專利名稱：用于治療性免疫接種的含共聚物1的滴眼用疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，涉及一種滴眼用疫苗，該疫苗含有作為活性劑的無(wú)規(guī)共聚物，尤其是共聚物I (Copolymer I)、共聚物I相關(guān)肽或共聚物I相關(guān)多肽，本發(fā)明還涉及治療性免疫接種哺乳動(dòng)物的方法，尤其適用于在損傷、疾病、失調(diào)或狀況后，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)，或者適用于保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷
氨酸鹽毒性?？s寫B(tài)SA :牛血清白蛋白；CFA :完全弗氏佐劑；CNS :中樞神經(jīng)系統(tǒng)；Cop I :共聚物1，即glatiramer acetate ；FCS :胎牛血清；IFA :不完全弗氏佐劑；Ι0Ρ :眼內(nèi)壓；MBP :髓鞘堿性蛋白；NS :神經(jīng)系統(tǒng)；PBS :磷酸緩沖鹽溶液；PNS :外周神經(jīng)系統(tǒng)；RGC :視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
背景技術(shù)：
神經(jīng)系統(tǒng)包括中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)由腦和脊髓組成；外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)則包括其它所有的神經(jīng)元件，即腦和脊髓外部的神經(jīng)和神經(jīng)節(jié)。對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷可能是創(chuàng)傷性損傷造成的，諸如穿透性創(chuàng)傷或鈍傷，或者是由包括，但不限于阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓病、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病、青光眼、老年性癡呆和局部缺血的疾病、失調(diào)或狀況造成的。神經(jīng)變性疾病通常與CNS中正在進(jìn)行的神經(jīng)元損失有關(guān)。在原發(fā)性危險(xiǎn)因子導(dǎo)致的神經(jīng)元喪失之后，另外的(“繼發(fā)性”)神經(jīng)元喪失是由超過(guò)生理濃度的自身化合物，諸如谷氨酸鹽、氧化氮或反應(yīng)性氧類介導(dǎo)的。這些化合物參與了多種類型的神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)和急性CNS損傷。應(yīng)當(dāng)指出的是，神經(jīng)變性性疾病共有的破壞性組分也已被發(fā)現(xiàn)存在于諸如多發(fā)性硬化的自身免疫病中；在該疾病中，CNS中的髓鞘損傷伴隨著繼發(fā)的神經(jīng)元喪失。青光眼是在老年人群中具有高發(fā)病率(約為1% )的慢性進(jìn)行性視神經(jīng)病。直到最近，該病均與高的眼內(nèi)壓(IOP)有關(guān)，因此，對(duì)該病的研究曾集中于通過(guò)利用抗高血壓藥物使該病的進(jìn)展減緩。但隨時(shí)間而逐漸明顯的是，青光眼是一個(gè)疾病家族，并不都與壓力有關(guān)。但日漸清楚的是即使該病與壓力有關(guān)，后者可能被降低至正常，甚至低于正常值，而變性仍然可能繼續(xù)。正在臨床醫(yī)生之間進(jìn)行的討論探究了在具有正常IOP值的青光眼患者中仍然存在的連續(xù)變性是否反映了除壓力之外的其它危險(xiǎn)因子的存在，或者反映了殘留神經(jīng)元和纖維的易損性的提高，以及因此對(duì)降低Ι0Ρ，使其低于正常值的需要。我們已于1996年提出，在青光眼的情況中，視力進(jìn)行性喪失的潛在機(jī)制與在神經(jīng)系統(tǒng)的任何急性損傷中發(fā)生的機(jī)制，或在CNS的任何神經(jīng)變性性疾病中發(fā)生的機(jī)制類似 (Schwartz et al.，1996)。根據(jù)該提議，除了原發(fā)性危險(xiǎn)因子，例如壓力之外，還存在進(jìn)行
4中的變性過(guò)程，該變性過(guò)程可影響那些避過(guò)原發(fā)性事件的神經(jīng)元(Schwartz et al. , 1996 ； Schwartz and Yoles, 2000a and 2000b)。該過(guò)程受因原發(fā)性事件而出現(xiàn)的化合物介導(dǎo),或者由原發(fā)性危險(xiǎn)因子所造成的缺陷介導(dǎo)，這些情況均可造成對(duì)鄰近原發(fā)性損傷的神經(jīng)元而言的敵對(duì)環(huán)境。最近，我們進(jìn)一步觀察到，在由機(jī)械(神經(jīng)細(xì)胞軸索顯微外科術(shù))或生化(谷氨酸鹽、氧化應(yīng)激)損傷造成的神經(jīng)變性條件下，免疫系統(tǒng)發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。因此，業(yè)已發(fā)現(xiàn)可識(shí)別神經(jīng)系統(tǒng)(NS)抗原的活化T細(xì)胞可促進(jìn)神經(jīng)再生或賦予神經(jīng)保護(hù)性，如PCT公開號(hào) W099/60021中所述。