專利名稱：一種具有抑制單胺氧化酶b功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床的應(yīng)用的制作方法
—種具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)元退行性疾病是威脅人類健康的一大類疾病，包括阿爾采默茨病、帕金森病等。其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一直是神經(jīng)科學(xué)研究的重點(diǎn)。單胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO),是ー種線粒體膜復(fù)合酶,可在大腦和周圍神經(jīng)組織中催化ー些生物體產(chǎn)生的胺，氧化脫氨產(chǎn)生過氧化氫.根據(jù)底物選擇性和對(duì)抑制劑的靈敏度，單胺氧化酶被分為A和B兩種。單胺氧化酶A對(duì)底物血清素(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)和抑制劑clorgyline具有高親和性；而單胺氧化酶B則對(duì)苯こ基胺(PEA)、苯甲胺和抑制劑cbprenyl具有高親和性.單胺氧化酶B活力的變化則與帕金森氏綜合癥有夫，已證明在老年人神經(jīng)組織內(nèi)單胺氧化酶B水平升高3倍，阿爾采默茨病(AD)患者單胺氧化酶B活性比正常者高，患者腦組織內(nèi)單胺氧化酶A和單胺氧化酶B的mRNA水平也明顯升高，單胺氧化酶抑制劑是ー類由于單胺氧化酶活性過高導(dǎo)致的疾病如抑郁癥，帕金森病和老年性 癡呆等疾病具有預(yù)防和治療作用的藥物，如治療抑郁癥的苯こ肼、異唑肼、異丙肼、苯環(huán)丙胺、嗎氯貝胺、溴法羅明、尼亞拉胺、托洛沙酮、德弗羅沙酮，治療帕金森病藥司立吉蘭，治療高血壓的優(yōu)降寧，抗菌藥物呋喃唑酮、灰黃霉素、異煙肼，抗腫瘤藥物甲基芐肼，復(fù)方藥物益康寧等。這些藥物在臨床應(yīng)用多年，取得一定的療效，但對(duì)老年性神經(jīng)元退行性疾病如阿爾采默茨病、帕金森病和抑郁癥的治療還是存在許多困難，主要是這些藥物長(zhǎng)期服用均有一些較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，影響這些疾病的治療，目前急需尋找ー些副作用少的，可以長(zhǎng)期服用的保健食品，或藥品，解決這些疾病的治療難題。紅曲源于中國(guó)，至今已有一千多年的應(yīng)用歷史，是我國(guó)傳統(tǒng)的食藥雙效的發(fā)酵產(chǎn)品，古往今來一直被廣泛應(yīng)用于食品著色、釀酒、發(fā)酵食品生產(chǎn)、中藥等各個(gè)領(lǐng)域。紅曲最早的藥用記錄為元代的《日用本草》，“破血行藥勢(shì)，殺山嵐瘴氣，治打撲傷損”。紅曲味甘，性平，無毒，歸脾、胃、肝、大腸經(jīng)，明代李時(shí)珍在《本草綱目》評(píng)價(jià)它說“此乃人窺造化之巧者也”，“奇藥也”。紅曲為曲霉科真菌紫色紅曲霉Monascus purpureus Went菌絲體及孢子,經(jīng)人工培養(yǎng)使菌絲在粳米內(nèi)部生長(zhǎng)，最終整個(gè)米粒變?yōu)榧t色所得的制品。近年研究發(fā)現(xiàn)紅曲中含有紅曲色素、紅曲多糖、洛伐他汀、麥角留醇、Y-氨基丁酸、生物黃酮、皂苷、膳食纖維、氨基多糖、輔酶QlO等豐富的生理活性物質(zhì)，1998年，日本學(xué)者證實(shí)從紅曲中提取的一系列香豆素衍生物(Monankarins A-D)具有小鼠腦組織MAO B活性抑制作用。紅曲發(fā)酵液提取天然紅色素后剰余的紅曲酶菌絲體，經(jīng)檢測(cè)其中脂肪酸組成以不飽和脂肪酸為主(70% )，人體必需脂肪酸亞油酸、亞麻酸的含量占總脂肪的30%以上，可調(diào)節(jié)人體血脂平衡和減少氧化型低密度脂蛋白產(chǎn)生，有效地阻斷氧化應(yīng)激反應(yīng)和心血管疾病的誘發(fā)因素。此外，紅曲菌絲體中豐富的蛋白質(zhì)和水溶性多糖可作為能源物質(zhì)，其中的多糖類物質(zhì)在免疫調(diào)節(jié)及抗氧化、抗衰老的作用等方面都表現(xiàn)出生物活性?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿提取物能顯著抑制利血平拮抗模型小鼠腦及肝臟的ΜΑ0_Α和ΜΑ0_Β活性，淫羊藿苷可以顯著縮短小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間，并逆轉(zhuǎn)由于強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)所致的小鼠腦組織ΜΑ0_Α和MAO_B的活性升高，提示淫羊藿提取物有可能通過抑制MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝，提高腦組織神經(jīng)遞質(zhì)水平達(dá)到抗抑郁作用。鑒于淫羊藿抗抑郁樣作用，紅曲菌絲體調(diào)節(jié)血脂、抗氧化及其潛在香豆素衍生物的嫩0_8抑制作用，將兩藥組成一組具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品或藥品。用于預(yù)防可治療由于單胺氧化酶B活性升高導(dǎo)致的相關(guān)疾病，就是本發(fā)明的主要目的。