專利名稱：一種抗腫瘤聯(lián)合用藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤聯(lián)合用藥物。屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤已成為人類死亡的一個重要原因。近年來，化學治療同手術(shù)治療、放射治療一樣，已經(jīng)成為惡性腫瘤不可或缺的重要治療手段。盡管人們在化療方面做出很多努力，研究新的化療藥物，改進化療方案，但是治療效果仍不理想。一方面，大部分抗腫瘤藥物缺乏對腫瘤細胞的選擇性，在殺傷細胞的同時，對正常細胞也有毒副作用，從而導致嚴重的全身不良反應，所以很多患者無法堅持，甚至放棄化療，臨床上難以期望通過增加藥物劑量來獲得理想的效果；另一方面，腫瘤細胞對于化療藥物的耐藥性，更多可能是繼發(fā)性耐藥引起的多藥耐藥(MDR)，這些因素嚴重影響了化療療效。多藥耐藥(MDR)是指在化療過程中，腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物耐藥的同時,對其他結(jié)構(gòu)不同作用靶位不同的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象，它是導致腫瘤治療失敗的重要原因。MDR以原發(fā)性和繼發(fā)性兩種形式出現(xiàn)，前者是細胞固有的對藥物不敏感，首次使用藥物就產(chǎn)生耐藥性，后者是初始對藥物敏感，但經(jīng)過幾個療程后，對藥物產(chǎn)生耐藥性。隨著對MDR機制了解的深入，國內(nèi)外學者開始尋找逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的策略，很重要的一方面就是針對細胞膜P-糖蛋白(P-gp)或其它ABC家族成員等的小分子逆轉(zhuǎn)劑。目前已發(fā)現(xiàn)數(shù)百種MDR逆轉(zhuǎn)劑，這些逆轉(zhuǎn)劑主要包括鈣通道阻滯劑，如維拉帕米，蛋白激酶抑制劑，鈣調(diào)素拮抗劑，生物堿等。盡管大量的體外細胞試驗已經(jīng)證實許多逆轉(zhuǎn)劑可以成功逆轉(zhuǎn)P-gp介導的MDR，但是臨床應用上，發(fā)現(xiàn)很多都不能達到理想的治療效果，因為它們是通過與抗腫瘤藥物競爭的方式來抑制P-gp對抗腫瘤藥物的外排，但是，它們對P-gp的親合力又較弱，因此，為了使腫瘤細胞內(nèi)的藥物濃度達到足夠高就不得不保證要有高的逆轉(zhuǎn)劑的血漿濃度，結(jié)果導致在體內(nèi)產(chǎn)生了嚴重的毒副作用。腫瘤細胞MDR機制十分復雜，牽涉到與MDR相關(guān)的基因較多，僅從單個基因表達的研究入手還不能反映MDR的全貌。一般的化學制劑只有單一的逆轉(zhuǎn)作用靶點，而中藥是一個復雜化學分子復合體，往往同時兼?zhèn)鋽?shù)種逆轉(zhuǎn)機制，因此從中藥中篩選有效的MDR逆轉(zhuǎn)劑已經(jīng)成為研究的熱點。目前，將化療藥物和小分子逆轉(zhuǎn)劑同時包載于同一個納米粒中，可以保證將其靶向到靶點位置的同時，達到更高的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)和治療效果，降低藥物劑量，從而減小對正常細胞的毒副作用。納米粒，一種超微型藥物載體，比細胞還小，可被組織和細胞吸收，改善藥代動力學性質(zhì)，能實現(xiàn)緩釋、控釋和靶向釋藥的目的，從而顯著地提高療效，降低毒副反應。納米粒作為藥物傳遞系統(tǒng)之一，與脂質(zhì)體同樣具有良好的靶向、緩釋控釋的作用，載藥納米粒的形成，可以是藥物溶解、包裹于納米粒內(nèi)部，也可以是吸附粘著于納米粒表面，具有尺寸效應、表面效應、易吸收等生物優(yōu)勢，能夠提高藥物的生物利用度，避免其降解或泄漏，提高其穩(wěn)定性。表阿霉素(Epirubicin,EPI)的同分異構(gòu)體阿霉素，目前為治療肝癌單藥中效率最、高的藥物，也是最早開發(fā)的具有抗腫瘤活性的蒽環(huán)類藥物，抗瘤譜廣、療效好，但是，阿霉素具有嚴重的全身不良反應，如心臟損害、骨髓抑制等，從而嚴重地限制其在臨床上的應用。表阿霉素為桔紅色粉末狀結(jié)晶，溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿、丙酮等溶劑，在溶液中pH為7時，呈桔紅色，pH超過9時呈藍紫色。Delozier等研究認為表阿霉素的抗腫瘤活性與阿霉素相當或略好，目前的臨床結(jié)果也得出了此結(jié)果，而且在動物體內(nèi)表阿霉素的毒性更低，尤其心臟毒性更是如此。表阿霉素主要作用機理是它能夠直接嵌入DNA堿基對之間，干擾轉(zhuǎn)錄過程，阻止mRNA的形成，從而能抑制DNA和RNA的合成，所以對細胞周期各階段均有作用，最主要是作用于細胞核。另外，表阿霉素對拓撲異構(gòu)酶II亦有抑制作用。目前，表阿霉素臨床主要用于急性白血病和惡性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、睪丸癌、胃癌、肝癌等多種實體瘤。槲皮素(quercetin，QC)是一種天然的黃酮類化合物，化學名為3，3’，4’，5，7_五羥基黃酮，具有抗癌防癌、抗自由基、抗貧血、抗炎和抗過敏等多種生物活性及藥理作用。特別是近年來研究發(fā)現(xiàn)槲皮素有促進凋亡及增加某些化療藥物抗腫瘤敏感性作用，能顯著抑制人卵巢癌細胞、乳腺癌細胞、肝癌細胞、結(jié)腸癌細胞和前列腺癌細胞等生長。