更具體而言，對(duì)髓鞘堿性蛋白(MBP)具有反應(yīng)性的T細(xì)胞被證實(shí)在視神經(jīng)部分?jǐn)D壓損傷(Moalem et al. , 1999)和脊髓損傷(Hauben et al. , 2000)的大鼠模型中具有神經(jīng)保護(hù)性。直至最近，人們?nèi)匀徽J(rèn)為免疫系統(tǒng)沒(méi)有讓免疫細(xì)胞參與神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)。相當(dāng)令人驚訝的發(fā)現(xiàn)是，NS-特異性活化T細(xì)胞可被用于促進(jìn)神經(jīng)再生或保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)組織，使其避免可能在CNS或PNS的損傷或疾病導(dǎo)致的損害之后發(fā)生的繼發(fā)性變性。本發(fā)明的發(fā)明者進(jìn)一步觀察到，CNS中的應(yīng)激狀況利用了適應(yīng)性免疫反應(yīng)以對(duì)抗該應(yīng)激，且該反應(yīng)受遺傳控制。因此，在視神經(jīng)受到擠壓損傷或玻璃體內(nèi)注射毒性劑量的谷氨酸鹽之后，對(duì)成年小鼠或大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的存活率的觀察顯示，對(duì)CNS自身免疫病具有抗性的品系的RGCs存活率比易感性品系的RGCs存活率高2倍。該差異被發(fā)現(xiàn)可歸因于有利的自身免疫T細(xì)胞反應(yīng)，該反應(yīng)是在抗性品系，而不是易感性品系中，于 CNS損傷之后自然地被誘發(fā)的。因此，只要直接針對(duì)自身的T細(xì)胞反應(yīng)被良好調(diào)節(jié)，則其被誘發(fā)時(shí)，這種損傷導(dǎo)致的神經(jīng)元存活率較高。換言之，業(yè)已證實(shí)，誘發(fā)保護(hù)性自身免疫反應(yīng)以對(duì)抗上述刺激性條件，可使動(dòng)物免于損傷后果。業(yè)已進(jìn)一步觀察到，在調(diào)節(jié)這種反應(yīng)的能力受損的動(dòng)物體內(nèi)，或在缺乏成熟T細(xì)胞(出生時(shí)接受過(guò)胸腺切除術(shù)導(dǎo)致的結(jié)果)的動(dòng)物體內(nèi)，對(duì)抗該刺激性條件的能力被降低了。因此，與具有用于裝配保護(hù)性自身免疫T細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的有效機(jī)制的動(dòng)物相比，上述動(dòng)物體內(nèi)CNS損傷后的神經(jīng)元存活率顯著地較低 (Kipnis et al. ,2001) 我們實(shí)驗(yàn)室更近的研究顯示自身免疫性神經(jīng)保護(hù)是當(dāng)CNS損傷發(fā)生時(shí)被喚醒的機(jī)體生理防御機(jī)制(Kipnis et al. ,2001 ;Yoles et al.，2001)。我們證實(shí)，各品系針對(duì)升高的IOP的抗性之間存在差異(Bakalash et al.，2002)，且該差異與利用具有有利后果的自身免疫反應(yīng)的能力有關(guān)聯(lián)。我們進(jìn)一步證實(shí)，在缺乏成熟T細(xì)胞的情況下(經(jīng)過(guò)新生期胸腺切除術(shù))，對(duì)IOP升高的相對(duì)抗性則喪失了其有利的特性，反之亦然，當(dāng)將抗性品系來(lái)源的脾細(xì)胞被動(dòng)轉(zhuǎn)移至MHC-匹配的易感性品系中時(shí)，神經(jīng)保護(hù)作用便被恢復(fù)了(Bakalash et al.，2002)。我們的研究小組進(jìn)一步證實(shí)，在諸如部分視神經(jīng)擠壓傷或脊髓挫傷的急性損傷中，采用T細(xì)胞被動(dòng)接種也是有效的方法(Kipnis et al. ,2001 ；Moalem et al.，1999)。對(duì)加強(qiáng)這種抗自身反應(yīng)，作為使神經(jīng)元避免損傷條件的方法的嘗試已表明接種抗原應(yīng)來(lái)源于損傷部位中存在的化合物。因此，利用眼內(nèi)最富含的肽，即光感受器間結(jié)合蛋白 (IRBP)來(lái)源的自身抗原(Bakalash et al. , 2002 ；Mizrahi et al.，2002)，可在易感性和抗性兩種品系內(nèi)產(chǎn)生RGC保護(hù)。與之相反，利用與視神經(jīng)相連的髓鞘中存在的化合物來(lái)源的肽，對(duì)遭受IOP升高損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞而言沒(méi)有益處。為了針對(duì)青光眼設(shè)計(jì)一種可加強(qiáng)免疫系統(tǒng)，且無(wú)誘發(fā)自身免疫病的危險(xiǎn)的接種疫苗方法，我們的選擇集中在共聚物I上，并已證實(shí)共聚物I與佐劑一起施用時(shí)對(duì)青光眼具有神經(jīng)保護(hù)性(Bakalash et al. , 2002 ；Schori et al. , 2001 ；Schwartz and Kipnis, 2002 ； WO 01/52878 ；W0 01/93893)。Cop-I可與廣泛多種自身反應(yīng)性T細(xì)胞發(fā)生免疫學(xué)交叉反應(yīng)。 相應(yīng)地，其活性是由于改變了的肽配體，即已被改變并因而喪失致病性的自身肽的活性(W0 02/055010 ；Kipnis and Schwartz,2002)。