發(fā)明內(nèi)容取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 X Ih)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，蒸干，制成可供臨床應(yīng)用的保健食品和藥品，這些產(chǎn)品經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，證明對(duì)單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以用來制備抑制單胺氧化酶B活性的保健食品和藥品，作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。本發(fā)明提出，可取這些天然紅曲和淫羊藿提取物按常規(guī)的藥品生產(chǎn)規(guī)范制成可供臨床應(yīng)用的產(chǎn)品形式，如片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。這些天然紅曲提取物還可做成餅干、飲料等保健食品應(yīng)用，其中這些天然紅曲提取物作為保健食品餅干的添加量為5 30% ;作為飲料的添加量為I 15%。
實(shí)施例一紅藿制劑對(duì)動(dòng)脈硬化小鼠腦組織單胺氧化酶_B活性的影響I材料和方法I. I藥物配制與試劑紅藿制劑的生產(chǎn)方法取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2Xlh)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，配成實(shí)驗(yàn)用的紅藿制劑，供實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，另按同樣工藝配置不含紅曲的淫羊藿對(duì)照制劑組和不含淫羊藿的紅曲菌絲體對(duì)照制劑組，同時(shí)選取血脂康膠囊(北京北大維信生物科技有限公司)作為陽性對(duì)照組，采用人與小鼠的體表面積換算，按成人每次服用兩粒血脂康膠囊和小鼠灌胃量為5ml/(kg d)，即取一粒血脂康膠囊溶于19. 2ml蒸餾水配制成血脂康藥液。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物油則購(gòu)買新鮮豬腸油煉制。單胺氧化酶_B測(cè)定試劑盒和組織蛋白定量測(cè)試盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。I. 2實(shí)驗(yàn)儀器貝利微粉機(jī)、BiotekSynergy 2 酶標(biāo)儀、Synthetic QuarZ Glass 酶標(biāo)板I. 3動(dòng)物分組與給藥方案SPF級(jí)KM雄性小鼠60只(購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK (粵)2008-0002，體重(35 40) g，按體重隨機(jī)分成正常組、維生素D3+動(dòng)物油模型組、血脂康組、紅曲菌絲體組、淫羊藿組、紅藿制劑組，每組10只。除正常組小鼠給予等量生理鹽水做平行對(duì)照外，其余小鼠均在實(shí)驗(yàn)第I 4天灌胃給予300，OOOIU/(kg d)維生素D3注射液，第5天開始上午灌胃給予動(dòng)物油造模，下午4個(gè)藥物組給予相應(yīng)藥液，模型組則給予等量生理鹽水，灌胃量均為5ml/(kg d)，每周根據(jù)小鼠體重變化調(diào)整灌胃量。I. 4指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)六周后處死小鼠，迅速取腦、稱重，并計(jì)算腦指數(shù)腦指數(shù)=腦重(mg)/體重(g)。按胺氧化__B測(cè)定試劑盒說明書的方法，以預(yù)冷的生理鹽水制備腦組織勻漿用于MAO_B的活性測(cè)定，以正常組MAO_B活性為100%，計(jì)算各組MAO_B相對(duì)活性。I. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以i±s表示，采用SPSS 16. O統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析(One-WayAN0VA)進(jìn)行檢驗(yàn),方差齊米用Bonferroni檢驗(yàn)；方差不齊則米用Tajnhane’ s T2檢驗(yàn)，以P
<O. 05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果2. I各組小鼠體重隨時(shí)間變化情況除正常組小鼠體重隨時(shí)間逐漸增加外，第I周模型組和4個(gè)藥物組小鼠體重急劇降低，第2周開始體重迅速増加，其中紅藿制劑組與正常組體重變化趨勢(shì)基本一致，其余四組體重變化趨勢(shì)基本一致，第5周時(shí)體重基本達(dá)到正常水平，第I 5周各時(shí)間點(diǎn)小鼠體重高低為正常組>模型組>紅曲菌絲體組>血脂康組>淫羊藿組。第6周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組小鼠體重與正常組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組和紅曲菌絲體組有超過正常組的趨勢(shì)，而血脂康組合淫羊藿組則維持在較低體重水平。2. 2各組小鼠腦指數(shù)和腦組織單胺氧化酶_B活性表I各組小鼠腦指數(shù)與腦組織ΜΑ0_Β活性比較G 土 s, η = 8)
μαο_β活性酶相對(duì)活性
組別腦指數(shù)
(U/mgprot)(%)
正常組5.96 土 1.0030,22土 2.46100
模型組6.15±0.4445.16±5.26a149.44
血脂康組7.30±0.33αδ43.31±5.16α143.32
紅曲菌絲體組6.40±0.4248.3丨±9.6丨159.86
淫羊藿組7.28±0.69αλ46.77±6.40α154.77