目前，尚沒有文獻報道將表阿霉素和槲皮素聯(lián)合使用的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了表阿霉素與槲皮素制備抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了一種抗腫瘤聯(lián)合用藥物及其制備方法。本發(fā)明提供了表阿霉素與槲皮素制備抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。其中，所述的藥物是治療腫瘤多藥耐藥的藥物。進一步優(yōu)選地，所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為0. 1-10:1-100。更進一步優(yōu)選地，所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為1 10。本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤聯(lián)合用藥物，它包含不同規(guī)格的單位制劑，用于同時、分別或依次給藥的表阿霉素與槲皮素，及藥學上可接受的載體制備成的制劑。其中，所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為0. 1-10:1-100。進一步優(yōu)選地，所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為1 10。本發(fā)明藥物是由表阿霉素、槲皮素為活性成分，制備成納米粒，再加入凍干輔料支架劑，冷凍干燥，制備成凍干粉針；所述的納米粒是含有下述重量配比的原料及輔料制備而成表阿霉素O. 1-10份、槲皮素1-90份、PLGA 10_90份、穩(wěn)定劑2_20份；其中，所述的穩(wěn)定劑為 F-68、PVA205、PVA403。進一步優(yōu)選地，所述的納米粒是含有下述重量配比的原料及輔料制備而成表阿霉素O. 2份、槲皮素2份、PLGA 100份、PVA2055份。其中，所述的納米粒的粒徑小于220nm。平均電位為-O. 33±0. 38mV。進一步優(yōu)選地,所述的納米粒的平均粒徑為141. 1±2. 89nm。其中，所述的納米粒的制備方法為a、稱取原料及輔料b、將表阿霉素溶解于95%乙醇溶液中，槲皮素溶解于丙酮溶液中；
C、將PLGA與b步驟的乙醇溶液、丙酮溶液混合，加入二氯甲烷；混合后與含O. 5-5%w/vPVA205的水相混合，其中，有機相和水相的體積比為I 2_5，探頭超聲3-10min，制備成初乳；d、將c步驟的初乳經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得本發(fā)明納米粒。其中，b步驟中表阿霉素溶解于95%乙醇溶液的濃度為O. 5-1. 5mg/ml ;槲皮素溶解于丙酮溶液的濃度為5-15mg/ml ；c步驟中二氯甲烷丙酮乙醇的體積比為1 : O. 4 :O. I ；c步驟所述的探頭超聲條件為200W功率探頭超聲3min ；c步驟所述的水相中含2%w/w PVA205 ;有機相和水相的體積比為1 2 ;d步驟所述的減壓旋轉(zhuǎn)條件為25°C、50r/min條件下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓旋轉(zhuǎn)40min。其中，所述的凍干輔料支架劑為甘露醇、注射用乳糖、注射用葡萄糖、右旋糖酐、氯 化鈉、甘氨酸鈉、磷酸二氫鈉、氨基乙酸中的一種。進一步優(yōu)選地，所述的凍干輔料支架劑為甘露醇。本發(fā)明還提供了一種制備所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物的方法，它包括如下步驟①稱取原料及輔料②將表阿霉素溶解于濃度為95%乙醇溶液中，槲皮素溶解于丙酮溶液中；③將PLGA與b步驟的乙醇溶液、丙酮溶液混合，加入二氯甲烷；混合后與含PVA205的水相混合，探頭超聲，制備成初乳；④將步驟③中的初乳經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得本發(fā)明納米粒；⑤將步驟④中的納米粒，加入蒸餾水溶解，再加入溶劑重量2%_10%的凍干輔料支架劑，-50°C冷凍干燥，得凍干粉針。