竹節(jié)參提取物作為多發(fā)性硬化藥物的新用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了竹節(jié)參提取物作為多發(fā)性硬化藥物的一種新用途。本發(fā)明提供了竹節(jié)參提取物在制備治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物，它的活性成分為竹節(jié)參提取物。所述竹節(jié)參提取物是將中藥竹節(jié)參先進(jìn)行乙醇水溶液提取，再進(jìn)行水飽和正丁醇萃取，最后進(jìn)行丙酮沉淀得到的物質(zhì)。本發(fā)明對(duì)于多發(fā)性硬化的預(yù)防和/或治療具有重大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】竹節(jié)參提取物作為多發(fā)性硬化藥物的新用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及竹節(jié)參提取物作為多發(fā)性硬化藥物的一種新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性脫髓鞘疾病，好發(fā)于20~40歲的青壯年，主要臨床特點(diǎn)為癥狀和體征的時(shí)間和空間多發(fā)性，首次發(fā)作多表現(xiàn)為視力減退、肢體無力和感覺障礙等，以腦白質(zhì)損傷為主，伴有軸索損傷的炎性脫髓鞘性疾病，其長期反復(fù)發(fā)作是青年患者致殘的主要原因。MS是T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，與Thl/Th2細(xì)胞失衡密切相關(guān)。隨著研究的深入，又發(fā)現(xiàn)Thl7及Treg細(xì)胞在MS的發(fā)生發(fā)展過程起著更為重要的作用。Thl7細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞亞群，其分泌的IL-17誘導(dǎo)嚴(yán)重的自身免疫反應(yīng)，Treg功能低下是MS發(fā)病的另一重要原因。Treg受叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(forkhead / winged helix transcription factor, Foxp3)特異性調(diào)控，在 MS 等自身免疫性疾病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
[0003]對(duì)于多發(fā)性硬化而言，尚無有效的治療方法。西醫(yī)多用激素、干擾素或免疫抑制劑等方法治療，但不良作用明顯。
[0004]中藥竹節(jié)參為五加科植物竹節(jié)參Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根莖,性味甘、微苦、溫，歸肝、脾、肺經(jīng)，有散瘀止血、消腫止痛、祛痰止咳、補(bǔ)虛強(qiáng)壯的功效。
[0005]實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(ExperimentalAutoimmune Encephalomyelitis,EAE)是目前公認(rèn)的MS的動(dòng)物模型。EAE是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。用M0G35_m乳化液制作的C57BL/6小鼠EAE模型為慢性進(jìn)展的模型，脫髓鞘和軸突損傷明顯，是MS的理想模型。在EAE的發(fā)病過程中，Thl7細(xì)胞起到了比Thl細(xì)胞更強(qiáng)的炎癥誘導(dǎo)作用，Thl7細(xì)胞特異性分泌的IL-17通過募集炎癥浸潤性白細(xì)胞和活化基質(zhì)金屬蛋白酶，破壞血腦屏障，吸引單核、巨噬細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而影響神經(jīng)免疫的正常調(diào)節(jié)。而Treg有明顯的保護(hù)作用，具有維持自身免疫耐受和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的功能，其功能紊亂或數(shù)目下降是導(dǎo)致自身免疫性疾病的重要原因之一，F(xiàn)oxp3是叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員，在調(diào)控Treg細(xì)胞的發(fā)育上起很重要的作用。IL_17a是與炎癥密切相關(guān)的細(xì)胞因子，主要由Thl7細(xì)胞產(chǎn)生。有研究表明Thl7/Treg平衡在EAE病程中起到關(guān)鍵性作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的是提供竹節(jié)參提取物作為多發(fā)性硬化藥物的一種新用途。
[0007]本發(fā)明提供了竹節(jié)參提取物在制備治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物，它的活性成分為竹節(jié)參提取物。
