專利名稱：具有美白皮膚作用的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法，特別是ー種具有美白皮膚作用的化妝品用藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，適用添加于膏類、霜類、乳類、液類(香水除外)的化妝品。
背景技術(shù)：
俗話說“一白遮三丑”，花容月貌、面白如玉，自古為人們所向往。東方女性歷來崇尚白皙的肌膚，美白肌膚是每個(gè)女孩子所追求的，歐美人雖不追求美白，但熱衷于對(duì)各種色斑的去除。美白化妝品的市場(chǎng)日趨活躍，其產(chǎn)品銷售與日俱增，已成為護(hù)膚化妝品的主流品種之一。美白化學(xué)物是指通過作用于皮膚黑色素的形成、代謝途徑的某個(gè)階段，控制、抑制黑色素生成，從而降低皮膚色度或減輕色素沉著，以達(dá)到皮膚美白為目的的天然或人工合成的化學(xué)物。目前國(guó)內(nèi)外用于化妝品的美白化學(xué)物主要為氫醌、曲酸、果酸、熊果苷和維生素C衍生物等，氫醌和汞鹽能達(dá)到迅速美白效果，但其毒副作用大，長(zhǎng)期使用會(huì)造成皮膚永久脫色和接觸性皮炎。長(zhǎng)期使用曲酸具有細(xì)胞毒作用，并可增加卵巣細(xì)胞染色體互換及染色體畸變的發(fā)生率，但曲酸衍生物美白作用更強(qiáng)，且毒副作用更小，目前的美白化妝品多以此為有效成分；熊果苷作用溫和，但使用劑量過大有和曲酸相似的毒副作用。維生素C衍生物則有穩(wěn)定性差和價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)。(Nerya 0, Musa R, Khatib s, etal.unalcones 00 potent tyrosinase inhioitors:the effect of nydroxyl positionsand numbers[J].Phytochemistry,2004,65:1389-1395)植物美白依其純天然性，來源的廣泛性，品種豐富無毒、無副作用的優(yōu)點(diǎn)，越來越多的受到廣大消費(fèi)者的關(guān)注。(Smit N,Vicanova J,Pavel S.The hunt for natural skinwhitening agents[J]. 1ht J Mol Sci,2009,10(12):5326-5349 ;Kamakshi R.Fairnessvia formulations:a review ofcosmetic skin-丄ightening ingredients[J].J CosmetSci,2012,63(1):43-54)中藥美容已有ニ千年歷史，積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，目前，在日本含天然中草藥的化妝品已占整個(gè)化妝品市場(chǎng)的50%以上。因此，尋找開發(fā)高效且對(duì)人體無副作用或副作用小的天然中草藥皮膚美白祛斑制劑已成為目前化妝品領(lǐng)域研發(fā)的熱點(diǎn)。(舒樹苗、肖峰、潘勤.美白中藥與植物藥的研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)藥 植物藥分冊(cè)，2007，22 (6):252-255)如專利200810024411.9，該專利公開了ー種具有美白功能的中藥組合物及其應(yīng)用，該中藥組合物由黃芩、虎杖、丹皮提取物復(fù)配而成。如專利200910192274.4，該專利公開了一種美白祛斑霜及其制備方法，活性成分為中藥提取液，中藥由如下中藥百分?jǐn)?shù)的組分組成:手參5 55 %、人參花15 35%、合歡花5 15%、金銀花5 15%、玫瑰花15 20%、菊花5 10%。如專利201010261392.9，該專利公開了ー種用于美白皮膚的組合物、植物萃取美白組合物與具有美白功能的組合物，該組合物包括有效量的亞精胺衍生物，以及美容或藥理學(xué)上可接受的媒介物
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供ー種具有美白皮膚作用的藥物組合物及制備方法和用途。本發(fā)明所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物，是以火棘果實(shí)、甘草、桑椹、當(dāng)歸和虎耳草為原料制備的，且是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)I 60份甘草I 60份?？癐 60份當(dāng)歸I 60份虎耳草I 60份優(yōu)選的，所述具有美白皮膚作用的藥物組合物，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)I 50份甘草I 50份?？癐 50份當(dāng)歸I 50份虎耳草I 50份

