專利名稱：一種石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別是一種石膽草中苯こ醇苷和黃酮碳苷的提取方法。
背景技術(shù)：
石膽草做為傳統(tǒng)中藥之一，在《云南中草藥》和《昆明民間常用草藥》中均有記載“苦，辛，寒?；钛舛?，消腫止痛。治療月經(jīng)不調(diào)，赤白帶下，心悸，跌打損傷，刀傷瘡癰，頑癬?！?“清熱解毒，除濕。治濕熱痹癥，腮腺炎，咽喉腫痛。”在現(xiàn)代，石膽草在河南西部伏牛山一帶民間常用于初期上呼吸道感染及治療婦女月經(jīng)不調(diào)，赤白帶下等癥。石膽草藥材來源于苦苣苔科(Gesneriaceae)旋蒴苣苔 屬(Boea Comm, ex Lam)植物貓耳朵(Boeahygrometrica (Bunge) R. Br)的干燥全草。該植物又名牛耳草、還魂草、鎮(zhèn)心草等，多生于溪邊或山坡的陰濕巖壁上，主要分布在廣西、云南、河南等地，夏、秋采集全草入藥，石膽草在我國分布廣泛，資源豐富，具有很好的開發(fā)利用價值。在結(jié)構(gòu)鑒定研究中，發(fā)現(xiàn)其含有大量的苯こ醇苷和黃酮碳苷成分。此兩類成分極性大，溶解性相似，均具有很強的生物活性有抗菌、抗炎、抗病毒、抗甲狀腺、抗氧化、保肝、免疫調(diào)節(jié)、強心、增強記憶等多種藥理作用而備受:關(guān)注。事實證明，對石膽草藥材的深入研究具有很高的醫(yī)學(xué)意義和經(jīng)濟價值，石膽草主要成分苯こ醇苷和黃酮碳苷提取エ藝研究可以為同類中藥的研究提供借鑒和參考，具有很高的技術(shù)價值；能夠為石膽草藥材及同類中藥的開發(fā)利用及エ業(yè)化大生產(chǎn)提供指導(dǎo)和依據(jù)，具有廣闊的應(yīng)用前景。而至今還未見有關(guān)石膽草中苯こ醇苷和黃酮碳苷提取方法的報道。目前，中藥生產(chǎn)中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸潰法、滲漉法等，雖然存在損失較大、周期長、エ序多、提取率不高等缺點，但操作簡單、設(shè)備便易，目前エ業(yè)生產(chǎn)仍被普遍采用，近年來也出現(xiàn)了ー些新提取エ藝技術(shù)(超臨界流體萃取技術(shù)、膜提取分離技木、高速逆流色譜提取技術(shù)、空氣爆破法、半仿生提取法等)。盡管新エ藝技術(shù)能夠提高有效成分的收率和純度，但是其適用范圍及操作應(yīng)用均有很大的局限性，因此，如何從石膽草中提取出苯こ醇苷和黃酮碳苷是迫切要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種石膽草中苯こ醇苷和黃酮碳苷的提取方法，可有效解決從石膽草中提取出苯こ醇苷和黃酮碳苷的問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為10-95%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:8-16，在50°C -90°C回流提取1-4次，每次提取時間1. 5-3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶剤，真空干燥得提取物，備用，取大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h(BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4_5h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4-6BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以4-6BV h—1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0. 06-0.1g mL-1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為1:4-8的預(yù)處理后的樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0. 06-0.1g ml/1的提取物的上樣量為50-85ml，流速為2-4BV h—1，待吸附完全后，用2-8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2-4BV h'除雜后用4-6倍柱體積的質(zhì)量濃度為10-50%的こ醇以1-3BV h-1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷；所述的大孔吸附樹脂為HPD-100、AB-8、X-5中的ー種；所述的重量體積比是指固體(石膽草藥材)以g計，液體(こ醇)以ml計。本發(fā)明方法簡單、易操作，提取エ藝成本低、效率高。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為50%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:12，在80°C回流提取2次，每次提取時間2. 5h，過濾，濾液減壓回收溶剤，真空干燥得提取物，備用，取HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h (BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以5BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以5BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0. OSg mL-1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為I 6的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0. 08g mr1的提取物的上樣量為65ml，流速為3BV 待吸附完全后，用5倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為3BV h'除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為30%的こ醇以2BV 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。實施例2取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為10%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:8，在50でで回流提取1次，每次提取時間1. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h (BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4BV h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以4BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0. 06g mじ1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為I 4的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0. 06g mr1的提取物的上樣量為85ml，流速為2BV 待吸附完全后，用2倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2BV h'除雜后用4倍柱體積的質(zhì)量濃度為10%的こ醇以IBV 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。實施例3取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為95%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:16，在90°C回流提取4次，每次提取時間3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶剤，真空干燥得提取物，備用，取HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用
0.5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h (BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂5h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以6BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以6BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0.1g mL-1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為I 8的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0.1g ml/1的提取物的上樣量為50ml，流速為4BV h'待吸附完全后，用8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為4BV h'除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為50%的こ醇以3BV 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。