抗egfr抗體在治療egfr突變體介導的疾病中的用途【專利摘要】本發(fā)明涉及治療抗酪氨酸激酶抑制劑療法的EGFR介導的疾病，特別是癌癥。提供了用于在具有次級EGFR突變，特別地酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變的抗標準療法的個體中治療癌癥和減少腫瘤生長的方法。本發(fā)明提供了使用抗EGFR抗體治療抗酪氨酸激酶抑制劑的癌癥的方法。描述了使用抗體抗EGFR?mAb806治療抗酪氨酸激酶抑制劑的復發(fā)性肺癌包括非小細胞肺癌的方法?！緦＠f明】抗EGFR抗體在治療EGFR突變體介導的疾病中的用途[0001]本申請是申請日為2008年I月24日、申請?zhí)枮?00880006008.1、發(fā)明名稱為“抗EGFR抗體在治療EGFR突變體介導的疾病中的用途”的發(fā)明專利申請的分案申請。發(fā)明領(lǐng)域[0002]本發(fā)明涉及治療抗酪氨酸激酶抑制劑療法的EGFR介導的疾病，特別是癌癥。提供了用于在具有次級EGFR突變，特別地酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變的抗標準療法的個體中治療癌癥和降低腫瘤生長的方法。[0003]發(fā)明背景[0004]靶向癌癥療法被設計用來破壞致癌作用和腫瘤生長所需的特定分子的功能，從而殺死或阻止癌細胞的生長(JiH等人(2006)CellCycle5(18):2072-2076Epub2006Sep15)。與常規(guī)細胞毒性化學療法相反，此類靶向癌癥療法更有效并且對正常細胞的傷害更小。靶向癌癥療法領(lǐng)域的主要努力一直以來是開發(fā)靶向表皮生長因子受體(EGFR)的試劑。EGFR是密切相關(guān)的受體(包括的EGFR(ErbB-1)、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4))的ErbB家族的成員。EGFR的激活導致受體酪氨酸激酶的激活和一系列下游信號傳導事件(所述述信號傳導事件介導細胞增殖、運動、粘著、侵入和對化學療法的抗性以及對細胞凋亡的抑制(2-4))，對于癌細胞的持續(xù)增殖和存活至關(guān)重要的過程。[0005]迄今為止，兩個主要類型的抗EGFR試劑已進入臨床環(huán)境:抗EGFR抗體和小分子EGFR酪氨酸激酶抑制劑(TKI)(5,6)?？笶GFR抗體例如西妥昔單抗(cetuximab)經(jīng)設計以結(jié)合EGFR的細胞外結(jié)構(gòu)域并且阻斷EGFR下游信號傳導的激活(7)。西妥昔單抗(也稱為抗體225，美國專利4，943，533)是針對A431細胞產(chǎn)生的，所述細胞表達高水平的野生型EGFR0相反地，小分子TKI例如吉非替尼(化合物ZD1839，易瑞沙)或厄洛替尼(化合物0S1-774,它賽瓦)與ATP競爭對EGFR酪氨酸激酶的細胞外催化結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，從而阻止EGFR的自磷酸化作用和下游信號轉(zhuǎn)導(4)。[0006]這兩種抗EGFR藥物類型都已在患有多種不同類型癌癥的患者的亞群中顯示一些臨床功效。在患有具有EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變的肺癌的患者中使用吉非替尼或厄洛替尼進行的治療通常產(chǎn)生顯著的臨床反應(5，8)。然而，吉非替尼或厄洛替尼在具有野生型EGFR的肺腺癌或其他組織學亞型例如鱗狀細胞癌中的功效是有限的(9，10)。此外，在臨床前和臨床試驗中已顯示吉非替尼或厄洛替尼在抑制EGFRvIII突變體(11)(其中存在外顯子II至VII的符合讀框的缺失(也稱為EGFRde2-7)的不同的激活性EGFR突變)的功能中很大程度上是無效的。EGFRvIII通常見于成膠質(zhì)細胞瘤(Gl1blastoma),并且最近發(fā)現(xiàn)存在于人肺鱗狀細胞癌的亞群(12)和大部分頭頸癌(13)中。[0007]顯示西妥昔單抗在非小細胞肺癌(NSCLC)患者和患有頭頸癌的患者以及結(jié)腸直腸癌患者的小亞群中是有效的。然而，對西妥昔單抗的反應似乎與EGFR的表達水平無關(guān)。因此，不清楚這些患者對西妥昔單抗治療有反應然而其腫瘤具有高EGFR表達的其他癌癥患者對西妥昔單抗治療不顯療效的原因(14)。[0008]由于EGFRvIII突變受體的表達限定于腫瘤細胞，因此其代表了抗體療法的高度特異性靶。因此，已產(chǎn)生了對于de2-7EGFR的獨特的肽是特異性的多克隆和單克隆抗體。