紅藿制劑組6.61±0.7829.65±2.46*δ98.11注與止常組比較，aP < O. 05 ;與模型組相比較，ΛΡ < O. 05 ;與血脂康組比較，*Ρ
<O. 05。如表I所示，與正常組和模型組相比，血脂康組和淫羊藿組小鼠腦指數(shù)均增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)，紅曲菌絲體組和紅藿組腦指數(shù)雖有增高的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比，模型組、血脂康組和淫羊藿組小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05);與模型組和血脂康組相比，紅藿制劑組小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < O. 05)。各組ΜΑ0_Β相對(duì)活性高低為紅曲菌絲體組>淫羊藿組>模型組>血脂康組>正常組>紅藿制劑組。3 討論結(jié)合體重和臟器指數(shù)的變化可反映動(dòng)物機(jī)體中毒效應(yīng)和判斷藥物作用靶器官的毒性綜合情況，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，除正常組小鼠體重隨時(shí)間逐漸增加外，其余小鼠第I周出現(xiàn)精神萎靡、肌張力下降、腹瀉、嗜睡、體重急劇下降等急性維生素D3中毒癥狀。隨著中毒癥狀的緩解、動(dòng)物油脂的攝入增加和藥物的干預(yù)，從第2周開始體重變化大致可分為3類紅藿制劑組體重變化趨勢(shì)與正常組基本一致，提示該復(fù)方能夠快速恢復(fù)小鼠各項(xiàng)生理功能和調(diào)節(jié)體內(nèi)脂肪平衡；模型組、紅曲菌絲體組、血脂康組、淫羊藿組小鼠體重則呈直線增加，增幅大于正常組和紅藿制劑組，；第五周開始模型組和紅曲菌絲體組體重超過正常水平，并有繼續(xù)增加的趨勢(shì)，而血脂康組和淫羊藿組則一直維持在正常水平之下，推測(cè)血脂康和淫羊藿比紅曲菌絲體在維持正常體重方面更有優(yōu)勢(shì)。組織器官萎縮及其功能逐漸衰退是衰老的重要表現(xiàn)，尤以腦組織的變化最為顯著，血脂康組和淫羊藿組小鼠雖一直維持較低體重，但腦指數(shù)較正常組和模型組高，表明血脂康和淫羊藿有延緩腦衰老的作用。就理論而言，腦組織富含不飽和脂肪酸，需要利用大量氧來產(chǎn)生能量，因此容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，加之腦組織與其他器官相比相對(duì)缺乏抗氧化酶系統(tǒng)，因此腦組織是活性氧自由基的易損部位。腦組織MA0_B異常升高會(huì)導(dǎo)致兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)氧化失活，生成大量活性氧自由基導(dǎo)致氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激是神經(jīng)退行性疾病和血管疾病的發(fā)病機(jī)理。自由基學(xué)說認(rèn)為，衰老與氧化-抗氧化的失衡有一定關(guān)系，氧化劑增多會(huì)加速生物分子 的氧化損傷，會(huì)引發(fā)神經(jīng)生化和神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂，從而導(dǎo)致腦生理功能的退化、行為異常，出現(xiàn)憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆，故MA0_B的活性可作為評(píng)價(jià)腦衰老的一個(gè)重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合運(yùn)用300，OOOIU/ (kg d)維生素D3和動(dòng)物油誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈硬化，實(shí)驗(yàn)6周后模型小鼠腦組織MA0_BS性較正常組顯著升高(P < 0. 05)，提示MA0_B參與腦血管硬化的病變過程并加快小鼠腦衰老的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的另一個(gè)重要提示，超生理劑量維生素D3引起的MA0_B活性的升高會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的氧化損傷。維生素D3與VitD受體形成受體一配體復(fù)合物之后方可發(fā)揮藥理作用，而VitD受體廣泛分布于體內(nèi)多個(gè)組織器官，動(dòng)脈硬化小鼠腦組織MA0_BS性升高的原因可能是超生理劑量的維生素D3上調(diào)細(xì)胞Vit D受體使細(xì)胞攝鈣能力，細(xì)胞鈣超載導(dǎo)致線粒體損傷；由于動(dòng)脈硬化，腦血管狹窄和微血栓形成，腦組織易發(fā)生缺血缺氧，此時(shí)細(xì)胞能量耗竭，膜泵功能降低，細(xì)胞膜內(nèi)外離子失衡導(dǎo)致細(xì)胞線粒體功能障礙，線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損必定會(huì)導(dǎo)致MA0_B活性異常變化；高脂飲食所致高膽固醇血癥是氧化應(yīng)激和DNA損傷的誘導(dǎo)因素，加之動(dòng)脈硬化時(shí)腦缺血缺氧產(chǎn)生的氧化應(yīng)激效應(yīng)，腦組織中H2O2的大量積累誘使MA0_B活性升高。已有實(shí)驗(yàn)證明血脂康膠囊具有使高血脂癥大鼠血清SOD水平升高，MDA水平降低而表現(xiàn)抗氧化作用，此外對(duì)腦缺血-再灌注的模型大鼠有腦缺血保護(hù)作用。