優(yōu)選的，所述具有美白皮膚作用的藥物組合物，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)I 40份甘草I 40份桑椹I 40份當(dāng)歸I 40份虎耳草I 40份優(yōu)選的，所述具有美白皮膚作用的藥物組合物，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)2 35份甘草2 35份桑椹2 35份當(dāng)歸2 35份虎耳草2 35份優(yōu)選的，所述具有美白皮膚作用的藥物組合物，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)8 30份甘草8 30份桑椹8 30份當(dāng)歸10 30份虎耳草10 3O份最優(yōu)選的，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)10份
甘草10份桑椹10份當(dāng)歸10份虎耳草10份最優(yōu)選的，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)8份甘草8份桑椹12份當(dāng)歸12份虎耳草12份最優(yōu)選的，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)8份甘草8份桑椹15份

當(dāng)歸15份虎耳草15份最優(yōu)選的，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)10份甘草10份桑椹12份當(dāng)歸12份虎耳草12份最優(yōu)選的，是以如下重量份數(shù)的原料制備的:火棘果實(shí)8份甘草8份桑椹10份當(dāng)歸10份虎耳草15份本發(fā)明所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物的制備方法，包括以下步驟:(I)將上述的各個(gè)原料置于體積濃度為20% 80%的こ醇中浸泡2 48小時(shí)，浸泡用的こ醇用量為各個(gè)原料總重量的10 200倍，過濾，得浸泡液；優(yōu)選的，過濾殘?jiān)儆皿w積濃度為20% 80%的こ醇浸泡2 48小時(shí)，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。(2)浸泡液濃縮至原重量的2 5%，濃縮液用大孔樹脂吸附，再用體積濃度5 95%的こ醇多次洗脫，收集洗脫液，即為所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物；優(yōu)選的，洗脫用こ醇的體積濃度為40% 95% ；所述大孔樹脂采用日本三菱化學(xué)公司以聚苯こ烯一二こ烯基苯為基體的HP20型大孔樹脂；浸泡液濃縮的方法為常規(guī)的減壓濃縮。試驗(yàn)證明，本發(fā)明的具有美白皮膚作用的藥物組合物，具有多重作用，能夠用于制備美白皮膚保養(yǎng)的化妝品和皮膚的治療性藥物。本發(fā)明還涉及ー種皮膚保養(yǎng)化妝品，包括所述具有美白皮膚作用的藥物組合物和化妝品領(lǐng)域使用的輔料。本發(fā)明還涉及ー種皮膚的治療性藥物，包括權(quán)利要求所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物和醫(yī)學(xué)上可接受的載體。尤其可以用于制備皮膚護(hù)理化妝品，包括霜?jiǎng)?、乳液、化妝水、凝膠劑、面膜、涂搽劑或洗劑；制備皮膚護(hù)理化妝品時(shí)，可將制得的提取液組合物，經(jīng)減壓濃縮至原重量的10 % 50 %，得到組合物濃縮液，與已知的化妝品以及藥品的基質(zhì)或者輔料、載體、添加劑相混合，按照常規(guī)的方法進(jìn)行制備，其中，所述組合物濃縮液占化妝品總重量的5% 10%。本發(fā)明根據(jù)中藥理論，從大量的天然藥物中，選用了火棘果實(shí)、甘草、桑椹、當(dāng)歸和虎耳草為原料，制備獲得了所述的具有美白皮膚作用的組合物，其中，所述的火棘果實(shí)選用薔薇科蘋果亞科火棘屬的常綠野生小灌木植物Pyracantha fortuneana(Maxim.) Li的果實(shí)；甘草選用豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖；桑椹選用?？浦参锷orus albaL.的干燥果穗；虎耳草選用虎耳草科植物虎耳草Saxifiaggastolonifera Curt.的全草；當(dāng)歸選用傘科植物當(dāng)歸 Angelica sinensis (Oliv.) Diels 的干燥根。