使用獨特的de2-7肽免疫后分離的一系列小鼠mAb都顯示對于截短的受體和裸小鼠中生長的被靶向的de2-7EGFR陽性異種移植物的選擇性和特異性(WikstrandCJ等人(1995)CancerRes55:3140-3148;Okamoto,S等人(1996)BrJCancer73:1366-1372;HillsD等人(1995)IntJCancer63:537-543;ReistCJ等人(1997)CancerRes57:1510-1515;ReistCJ等人(1995)CancerRes55:4375-4382;美國專利5，401，828)。抗EGFRvIII抗體的實例包括ABX-EGF(帕尼單抗)、DH8.3、L8A.4和Y10。[0009]MAb806是新型鼠抗體，最初使用表達EGFRvIII突變體的完整細胞作為免疫原產(chǎn)生該抗體以識別獨特的截短的突變體EGFRvIII(15-17)。重要地，被mAb806識別的表位在無活性的野生型(wt)EGFR中是不可接近的，但在過表達EGFR和表達EGFRvIII的細胞中暴露于wtEGFR的過渡形式中(18)。表位研究受到免疫組織化學研究支持，后者證明806抗體結(jié)合存在于神經(jīng)膠質(zhì)瘤以及廣泛的上皮癌中的表位但不結(jié)合正常人組織(16，19)。這些和其他臨床前數(shù)據(jù)表明mAb806可能具有與西妥昔單抗和其他抗EGFR抗體不同的臨床活性譜和副作用特征譜。在異種移植模型中，mAb806已展示出有效的不靶向正常組織的抗腫瘤活性。因此，mAb806的獨特的靶向能力代表了癌癥特異性分子靶向療法的新范例。[0010]當過表達時或被突變激活時，酪氨酸激酶(包括EGFR)促成了癌癥的發(fā)生并且這些突變的酪氨酸激酶(TK)通常為選擇性和特異性癌癥療法提供了靶或敏感性。EGFR基因的酶氨酸激酶結(jié)構(gòu)域中的體細胞突變與肺癌對包括吉非替尼和厄洛替尼的某些酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的敏感性有關(guān)。外顯子19中的符合讀框的EGFR缺失(delL747-S752)和密碼子858(外顯子21)中的常見點突變(L858R)已在非小細胞肺癌和腺癌中得到鑒定，并且與對TKI吉非替尼和厄洛替尼的敏感性相關(guān)(LynchTJ等人(2004)NEnglJMed350:2129-2139;PaezJG等人(2004)Science304:1497-1500;PaoW等人(2004)PNAS101(36):13306-13311)。最近的研究已顯示10-30%的NSCLC患者具有EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變，而5%的肺鱗狀細胞癌(SCC)患者具有細胞外結(jié)構(gòu)域EGFRvIII突變(12，20)。測定癌癥對EGFR靶向治療的反應性的方法基于對EGFR中，特別是激酶結(jié)構(gòu)域中的突變的估量，患者中預測的抑制劑敏感性描述于Bell等人(W02005/094357和US20060147959)。[0011]由繼發(fā)抗藥性(secondaryresistance)或補償性突變(compensatorymutat1ns)介導的、所獲得的對化學療法或靶向癌癥療法的抗性是正在面臨的挑戰(zhàn)。盡管使用TKI進行持續(xù)的治療，但對TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)敏感的腫瘤最終不斷地發(fā)展。已在復發(fā)性和抗性患者的腫瘤活檢組織中鑒定了EGFR的位點790上的次級突變(T790M)(KobayashiS等人(2005)NEnglJMed352(8):786-792)。預測該突變導致抑制劑在ATP-激酶-結(jié)合口袋中的結(jié)合的空間位阻。[0012]考慮到在EGFR介導的疾病中獲得的對TKI的抗性的存在和盛行以及顯著的癌癥復發(fā)率，存在對更廣的有效的治療方案的臨床需要，所述治療方案使用EGFR靶向試劑，所述試劑有效地針對，靶向或避免在EGFR突變體和EGFR介導的疾病中獲得的抗性。[0013]本文中參考資料的引用不應當解釋為這是對于本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)的承認。[0014]發(fā)明概述[0015]現(xiàn)已在許多EGFR介導的癌癥(包括肺癌)中鑒定了激活表皮生長因子受體(EGFR)的突變。已在人非小細胞肺癌(NSCLC)中鑒定了EGFR突變，5%的人肺鱗狀細胞癌具有EGFRvIII突變以及10-30%的肺腺癌具有EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變。