成琥珀?；暇厶?；(2)合成胺基化葉酸類似物，所述胺基化葉酸類似物是如下化合物


2.權(quán)利要求1所述的葉酸-葡聚糖綴合物，其中所述方法包括，(1)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖
3.權(quán)利要求1所述的葉酸-葡聚糖綴合物，其中所述方法包括，(1)取平均分子量20KDa、Mw/Mn= 1.3的葡聚糖10.0g溶于無(wú)水DMF中，攪拌20分鐘形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4_ 二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速攪拌至所有的固體溶解；置于室溫下使得整個(gè)反應(yīng)液反應(yīng)24小時(shí)，之后將反應(yīng)液放入截留分子量3，500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到白色的琥珀?；暇厶?； (2)取3g葉酸溶于120mLDMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反應(yīng)液在室溫暗室處放置12小時(shí)，然后副產(chǎn)物D⑶沉淀被過(guò)濾去除，再向反應(yīng)液加入1000mL V: V =30: 70的丙酮/乙醚混合液并進(jìn)行攪拌，收集黃色沉淀并用V: V = 30: 70的丙酮/乙醚混合液洗滌后晾干；取2.78g晾干的黃色沉淀再溶于20mLDMS0中，取6.0lg乙二胺快速加入到該溶液中，將兩者混合后在室溫暗室處放置12小時(shí)，加入50mL V: V = 30: 70的丙酮/乙醚混合液并進(jìn)行攪拌，收集黃色沉淀并在DMSO溶液中重結(jié)晶提純，獲得胺基化葉酸類似物； (3)取步驟⑴制備的琥珀?；暇厶?000mg溶于40ml無(wú)水DMF中，加入50mgDMAP和579.7mg DCC,在室溫下放置12小時(shí)后，再加入2mL含300mg步驟(2)制備的胺基化葉酸類似物的EDC溶液，反應(yīng)液在室溫下攪拌12小時(shí)后，將反應(yīng)液放入截留分子量3，500的Spectra/Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后將透析袋中的溶液冷凍干燥，得到黃色的葉酸-葡聚糖綴合物。
4.權(quán)利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物的制備方法，其包括權(quán)利要求1~3之任一中所述的制備步驟。
5.權(quán)利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物在制備含有脂溶性藥物化合物(優(yōu)選是紫杉醇)的藥物組合物(優(yōu)選是注射劑，更優(yōu)選是凍干粉針劑)中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中制備的方法包括，` (4)將藥物化合物混合(優(yōu)選用高速勻漿機(jī)混合)入含權(quán)利要求1~3之任一所述的葉酸-葡聚糖綴合物的溶液中，形成含納米級(jí)顆粒的溶液；和， (5)任選向步驟(4)的產(chǎn)物加入藥學(xué)上可接受的輔料(如，甘露醇)和/或進(jìn)行干燥(如，冷凍干燥)。
7.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中制備的方法不包括層析步驟。
8.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中藥物化合物是脂溶性藥物化合物，優(yōu)選是紫杉醇。
9.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中步驟(4)中的納米級(jí)顆粒是粒徑小于200nm(優(yōu)選是小于180nm)的顆粒。
10.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中步驟(4)中的藥物化合物和葉酸-葡聚糖綴合物的重量比為0.5~2: I~10，優(yōu)選為0.8~1.2: 3~6，如1: 4。
【文檔編號(hào)】A61K31/337GK103864955SQ201410060493
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月14日
【發(fā)明者】李軍, 游紹進(jìn), 陳瓊 申請(qǐng)人:蘇州友林生物科技有限公司