中藥菟絲子提取物化學(xué)修飾的制備方法和臨床應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】取菟絲子粉末乙醇用浸泡，加熱回流提取得到含菟絲子黃酮提取物。菟絲子黃酮再與一氯乙酸、氫氧化鈉的混合物，在70-80℃條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95％乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基菟絲子提取物衍生物，生成物干燥。該制劑，制備方法簡(jiǎn)單，易溶于水，原料來(lái)源廣，成本低廉，治療效果好。
【專(zhuān)利說(shuō)明】中藥菟絲子提取物化學(xué)修飾的制備方法和臨床應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)臨床用藥，具體說(shuō)是涉及一種適用于骨折、骨不連、股骨頭壞死、骨質(zhì)疏松的治療與預(yù)防的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]骨折愈合是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)修復(fù)過(guò)程，可以重新形成與原骨外形、內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能都一樣的新骨。祖國(guó)醫(yī)學(xué)運(yùn)用中藥治療骨折有著悠久的歷史…，并積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出了很多有效的方藥。中藥能加速骨折愈合，已被臨床證實(shí)，人們通過(guò)各種手段。從不同角度對(duì)中藥促進(jìn)骨折愈合機(jī)理進(jìn)行了深入的研究，并已取得了一定的成果，顯示出中藥促進(jìn)骨折愈舍的優(yōu)勢(shì)。
[0003]英絲子是旋花科植物英絲子Cuscuta chinensisLain的干燥成熟種子,是溫補(bǔ)腎陽(yáng)的要藥。其主要成分為多糖類(lèi)，黃酮類(lèi)，揮發(fā)油成分和生物堿類(lèi)化合物等。其中黃酮類(lèi)化合物主要包含山奈酚、槲皮素及糖苷類(lèi)…?，F(xiàn)代研究顯示，多種黃酮類(lèi)化合物對(duì)對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖分化有促進(jìn)作用。[宋敏，羅曉，李寧，等.淫羊藿總黃酮含藥血清對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化的影響[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2010.18(2):3.]
[0005]本發(fā)明的目的本發(fā)明的目的在于提供一種菟絲子提取物衍生物的制備方法。
[0006]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是制備方法簡(jiǎn)單，易溶于水，原料來(lái)源廣，成本低廉，無(wú)副作用。
[0007]本發(fā)明的目的可通過(guò)下述技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn):菟絲子一干燥一粉碎一乙醇提取一提取液離心過(guò)濾-減壓蒸餾揮去乙醇-濃縮一干燥` 菟絲子黃酮的提取:菟絲子80°C干燥5h，取出粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，精密稱(chēng)取菟絲子粉末30g，加人300mL95%乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓蒸餾回收溶劑至少量，提取物經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到黃色固體，即為粗黃酮提取物。
菟絲子提取物衍生物制備:
1.按每100g菟絲子提取物加入200-250ml(2mol/ L)的氫氧化鈉液體和15g—氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g菟絲子提取物再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基菟絲子提取物衍生物，生成物干燥。
2.一鍋炒方法:按質(zhì)量:質(zhì)量:體積=1:0.35:0.30取菟絲子提取物、氫氧化鈉、一氯乙酸，放入2倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液中，在醚化溫度50°C，醚化時(shí)間3h條件下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，生成物干燥，得到羧甲基菟絲子提取物衍生物。
[0010]所述的藥物組合物，在制備促進(jìn)人或動(dòng)物骨折愈合的治療中的應(yīng)用。
[0011]為了進(jìn)一步的驗(yàn)證本發(fā)明成品制劑的療效，我們將上述具體制備方法1-3中制備的藥物進(jìn)行了相應(yīng)的動(dòng)物試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。
[0012]目的:探討羧甲基菟絲子提取物衍生物對(duì)動(dòng)物骨折愈合的治療的影響，有效地開(kāi)發(fā)中藥菟絲子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:
[0013]動(dòng)物分組模型制備:取6月齡清潔級(jí)雎性SD大鼠30只。體重約261±12g。隨機(jī)分為兩組:空白對(duì)照組和菟絲子治療組，每組15只。治療組、空白對(duì)照大鼠以20%氨基甲酸乙酯5mg / kg腹腔注射麻醉，暴露大鼠股骨，用鋼鋸將股骨鋸開(kāi)，以達(dá)到骨髓滲出為度，將創(chuàng)口縫合。
試劑骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司然后實(shí)施灌胃給藥，空白對(duì)照組大鼠予5%葡萄糖5-10mg / kg / d，治療組大鼠予菟絲子提取物衍生物5-10mg / kg / d，并連續(xù)3d肌內(nèi)注射青霉素以抗感染。每組大鼠分別于7 \ 14\28d各處死5只。