EGFR靶向性單克隆抗體mAb806識別野生型(Wt)EGFR以及截短的EGFRvIII突變體的構(gòu)象表位。為了進一步表征mAb806對EGFR介導的癌癥療法的應用，將mAb806用于治療經(jīng)基因工程改造的、患有肺腫瘤的小鼠，所述肺腫瘤由EGFRvIII或EGFR激酶結(jié)構(gòu)域的突變驅(qū)動。本發(fā)明驗證了抗EGFRvIII抗體，特別是mAb806在阻斷EGFRvIII信號傳導和誘導腫瘤細胞凋亡，從而在EGFRvIII驅(qū)動的鼠類肺癌中導致顯著的腫瘤衰退中是非常有效的。針對表達高水平的野生型EGFR的細胞產(chǎn)生的不同的EGFR-靶向性抗體一西妥昔單抗未能在這些遺傳上確定的肺腫瘤中顯示活性。此外，使用mAb806進行的對由公認的和臨床相關(guān)的EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變(L858R)驅(qū)動的鼠肺腫瘤的治療誘導了顯著的腫瘤衰退。已顯示該激酶結(jié)構(gòu)域突變對TKI療法，特別是吉非替尼或厄洛替尼是敏感的。[0016]獲得的對TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)的抗性是正在面臨的挑戰(zhàn)，并且盡管進行持續(xù)的療法，但對TKI敏感的腫瘤最終繼續(xù)發(fā)展。該獲得的抗性可由繼發(fā)抗藥性或補償性突變，特別包括在EGFR的位點790上的次級突變(T790M)介導。研究者現(xiàn)在證明抗EGFR抗體，特別是mAb806有效地抗T790M突變，從而在EGFRT790M/L858R驅(qū)動的鼠肺癌中導致顯著的腫瘤衰退?？偟恼f來，這些數(shù)據(jù)證明抗EGFR抗體，特別是mAb806在具有EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變的患者(包括癌癥患者，特別是肺癌患者)的治療中提供了有效的備選或輔助。[0017]本發(fā)明提供了在哺乳動物中治療酪氨酸激酶抑制劑抗性EGFR介導的疾病的方法，其中所述抗性EGFR介導的疾病是EGFR中次級突變從而產(chǎn)生突變的EGFR的結(jié)果并且其中所述突變與EGFRvIII突變不同，該方法包括對所述哺乳動物施用有效量的能夠結(jié)合并抑制突變的EGFR的抗EGFR抗體。在特定的方面，次級EGFR突變是EGFR酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變。在另外的方面，酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變是T790M。[0018]在所述方法的特定實施方案中，抗EGFR抗體是mAb806抗體或其活性片段。MAb806包括鼠抗體、重組抗體或人源化抗體。[0019]另外的抗EGFR抗體，包括靶向EGFRvIII突變體的那些抗體，可用于本發(fā)明的治療方法。示例性和已知的抗EGFR抗體可選自ABX-EGF(帕尼單抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。[0020]在所述方法中進行治療的EGFR介導的疾病包括癌癥。EGFR介導的癌癥包括成膠質(zhì)細胞瘤、頭頸癌、胰腺癌、肺癌、神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、腎癌、視網(wǎng)膜癌、皮膚癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，EGFR介導的癌癥是肺腺癌、肺鱗狀細胞癌或非小細胞肺癌。[0021]本發(fā)明提供了用于在癌癥患者中降低EGFR介導的腫瘤生長的方法，其中所述癌癥患者之前已用一種或多種酪氨酸激酶抑制劑進行了治療并且已發(fā)生了復發(fā)性疾病和腫瘤生長，該方法包括對所述患者施用有效量的抗EGFR抗體以使復發(fā)性疾病和腫瘤生長被抑制和降低。[0022]在用于降低腫瘤生長的本方法的特定實施方案中，抗EGFR抗體是mAb806抗體或其活性片段。MAb806包括鼠抗體、重組抗體或人源化抗體。[0023]可使用另外的抗EGFR抗體，包括靶向EGFRvIII突變體的那些抗體。示例性和已知的抗EGFR抗體可選自ABX-EGF(帕尼單抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。[0024]在特定的臨床方面，癌癥患者中的復發(fā)性疾病和腫瘤生長是次級EGFR突變的結(jié)果，所述次級EGFR突變是EGFR酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變。