共聚物I也被稱為Cop I或glatiramer acetate，是由平均摩爾分?jǐn)?shù)分別為 O. 141,0. 338,0. 427 和 O. 095 的四種氨基酸L_Glu、L-Lys, L-Ala 和 L-Tyr 組成的非致病性合成無(wú)規(guī)共聚物，其平均分子量為4，700-11，000。glatiramer acetate的商標(biāo)名為 COPAXONE (Teva Pharmaceutical Industries Ltd. ,Petach Tikva, Israel 的商標(biāo))， 是目前在許多國(guó)家被批準(zhǔn)用于治療多發(fā)性硬化的藥物。該藥的耐受性極好，僅具有較少的不利反應(yīng)。雖然US 6，214，791公開了通過(guò)攝入或吸入施用Copl進(jìn)行治療的方法，但對(duì)多發(fā)性硬化患者施用Copl的唯一途徑仍然是每日皮下注射。最近，業(yè)已發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物模型中，Copl對(duì)其它若干種失調(diào)發(fā)揮了有利的作用。因此， 在骨髓移植的情況中，Copl可抑制移植物抗宿主疾病(GVHD)中顯著的免疫排斥(Schlegel et al.，1996 ；US5, 858，964)，也可抑制實(shí)體器官移植情況中出現(xiàn)的移植物排斥(Aharoni et al. , 2001) 0 WO 00/05250已公開了用于治療自身免疫病的Copl和Copl-相關(guān)共聚物和肽。本發(fā)明申請(qǐng)人的WO 01/52878和WO 01/93893公開的是Cop l、Cop_l相關(guān)肽和多肽和由其活化的T細(xì)胞可使CNS細(xì)胞避免谷氨酸鹽毒性，并預(yù)防或抑制神經(jīng)元變性或促進(jìn) CNS和PNS中的神經(jīng)再生。W001/93828公開的是Copl可被用于治療CNS失調(diào)。這些出版物均未公開過(guò)通過(guò)施用含Copl的滴眼劑實(shí)現(xiàn)的免疫接種。已有報(bào)導(dǎo)描述了可作為滴眼劑施用，并含有活病毒或編碼傳染物來(lái)源的免疫原性蛋白的重組DNA的家禽疫苗，用于預(yù)防禽類動(dòng)物中的病毒病(Mukibi-Muka et al.，1984 ; Sharma,1999 ；Russell and Mackie,2001)。在本章節(jié)或本申請(qǐng)書其它任意部分中，任何參考文獻(xiàn)的引用或鑒定均不應(yīng)被解讀為認(rèn)同這些參考文獻(xiàn)是在本發(fā)明之前出現(xiàn)的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
目前，根據(jù)本發(fā)明，業(yè)已發(fā)現(xiàn)，共聚物I被作為滴眼用疫苗施用時(shí)，可在CNS或PNS 中誘發(fā)神經(jīng)保護(hù)作用所需的系統(tǒng)性T細(xì)胞依賴型免疫反應(yīng)，例如保護(hù)了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 (RGCs)，使其避免了因急性或慢性眼內(nèi)壓(IOP)升高導(dǎo)致的死亡。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種滴眼用疫苗，該疫苗含有選自共聚物I、共聚物 I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑。另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑在生產(chǎn)滴眼用疫苗方面的用途。本發(fā)明的滴眼用疫苗尤其有助于對(duì)哺乳動(dòng)物，尤其是人類的治療性免疫接種，以實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)，治療因中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中的損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性，預(yù)防或抑制可能在CNS中的原發(fā)性損傷后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性，促進(jìn)CNS或PNS中在損傷或疾病、失調(diào)或狀況后的神經(jīng)再生，或保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性。