血脂康組小鼠腦MA0_BS性高于正常組(P<0. 05)，但與模型組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明血脂康并非通過抑制腦MA0_B的活性起抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用。淫羊藿提取物(含淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷)能顯著抑制利血平拮抗模型小鼠腦及肝臟的MA0_A和MA0_B活性，提示淫羊藿提取物有可能通過抑制MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝，提高腦組織神經(jīng)遞質(zhì)水平達(dá)到抗抑郁作用。本實(shí)驗(yàn)中淫羊藿提取物對(duì)MA0_B活性的影響與血脂康組相似，無法逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈硬化小鼠MA0_B活性升高的作用。紅曲菌絲體是提取了紅色素之后的物質(zhì)，以不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和水溶性多糖為主要成分，實(shí)驗(yàn)顯示雖有升高正常小鼠的腦MA0_B活性的趨勢(shì)(P = 0. 07)，但與模型組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)紅曲菌絲體提取物中不含或僅含微量的MonankarinsA-D，故無顯著的MAO_B抑制作用。上述結(jié)果顯示，動(dòng)脈硬化小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性顯著升高，但血脂庚、淫羊藿、紅曲菌絲體單方均無法逆轉(zhuǎn)這種作用，而紅曲菌絲體+淫羊藿復(fù)方(紅藿制劑)可使模型小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性降至正常水平，與模型組和血脂康相比具有顯著差異，提示該復(fù)方具有延緩腦衰老和預(yù)防神經(jīng)退行性病變的作用，可作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。由紅曲菌絲體與淫羊藿組成的紅藿制劑對(duì)單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以用來制備抑制單胺氧化酶B活性的保健食品和藥品，作為單胺氧化酶B抑制劑用于 預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病?？扇∵@些天然紅曲和淫羊藿提取物按常規(guī)的藥品生產(chǎn)規(guī)范制成可供臨床應(yīng)用的產(chǎn)品形式，如片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。這些天然紅曲和淫羊藿提取物還可做成餅干、飲料等保健食品應(yīng)用，其中這些天然紅曲和淫羊藿提取物作為保健食品餅干的添加量為5 30% ;作為飲料的添加量為I 15%。
權(quán)利要求
1.一種由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法，其特征為該生產(chǎn)方法是取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70 %乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 Xlh)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，制成可供臨床應(yīng)用的保健食品和藥品。
3.如權(quán)利要求I所述的紅曲與淫羊藿組成的單胺氧化酶B抑制劑的生產(chǎn)方法及在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用，產(chǎn)品形式為片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。
4.如權(quán)利要求I所述的紅曲與淫羊藿組成的單胺氧化酶抑制劑B的生產(chǎn)方法及在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用，其中作為預(yù)防應(yīng)用的產(chǎn)品形式為餅干、飲料。
全文摘要
取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用乙醇浸泡，回流提取，過濾，濾渣再用乙醇浸泡24h，回流提取，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，制成可供臨床應(yīng)用的具有抑制單胺氧化酶B功能保健食品和藥品，這些產(chǎn)品經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，證明對(duì)單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。
文檔編號(hào)A61K36/296GK102813692SQ20121018321
公開日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月24日
發(fā)明者吳鐵, 謝愛媚, 崔燎, 司徒永立, 盧旱云 申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院, 湛江廣醫(yī)醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司