特定的次級EGFR突變是酶氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變T790M。[0025]本發(fā)明還提供了在哺乳動物中治療EGFR介導的癌癥的方法，該方法包括對所述哺乳動物施用酪氨酸激酶抑制劑和抗EGFR抗體，其中在使用酪氨酸激酶抑制劑作為二線療法的治療后施用所述抗EGFR抗體來抑制抗酪氨酸激酶抑制劑的潛在的次級突變的EGFR。[0026]EGFR介導的癌癥可選成膠質(zhì)細胞瘤、頭頸癌、胰腺癌、肺癌、神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、腎癌、視網(wǎng)膜癌、皮膚癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，癌癥是肺腺癌、肺鱗狀細胞癌或非小細胞肺癌。[0027]在本方法的一個方面，酶氨酸激酶抑制劑是可逆酪氨酸激酶抑制劑?？赡胬野彼峒っ敢种苿┛梢允潜桨粪蜻衔?aniliniquinazoline)和選自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。[0028]在本方法的另外方面，酪氨酸激酶抑制劑是不可逆酪氨酸激酶抑制劑。示例性不可逆酪氨酸激酶抑制劑在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的并且包括但不限于EKB-569、EK1-569、HK1-272、HK1-357和BIBW2992。[0029]根據(jù)參考下列舉例說明的附圖的下列描述，其他目的和有利方面對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將變得顯而易見。[0030]附圖概述[0031]圖1描繪由EGFRvIII表達驅(qū)動的鼠肺癌腫瘤對mAb806和ch806抗體治療敏感但抗西妥昔單抗治療。通過每日一次1.P.注射0.5mg/劑的mAb806或ch806或Img/劑的西妥昔單抗治療Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA，Ink4A/Arf-/_小鼠。在第一周的治療后，以相同的劑量每兩天給予抗體。在指定的時間點上進行系列MRI，顯示各治療組中代表性小鼠的相應切片。表示為平均值土標準差(SD)的條狀圖(Bardiagram)示例說明通過MRI測量的腫瘤衰退，并且使用學生氏精確t檢驗(Student’sexactttest)進行統(tǒng)計分析。在整個實驗過程中使所有小鼠持續(xù)飲食多西環(huán)素。H:標示心臟的區(qū)域。[0032]圖2A和2B描繪了使用mAb806治療的EGFRvIII驅(qū)動的小鼠中的肺腺癌的組織病理學特征。(A)通過EGFRvIII表達進行超過8周驅(qū)動的肺腺癌(上方的圖框)。在用mAb806治療I周后，腫瘤開始變小并且具有增加的纖維化(中間的圖框)。當在第5周結(jié)束mAb806治療時肺樣品總體上正常(下方的圖框)。箭頭顯示纖維化結(jié)節(jié)(fibroticnodule)，其由成纖維細胞和巨噬細胞組成。在該特定的纖維化區(qū)域中未發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞。左圖框:100X，在圖框:800X。⑶可在對照小鼠和用mAb806治療I周的小鼠(分別為左上和左下圖框)中觀察到總EGFR的免疫組織學染色的相似模式和強度；當與未治療的腫瘤(右上圖框)相比時，在I周的治療后，腫瘤細胞的Phospho-EGFR染色的強度減小(右下圖框)。代表性照片在200X放大率下拍攝。(C)TUNEL染色顯示當與未治療的腫瘤(左上圖框)相比時，在用mAb806治療I周后在EGFRvIII驅(qū)動的肺腫瘤(左下圖框)中凋亡的細胞核(紅色箭頭)增加。代表性照片在200X放大率下拍攝。表示為平均值土SD的條狀圖示例說明從至少200倍的高倍視野(HPF)中測定在I周的mAb806治療前和治療后肺腫瘤中的細胞凋亡指數(shù)。使用學生氏精確t檢驗(右圖框)進行統(tǒng)計分析。[0033]圖3顯示來自mAb806治療的Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/_小鼠的整個肺裂解物的Western印跡分析。分析來自在mAb806治療的不同時間點上從小鼠采集的腫瘤的完整肺裂解物。EGFR磷酸化的抑制可在治療的I周后就觀察到，然而總EGFR水平只在治療的5周后才減少。