在一個(gè)進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供了一種治療性免疫接種的方法，用于治療因中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中的損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性，預(yù)防或抑制可能在CNS中的原發(fā)性損傷后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性，促進(jìn)CNS或 PNS中在損傷或疾病、失調(diào)或狀況后的神經(jīng)再生，或保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性， 該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗使需要該治療的個(gè)體免疫，該疫苗所含活性劑的量可有效治療、預(yù)防或抑制因該個(gè)體體內(nèi)的上述損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性。本發(fā)明滴眼用疫苗中的活性劑可無(wú)需連同任何佐劑一起被施用，例如在鹽溶液或磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS)中，或者可連同可溶性佐劑，諸如例如IL-2、IL-12、GM-CSF或 IFN-Y等的細(xì)胞因子一起被施用。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明滴眼用疫苗中的活性劑為共聚物I。


圖I所示為在慢性模型中保護(hù)RGCs使其避免IOP-誘導(dǎo)的死亡方面具有長(zhǎng)期作用的共聚物I (Cop-I)。圖2A-2B所示為在慢性模型中，采用500μ gCop-Ι，而無(wú)需連同佐劑(2A)在首次激光切除后第7天(2B)進(jìn)行的免疫接種保護(hù)了 RGCs，使其避免了 IOP-誘導(dǎo)的RGC死亡。圖3A-3B所示為Cop-I的作用為T細(xì)胞依賴型。采用Cop-I對(duì)未經(jīng)胸腺切除術(shù)的動(dòng)物體內(nèi)升高的IOP的治療比在經(jīng)過(guò)胸腺切除術(shù)的動(dòng)物體內(nèi)實(shí)施的相同治療更有效(3A)， 也比青光眼藥物溴莫尼定更有效(3B)。圖4A-4B所示為在慢性模型中，應(yīng)用在滴眼劑中的Cop-I可保護(hù)RGC，使其避免 IOP-誘導(dǎo)的RGC死亡。在慢性IOP升高模型中，IOP升高后立即(4A)或7天(4B)，以5分鐘為間隔，施用5滴Cop-Ι,每次的施用量為lmg。3周后切除視網(wǎng)膜。圖5A-5B所示為當(dāng)以皮下注射(5A)或作為滴眼劑(5B)施用時(shí)，Cop-I可保護(hù) RGCs，使其避免急性短暫IOP升高。
具體實(shí)施例方式此處所用術(shù)語(yǔ)“共聚物l”、“Copl”、“Cop_l” 和 “glatiramer acetate” 均可互換應(yīng)用。對(duì)本發(fā)明而言，“Copl或Cop I相關(guān)肽或多肽”意指包括了任何肽或多肽，包括與髓鞘堿性蛋白(MBP)功能性交叉反應(yīng)，并可在抗原呈遞中與II類MHC上的MBP競(jìng)爭(zhēng)的無(wú)規(guī)共聚物。作為活性劑應(yīng)用于本發(fā)明滴眼用疫苗中的共聚物可以是無(wú)規(guī)共聚物，該共聚物含有合適量的帶正電荷的氨基酸，諸如賴氨酸(K)或精氨酸(R)，并組合帶負(fù)電荷的氨基酸 (優(yōu)選較少量)，諸如谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)，任選地組合含有可充當(dāng)填充物的無(wú)電荷的中性氨基酸，諸如丙氨酸(A)或甘氨酸(G)，并任選地含有可賦予該共聚物免疫原性特性的氨基酸，諸如芳族氨基酸，例如酪氨酸(Y)或色氨酸(W)。應(yīng)用于本發(fā)明的共聚物可由L-或D-氨基酸或這兩種氨基酸的混合組成。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，L-氨基酸存在于大部分天然蛋白質(zhì)中。而D-氨基酸可通過(guò)商業(yè)渠道獲得，并可替代被用于制備本發(fā)明所用共聚物的一部分或全部氨基酸。本發(fā)明設(shè)想了利用同時(shí)含有D-和L-氨基酸的共聚物，以及基本上由L-或D-氨基酸組成的共聚物。在一種實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的活性劑包括至少一種由3或4種氨基酸構(gòu)成的無(wú)規(guī)共聚物，該共聚物含有選自下列4組中每一組的各I個(gè)氨基酸(a)賴氨酸(K)和精氨酸(R) ; (b)谷氨酸(E)和天冬氨酸(D) ； (c)丙氨酸(A)和甘氨酸(G);和(d)酪氨酸(Y) 和色氨酸(W)。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述共聚物含有酪氨酸、谷氨酸、丙氨酸和賴氨酸的氨基酸組合，在此文中被命名為聚-YEAK，總體上帶凈正電荷，最優(yōu)選地為共聚物1，含有摩爾比如下的氨基酸大約O. 14的谷氨酸、大約O. 43的丙氨酸、大約O. 10的酪氨酸和大約 O. 34的賴氨酸。該共聚物可能是低分子量或高分子量共聚物，是長(zhǎng)度為大約15到大約100 個(gè)氨基酸，優(yōu)選地為大約40到大約80個(gè)氨基酸的多肽。該共聚物的平均分子量為大約 2，000-40，OOODa,優(yōu)選大約2，000-13，OOODa,更優(yōu)選的是大約4，700-13，OOODa,最優(yōu)選的是大約5，000-9，OOODa，和最優(yōu)選的大約6，000-8，OOODa0該優(yōu)選共聚物，即Copl最優(yōu)選的是乙酸鹽形式,其通用名名為glatiramer acetate。美國(guó)專利No. 5, 800, 808描述了優(yōu)選的分子量范圍和制備優(yōu)選形式的Copl的方法，其全部?jī)?nèi)容被完整引入此處作為參考，就象被完全公開在此文中一樣。應(yīng)當(dāng)清楚的是，該實(shí)施方案是僅通過(guò)舉例提供的，可改變所述活性劑的組分和這些組分的相對(duì)比例，從而獲得與Copl不同的聚-YEAK共聚物。