[0009]本發(fā)明還提供了竹節(jié)參提取物在制備治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明還提供了一種治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的藥物，它的活性成分為竹節(jié)參提取物。
[0011]以上任一所述竹節(jié)參提取物是將中藥竹節(jié)參先進(jìn)行乙醇水溶液提取，再進(jìn)行水飽和正丁醇萃取，最后進(jìn)行丙酮沉淀得到的物質(zhì)。
[0012]以上任一所述竹節(jié)參提取物的制備方法依次包括如下步驟:
[0013](I)取中藥竹節(jié)參，粉碎，得到粉末；
[0014](2)取所述粉末，用體積百分比為60-80%的乙醇水溶液進(jìn)行提取，得到提取液；
[0015](3)取所述提取液，去除其中的乙醇；
[0016](4)用水飽和正丁醇萃取，取有機(jī)相；
[0017](5)取所述有機(jī)相，去除其中的正丁醇，得到浸膏；
[0018](6)取所述浸膏，用體積百分比為70-80%乙醇水溶液溶解；
[0019](7)加入丙酮，靜置，然后收集沉淀。
[0020]所述步驟(1)中，具體可粉碎并過20-40目篩(具體可過40目篩)，得到粉末。
[0021]所述步驟(2)中，所述粉末與所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液的配比可為:1重量份粉末:8-15重量份乙醇水溶液。所述步驟(2)中，所述粉末與所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液的配比具體可為:1重量份粉末:10重量份乙醇水溶液。所述步驟
(2)中，所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液具體可為體積百分比為70%的乙醇水溶液。從產(chǎn)率的角度考慮，可以多次`重復(fù)提取(如3次重復(fù)提取)，再合并提取物。每次提取的條件具體如下:100°C、2-3h。
[0022]所述步驟(3)中，可通過減壓蒸發(fā)去除乙醇(可回收乙醇以再利用)。
[0023]所述步驟(3)得到濃縮液，可先用水分散再進(jìn)行步驟(4)的萃取。
[0024]所述步驟(4)中，可采用與待分離溶液(料液)等體積的水飽和正丁醇進(jìn)行萃取。從產(chǎn)率的角度考慮，可以多次重復(fù)萃取(如3次重復(fù)萃取)，再合并有機(jī)相。
[0025]所述步驟(5)中，可通過減壓蒸發(fā)去除正丁醇(可回收正丁醇以再利用)。
[0026]所述步驟(6)中，所述體積百分比為70-80%乙醇水溶液具體可為體積百分比為70%的乙醇水溶液。
[0027]所述步驟(7)中，具體可加入4-5倍體積的丙酮(如加入4倍體積的丙酮)。所述步驟(7)中，所述靜置的條件可為:4°C靜置8-12h (具體可為12h)。所述步驟(7)中，所述收集沉淀的方法可為離心。所述離心的參數(shù)具體可為:4000r/min、10min。
[0028]所述方法還包括如下步驟:將步驟(7)得到的沉淀用丙酮洗滌，然后干燥，得到的固態(tài)物質(zhì)即為竹節(jié)參提取物
[0029]本發(fā)明發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參提取物能明顯回補(bǔ)EAE小鼠丟失的體重，與EAE小鼠相比，給予竹節(jié)參提取物的EAE小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分顯著降低、發(fā)病率顯著降低、死亡率顯著降低，并且潛伏期增長、病程縮短；竹節(jié)參提取物能明顯減輕EAE小鼠的腦和脊髓中的炎性細(xì)胞浸潤；以上結(jié)果說明，竹節(jié)參提取物對(duì)EAE小鼠有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用。
[0030]在EAE小鼠中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性部位存在大量活化的Thl7細(xì)胞，Thl7細(xì)胞通過具有殺傷作用的粒酶B，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，并通過釋放IL-17趨化其他淋巴細(xì)胞的聚集，加重中樞炎性損傷。Treg對(duì)EAE發(fā)病有抑制作用，明顯減輕殘疾程度，減輕血腦屏障損傷，抑制T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等浸潤。因此炎癥環(huán)境下的Thl7 / Treg失衡機(jī)制在MS和EAE發(fā)病占有重要作用。在治療中，抑制Thl7細(xì)胞生成與擴(kuò)增、增強(qiáng)Treg細(xì)胞數(shù)量及功能，調(diào)節(jié)Thl7 / Treg恢復(fù)平衡成為預(yù)防和治療MS和EAE的重要突破口。EAE小鼠的腦和脊髓中，IL_17a蛋白水平顯著升高，F(xiàn)0XP3蛋白水平明顯降低，即IL_17a/F0XP3比值升高。本發(fā)明發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參提取物明顯降低了 EAE小鼠的腦和脊髓中的IL-17a蛋白水平，升高了 F0XP3蛋白水平，即降低了 IL-17a/F0XP3比值，使二者比值保持穩(wěn)定，從而減輕了炎癥反應(yīng)、脫髓鞘和軸突損傷。