在mAb806施用的整個過程中，Erkl，2磷酸化被抗體抑制，但AKT磷酸化在兩個治療時間點上都保持在與未治療的對照相當?shù)乃缴希录拥鞍子米魃蠘訉φ?。[0034]圖4Α和4Β。EGFR激酶結(jié)構(gòu)域突變L858R驅(qū)動的小鼠肺腺癌對ch806治療有反應。(A)通過每日一次1.P注射0.5mg/劑的ch806來治療Tet-op-EGFRL858R-1RES-熒光素酶/CCSP-rtTA小鼠，進行4周。在治療的2和4周后，MRI顯示腫瘤體積減少。表示為平均值土SD的條狀圖示例說明通過MRI測量到的腫瘤衰退，使用學生氏精確t檢驗進行統(tǒng)計分析(右圖框)。H:標示心臟的區(qū)域。(B)組織病理學分析顯示，當與未治療對照(左邊的兩個圖框)相比較時，Tet-op-EGFRL858R-1RES-熒光素酶/CCSP-rtTA小鼠(右邊的兩個圖框)中腫瘤皺縮并且具有顯著的巨噬細胞浸潤。箭頭顯示殘留腫瘤的病灶。來自100X和800X放大率的照片如圖中的腳標所標示所示。[0035]圖5A和5B描繪了使用mAb806對比西妥昔單抗，對EGFRT790M-L858R肺腫瘤治療的結(jié)果。將持續(xù)多西環(huán)素飲食超過8周的小鼠進行MRI以記錄腫瘤負荷。每日一次通過1.P.注射0.5mg劑量，將mAb806遞送至具有肺腫瘤的小鼠，進行4周。每日一次通過1.P.注射Img/劑對小鼠施用西妥昔單抗,進行4周。使用同窩出生小鼠(Littermate)作為所有治療研究的對照(未治療)。(A)在第0、2和4或5周用MRI對小鼠進行成像來測定腫瘤體積的減小。(B)在治療和MRI成像完成后，殺死小鼠以進行進一步的組織學和生物化學研究。[0036]發(fā)明詳述[0037]根據(jù)本發(fā)明，可使用在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)的常規(guī)分子生物學、微生物學和重組DNA技術(shù)。此類技術(shù)在文獻中進行了詳盡的說明。參見，例如，Sambrook等人，"MolecularCloning:ALaboratoryManual"(1989),CurrentProtocolsinMolecularB1logy"第1-1II卷[Ausubel,R.M.，ed.(1994)];"CelIB1logy:ALaboratoryHandbook^第1-1II卷[J.E.Celis,ed.(1994))];"CurrentProtocolsinImmunology^第1-1II卷[Coligan,J.E.,ed.(1994)]/'OligonucleotideSynthesis"(M.J.Gaited.1984);"NucleicAcidHybridizat1n"[B.D.Hames&S.J.Higginseds.(1985)];"Transcript1nAndTranslat1n"[B.D.Hames&SJ.Higgins,eds.(1984)];〃AnimalCellCulture^[R.1.Freshney,ed.(1986)];"ImmobilizedCellsAndEnzymes"[IRLPress,(1986)];B.Perbal，〃APracticalGuideToMolecularCloning"(1984)。[0038]因此，如果在本文中出現(xiàn)，下列術(shù)語將具有下面所示的定義。[0039]術(shù)語“抗體”描述了無論是天然還是部分或完全合成產(chǎn)生的免疫球蛋白?？贵w包括結(jié)合特定表位的任何免疫球蛋白，包括抗體和其片段。該術(shù)語包括多克隆、單克隆、重組、人源化以及嵌合抗體。該術(shù)語還涵蓋具有是抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的或與其同源的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽或蛋白質(zhì)。該術(shù)語也包括⑶R移植抗體。[0040]由于抗體可通過許多方法進行修飾，因此，術(shù)語“抗體”應當解釋為涵蓋具有擁有需特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何特定的結(jié)合成員或物質(zhì)。因此，該術(shù)語涵蓋抗體的抗體片段、衍生物、功能等同物和同源物，其中包括包含免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽，無論是天然的還是完全或部分合成的多肽。因此包括包含融合至另一個多肽的免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域或等同物的免疫嵌合分子。