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明滴眼用疫苗的活性劑為Cop I相關(guān)多肽，是含有4種不同氨基酸的無(wú)規(guī)共聚物，這4種氨基酸分別選自上述(a)-(d)組中的不同組，但不包括 Cop I。當(dāng)對(duì)所述共聚物的氨基酸組成進(jìn)行下述一種或多種取代時(shí)，預(yù)期將保留共聚物I表現(xiàn)的活性天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)、甘氨酸(G)取代丙氨酸(A)、精氨酸(R)取代賴氨酸⑷和色氨酸(W)取代酪氨酸⑴。因此，在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的Cop I相關(guān)多肽可能包括WO 00/05250公開的任意一種共聚物，其全部?jī)?nèi)容均被完整引入此處作為參考，就象被完全公開在此文中一樣，且其它合成氨基酸共聚物，諸如Fridkis-Hareli等人(2002)所描述的可作為治療多發(fā)性硬化的候選藥物，并由4種氨基酸組成的無(wú)規(guī)共聚物，即含有苯丙氨酸、谷氨酸、丙氨酸和賴氨酸(聚-FEAK)，或酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸和賴氨酸(聚-YFAK)的共聚物(14-、 35-和50-聚體)，及其它任何被發(fā)現(xiàn)可被認(rèn)為是與Copl類似的通用抗原的類似共聚物。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的Copl相關(guān)多肽是含有3種不同氨基酸的組合的共聚物，這3種氨基酸分別選自(a)-(d)中3組氨基酸中的不同組。這些共聚物在此文中指三元共聚物。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該三元共聚物中各氨基酸的摩爾份數(shù)將是對(duì)共聚物 I而言優(yōu)選的摩爾份數(shù)。在一種實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的三元共聚物含有酪氨酸(Y)、丙氨酸(A)和賴氨酸(K)，下文將其稱為聚-YAK。這種三元共聚物中各氨基酸的平均摩爾份數(shù)可以改變。例如，酪氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 005-0. 250 ;丙氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 3-0. 6 ;賴氨酸的摩爾份數(shù)則可為大約O. 1-0. 5，但酪氨酸、丙氨酸和賴氨酸的摩爾比優(yōu)選地為大約O. I 到大約O. 54到大約O. 35。聚-YAK的平均分子量為大約2，000-40，OOODa,優(yōu)選的是大約 3，000-35, OOODa,更優(yōu)選的是大約5，000-25, OOODa0以精氨酸(R)取代賴氨酸(K)、甘氨酸(G)取代丙氨酸(A)和/或色氨酸(W)取代酪氨酸(Y)是可能的。在另一種實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的三元共聚物含有酪氨酸(Y)、谷氨酸(E)和賴氨酸(K)，下文將其稱為聚-YEK。這種三元共聚物中各氨基酸的平均摩爾份數(shù)可以改變谷氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 005-0. 300 ;酪氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 005-0. 250， 賴氨酸的摩爾份數(shù)則可為大約O. 3-0. 7，但谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸的摩爾比優(yōu)選地為大約 O. 26到大約O. 16到大約O. 58。聚-YEK的平均分子量為大約2，000-40, OOODa，優(yōu)選地為大約3，000-35, OOODa,更優(yōu)選地為大約5，000-25, OOODa0以精氨酸(R)取代賴氨酸(K)、天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)和/或色氨酸(W)取代酪氨酸(Y)是可能的。在一種進(jìn)一步的實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的三元共聚物含有賴氨酸(K)、谷氨酸(E)和丙氨酸(A)，下文將其稱為聚-ΚΕΑ。這種三元共聚物中各氨基酸的平均摩爾份數(shù)也可改變。例如，谷氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 005-0. 300 ;丙氨酸的摩爾份數(shù)可為大約 O. 005-0. 600，賴氨酸的摩爾份數(shù)則可為大約O. 2-0. 7，但谷氨酸、丙氨酸和賴氨酸的摩爾比優(yōu)選地為大約O. 15到大約O. 48到大約O. 36。YEK的平均分子量為大約2，000-40，OOODa, 優(yōu)選地為大約3，000-35, OOODa,更優(yōu)選地為大約5，000-25, OOODa0以精氨酸(R)取代賴氨酸(K)、天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)和/或甘氨酸(G)取代丙氨酸(A)是可能的。