專利名稱：一種中藥保健品及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥保健品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥保健品及其制備方法。
背景技術(shù)：
蟬花(Paecilomyces cicadae (Mique 1. ) Samson)屬蟲生性藥用真菌，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，又名蟬蛹草、蟬茸、胡蟬、蜩等，是蟬在土中的若蟲被麥角菌科真菌的分生孢子寄生致死的帶菌尸體，其在頭部長菌絲形成的子座，形似花蕾故名蟬花。其藥用始載于南北朝劉宋時代的《雷公炮炙論》。宋朝唐慎微所著《經(jīng)史證類備急本草》言“蟬花味甘寒，無毒，主小兒天吊，驚癇，瘛瘋，夜啼，心悸”。中醫(yī)藥學(xué)家認為，蟬花具有疏散風(fēng)熱、透疹、熄風(fēng)止痙、明目退翳之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，它具有免疫調(diào)節(jié)、改善腎功能、調(diào)節(jié)脂類代謝、促進造血、改善機體營養(yǎng)狀況、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠、滋補強壯、抗疲勞抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等作用。蟬花藥用已有1000多年歷史，但天然蟬花的生長需要特定的生態(tài)環(huán)境和寄主昆蟲，資源稀少，產(chǎn)量逐年下降，一年只能采收一次，產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量受環(huán)境影響無法控制，已不能滿足人們需求。從天然蟬花中分離的蟬擬青霉菌株能在一些自然基物或組合培養(yǎng)基上發(fā)酵，固體培養(yǎng)生長出類似蟲體生的孢梗束，從而認為有可能通過人工培育途徑，解決天然蟬花資源不足的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷提供一種中藥保健品。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案一種中藥保健品，該中藥保健品中的主要藥效成分為蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物或蟬花人工培養(yǎng)物的有效成分提取物。所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物由如下方法制得1)斜面菌種制備將蟬擬青霉菌株接種到斜面培養(yǎng)基上，20 25°C下，培養(yǎng)3 10天;2)種子液的制備從斜面上刮取菌絲接種到液體培養(yǎng)基中，20 25°C下，140 160rpm,培養(yǎng)(一般為3 8天)即可制得蟬擬青霉種子液；3)將步驟2)中制得的發(fā)酵液按重量百分比為5% 10%接入滅菌后的所述固相培養(yǎng)基中，在溫度為18 23°C，濕度為60 80%的條件下，靜置封閉式培養(yǎng)35 40天，人工光源100-1501uX不間斷全光譜人工光源照射。4)采收培養(yǎng)產(chǎn)物。步驟1)所述斜面培養(yǎng)基可為PSA (馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基)、PDA (馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)或YMB固體培養(yǎng)基。步驟幻所述液體培養(yǎng)基可為PSB (馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基)或PDB (馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基)。
步驟幻所述固體培養(yǎng)基包括下列重量份的原料組分
小麥觀-35小米 4-8卟啉鐵 1-4水 60-67本發(fā)明在固體培養(yǎng)基中加入了小米與卟啉鐵，研究表明，采用該固體培養(yǎng)基獲得培養(yǎng)獲得的子實體中鐵含量增加。步驟4)所述培養(yǎng)產(chǎn)物為培養(yǎng)獲得的蟬擬青霉子實體。進一步優(yōu)選的，步驟1)所用蟬擬青霉菌株為蟬擬青霉菌株I^aecilomycescicadae (Miq. ) Samson CGMCC No. ；3453，該菌株于于2009年11月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)注冊保藏。蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453采用如下方法進行分離從云南三江源頭采集純凈無污染野生蟬花標(biāo)本，在凈化工作臺上用火焰滅菌過的移植鑷從樣本上取少量分生孢子于加入孟加拉紅的PSA平板上置22°C -25°C下培養(yǎng)120h后再挑取單菌落接入斜面培養(yǎng)基，在22°C _25°C下培養(yǎng)并經(jīng)反復(fù)純化即可得本發(fā)明所述的蝶擬青霉菌株[Paecilomyces cicadae (Miq. ) Samson]。蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453屬于半知菌亞門Deuteromycotina，絲孢綱 Hyphomycetes，束梗孢目 Stilbellales，束梗孢科 Stilbellaceae,擬青霉屬Paecilomyces0經(jīng)中國科學(xué)院生物研究所進行形態(tài)特征鑒定的結(jié)果為蟬擬青霉[Paecilomycescicadae (Miq. ) Samson]，其主要形態(tài)特征為在PDA培養(yǎng)基上25°C培養(yǎng)10天，菌落圓形，平展，初絮狀，后粉狀，白色至淺黃色，背面淺黃色，直徑5 6厘米。菌絲無色，分枝，具隔膜，寬1.2 2.5 μ m。分生孢子梗多分枝，寬3. O 5. 5 μ m，由每輪2 5個產(chǎn)孢細胞組成輪狀分枝。產(chǎn)孢細胞瓶形，基部球狀膨大，向上變細窄，4. 5 6. 5 X 2. 5 3. 5 μ m。分生孢子圓柱形，單細胞，無色，平滑，鏈生，直或彎曲，6. 5 8. 8( 11. 0) X2. 5 3. 5 μ m。蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453，具有以下微生物學(xué)特征1、培養(yǎng)學(xué)的特征(1)置分生孢子于，1 %的C6H12O6溶液作載片培養(yǎng)，4h萌動，他出芽長菌絲，從分生孢子萌發(fā)開始到次代分生孢子產(chǎn)生需要36h ；(2)菌落在馬鈴薯-蔗糖-瓊脂上，生長繁茂，溫育14d，直徑達60 72mm。菌絲體灰白到淺黃，茸毛狀。培養(yǎng)后期，因產(chǎn)生大量分生孢子，致使菌落外觀顯粉質(zhì)狀。菌落在蛋白胨-蔗糖-瓊脂上生長佳，14d直徑M 70mm，局部凸起或陷落，肉色，后期布滿分生孢子，背面深褐色；(3)液體深層發(fā)酵合成培養(yǎng)基以Richard培養(yǎng)基(KNO3 IOgjKH2PO4 5g,MgSO4. 7H202. 5g，蔗糖 50g, FeCl3 0. 03g，水 1000ml)為佳；(4)溫濕度
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①溫度此菌生長起點溫度6°C，最佳生長溫度M ，但孢梗束生長期溫度偏低，純培養(yǎng)物經(jīng)過40°C處理30h，50°C處理2. 5h后失活；②濕度在飽和濕度下，分生孢子萌發(fā)率24h為86%，96h為99%;RH 90%時，24h萌發(fā)率為0%，％h為78. 3% ；RH 76%時，7 萌發(fā)率為0%，％h為18% ；(5) PH 此菌在PH 4 12范圍均能正常生長，但PH 5 6菌絲體產(chǎn)量高，斜面培養(yǎng)菌落不易老化；(6)C、N源利用該菌能利用葡萄糖、果糖、麥芽糖、甘露糖、甘油等碳源，但不利用菊糖、山梨糖、鼠李糖和乳糖。以葡萄糖做為碳源，分生孢子產(chǎn)量顯著高于上述幾種碳源，用果糖做為碳源，菌絲體產(chǎn)量高于其他碳源。對硝基、亞硝基、氨基等9種無機N培養(yǎng)情況來看，此菌對KNO3利用好，而且利用硝基N比氨基N好，但不能利用NaNO2和硫脲。該菌對碳源要求量相當(dāng)敏感。譬如，將碳源維持在2 %的正常生長發(fā)育水平上，提高N源或降低N源對孢梗束生長和產(chǎn)孢量影響不大；但將N源固定在正常生長水平上，將碳源從2%降低到0.5%，發(fā)現(xiàn)不產(chǎn)生孢梗束，或極少有孢梗束產(chǎn)生。反之，將碳源提高10倍(20%)，則孢梗束多而不易老化，但分生孢子產(chǎn)生較晚；(7)光該菌有明顯趨光性，孢梗束生長朝向光源方向傾斜，暗培養(yǎng)菌絲生長旺，僅產(chǎn)生菌核而不形成孢梗束。自然光和燈光均能刺激孢梗束生長和分生孢子形成；(8)此菌有強烈抗輻射現(xiàn)象，平板菌落離30Wt紫外光源0. 5m處照射^lh,移殖后未見失活，亦未見生長異常；(9)固體發(fā)酵以小麥等谷物做培養(yǎng)基，接種量3% 5% (重量百分比)，接種后3 5天，可見灰白色茸毛狀菌絲體覆蓋基質(zhì)表面。20 25天形成菌核并長出與寄主體上相類似的孢梗束。孢梗束蛋黃色，直立、柱狀或掌狀分枝，20 30( 80) X3 5mm，通常30天后產(chǎn)生大量分生孢子，嗣后孢梗束逐漸枯萎倒伏。本發(fā)明的中藥保健品中除含有所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物或蟬花人工培養(yǎng)物的有效成分提取物外，還可含有藥學(xué)上可接受的載體，載體的重量百分比含量可為1-50 %，優(yōu)選為20% -38%。本領(lǐng)域枝術(shù)人員已知的載體包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蠟、脂肪、多羥基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，諸如此類，各種防腐劑、潤滑劑、分散劑、矯味劑。保濕剮、抗氧化劑、甜味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、鹽、緩沖液諸如此類也可加入其中，這些物質(zhì)根據(jù)需要用于幫助配方的穩(wěn)定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情況下產(chǎn)生可接受的口感或氣味。本發(fā)明的中藥保健品可以按照藥劑學(xué)上的通用方法制成任何常規(guī)的制劑形式，包括口服制劑。優(yōu)選的是膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、糖漿劑，最優(yōu)選為膠囊劑。本發(fā)明的中藥保健品可用于改善貧血或改善睡眠。