嵌合抗體的克隆和表達描述于EP-A-0120694和EP-A-0125023以及美國專利4，816，397和4，816，567中。[0041]已顯示，完整抗體的片段可行使結(jié)合抗原的功能。結(jié)合片段的實例是(i)由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fab片段；(ii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iii)由單個抗體的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(iv)由VH結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段(Ward,E.S.等A.,Nature341,544-546(1989));(v)分離的CDR區(qū)域;(vi)F(ab’)2片段，包含兩個連接的Fab片段的二價片段；(vii)單鏈Fv分子(scFv)，其中VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域通過肽連接體連接，所述肽連接體允許兩個結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成抗原結(jié)合部位(Bird等人，Science,242，423-426，1988;Huston等人，PNASUSA,85，5879-5883，1988);(viii)多價抗體片段(scFv二聚體、三聚體和/或四聚體(Power和Hudson,JImmunol.Methods242:193-2049(2000))；(ix)雙特異性單鏈Fv二聚體(PCT/US92/09965)和(x)“雙特異抗體(Diabody)”，通過基因融合構(gòu)建的多價或多特異性片段(W094/13804;P.Holliger等人Proc.Natl.Acad.Sc1.USA906444-6448,(1993))。[0042]“抗體結(jié)合部位”是由輕鏈或重鏈以及輕鏈可變區(qū)和高變區(qū)組成的抗體分子的結(jié)構(gòu)部分，其特異性結(jié)合抗原。[0043]以其不同語法形式在本文中使用的短語“抗體分子”包括完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。[0044]示例性抗體分子是完整的免疫球蛋白分子、大體上完整的免疫球蛋白分子和包含互補位(paratope)的免疫球蛋白分子的那些部分,其中包括本領(lǐng)域內(nèi)稱為Fab、Fab’、F(ab’)2和F(v)的那些部分，所述部分優(yōu)選用于本文中描述的治療方法。[0045]抗體還可以是雙特異性的，其中抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是本發(fā)明的特定結(jié)合成員，并且另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有不同的特異性，例如招募效應子功能等。本發(fā)明的雙特異性抗體包括其中抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是本發(fā)明的特定結(jié)合成員(以括其片段)，并且另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是不同的抗體或其片段，包括不同的抗EGFR抗體例如抗體528(美國專利4，943，533)、嵌合的和人源化的225抗體(美國專利4，943，533和W0/9640210)、抗de2-7抗體例如DH8.3(Hills,D.等人(1995)Int.J.Cancer63(4):537-543)、抗體L8A4和Y10(Reist，CJ等人(1995)CancerRes.55(19):4375-4382;FoulonCF等人.(2000)CancerRes.60(16):4453-4460),ICR62(ModjtahediH等人(1993)CellB1phys.Jan-Jun;22(1-3):129-46;Modjtahedi等人(2002)P.A.A.C.R.55(14):3140-3148或Wikstrand等人的抗體(WikstrandC.等人(1995)CancerRes.55(14):3140-3148)的片段。另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以是識別或靶向特定細胞類型的抗體，如在神經(jīng)或膠質(zhì)細胞特異性抗體中的。