根據(jù)《中國(guó)藥典》和文獻(xiàn)記載:火棘果實(shí)為薔薇科蘋果亞科火棘屬的常綠野生小灌木植物Pyracanthafortuneana (Maxim.)Li的果實(shí),火棘果實(shí)又名赤陽子、火把果等，主要分布在我國(guó)東南、西南及西北等區(qū)域的山地及丘陵地帯?；鸺麑?shí)可食用，性味甘酸，具有健脾消積、生津止渴等功效。火棘果實(shí)提取物富含蘆丁和金絲桃苷等黃酮類化合物，此外也含有氨基酸、多種無機(jī)鹽及微量元素等。國(guó)外曾報(bào)道火棘果實(shí)具有顯著的美白作用，并以此為原料成功開發(fā)出美白化妝品。甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 Glycyrrhizainflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖,甘草是臨床最常用的中藥，俗稱“國(guó)之藥老”，有“十方九草”之美譽(yù)，甘草性平，味甘，歸十二經(jīng)。有解毒、祛痰、止痛、解痙以至抗癌等藥理作用。在中醫(yī)上，甘草補(bǔ)脾益氣，止咳潤(rùn)肺，緩急解毒，調(diào)和百藥。臨床應(yīng)用分“生用”與“蜜炙”之別。生用主治咽喉腫痛，痛疽瘡瘍，胃腸道潰瘍以及解藥毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能減退，大便溏薄，乏カ發(fā)熱以及咳嗽、心悸等。桑椹為?？浦参锷orus alba L.的干燥果穗，中醫(yī)認(rèn)為桑葚味甘酸，性微寒，入心、肝、腎經(jīng)，為滋補(bǔ)強(qiáng)壯、養(yǎng)心益智佳果。具有補(bǔ)血滋陰，生津止渴，潤(rùn)腸燥等功效，主治陰血不足而致的頭暈?zāi)垦?，耳鳴心悸，煩躁失眠，腰膝酸軟，須發(fā)早白，消渴ロ干，大便干結(jié)等癥。
當(dāng)歸為傘科植物當(dāng)歸Angelicasinensis (Oliv.)Diels的干燥根。當(dāng)歸味甘、辛，性溫。能補(bǔ)血，活血，調(diào)經(jīng)，止痛，潤(rùn)腸。用于血虛，面色萎黃，眩暈心悸；血虛，或兼有瘀滯的月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉、痛經(jīng)；虛寒性腹痛、冠心病心絞痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷等痛證；腸燥便秘；久咳氣喘。近年來，醫(yī)學(xué)家對(duì)中國(guó)唐代孫思邈著的《千金翼方》中抗老消斑、美容健膚的“婦人面藥”進(jìn)行了科學(xué)驗(yàn)證，從中篩選出使用頻率最高的藥物，結(jié)果表明，當(dāng)歸的水溶液抑制酪氨酸酶活性的功能很強(qiáng)，因而能抑制黑色素的形成，對(duì)治療黃褐斑、雀斑等色素性皮膚病收效良好，具有抗衰老和美容作用，有助于使人青春常駐。將當(dāng)歸添加到美容霜、祛斑霜中，以及膠囊雪菲中以求得營(yíng)養(yǎng)皮膚，防止皮膚粗糙，防治粉刺、黃褐斑、雀斑等作用，經(jīng)觀察無任何副作用。當(dāng)歸還能促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)，用當(dāng)歸制成的護(hù)發(fā)素、洗發(fā)膏，能使頭發(fā)柔軟發(fā)亮，易于梳理?；⒍轂榛⒍菘浦参锘⒍軸axifiagga stolonifera Curt.的全草。微苦、辛、寒、有小毒，祛風(fēng)，清熱，涼血解毒。治風(fēng)疹，濕疹，中耳炎，丹毒，咳嗽，吐血，肺癰，崩漏，痔疾。近年來，人們發(fā)現(xiàn)虎耳草花中富含熊果苷，能有效抑制黑色素母細(xì)胞的活躍程度，就像給黑色素催眠一祥，有美白，淡斑的功效。目前，國(guó)內(nèi)外尚未見將火棘果實(shí)、甘草、桑椹、當(dāng)歸和虎耳草提取物的組合物用于具有美白皮膚作用的相關(guān)報(bào)道。綜上所述，本發(fā)明人閱讀了大量文獻(xiàn)，依據(jù)皮膚美白劑的基本原理，利用細(xì)胞模型進(jìn)行高通量篩選，終于發(fā)現(xiàn)具有顯著肌膚美白作用的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物經(jīng)臨床試驗(yàn)證實(shí)效果顯著，安全性好。所涉及的成分具有效果明確、安全性好、無任何副作用和在化妝品配方中穩(wěn)定的特點(diǎn)；與現(xiàn)有同類產(chǎn)品相比，具有效果顯著的特點(diǎn)，是ー種新型具有美白皮膚作用的有效天然藥物提取物的組合物。