較佳的，所述貧血為缺鐵性貧血。本發(fā)明還進一步提供了所述中藥保健品的制備方法，所述制備方法選自如下方法中的任一種1)粉碎將所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物干燥后直接粉碎，過篩制得所述中藥保健品；2)將所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物提取有效成分后干燥獲得所述中藥保健品。所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物提取有效成分的方法可以采用常規(guī)的中藥有效成分提取方法來提取其有效成分，如采用溶劑提取。
較佳的，所述采用溶劑提取為采用有機溶劑、水或有機溶劑與水的混合液提??；所述有機溶劑可選自乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、石油醚中的一種或多種的混合物；所述有機溶劑和水的混合溶液優(yōu)選為乙醇水溶液。進一步優(yōu)選為水提。較佳地，所述水提法為將所述蟬花人工培育物加水煎煮(所用水量為蟬花人工培育物重量的6-10倍)，過濾，濃縮至適量。所述煎煮次數(shù)較佳為2 3次，每次煎煮時間為15 60分鐘。本發(fā)明的中藥保健品可具有改善睡眠、改善貧血等多重保健功效。本發(fā)明的發(fā)酵方法而獲得的人工培養(yǎng)的蟬擬青霉，生長周期短、產(chǎn)量較高，生物活性成分也大大高于野生蟬花，比野生蟬花更具有利用價值。蟲草類如冬蟲夏草等已有大量保健產(chǎn)品上市，而蟬花的保健產(chǎn)品幾乎沒有，可見人工培養(yǎng)蟬擬青霉保健產(chǎn)品的前景相當(dāng)廣闊，能充分發(fā)揮其藥用食用的價值。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1蟬擬青霉人工培養(yǎng)1)將蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453接種到PSA斜面培養(yǎng)基上，20°C下，培養(yǎng)10天；2)從斜面上刮取菌絲接種到以PDB液體為基礎(chǔ)的三角瓶液體培養(yǎng)基中，20°C下， 140rpm，培養(yǎng)3天即可制得蟬擬青霉搖瓶種子液；將蟬擬青霉搖瓶種子液按體積百分比為 10%接入滅菌后的PSB液體為種子培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，20°C下，攪拌速率140rpm，培養(yǎng)5天即可制得蟬擬青霉發(fā)酵罐種子液；3)將制得的發(fā)酵罐種子液按重量百分比為5%接入滅菌后的固相培養(yǎng)基中，在溫度為18°C，濕度為60%的條件下，固體發(fā)酵時，增加人工散射光源(連續(xù)增加光照強度 150LUX)，并定時通風(fēng)排氣(間隔8小時進行通風(fēng)排氣，每次送風(fēng)、排氣30分鐘)靜置封閉式培養(yǎng)40天后采收子實體獲得培養(yǎng)物。步驟幻所用的固體培養(yǎng)基配比為小麥35重量份，小米4重量份，卟啉鐵1重量份，水為60重量份；其制備方法為將小麥、小米煮熟，將卟啉鐵與煮熟小麥、小米按照比例混合均勻。實施例2蟬擬青霉人工培養(yǎng)1)將蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453接種到PSA斜面培養(yǎng)基上，22°C下，培養(yǎng)9天；2)從斜面上刮取菌絲接種到以PDB液體為基礎(chǔ)的三角瓶液體培養(yǎng)基中，22°C下， 140rpm，培養(yǎng)3天即可制得蟬擬青霉搖瓶種子液；將蟬擬青霉搖瓶種子液按體積百分比為 10%接入滅菌后的PSB液體為種子培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，22°C下，攪拌速率150rpm，培養(yǎng)4天即可制得蟬擬青霉發(fā)酵罐種子液；3)將制得的發(fā)酵罐種子液按重量百分比為5%接入滅菌后的固相培養(yǎng)基中，在溫度為21°C，濕度為70%的條件下，固體發(fā)酵時，增加人工散射光源(連續(xù)增加光照強度 150Lux)，并定時通風(fēng)排氣(間隔8小時進行通風(fēng)排氣，每次送風(fēng)、排氣40分鐘)靜置封閉式培養(yǎng)37天后采收子實體獲得培養(yǎng)物。步驟3)所用的固體培養(yǎng)基同實施例1.