在本發(fā)明的雙特異性的抗體中，本發(fā)明的抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與其他結(jié)合結(jié)構(gòu)域或分子組合，所述其他結(jié)合結(jié)構(gòu)域或分子識別特定細胞受體和/或以特定的方式例如作為免疫調(diào)節(jié)劑(例如，白細胞介素)、生長調(diào)節(jié)劑或細胞因子(例如腫瘤壞死因子(TNF)，特別地，2002年2月13日提交的U.S.S.N.60/355，838(以其全文通過引用合并入本文)中記載的TNF雙特異性形式(modality))或毒素(例如，蓖麻毒素)或抗有絲分裂或細胞凋亡試劑或因子來調(diào)控細胞。[0046]抗體分子的Fab和F(ab’)2部分可通過熟知的方法通過木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分別對大體上完整的抗體分子進行蛋白水解反應來制備。參見例如，屬于Theofilopolous等人的美國專利4，342，566。Fab’抗體分子部分也是熟知的并且從F(ab’)2部分產(chǎn)生，然后用巰基乙醇還原連接兩個重鏈部分的二硫鍵，然后用試劑例如碘乙酰胺來烷基化所得的蛋白質(zhì)硫醇來產(chǎn)生。包含完整的抗體分子的抗體在本文中是優(yōu)選的。[0047]以其不同語法形式顯示的短語“單克隆抗體”是指只具有一種能夠與特定抗原發(fā)生免疫反應的抗體結(jié)合部位的抗體。因此單克隆抗體通常展示對于與其發(fā)生免疫反應的任何抗原的單一結(jié)合親和力。單克隆抗體還可以包含具有多個抗體結(jié)合部位的抗體分子，每一個抗體結(jié)合部位對于不同的抗原是免疫特異性的；例如，雙特異性(嵌合)的單克隆抗體。[0048]術(shù)語“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”描述了包含特異性結(jié)合抗原的部分或全部和與抗原的部分或全部互補的區(qū)域的抗體的部分。當抗原很大時，抗體可以只結(jié)合抗原的特定部分，該部分稱為表位。抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可由一個或多個抗體可變結(jié)構(gòu)域提供。優(yōu)選，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含抗體輕鏈可變區(qū)(VL)和抗體重鏈可變區(qū)(VH)。[0049]術(shù)語“mAb806”、“806抗體”、“單克隆抗體806”、“ch806”、“人源化806”和未特別列出的任何變體可在本文中互換使用，并且如在整個本申請和權(quán)利要求中所使用。因此，同樣地包括抗體，其中包括重組的、嵌合的、經(jīng)遺傳修飾的或備選的抗體。這些修飾可以是有意的，例如通過定點誘變獲得的修飾，或者可以是偶然的，例如通過在作為抗體或其片段的產(chǎn)生者的宿主中的突變獲得的修飾。同樣，術(shù)語“mAb806”、“806抗體”、“單克隆抗體806”、“ch806”、“人源化806”意欲將本文中明確引用的和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的、公共公開的蛋白質(zhì)和免疫球蛋白以及所有大體上同源的類似物和等位基因變異包括在它們的范圍內(nèi)。mAb806抗體，包括其產(chǎn)生、特定的活性、氨基酸和核酸序列、抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、可變區(qū)序列得到了公開并且對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，包括W002/092771;LUWOrRB等人(2001)CancerRes61:5355-5361;MishimaK等人(2001)CancerRes61:5349-5354;JohnsTG等人(2002)IntJCancer98:398-408;JungbluthAA等人(2003)ProcNatlAcadScilOO(2):639-644(其各自以其全文通過引用合并入本文)中所提供的。[0050]本文中描述的氨基酸殘基優(yōu)選以“L”同分異構(gòu)形式存在。然而，可用以“D”同分異構(gòu)形式存在的的殘基置換任何L氨基酸殘基，只要多肽保持期望的免疫球蛋白-結(jié)合的功能特性。NH2是指存在于多肽的氨基末端的游離氨基。COOH是指存在于多肽的羧基末端的游離羧基。