[0031]本發(fā)明對(duì)于多發(fā)性硬化的預(yù)防和/或治療具有重大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0032]圖1為各組小鼠體重(g)的變化。
[0033]圖2為各組小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分的變化。
[0034]圖3為各組小鼠第40天腦和脊髓的病理的變化(HE，400X )。
[0035]圖4為各組小鼠第40天腦和脊髓中IL_17a蛋白的變化(免疫組化，400X )。
[0036]圖5為各組小鼠第40天腦和脊髓中F0XP3的變化(免疫組化，400X )。
【具體實(shí)施方式】
[0037]以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。所有實(shí)驗(yàn)均經(jīng)過首都醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理采用SPSS17.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，成組設(shè)計(jì)的多個(gè)樣本均數(shù)比較在方差齊性的基礎(chǔ)上作單因素方差分析，LSD檢驗(yàn)比較組間差異。
[0038]SPF級(jí)C57BL/6小鼠，雌性，體重18~22g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2006-0009]，飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心國家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室[SYXK(京)2010-0020]。M0G35-55 多肽(氨基酸序列:MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)，由北京中科亞光生物技術(shù)有限公司合成。完全弗氏佐劑(Complete freund’s adjuvant, CFA):Sigma公司。百日咳毒素(pertussis toxin, PTX):美國Sigma公司。滅活結(jié)核分枝桿菌H37Ra:美國BD公司，貨號(hào)為231141。IL-17抗體和F0XP3抗體:美國Abcam公司。兔超敏二步法檢測(cè)試劑盒(PV-9001)和濃縮型DAB試劑盒(ZL1-9018):北京中杉金橋公司。醋酸潑尼松片:石家莊康力藥業(yè)有限公司。低溫生物離心機(jī)(Biofugel5R)由德國Heraeus公司提供。臺(tái)式離心機(jī)(94-108)由Sigma公司提供。光學(xué)顯微鏡Nikon Eclipse80i由日本尼康股份有限公司提供。MENLAB-U/4C501H生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)由南京美易科技有限公司提供。DENVER INSTRUMENT電子天平由北京賽多利萁儀器系統(tǒng)有限公司提供。電子天平(ES-600)由長沙湘平科技發(fā)展有限公司提供。微波爐(PT0D20TL-D4由格蘭仕微波爐電器有限公司提供。電熱鼓風(fēng)干燥箱由天津市泰斯特儀器有限公司提供。渦旋震蕩器(VG3S25)由IKA公司提供。
[0039]實(shí)施例1、竹節(jié)參提取物的制備
[0040]1、取市售的中藥竹節(jié)參,粉碎,過40目篩。
[0041]2、將步驟I得到的藥材粉末加入70%乙醇水溶液，100°C提取三次，得到竹節(jié)參提取液。
[0042](I)第一次加熱[0043]取I質(zhì)量份藥材粉末，加入10質(zhì)量份70% (體積比)乙醇水溶液，100°C提取2小時(shí)，用雙層紗布過濾，收集濾液，即為提取液Frl。
[0044](2)第二次加熱
[0045]在步驟(1)的藥材殘?jiān)?，再加?0質(zhì)量份70% (體積比)乙醇水溶液，100°C提取2小時(shí)，用雙層紗布過濾，收集濾液，即為提取液Fr2。[0046](3)第三次加熱
[0047]在步驟(2)的藥材殘?jiān)?，再加?0質(zhì)量份70% (體積比)乙醇水溶液，100°C提取2小時(shí)，用雙層紗布過濾，收集濾液，即為提取液Fr3。
[0048](4)將提取液Frl、提取液Fr2和提取液Fr3合并。
[0049]3、取步驟2得到的竹節(jié)參提取液，通過減壓蒸發(fā)去除乙醇(回收乙醇，可重復(fù)利用)，得到濃縮液。
[0050]4、取步驟3得到的濃縮液，用水分散后用水飽和正丁醇萃取3次，得到萃取液。
[0051]每次萃取中，待分離溶液(料液)與水飽和正丁醇的體積比均為1:1，取有機(jī)相；將3次得到的有機(jī)相合并。
[0052]5、取步驟4得到的萃取液，通過減壓蒸發(fā)去除正丁醇(回收正丁醇，可重復(fù)利用)，得到稠浸膏。
[0053]6、取步驟5得到的稠浸膏，用70% (體積比)乙醇水溶液溶解。
[0054]7、取步驟6得到的溶液，加入4倍體積的丙酮(邊加邊攪拌)，然后4°C靜置12h，然后4000r/min離心IOmin,并收集沉淀物。
[0055]8、取步驟7得到的沉淀物，用丙酮洗滌后真空干燥，得到的固態(tài)物質(zhì)即為竹節(jié)參提取物。
[0056]實(shí)施例2、竹節(jié)參提取物的應(yīng)用
[0057]一、分組處理