本發(fā)明選擇表阿霉素為抗癌藥物，槲皮素作為表阿霉素的MDR逆轉(zhuǎn)劑，PLGA為納米粒共聚物材料，制備同時包載表阿霉素和槲皮素的復方納米粒，達到一定的包封率和載藥量，以納米粒各種指標評價其性質(zhì)，以體外細胞試驗評價其逆轉(zhuǎn)多藥耐藥效果。采用乳化溶劑蒸發(fā)法制備EPI-QC復方納米粒，通過比較系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn)EPI-QC復方納米粒可以一定程度逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥性，并且降低其對正常細胞的毒性，為臨床提供了一種新的用藥選擇。


圖I本發(fā)明藥物制備工藝2不同穩(wěn)定劑的篩選結(jié)果圖3 PVA205不同濃度篩選結(jié)果圖4 PLGA用量篩選結(jié)果圖5有機相和水相體積比的篩選圖6 EPI-QC復方納米粒的Zeta電位圖7 K562cells(X400)圖8 K562/A02cells(X400)圖9 L02cells(X400)
具體實施方式
實施例I本發(fā)明藥物凍干制劑的制備處方表阿霉素O. 2g、槲皮素2g、PLGAlOOg, PVA2055g、甘露醇50g ;共制1000支；具體步驟為a、用乙醇配制成濃度為的lmg/ml的EPI溶液,丙酮配制濃度為10mg/ml的QC溶液，備用；b、稱取PLGA，加入二氯甲烷和丙酮溶液溶解PLGA，再加入乙醇溶液組成有機相，二氯甲烷丙酮乙醇的體積比為1 O. 4 O. 1，混勻，與2%PVA的水相混合，200W功率探頭超聲3min后置圓底燒瓶中，25°C、50r/min條件下，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓除去有機溶劑，40min后即得納米粒(EPI-QC復方納米粒)；加入蒸餾水，完全溶解，再加入溶劑重量 2%-10%的甘露醇，冷凍干燥，經(jīng)預凍(_50°C，7小時)、升華干燥、解析干燥，得凍干粉針。具體制備工藝見制備工藝見圖I。實施例2納米粒同時包載鹽酸表阿霉素和槲皮素制備工藝的研究納米粒包裹材料方面，本發(fā)明選擇了在國外已經(jīng)批準的具有良好生物相容性和降解性的聚乳酸共聚物(PLGA)，此材料在體內(nèi)能完全降解為乳酸和乙酸，再經(jīng)過三羧酸循環(huán)轉(zhuǎn)化為水和二氧化碳排出體外，無刺激、無毒。本發(fā)明選擇的模型藥物表阿霉素和槲皮素在理化性質(zhì)上差別較大，前者是水溶性藥物，后者為水不溶、脂難溶藥物，在制備工藝上有很大的困難。I儀器與試藥I. I 儀器
Sartorius BP211D .丨-萬分之一電子天、卜德國
R-201B-II旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海申順生物科技有Pl公司
JY88-II型起聲波細胞粉碎機寧波新芝科器研究所
ZNZ激光粒度測定儀英閨MarYent
Allegra X-22R超速冷凍離心機美W Beckman公-—《I
SHZ-88-1臺式水浴恒溫振蕩器江蘇太倉鹿河生化儀器廠
PHS-4C酸度計成都方舟科技開發(fā)公司I. 2 試劑PLGA 山東省醫(yī)療器械研究所PVA 可樂麗國際貿(mào)易(上海)有限公司F68 BASF甲醇和乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純2實驗方法2. I破膜溶劑的選擇文獻報道中，能夠溶解PLGA的溶劑有DMSO、乙腈、丙酮和二氯甲燒，本實驗中對以上有機溶劑進行了篩選，以獲得合適的破膜劑。2. 2包封率和載藥量納米?；鞈乙褐泻繙y定包括混懸液中藥物總含量的測定和包裹在納米粒內(nèi)部或吸附在納米粒表面的藥物。選擇合適的方法分離未包封游離藥物和納米粒，按下面公式計算藥物包封率和載藥量(公式2-1，2-2)。
權(quán)利要求
1.表阿霉素與槲皮素制備抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為O.1-10:1-100。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為1 10。