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1在室溫下，取火棘果實(shí)、甘草、桑椹、當(dāng)歸和虎耳草各10公斤(共50公斤)，用體積濃度70%的こ醇600公斤浸泡提取，浸泡時(shí)間為24小時(shí)，殘?jiān)儆皿w積濃度70%的こ醇600公斤浸泡24小時(shí)提取，然后將浸泡后的溶液合并，經(jīng)過200目的濾網(wǎng)過濾后，減壓濃縮20倍，再將濃縮液上大孔樹脂，用體積濃度50%的こ醇洗脫，收集的洗脫液中含有本發(fā)明組方中所需要的有效成分，即藥物組合物。實(shí)施例2在室溫下，取火棘果實(shí)8公斤、甘草8公斤、桑椹12公斤、當(dāng)歸12公斤和虎耳草12公斤(共52公斤)，用體積濃度50%的こ醇1200公斤浸泡提取，浸泡時(shí)間為24小時(shí)，殘?jiān)儆皿w積濃度50%的こ醇1200公斤浸泡24小時(shí)提取，然后將浸泡后的溶液合井，經(jīng)過200目的濾網(wǎng)過濾后，減壓濃縮40倍，再將濃縮液上大孔樹脂，用體積濃度40%的こ醇洗脫，收集的洗脫液中含有本發(fā)明組方中所需要的有效成分，即藥物組合物。實(shí)施例3在室溫下，取火棘果實(shí)8公斤、甘草8公斤、桑椹15公斤、當(dāng)歸15公斤和虎耳草15公斤(共61公斤)，用體積濃度80%的こ醇1000公斤浸泡提取，浸泡時(shí)間為24小時(shí)，殘?jiān)儆皿w積濃度80%的こ醇1000公斤浸泡24小時(shí)提取,然后將浸泡后的溶液合并,經(jīng)過200目的濾網(wǎng)過濾后濃縮25倍，再將濃縮液上大孔樹脂，用體積濃度60%的こ醇洗脫，收集的洗脫液中含有本發(fā)明組方中所需要的有效成分，即藥物組合物。實(shí)施例4 在室溫下，取火棘果實(shí)10公斤、甘草10公斤、桑椹12公斤、當(dāng)歸12公斤和虎耳草12公斤(共56公斤)，用體積濃度30%的こ醇2000公斤浸泡提取，浸泡時(shí)間為24小時(shí)，殘洛再用體積濃度30%的こ醇2000公斤浸泡24小時(shí)提取,然后將浸泡后的溶液合并,經(jīng)過200目的濾網(wǎng)過濾后濃縮50倍，再將濃縮液上大孔樹脂，用體積濃度50%的こ醇洗脫，收集的洗脫液中含有本發(fā)明組方中所需要的有效成分，即藥物組合物。實(shí)施例5在室溫下，取火棘果實(shí)8公斤、甘草8公斤、桑椹10公斤、當(dāng)歸10公斤和虎耳草15公斤(共51公斤)，用體積濃度60%的こ醇1200公斤浸泡提取，浸泡時(shí)間為24小時(shí)，殘?jiān)儆皿w積濃度60%的こ醇1200公斤浸泡24小時(shí)提取,然后將浸泡后的溶液合并,經(jīng)過200目的濾網(wǎng)過濾后濃縮30倍，再將濃縮液上大孔樹脂，用體積濃度80%的こ醇洗脫，收集的洗脫液中含有本發(fā)明組方中所需要的有效成分，即藥物組合物。實(shí)施例6將實(shí)施例1所獲得的液體采用減壓濃縮，濃縮至原重量的10% 50%，得藥物組合物濃縮液，用于制備具有美白皮膚作用的精華液，組分的重量百分比如下:
原料比例(％)供應(yīng)商
A相
單硬脂酸甘酯6.0廣州華化
丙ニ醇5.5廣州華化
硬脂酸4.0廣州華化
三乙醇胺0.7無明化工
白色礦物油10.0廣州華化
尼泊爾金甲酯1.5銳谷生物科技
肉豆蔻酸異丙酯10.0浙江物美
聚ニ甲基硅氧燒2.0無明化工
B相
藥物組合物濃縮液 1.0自制
去離子水59.3自制生產(chǎn)エ藝:攪拌下將A和B相分別加熱至70°C，至全部溶解混合均勻，然后在70°C條件下將B相加入A相中，至形成W/Q型乳剤。攪拌均勻后，冷卻至室溫即得。實(shí)施例1 藥物組合物具有美白皮膚作用的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告:下述實(shí)驗(yàn)中，所用的藥物提取物的組合物為實(shí)施例1的藥物組合物。I材料與方法1.1試劑與儀器RPMI1640，Gibco公司產(chǎn)品；胎牛血清(FBS)，杭州四季青公司產(chǎn)品；B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞，中科院細(xì)胞所提供，維生素C由北京貝麗萊斯生物化學(xué)公司提供，符合化妝品原料藥標(biāo)準(zhǔn)；左旋谷氨酰胺、左旋多巴(L-Dopa)、ニ甲基亞砜(DMSO)、胰蛋白酶，TritonX-100，均為Sigma產(chǎn)品，噻唑蘭(MTT)，Serva產(chǎn)品；C02培養(yǎng)箱，美國(guó)Bamstead公司；TDL-40B離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；細(xì)胞培養(yǎng)板，美國(guó)Greiner產(chǎn)品；DG5031酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，華東電子管廠產(chǎn)品。