[0058]將SPF級(jí)C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組，即正常組(n=5)、模型組(n=5)、激素組(n=5)、竹節(jié)參提取物146mg/kg組(相當(dāng)于臨床人用量的18倍)和竹節(jié)參提取物73mg/kg組(相當(dāng)于臨床人用量的9倍)。用生理鹽水溶解M0G35_55多肽，然后與等體積完全弗氏佐劑(完全弗氏佐劑中添加了滅活結(jié)核分枝桿菌H37Ra，滅活結(jié)核分枝桿菌H37Ra在完全弗氏佐劑中的濃度為4mg/ml)混合，用玻璃注射器推打至油包水狀，即為抗原乳劑。M0G35_55多肽具有誘發(fā)小鼠發(fā)生實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的作用。
[0059]模型組、激素組、竹節(jié)參提取物146mg/kg組和竹節(jié)參提取物73mg/kg組的各個(gè)小鼠的共性處理如下:每只小鼠于背部中線兩側(cè)皮下4點(diǎn)注射抗原乳劑共0.2ml (含50μ gM0G35_55多肽)，然后立即腹腔注射0.2ml PTX溶液(含500ng PTX，溶劑為生理鹽水)，免疫抗原乳劑48小時(shí)后再次腹腔注射0.2mlPTX溶液(含500ng，溶劑為生理鹽水)；注射抗原乳劑的時(shí)刻作為O時(shí)刻,每24小時(shí)為I天,第0-24小時(shí)為第一天,第24-48小時(shí)為第2天,依次類推，即第O天注射抗原乳劑和PTX溶液，第2天再次注射PTX溶液。
[0060]模型組小鼠的特性處理如下:第I天至第40天，每天每只小鼠灌胃給予0.2ml生理鹽水。
[0061]激素組小鼠的特性處理如下:第I天至第40天，每天每只小鼠灌胃給予0.2ml生理鹽水；第10天至第40天，每天灌胃給予醋酸潑尼松混懸液0.2ml (醋酸潑尼松混懸液是將醋酸潑尼松片磨粉然后用生理鹽水懸浮得到的，醋酸潑尼松的單次給藥劑量為6mg/kg體重)。
[0062]竹節(jié)參提取物146mg/kg組小鼠的特性處理如下:第1天至第40天，每天灌胃給予竹節(jié)參提取物混懸液0.2ml (竹節(jié)參提取物混懸液是將實(shí)施例1制備的竹節(jié)參提取物用生理鹽水懸浮得到的，竹節(jié)參提取物的單次給藥劑量為146mg/kg體重)。
[0063]竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠的特性處理如下:第I天至第40天，每天灌胃給予竹節(jié)參提取物混懸液0.2ml (竹節(jié)參提取物混懸液是將實(shí)施例1制備的竹節(jié)參提取物用生理鹽水懸浮得到的，竹節(jié)參提取物的單次給藥劑量為73mg/kg體重)。
[0064]正常組小鼠的處理方法如下:每只小鼠于背部中線兩側(cè)皮下4點(diǎn)注射生理鹽水共
0.2ml，然后立即腹腔注射0.2ml生理鹽水，免疫抗原乳劑48小時(shí)后再次腹腔注射0.2ml生理鹽水；第一次注射生理鹽水的時(shí)刻作為O時(shí)刻，每24小時(shí)為I天，第0-24小時(shí)為第一天，第24-48小時(shí)為第2天，依次類推，即第O天皮下注射生理鹽水和腹腔注射生理鹽水，第2天再次腹腔注射生理鹽水；第I天至第40天，每天每只小鼠灌胃給予0.2ml生理鹽水。
[0065]二、體重變化
[0066]第I天至第40天，每天測(cè)量小鼠的體重，結(jié)果見圖1。實(shí)驗(yàn)初始時(shí)刻(即未進(jìn)行任何操作)，各組小鼠體重?zé)o差異。分組處理后，模型組小鼠體重逐漸降低，第15天降至谷底，之后又回升，至第40天體重基本恢復(fù)正常，模型組小鼠在第1-6天、9-20天、25-30天體重降低明顯，與正常組小鼠比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0.05、P < 0.01或P < 0.001)。竹節(jié)參提取物146mg/kg組和竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠的體重降低均不明顯,竹節(jié)參提取物146mg/kg組小鼠體重在1-9天、14-17天、19-20天、24-32天與模型組小鼠具有顯著差異，竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠體重在2-16天、20天、24-32天與模型組小鼠具有顯著差異。激素組小鼠的體重與模型組小鼠沒有顯著差異。
[0067]三、發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)