標(biāo)本采集與組織學(xué)處理:取大鼠股骨做組織學(xué)制備。每組標(biāo)本隨機(jī)抽取5個(gè)骨折斷端進(jìn)行脫鈣石蠟切片。股骨用4% PFA加0.1M磷酸緩沖液調(diào)整PH值為7.2，室溫固定3d。然后用20% EDTA加0.1M磷酸緩沖液調(diào)整PH值為7.2，浸泡8~IOd脫鈣。再經(jīng)系列乙醇脫水，石蠟包埋，沿股骨干長(zhǎng)軸方向行厚度切成5 μ m厚片，行HE染色。隨機(jī)取5張股骨片，分別在X400奧林巴斯FV1000放大激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察。
結(jié)果與結(jié)論:
骨折術(shù)后2周，治療組大鼠骨折處出現(xiàn)大量細(xì)胞聚集，間充質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等開(kāi)始形成纖維骨痂，大量骨小梁開(kāi)始形成，骨小梁間隙可見(jiàn)豐富的毛細(xì)血管，骨折斷端處可見(jiàn)板層骨部分取代纖維骨痂；模型組大鼠骨小梁較細(xì)，間隙較大，排列方向紊亂。治療組BMP-2蛋白表達(dá)高于空白組(P <0.01)。結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
[0017]【具體實(shí)施方式】
以下是本
【發(fā)明內(nèi)容】
的具體實(shí)施例，用于闡述本申請(qǐng)文件中所要解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案。
`[0018]【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為術(shù)后7d治療組大鼠和空白對(duì)照組大鼠骨組織形態(tài)比較。術(shù)后7d治療骨折斷端的髓腔內(nèi)可見(jiàn)少量紅細(xì)胞，明顯纖維組織增生和骨小梁形成；空白組骨折斷端的髓腔內(nèi)可見(jiàn)較多紅細(xì)胞，和少量壞死的骨組織，偶見(jiàn)增生的顯微組織。
[0020]圖2為術(shù)后14d治療組大鼠和空白對(duì)照組大鼠骨組織形態(tài)比較。術(shù)后14d，2組小鼠組織形態(tài)比較:治療組骨折斷端處可見(jiàn)板層骨部分取代纖維骨痂，尚不具備骨的結(jié)構(gòu)層次；空白對(duì)照組骨折斷端處可見(jiàn)大片小梁的邊緣有成片的骨基質(zhì)形成。
[0021]實(shí)施例1
[0022]菟絲子黃酮的提取:菟絲子80°C干燥5h，取出粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，精密稱(chēng)取菟絲子粉末30g，加人300mL95%乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓回收溶劑至少量，提取物經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到黃色固體，即為粗黃酮提取物。
[0023]菟絲子提取物衍生物制備:按每100g菟絲子提取物加入200_250ml (2mol / L)的氫氧化鈉液體和15g—氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g菟絲子提取物再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基菟絲子提取物衍生物，生成物干燥。
[0024]實(shí)施例2
[0026]菟絲子黃酮的提取:菟絲子80°C干燥5h，取出粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，精密稱(chēng)取菟絲子粉末30g，加人300mL95%乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓回收溶劑至少量，提取物經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到黃色固體，即為粗黃酮提取物。
[0027]—鍋炒方法:按質(zhì)量:質(zhì)量:體積=1:0.35:0.30取菟絲子提取物、氫氧化鈉、一氯乙酸，放入2倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95 %的乙醇溶液中，在醚化溫度50°C，醚化時(shí)間3h條件下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，生成物干燥，得到羧甲基菟絲子提取物衍生 物。
【權(quán)利要求】
1.中藥菟絲子提取物化學(xué)修飾的制備方法，其特征是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn): (1):菟絲子粉碎成細(xì)粉，過(guò)80目篩，加十倍量95%乙醇，水浴回流，提取2次，每次2h，過(guò)濾，濾液合并，減壓回收溶劑至少量，提取物經(jīng)過(guò)減壓濃縮，真空干燥后得到粗黃酮提取物。 (2)菟絲子提取物化學(xué)修飾制備方法:菟絲子粗黃酮提取物加入氫氧化鈉液體和一氯乙酸混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)濃縮后，用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基菟絲子提取物衍生物，生成物干燥。
2.權(quán)利I所獲得的菟絲子提取物衍生物在制備促進(jìn)人或動(dòng)物骨折愈合、骨不連、股骨頭壞死、骨質(zhì)疏松的的治療中的應(yīng)`用。
【文檔編號(hào)】A61P19/10GK103816204SQ201310576174
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】姬明麗, 顧世玉, 焦軍杰, 程遠(yuǎn), 馬世江 申請(qǐng)人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院