1.2 方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)B-16黑素瘤細(xì)胞株購(gòu)于中科院細(xì)胞所，待細(xì)胞生長(zhǎng)至融合狀態(tài)，經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化傳代，接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，用RPMI1640培養(yǎng)液置于37°C CO2培養(yǎng)箱，5% CO2飽和濕度環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)。每一次實(shí)驗(yàn)取自同一傳代細(xì)胞，初始接種細(xì)胞濃度為IO5左右。細(xì)胞接種6h后，添加受試美白劑，各設(shè)5個(gè)劑量組，于第2天更換相同的含藥培養(yǎng)液，連續(xù)培養(yǎng)3d后收獲細(xì)胞，用苔盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)，然后將細(xì)胞用于以下實(shí)驗(yàn)中。1.2.2試劑配制與實(shí)驗(yàn)分組取本發(fā)明的美白提取物0.5g先用ImlDMSO溶解，加新鮮配制的1640培養(yǎng)液稀釋至終濃度為5、0.5,0.05,0.005,0.0005g/L，DMSO的終濃度低于
1%。維生素C 直接加入培養(yǎng)液稀釋至終濃度，稀釋濃度分別為10' 10_2、10' 10_4、IO-5Hi0I/し空白對(duì)照組僅加入稀釋藥物所用的相應(yīng)溶媒。1.2.3酪氨酸酶活性抑制率檢測(cè)以L-Dopa為底物，參考Maeda等的方法測(cè)定細(xì)胞酪氨酸酶活性。調(diào)整黑素細(xì)胞密度，以IO4個(gè)/孔接種于96孔板，6h后換液，每孔加A 200 u I的藥物溶液，每個(gè)濃度設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入新鮮培養(yǎng)液代替藥物溶液，5% CO2, 37 °C孵育3d后(中間換液一次)，棄去上清液，PBS洗3次，每孔加45 y kl %TritonX-100溶液,震蕩IOmin以溶解細(xì)胞,姆孔加0.01mol/L的L-Dopa, 37°C孵育60min,于450nm波長(zhǎng)處比色，以空白孔調(diào)零，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)各孔吸光度值，每ー實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。酪氨酸酶活性抑制率=(1-各濃度平均吸光度值+對(duì)照組平均吸光度值)X 100%，使用SPSS13.0進(jìn)行曲線擬合和計(jì)算IC5tl值。1.2.4黑素合成抑制率檢測(cè)黑素含量采用Victoria的方法測(cè)定，調(diào)整黑素細(xì)胞密度，以5 X IO5個(gè)/孔接種于6孔板，6h后換液，每孔加入Iml的藥物溶液，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入新鮮培養(yǎng)液代替藥物溶液，5% C02，37°C孵育3d后(中間換液一次)，棄去上清液，每孔加入0.25%胰酶Iml于室溫下消化2min，加入4ml培養(yǎng)液中止消化，吹打成單細(xì)胞懸液，取20 u I作細(xì)胞計(jì)數(shù)，其余細(xì)胞懸液1500r/min離心5min，棄上清液，加入ImllNNaOH溶液，震蕩5min，80°C水浴加熱Ih后，轉(zhuǎn)移至96孔板，每孔加100 yl，選擇405nm波長(zhǎng)，以空白孔調(diào)零，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)吸光度值，每ー實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。黑素合成抑制率(% ) = [1-(藥物孔吸光度值+藥物孔L細(xì)胞密度)+ (對(duì)照孔吸光度值+對(duì)照孔細(xì)胞密度)]X 100 %，使用SPSS13.0進(jìn)行曲線擬合和計(jì)算IC5tl值。