實施例3蟬擬青霉人工培養(yǎng)1)將蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453接種到PSA斜面培養(yǎng)基上，25°C下，培養(yǎng)8天；2)從斜面上刮取菌絲接種到以PDB液體為基礎(chǔ)的三角瓶液體培養(yǎng)基中，25°C下， 140rpm，培養(yǎng)3天即可制得蟬擬青霉搖瓶種子液；將蟬擬青霉搖瓶種子液按體積百分比為 10%接入滅菌后的PSB液體為種子培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，25°C下，攪拌速率140rpm，培養(yǎng)2天即可制得蟬擬青霉發(fā)酵罐種子液；3)將制得的發(fā)酵罐種子液按重量百分比為5%接入滅菌后的固相培養(yǎng)基中，在溫度為23°C，濕度為80%的條件下，固體發(fā)酵時，增加人工散射光源(連續(xù)增加光照強度 150LUX)，并定時通風(fēng)排氣(間隔8小時進行通風(fēng)排氣，每次送風(fēng)、排氣40分鐘)靜置封閉式培養(yǎng)35天后采收子實體獲得培養(yǎng)物。步驟3)所用的固體培養(yǎng)基同實施例1.實施例4蟬擬青霉人工培養(yǎng)產(chǎn)物的有效成分檢測人工培養(yǎng)蟬擬青霉，除了步驟幻所用固體培養(yǎng)基配方分別采用下列配方外，其余步驟均同實施例3。比較例1 小麥35重量份，小米4重量份，卟啉鐵1重量份，水為60重量份比較例2 小麥32重量份，小米6重量份，卟啉鐵2重量份，水為60重量份比較例3 小麥28重量份，小米8重量份，卟啉鐵4重量份，水為66重量份對比例小麥35重兩份，水65重量份將收獲的子實體干燥后分別依照GB/T 5009. 90-2003食品中鐵、鎂、錳的測定方法檢測其鐵含量。結(jié)果為比較例1 鐵含量190mg/100g比較例2 鐵含量227mg/100g比較例3 鐵含量3iang/100g對比例鐵含量3. 3mg/100g結(jié)果顯示，本發(fā)明的制備方法獲得的蟬擬青霉培養(yǎng)物鐵含量高，利于補血。實施例5中藥保健品的制備之一將采收的新鮮蟬擬青霉培養(yǎng)物，70°C干燥10h，通過粉碎機粉碎，過100目篩網(wǎng)，輻照滅菌，取粉末500g，裝入膠囊，制成1000粒，即得。 實施例6中藥保健品的制備之二將采收的新鮮蟬擬青霉培養(yǎng)物加8倍蒸餾水共煎煮2次，每次0. 5小時，煎液采用真空抽濾，除去雜質(zhì)，得濾液，減壓薄膜濃縮至適量，噴霧干燥即得干燥粉。實施例7中藥保健品急性經(jīng)口毒性試驗1.樣品采用實施例3制備的蟬擬青霉培養(yǎng)物利用實施例5的方法獲得保健樣品2.樣品性狀散裝固體3.受試樣品配制稱取樣品lOOOOmg，加蒸餾水至40mL，充分混勻后作為受試樣
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BFI ο4.實驗動物昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重19-22克，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供。生產(chǎn)許可證號SCXK (滬)2007-0005。飼養(yǎng)室溫度20-25 °C，相對濕度40-70%。實驗動物使用許可證號SYXK (滬)2007-0008。小鼠飼料有蘇州雙獅實驗動物飼料科技服務(wù)有限公司提供，登記證號蘇E飼生字0002)006。5.儀器設(shè)備電子稱 ACS-3A 90401582，天平 BP310S-910069096.實驗法法6. 1動物禁食(不禁水)16小時后，按體重要求選用雌、雄小鼠各10只，分放于兩鼠籠內(nèi)，同性別小鼠之間體重之差不超過3g。6. 2將受試樣品采用最大耐受劑量法對實驗動物染毒，小鼠逐只稱重，灌胃容量按每次0. 4mL/20g體重計，在M小時內(nèi)二次對小鼠灌胃，灌胃間隔時間為6小時。6. 3染毒后，觀察動物的替班狀態(tài)、體重變化、中毒體征和死亡情況等，觀察期為一周。6. 4實驗?zāi)┰俅螌游锓Q重。對死亡動物及到期處死動物進行尸體解剖，肉眼觀察大體病理改變情況。