與標準的多肽命名法，J.B1l.Chem.，243:3552-59(1969)一致，氨基酸殘基的縮寫不于下列對應表(tableofCorrespondence)中:[0051]對應表【權(quán)利要求】1.有效量的、能夠結(jié)合并抑制突變的EGFR的抗EGFR抗體在制備用于在哺乳動物中治療酪氨酸激酶抑制劑抗性EGFR介導的疾病的藥物中的用途，其中所述抗性EGFR介導的疾病是EGFR中次級突變從而產(chǎn)生突變的EGFR的結(jié)果，并且其中所述突變與EGFRvIII突變不同。2.權(quán)利要求1的用途，其中次級EGFR突變是EGFR酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變。3.權(quán)利要求2的用途，其中酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變是T790M。4.權(quán)利要求1的用途，其中抗EGFR抗體是mAb806抗體或其活性片段。5.權(quán)利要求4的用途，其中mAb806是重組抗體或人源化抗體。6.權(quán)利要求1的用途，其中抗EGFR抗體選自ABX-EGF(帕尼單抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。7.權(quán)利要求1的用途,其中EGFR介導的疾病是癌癥并且選自成膠質(zhì)細胞瘤、頭頸癌、胰腺癌、肺癌、神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、腎癌、視網(wǎng)膜癌、皮膚癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。8.權(quán)利要求7的用途，其中癌癥是肺腺癌、肺鱗狀細胞癌或非小細胞肺癌。9.有效量的、能夠結(jié)合并抑制突變的EGFR的抗EGFR抗體在制備用于在癌癥患者中降低EGFR介導的腫瘤生長，特別是復發(fā)性疾病的藥物中的用途，其中所述癌癥患者之前已用一種或多種酪氨酸激酶抑制劑進行治療并且已發(fā)生了復發(fā)性疾病。10.權(quán)利要求9的用途，其中抗EGFR抗體是mAb806抗體或其活性片段。11.權(quán)利要求10的用途，其中mAb806是重組抗體或人源化抗體。12.權(quán)利要求9的用途，其中抗EGFR抗體選自ABX-EGF(帕尼單抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。13.權(quán)利要求9的用途，其中癌癥患者已經(jīng)發(fā)生了為EGFR酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變的次級EGFR突變。14.權(quán)利要求13的用途，其中酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域突變是T790M。15.能夠結(jié)合并抑制突變的EGFR的抗EGFR抗體在制備用于在哺乳動物中治療EGFR介導的癌癥的藥物中的用途，其中在使用酪氨酸激酶抑制劑作為二線療法的治療后施用所述抗EGFR抗體藥物來抑制抗酪氨酸激酶抑制劑的潛在的次級突變的EGFR。16.權(quán)利要求15的用途，其中EGFR介導的癌癥選自成膠質(zhì)細胞瘤、頭頸癌、胰腺癌、肺癌、神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、腎癌、視網(wǎng)膜癌、皮膚癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。17.權(quán)利要求16的用途，其中癌癥是肺腺癌、肺鱗狀細胞癌或非小細胞肺癌。18.權(quán)利要求15的用途，其中酪氨酸激酶抑制劑是可逆酪氨酸激酶抑制劑。19.權(quán)利要求18的用途，其中可逆酪氨酸激酶抑制劑是苯胺喹唑啉化合物和選自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。20.權(quán)利要求15的用途，其中酪氨酸激酶抑制劑是不可逆酪氨酸激酶抑制劑。21.權(quán)利要求20的用途，其中不可逆酪氨酸激酶抑制劑選自EKB-569、EK1-569、HK1-272、HK1-357和BIBW2992?！疚臋n編號】A61P35/00GK104043123SQ201310593730【公開日】2014年9月17日申請日期:2008年1月24日優(yōu)先權(quán)日:2007年1月25日【發(fā)明者】K-K·王申請人:達娜-法勃腫瘤研究所公司