實施例4取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為30%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:10，在60°C回流提取2次，每次提取時間2h，過濾，濾液減壓回收溶剤，真空干燥得提取物，備用，取AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h(BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV h—1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV h—1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以5BV h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以5BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0. 07g mじ1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為1:5的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0. 07g mじ1的提取物的上樣量為75ml，流速為3BV h'待吸附完全后，用4倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為3BV r1,除雜后用5倍柱體積的質(zhì)量濃度為20%的こ醇以2BV .h-1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。實施例5取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為70%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:12，在50°C °C回流提取I次，每次提取時間3h，過濾，濾液減壓回收溶剤，真空干燥得提取物，備用，取AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h(BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4BV h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以4BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2_4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0. 09g mじ1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為1:7的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0. 09g !!!じ1的提取物的上樣量為60ml，流速為2BV h'待吸附完全后，用6倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2BV r1,除雜后用4倍柱體積的質(zhì)量濃度為30%的こ醇以IBV .h-1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。實施例6
取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為80%的こ醇，石膽草藥材和こ醇的重量體積比為1:14，在70で回流提取3次，每次提取時間3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用0. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇浸泡24h(BV為I個樹脂床體積)，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的こ醇以2BV 的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂5h，用質(zhì)量濃度為95%的こ醇2BV IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以6BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以6BV IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為0.1g mL-1的提取物，通過徑高比(樹脂床直徑與高度比值)為1:8的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為0.1g ml/1的提取物的上樣量為50ml，流速為4BV h'待吸附完全后，用8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為4BV h'除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為50%的こ醇以3BV .h-1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯こ醇苷和黃酮碳苷。本發(fā)明采用平行試驗結(jié)合L9(34)正交試驗確立的提取エ藝方法，苯こ醇苷和黃酮碳苷的提取率分別為4. 48±0. 97%,8. 06±1. 03%,該提取方法除去了葉綠素、糖類、蛋白質(zhì)、植物纖維等大量雜質(zhì)，為下一步的純化工藝提供前提，建立了石膽草藥材中苯こ醇苷和黃酮碳苷的純化工藝，經(jīng)純化工藝去除雜質(zhì)后的純化物中苯こ醇苷和黃酮碳苷的總含量為50-53%，轉(zhuǎn)移率為58-63%。符合中藥五類新藥有效部位的有效成分含量達到50%以上，轉(zhuǎn)移率也要達到50%以上的要求。通過對3批3份樣品的制備，對石膽草中苯こ醇苷和黃酮碳苷成分的提取純化工藝進行驗證，測定結(jié)果苯こ醇苷和黃酮碳苷的總含量均達到50%以上，轉(zhuǎn)移率也達到50%以上。本發(fā)明エ藝條件穩(wěn)定、可行。具體實驗資料如下石膽草中苯こ醇苷和黃酮碳苷成分的提取エ藝實驗I提取方法選取中藥生產(chǎn)中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸潰法、滲漉法等，雖然存在損傷較大、周期長、エ序多、提取率不高等缺點，但操作簡單、設(shè)備便易，目前エ業(yè)生產(chǎn)仍被普遍采用。近年來也出現(xiàn)了ー些新提取エ藝技術(shù)(超臨界流體萃取技術(shù)、膜提取分離技術(shù)、高速逆流色譜提取技術(shù)、空氣爆破法、半仿生提取法等)。盡管新エ藝技術(shù)能夠提高有效成分的收率和純度，但是其適用范圍及操作應(yīng)用均有很大的局限性，因此，在エ業(yè)生產(chǎn)中尚未普及。綜合以上因素并結(jié)合本實驗室的條件，仍將選取常用的提取方法作為石膽草藥材的提取方法。通過比較幾種常用的提取方法的優(yōu)缺點及使用范圍，并考慮石膽草藥材自身的特點，最終選取回流法。2影響回流提取因素考察影響回流提取法的因素包括溶劑濃度(%)、溶劑用量、提取溫度(°C )、提取時間(h)、提取次數(shù)等，首先以苯こ醇苷和黃酮碳苷成分的得率為考察指標，采用平行實驗考察各因素對回流提取的影響。2.1溶劑濃度考察精密稱取5份石膽草藥材(每份20. Og)，分別加入240mL體積分數(shù)分別為10%、30%、50%、70%、95%的こ醇溶液，于60°C恒溫水浴加熱回流2次，每次2h。提取液濃縮干燥后用紫外分光光度法測定苯こ醇苷和黃酮碳苷含量。表I不同溶劑濃度回流提取苯こ醇苷和黃酮碳苷含量和得率
權(quán)利要求
1.一種石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法,其特征在于，取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為10-95%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1:8-16，在501 _90°C回流提取1-4次，每次提取時間1. 5-3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，大孔吸附樹脂用O. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂 4_5h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · IT1的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止， 再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4-6 BV · IT1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以4-6 BV · h—1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O. 06-0.1g · mL-1的提取物，通過徑高比為1:4-8的預(yù)處理后的樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O. 06-0.1g · ml/1的提取物的上樣量為50-85ml，流速為2-4 BV · h—1，待吸附完全后，用2_8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2 -4 BV -^1,除雜后用4-6倍柱體積的質(zhì)量濃度為10-50%的乙醇以1-3 BV 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷；所述的大孔吸附樹脂為HPD-100、AB-8、X-5中的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為50%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1:12，在80°C 回流提取2次，每次提取時間2. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取 HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用O. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以5 BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5% 氫氧化鈉溶液以5 BV * h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O. 08g -mr1的提取物，通過徑高比為1:6的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O. 08g -πιΓ1 的提取物的上樣量為65ml，流速為3 BV 士―1，待吸附完全后，用5倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為3BV · 1Γ1，除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為30%的乙醇以2BV · 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為10%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1:8，在 50°C°C回流提取I次，每次提取時間1. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用O. 5BV 的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4 BV · h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以4 BV · h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O.06g · ml/1的提取物，通過徑高比為1:4的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O. 06g · πιΓ1的提取物的上樣量為85ml，流速為2 BV · h—1，待吸附完全后，用2倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2 BV -^1,除雜后用4倍柱體積的質(zhì)量濃度為10% 的乙醇以I BV · 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1: 16，在 90°C回流提取4次，每次提取時間3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取HPD-100大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，HPD-100大孔吸附樹脂用O. 5BV 的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂5h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以 6 BV · 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以6 BV · h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O.1g -mr1的提取物，通過徑高比為1:8的預(yù)處理后的HPD-100樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O.1g -mr1的提取物的上樣量為50ml，流速為4 BV ΙΓ1，待吸附完全后，用8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為4 BV · h—1，除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為50%的乙醇以3 BV · 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為30%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1:10，在60°C 回流提取2次，每次提取時間2h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取 AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用O. 5BV的質(zhì)量濃度為 95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV -h^1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以5 BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5%氫氧化鈉溶液以5 BV · h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂3h，而后用水以同樣流速冼脫至中性， 得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O. 07g · mL-1的提取物， 通過徑高比為1:5的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O. 07g · mL-1的提取物的上樣量為75ml，流速為3 BV 士―1，待吸附完全后，用4倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為3BV · 1Γ1，除雜后用5倍柱體積的質(zhì)量濃度為20%的乙醇以2BV · IT1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1:12，在 50°C°C回流提取I次，每次提取時間3h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用O. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂4h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以4 BV的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5% 氫氧化鈉溶液以4 BV · h—1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂2-4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O. 09g · mL-1的提取物，通過徑高比為1-J的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O. 09g -mL-1的提取物的上樣量為60ml，流速為2 BV 士―1，待吸附完全后，用6倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為2 BV · 1Γ1，除雜后用4倍柱體積的質(zhì)量濃度為30%的乙醇以I BV · 的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石膽草藥材，加入質(zhì)量濃度為80%的乙醇，石膽草藥材和乙醇的重量體積比為1: 14，在 700C回流提取3次，每次提取時間3. 5h，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取AB-8大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，預(yù)處理方法是，AB-8大孔吸附樹脂用O. 5BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇浸泡24h，用2BV的質(zhì)量濃度為95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通過樹脂柱，并浸泡樹脂5h，用質(zhì)量濃度為95%的乙醇2BV · 的流速洗滌樹脂，至流出液加水無白色混濁為止，再用水以同樣流速洗至無醇味；用2BV的質(zhì)量濃度為5%鹽酸溶液以6 BV 的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速洗至中性；用2BV的質(zhì)量濃度為5% 氫氧化鈉溶液以6 BV * h-1的流速通過樹脂層，并浸泡樹脂4h，而后用水以同樣流速冼脫至中性，得預(yù)處理后的AB-8樹脂柱；苯乙醇苷和黃酮碳苷的純化取濃度為O.1g · mL-1的提取物，通過徑高比為1:8的預(yù)處理后的AB-8樹脂柱進行動態(tài)吸附，濃度為O.1g · ml/1的提取物的上樣量為50ml，流速為4 BV 士―1，待吸附完全后，用8倍柱體積的蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，流速為4 BV · 1Γ1，除雜后用6倍柱體積的質(zhì)量濃度為50%的乙醇以3 BV · IT1的流速洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的提取方法，有效解決從石膽草中提取出苯乙醇苷和黃酮碳苷的問題，取石膽草藥材，加入乙醇回流提取，過濾，濾液減壓回收溶劑，真空干燥得提取物，備用，取大孔吸附樹脂進行預(yù)處理，提取物通過預(yù)處理后的樹脂柱進行動態(tài)吸附，待吸附完全后，用蒸餾水沖洗樹脂柱洗脫除雜，除雜后用乙醇洗脫至無色，收集洗脫液，即得苯乙醇苷和黃酮碳苷；本發(fā)明方法簡單、易操作，提取工藝成本低、效率高。
文檔編號A61P1/16GK103006721SQ20121055050
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者王彥志, 馮衛(wèi)生, 鄭曉珂, 劉媛媛, 王小蘭 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院