6. 5實驗全過程及觀察內(nèi)容均做詳細記錄，按最大耐受劑量法實驗結(jié)果求得小鼠急性經(jīng)口 MTD。7.結(jié)果表雌雄小鼠急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種中藥保健品，所述中藥保健品中的主要藥效成分為蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物或蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物的有效成分提取物。
2.如權(quán)利要求1所述中藥保健品，其特征在于，所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物由如下方法制得1)斜面菌種制備將蟬擬青霉菌株接種到斜面培養(yǎng)基上，20-25°C下，培養(yǎng)3-10天；2)種子液的制備從斜面上刮取菌絲接種到液體培養(yǎng)基中，20-25°C下，140-160rpm， 培養(yǎng)制得蟬擬青霉種子液；3)將步驟幻中制得的蟬擬青霉種子液按重量百分比為5%-10%接入滅菌后的固相培養(yǎng)基中，在溫度為18-23°C，濕度為60-80%的條件下，靜置封閉式培養(yǎng)35-40天，培養(yǎng)期間采用光照強度為100-1501UX的不間斷全光譜人工光源照射；4)采收培養(yǎng)產(chǎn)物。
3.如權(quán)利要求2所述中藥保健品，其特征在于，步驟1)所述斜面培養(yǎng)基為PSA、PDA或 YMB固體培養(yǎng)基；步驟2、所述液體培養(yǎng)基為PSB或PDB液體培養(yǎng)基。
4.如權(quán)利要求2所述中藥保健品，其特征在于，步驟1)所用蟬擬青霉菌株為蟬擬青霉菌株 Paecilomyces cicadae (Miq.) Samson CGMCC No. 3453。
5.如權(quán)利要求2所述中藥保健品，其特征在于，步驟；3)所述固體培養(yǎng)基包括下列重量份的原料組分小麥觀-35 小米 4-8 卟啉鐵 1-4 水 60-67。
6.如權(quán)利要求2所述中藥保健品，其特征在于，步驟4)所述培養(yǎng)產(chǎn)物為蟬擬青霉子實體。
7.如權(quán)利要求1-6任一所述中藥保健品，其特征在于，所述中藥保健品中還含有重量百分比含量為1-50%的藥學(xué)上可接受的載體。
8.如權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述中藥保健品的制備方法，所述制備方法選自如下方法中的任一種1)將所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物干燥后直接粉碎，過篩制得所述中藥保健品；2)將所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物提取有效成分后干燥獲得所述中藥保健品。
9.如權(quán)利要求8所述中藥保健品的制備方法，其特征在于，所述方法幻中蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物提取有效成分的方法為采用有機溶劑、水或有機溶劑與水的混合液提取。
10.如權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述中藥保健品在制備具有改善貧血或改善睡眠功效的保健品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥保健品及其制備方法和應(yīng)用，該中藥保健品以人工培育的蟬花為主要原料制備而成。本發(fā)明提供的中藥保健品具有改善貧血和改善睡眠功能。動物實驗表明，本發(fā)明提供的中藥保健品安全有效、無明顯毒副作用。
文檔編號A61K36/066GK102552335SQ20121002341
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月22日
發(fā)明者孫長勝, 王玉芹, 蓋悅, 譚悠久, 陳祝安 申請人:上海泛亞生命科技有限公司