在另一種實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的三元共聚物含有酪氨酸(Y)、谷氨酸(E) 和丙氨酸(A)，下文將其稱為聚-YEA。這種三元共聚物中各氨基酸的平均摩爾份數(shù)也可改變。例如，酪氨酸的摩爾份數(shù)可為大約O. 005-0. 250，谷氨酸的摩爾份數(shù)可為大約 O. 005-0. 300，丙氨酸的摩爾份數(shù)則可為大約O. 005-0. 800，但谷氨酸、丙氨酸和酪氨酸的摩爾比率優(yōu)選地為大約O. 21到大約O. 65到大約O. 14。聚-YEA的平均分子量為大約 2，000-40, OOODa,優(yōu)選地為大約3，000-35, OOODa,更優(yōu)選地為大約5，000-25, OOODa0以色氨酸(W)取代酪氨酸(Y)、天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)和/或甘氨酸(G)取代丙氨酸(A) 是可能的。上述三元共聚物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員可利用的任何方法制備，例如上文提到的 WO 01/52878和WO 01/93893所描述的方法。由于Copl與MS-相關(guān)HLA-DR分子的結(jié)合基序是已知的，因而可以方便地制備固定序列的多肽，并如Fridkis-Hareli et al.，(1999)所述，測(cè)定其與HLA-DR分子的肽結(jié)合溝的結(jié)合。這種肽的實(shí)例是W0005249公開的那些肽，其全部?jī)?nèi)容均被完整引入此文作為參考，就象被完全公開在此文中一樣。在該申請(qǐng)書特定公開的肽中，有32種如下表I所示 (SEQ ID N0:l-N0:32)。這些肽均為15-聚體肽，含有4種氨基酸，即丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪氨酸(肽2、3、5-32)或僅含3種氨基酸，即丙氨酸、賴氨酸和酪氨酸(肽1、4)。這些肽及其它類似的肽均應(yīng)被認(rèn)為具有與Copl類似的活性，并被包括在本發(fā)明的Cop I相關(guān)肽或多肽的定義范圍內(nèi)。表ISEQ ID NO.肽序列IAAAYAAAAAAKAAAA2AEKYAAAAAAKAAAA3AKEYAAAAAAKAAAA4AKKYAAAAAAKAAAA5AEAYAAAAAAKAAAA6KEAYAAAAAAKAAAA7AEEYAAAAAAKAAAA8AAEYAAAAAAKAAAA9EKAYAAAAAAKAAAA10AAKYEAAAAAKAAAA11AAKYAEAAAAKAAAA12EAAYAAAAAAKAAAA13EKKYAAAAAAKAAAA14EAKYAAAAAAKAAAA15AEK Y AAA AAAAA AA A16AKEYAAAAAAAAAAA17AKKYEAAAAAAAAAA18AKKYAEAAAAAAAAA19AEAYKAAAAAAAAAA20KEAYAAAAAAAAAAA21AEEYKAAAAAAAAAA22AAEYKAAAAAAAAAA23EKAYAAAAAAAAAAA24AAKYEAAAAAAAAAA25AAKY AEA AAAAA A AA26EKKY AAAAAA A AAA A27EAKYAAAAAAAAAAA28AEYAKAAAAAAAAAA29AEKAYAAAAAAAAAA30EKYAAAAAAAAAAAA31AYKAEAAAAAAAAAA32AKYAEAAAAAAAAAA本發(fā)明在一個(gè)方面涉及含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑在生產(chǎn)滴眼用疫苗方面的用途。在一種實(shí)施方案中，所述滴眼用疫苗含有被溶解在任意合適載體，諸如鹽溶液或 PBS中的上述活性劑，而無(wú)需任何佐劑。在另一種實(shí)施方案中，該滴眼用疫苗含有上述活性劑，連同合適的可溶性佐劑，諸如可溶性細(xì)胞因子，例如但不限于細(xì)胞因子IL-2、IL-12、GM-CSF或IFN-Y。本發(fā)明進(jìn)一步涉及治療性免疫接種以實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)作用的方法，該方法包括采用
10含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗使需要該治療的個(gè)體免疫，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地對(duì)該個(gè)體提供神經(jīng)保護(hù)作用。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療性免疫接種以治療因CNS或PNS中的損傷導(dǎo)致的神經(jīng)元變性的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地治療該個(gè)體中因損傷導(dǎo)致的神經(jīng)元變性。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療性免疫接種以預(yù)防或抑制可能在 CNS中的原發(fā)性損傷之后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地預(yù)防或抑制可能在該個(gè)體CNS中的原發(fā)性損傷之后出現(xiàn)的神經(jīng)元變性。