4.一種抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于它包含不同規(guī)格的單位制劑，用于同時、分別或依次給藥的表阿霉素與槲皮素，及藥學上可接受的載體制備成的制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為0. 1-10:1-100。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的表阿霉素與槲皮素的重量配比為I : 10。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任意一項所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于它是由表阿霉素、槲皮素為活性成分，制備成納米粒，再加入凍干輔料支架劑，冷凍干燥，制備成凍干粉針；所述的納米粒是含有下述重量配比的原料及輔料制備而成表阿霉素O. 1-10份、槲皮素1-90份、PLGA 10-100份、穩(wěn)定劑2_20份；其中，所述的穩(wěn)定劑為 F-68、PVA205、PVA403。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的納米粒是含有下述重量配比的原料及輔料制備而成表阿霉素O. 2份、槲皮素2份、PLGA 100份、PVA2055份。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的納米粒的粒徑小于220nm ;平均電位為-O. 33±O. 38mV。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的納米粒的平均粒徑為 141. I±2. 89nm。
11.根據(jù)權(quán)利要求7-10任意一項所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的納米粒的制備方法為a、稱取原料及輔料b、將表阿霉素溶解于95%乙醇溶液中，槲皮素溶解于丙酮溶液中；C、將PLGA與b步驟的乙醇溶液、丙酮溶液混合，加入二氯甲烷；混合后與含O. 5-5%w/ vPVA205的水相混合，其中，有機相和水相的體積比為1 2-5，探頭超聲3-10min，制備成初乳；d、將c步驟的初乳經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得本發(fā)明納米粒。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于b步驟中表阿霉素溶解于 95%乙醇溶液的濃度為O. 5-1. 5mg/ml ;槲皮素溶解于丙酮溶液的濃度為5_15mg/ml ；c步驟中二氯甲烷丙酮乙醇的體積比為1 : 0.4 : O. I ;c步驟所述的探頭超聲條件為200W 功率探頭超聲3min ；c步驟所述的水相中含2%w/w PVA205 ;有機相和水相的體積比為1 2;d步驟所述的減壓旋轉(zhuǎn)條件為25°C、50r/min條件下,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓旋轉(zhuǎn)40min。
13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的凍干輔料支架劑為甘露醇、注射用乳糖、注射用葡萄糖、右旋糖酐、蔗糖、山梨醇、氯化鈉、甘氨酸鈉、磷酸二氫鈉、氨基乙酸中的一種。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物，其特征在于所述的凍干輔料支架劑為甘露醇。
15.一種制備權(quán)利要求7-14任意一項所述的抗腫瘤聯(lián)合用藥物的方法，它包括如下步驟①稱取原料及輔料②將表阿霉素溶解于濃度為95%乙醇溶液中，槲皮素溶解于丙酮溶液中；③將PLGA與b步驟的乙醇溶液、丙酮溶液混合，加入二氯甲烷；混合后與含PVA205的水相混合，探頭超聲，制備成初乳；④將步驟③中的初乳經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得本發(fā)明納米粒；⑤將步驟④中的納米粒，加入蒸餾水溶解，再加入溶劑重量2%-10%的凍干輔料支架齊U，_50°C冷凍干燥，得凍干粉針。
全文摘要
本發(fā)明公開了表阿霉素與槲皮素制備抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。本發(fā)明還公開了一種聯(lián)合用藥物。本發(fā)明選擇表阿霉素為抗癌藥物，槲皮素作為表阿霉素的MDR逆轉(zhuǎn)劑，PLGA為納米粒共聚物材料，制備同時包載表阿霉素和槲皮素的復方納米粒，達到一定的包封率和載藥量，以納米粒各種指標評價其性質(zhì)，以體外細胞試驗評價其逆轉(zhuǎn)多藥耐藥效果。采用乳化溶劑蒸發(fā)法制備EPI-QC復方納米粒，通過比較系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn)EPI-QC復方納米粒可以一定程度逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥性，并且降低其對正常細胞的毒性。
文檔編號A61K31/352GK102697795SQ20121021037
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月1日
發(fā)明者孫毅毅, 尹佳, 林東, 鐘玲 申請人:成都醫(yī)學院