[0068]第I天至第40天，每日觀察小鼠。根據(jù)Weaver方法的15分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小鼠的神經(jīng)癥狀進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。尾巴:0分，無臨床癥狀；1分，尾巴張力減低或尾巴遠(yuǎn)端癱瘓；2分:尾巴全癱。四肢(四肢中的每個(gè)進(jìn)行一次評(píng)分，再將4個(gè)評(píng)分加和):0分:無臨床癥狀；I分:步態(tài)不穩(wěn)；2分:肢體輕癱，行走時(shí)肢體拖曳；3分:肢體全癱，行走時(shí)肢體外翻。各個(gè)部位的評(píng)分累加即為最后的神經(jīng)功能評(píng)分，總分為15分。結(jié)果見圖2。第9天，小鼠陸續(xù)開始發(fā)病，毛色粗糙不光澤、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、飲食飲水減少、體重減輕，最初表現(xiàn)為尾部張力消失，隨著病情的進(jìn)展，出現(xiàn)蹣跚步態(tài)、雙后肢拖地爬行，嚴(yán)重者四肢完全癱瘓。第16天，模型組小鼠達(dá)到發(fā)病高峰期，神經(jīng)功能評(píng)分最高。竹節(jié)參提取物146mg/kg組和竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠在第15天和第16天的評(píng)分顯著低于模型組小鼠(P < 0.05)。竹節(jié)參提取物146mg/kg組小鼠的評(píng)分在第30天顯著低于模型組小鼠。竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠的評(píng)分在第24-25天、第27-31天顯著低于模型組小鼠(P < 0.05)。與模型組小鼠相比，激素組小鼠的評(píng)分在第24-25天、第28天和第32-40天有明顯改善(P < 0.05或P
<0.01)。
[0069]神經(jīng)功能評(píng)分為1分及以上即判斷為發(fā)病。第1天至第40天，統(tǒng)計(jì)各組小鼠的發(fā)病率、死亡率、潛伏期和第1至40天階段的病程，結(jié)果見表1。正常組小鼠無發(fā)病。模型組小鼠和激素組小鼠的發(fā)病率均為100%，竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠的發(fā)病率為80%，竹節(jié)參提取物146mg/kg組小鼠的發(fā)病率為60%。模型組小鼠死亡率為20%，激素組、竹節(jié)參提取物73mg/kg組和竹節(jié)參提取物146mg/kg小鼠組無死亡。竹節(jié)參提取物146mg/kg組和竹節(jié)參提取物73mg/kg組小鼠的發(fā)病潛伏期延長，病程縮短，與模型組有顯著差異(P
<0.05)。
[0070]表1各組小鼠的發(fā)病率、死亡率、潛伏期和病程的變化(元±&)
[0071]
【權(quán)利要求】
1.竹節(jié)參提取物在制備治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物中的應(yīng)用。
2.一種治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物，它的活性成分為竹節(jié)參提取物。
3.竹節(jié)參提取物在制備治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的藥物中的應(yīng)用。
4.一種治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的藥物，它的活性成分為竹節(jié)參提取物。
5.如權(quán)利要求1或3所述的應(yīng)用，或，如權(quán)利要求2或4所述的藥物，其特征在于:所述竹節(jié)參提取物是將中藥竹節(jié)參先進(jìn)行乙醇水溶液提取，再進(jìn)行水飽和正丁醇萃取，最后進(jìn)行丙酮沉淀得到的物質(zhì)。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用或藥物，其特征在于: 所述竹節(jié)參提取物的制備方法依次包括如下步驟: (O取中藥竹節(jié)參，粉碎，得到粉末； (2)取所述粉末，用體積百分比為60-80%的乙醇水溶液進(jìn)行提取，得到提取液； (3)取所述提取液，去除其中的乙醇； (4)用水飽和正丁醇萃取，取有機(jī)相； (5)取所述有機(jī)相，去除其中的正丁醇，得到浸膏； (6)取所述浸膏，用體積百分比為70-80%乙醇水溶液溶解； (7)加入丙酮，靜置，然后收集沉淀。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用或藥物，其特征在于:所述步驟(2)中，所述粉末與所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液的配比為:1重量份粉末:8-15重量份乙醇水溶液。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用或藥物，其特征在于:所述步驟(2)中，所述粉末與所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液的配比為:1重量份粉末:10重量份乙醇水溶液。
9.如權(quán)利要求6至8中任一所述的應(yīng)用或藥物，其特征在于:所述體積百分比為60-80%的乙醇水溶液為體積百分比為70%的乙醇水溶液。
10.如權(quán)利要求6至9中 任一所述的應(yīng)用或藥物，其特征在于:所述步驟(7)中，加入4-5倍體積的丙酮。
【文檔編號(hào)】A61P25/00GK103800412SQ201410041725
【公開日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月28日
【發(fā)明者】王蕾, 趙暉, 鄒海艷, 張秋霞, 鄭琦, 李情琴, 房玲 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)