在一種進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療性免疫接種以促進(jìn)損傷之后 CNS或PNS中的神經(jīng)再生的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地促進(jìn)該個(gè)體的CNS或PNS在損傷后的神經(jīng)再生。CNS或PNS中的任何損傷均可根據(jù)本發(fā)明治療，諸如，但不限于脊髓損傷、鈍傷、穿透性創(chuàng)傷、腦外傷或?qū)?cè)外傷、出血性卒中和缺血性卒中。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種治療性免疫接種以治療因CNS或PNS中的疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I 相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地治療因該個(gè)體的CNS或PNS中的疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性。在另一種進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種治療性免疫接種以促進(jìn)疾病、失調(diào)或狀況之后CNS或PNS中的神經(jīng)再生的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物 I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地促進(jìn)該個(gè)體的CNS或PNS在疾病、失調(diào)或狀況之后所需的神經(jīng)再生。在另一種進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種治療性免疫接種以保護(hù)CNS和 PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性的方法，該方法包括采用含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑的滴眼用疫苗免疫需要該治療的個(gè)體，其中該疫苗所含活性劑的量可有效地保護(hù)該個(gè)體的CNS或PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性。在可根據(jù)本發(fā)明治療的疾病、失調(diào)和狀況中，且不限于，老年性癡呆包括阿爾茨海默氏病、帕金森綜合征，包括帕金森氏病、面神經(jīng)(Bell’ s)麻痹、亨廷頓舞蹈病、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病，包括肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化、朊病毒病，包括克-雅病、阿爾珀病、Batten病、科凱恩綜合征、路易體病、癲癇持續(xù)狀態(tài)、腕管綜合征、椎間盤突出、諸如維生素B缺乏的維生素缺乏、發(fā)作性失常，諸如癲癇、精神病失常，諸如精神分裂癥和焦慮、遺忘癥、痛覺(jué)過(guò)敏、氧化應(yīng)激、阿片制劑耐受和依賴、自身免疫病、與諸如淀粉樣蛋白多神經(jīng)病的疾病相關(guān)的外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、尿毒癥神經(jīng)病、卟啉癥多神經(jīng)病、低血糖、斯-拉綜合征、急性感覺(jué)神經(jīng)病、慢性共濟(jì)失調(diào)神經(jīng)病、膽汁性肝硬變、原發(fā)性淀粉樣變性、阻塞性肺病、肢端肥大癥、吸收不良綜合征、真性紅細(xì)胞增多、IgA和IgGY球蛋白病、多種藥物，諸如呋喃妥因、甲硝噠唑、異煙肼和諸如酒精或有機(jī)磷酸鹽的毒素的并發(fā)癥、Charcot-Marie-Tooth病、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張、遺傳性共濟(jì)失調(diào)、腎上腺髓質(zhì)神經(jīng)病、巨軸突神經(jīng)病、雷夫敘姆病、法布里病、脂蛋白血癥、非動(dòng)脈視神經(jīng)病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、視網(wǎng)膜病，諸如視網(wǎng)膜變性、或與眼內(nèi)壓異常升高有關(guān)的疾病，諸如青光眼。如本發(fā)明背景部分所述，我們于1996年提出，與神經(jīng)系統(tǒng)的任何急性損傷或CNS 的任何神經(jīng)變性疾病的情況相似，在青光眼中可能存在一個(gè)正在進(jìn)行中的變性過(guò)程，該過(guò)程可影響那些避過(guò)了原發(fā)性事件，例如壓力升高的神經(jīng)元(Schwartz et al. , 1996)。該過(guò)程受因原發(fā)性事件而出現(xiàn)的化合物介導(dǎo)，或者由原發(fā)性危險(xiǎn)因子所造成的缺陷而介導(dǎo)， 這些情況均可造成對(duì)鄰近原發(fā)性損傷的神經(jīng)元而言的敵對(duì)環(huán)境(Schwartz et al.，1996 ; Schwartz and Yoles, 2000a and 2000b)。對(duì)該過(guò)程可能發(fā)生在青光眼中的認(rèn)識(shí)促使我們研究相應(yīng)的療法，該療法在任何時(shí)候施用均可終止變性的進(jìn)展。