1.2.5MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增值抑制率取指數(shù)生長(zhǎng)期的B_16細(xì)胞，經(jīng)消化分散制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞接種至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，初始細(xì)胞接種濃度為IO5個(gè)/孔，液體量200 u I/孔，孵育6h待細(xì)胞貼壁后，吸去培養(yǎng)液，加入含有不同濃度藥物培養(yǎng)液，每個(gè)濃度設(shè)置6復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)3d(中間換液一次)。測(cè)定細(xì)胞增殖率吋，向每孔加入
0.5% MTT貯液20 yl，置CO2孵箱繼續(xù)培養(yǎng)4h。此時(shí)MTT經(jīng)線粒體膜琥珀酸脫氫酶轉(zhuǎn)化為甲替(formazan)，顯微鏡下可見細(xì)胞內(nèi)外有大量紫紅色針狀結(jié)晶，小心吸取培養(yǎng)液，每孔加A 200 u I DMSO,培養(yǎng)板振搖lOmin，使甲替結(jié)晶完全溶解。立即置酶標(biāo)儀于570nm測(cè)光吸收值，每ー實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，用下列公式計(jì)算各組細(xì)胞増殖抑制率。細(xì)胞増殖抑制率(％)=(1-實(shí)驗(yàn)組570/對(duì)照組570) X 100%，使用SPSS13.0進(jìn)行曲線擬合和計(jì)算IC5tl值。
1.2.6統(tǒng)計(jì)分析對(duì)各組中的IC5tl值采用SPSS進(jìn)行方差分析，進(jìn)行樣本均數(shù)間的比較。結(jié)果表I藥物組合物對(duì)美白作用的體外評(píng)價(jià)(J 土 S)
權(quán)利要求
1.種具有美白皮膚作用的藥物組合物，其特征在于:是由下述重量配比的原料制成的: 火棘果實(shí)1 60份 甘草1 60份 桑椹1 60份 當(dāng)歸1 60份 虎耳草1 60份
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物，其特征在于:是由下述重量配比的原料制成的: 火棘果實(shí)1 50份 甘草1 50份 桑椹1 50份 當(dāng)歸1 50份 虎耳草1 50份
3.據(jù)權(quán)利要求1-2所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: 第一歩:將上述中藥組方用體積濃度為20% 80%的こ醇浸泡，浸泡用的こ醇用量為中藥組方總重量的10 200倍，得浸泡液； 第二步:浸泡液經(jīng)過濾后濃縮至原重量的2 5%，濃縮液用大孔樹脂吸附，再用體積濃度5% 95%的こ醇多次洗脫，收集洗脫液，洗脫液中包括中藥提取物的組合物。
4.據(jù)權(quán)利要求3所述的具有美自皮膚作用的藥物組合物的制備方法，其特征在于:第一歩中，所述的こ醇浸泡時(shí)間為2 48小時(shí)；或中藥組方先用こ醇浸泡2 48小時(shí)，殘洛再用こ醇浸泡2 48小時(shí),合并浸泡后的溶液,得浸泡液。
5.據(jù)權(quán)利要求3所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物的制備方法，其特征在于:第二步中，所述洗脫用こ醇的體積濃度為40% 95%。
6.據(jù)權(quán)利要求3-5所述方法制得的具有美白皮膚作用的藥物組合物的用途，其特征在干:用于制備皮膚護(hù)理化妝品，包括霜?jiǎng)?、乳液、化妝水、凝膠劑、面膜、涂搽劑和洗剤。
7.據(jù)權(quán)利要求6所述的具有美白皮膚作用的藥物組合物的用途，其特征在于:將制得的藥物組合物經(jīng)減壓濃縮至原重量的10% 50%，得到組合物濃縮液，用于制備皮膚護(hù)理化妝品，其中，所述組合物濃縮液占化妝品總重量的5% 10%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種具有美白皮膚作用的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，所述具有美白皮膚作用的藥物組合物是由下述重量配比的原料制成的火棘果實(shí)1～60份、甘草1～60份、桑椹1～60份、當(dāng)歸1～60份、虎耳草1～60份。本發(fā)明具有美白皮膚作用效果顯著，安全，對(duì)皮膚無刺激性和致敏性。
文檔編號(hào)A61K8/97GK103083210SQ20131002961
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者王恩瀚 申請(qǐng)人:王恩瀚