實(shí)際上，從1996年開始，鑒定毒性的遞質(zhì)以發(fā)現(xiàn)可阻斷、避開或除去這些遞質(zhì)的途徑，或發(fā)現(xiàn)可使殘留神經(jīng)元對(duì)已變性神經(jīng)元造成的敵對(duì)環(huán)境具有更高耐受性的途徑的嘗試是世界范圍的。大約4年前，我們的研究小組發(fā)現(xiàn)，受損的視神經(jīng)或受損的視網(wǎng)膜可將應(yīng)力信號(hào)呈遞給全身免疫系統(tǒng)，并通過(guò)誘發(fā)直接針對(duì)應(yīng)激部位存在的大量抗原的T細(xì)胞反應(yīng)，以募集該全身免疫系統(tǒng)的幫助。該免疫反應(yīng)的特異性是將T細(xì)胞送至損傷部位的一個(gè)途徑。一旦被活化，這些T細(xì)胞便充當(dāng)了可局部影響小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞，甚至可能是神經(jīng)元的細(xì)胞因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的來(lái)源。在我們的研究過(guò)程中，我們認(rèn)識(shí)到這種免疫反應(yīng)基本上是幫助機(jī)體對(duì)抗有害狀況所必需的，并且在疾病情況，例如外傷情況中，需要被加強(qiáng) (Moalem et al. ,1999 ；Schori et al. ,2001 and 2002 ；Kipnis et al. ,2000)。我們已發(fā)現(xiàn)若干種方法，可成功地加強(qiáng)為保護(hù)受損神經(jīng)，使其避免其敵對(duì)環(huán)境所需的T細(xì)胞依賴型免疫反應(yīng)。通過(guò)利用可與廣譜自身抗原以弱親和力交叉反應(yīng)的化合物， 發(fā)現(xiàn)了一種無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的保護(hù)方法。一種這樣的化合物是共聚物I或glatiramer acetate。該化合物具有極大的優(yōu)勢(shì)，即它是被批準(zhǔn)用于多發(fā)性硬化患者的藥物，并因而不具有可導(dǎo)致自身免疫病的危險(xiǎn)(Schori et al. , 2001 and 2002 ；Kipniset al. ,2000)。正如我們之前的申請(qǐng)WO 01/52878和WO 01/93893所述，在慢性IOP升高模型中， 乳化在佐劑中的共聚物I被發(fā)現(xiàn)對(duì)RGCs具有保護(hù)性，可使其免受IOP升高的影響。我們發(fā)現(xiàn)，在IOP的急性和慢性兩種模型中，Cop-I足夠有效，并因而可以激發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)， 該反應(yīng)可起有效的保護(hù)作用，以避免IOP的后果。有趣的是，當(dāng)采用治療慢性MS病所用的方式，即每日重復(fù)注射，施用Cop-I時(shí)，便消除了單次注射的益處，從而證實(shí)了一個(gè)論點(diǎn)，即自身免疫病的要求與神經(jīng)變性疾病的要求不同(Schwartz and Kipnis. 2000 ；Kipnis and Schwartz, 2002)。雖然前者需要抑制，而后者需要免疫活化，但如果人們采用免疫調(diào)節(jié)的方法，則這兩種要求可能同時(shí)滿足。在本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中逐漸清楚的另一個(gè)特征是，在與慢性高I OP有關(guān)的RGC損失的情況中，干涉在任何時(shí)候均可有效終止疾病的進(jìn)展。事實(shí)是，在慢性IOP模型中，相互作用在第7天比在第O天更有效，說(shuō)明RGC損失并非在壓力升高后立即開始的，與在急性模型中的情況不同，急性模型中IOP升高到非常高的地步，從而使死亡更早發(fā)生。
通過(guò)采用Cop-I進(jìn)行疫苗接種實(shí)現(xiàn)的保護(hù)并非由藥物Cop-I本身介導(dǎo)，而是由其誘發(fā)的免疫反應(yīng)介導(dǎo)，該結(jié)論在缺乏T細(xì)胞的動(dòng)物體內(nèi)未觀察到任何效果時(shí)得到了證實(shí)。 這解釋了無(wú)需每日施用該藥物以實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)的原因，而每日施用藥物的方式通常是采用藥理學(xué)化合物時(shí)的情況，因?yàn)樗幚韺W(xué)化合物可快速?gòu)臋C(jī)體清除，因而需要補(bǔ)充該藥物。不過(guò)，這種化合物的施用必須是定期的，以維持為實(shí)現(xiàn)保護(hù)以避免進(jìn)行中的變性所需的T細(xì)胞的最佳水平。Cop-I在青光眼中實(shí)現(xiàn)保護(hù)性所采用的方式是激發(fā)T細(xì)胞反應(yīng)。被激發(fā)的T細(xì)胞返回至眼部，其中它們遇到了可呈遞眼中存在的相同自身抗原的小膠質(zhì)細(xì)胞，這些T細(xì)胞可與這些自身抗原交叉反應(yīng)?；罨腡細(xì)胞是實(shí)現(xiàn)保護(hù)所需的細(xì)胞因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的來(lái)源。我們的體外研究指出活化的T細(xì)胞可上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞中可對(duì)抗應(yīng)激的基因簇，以及與它們的緩沖活性有關(guān)的基因。有其它研究表明可中和眼內(nèi)有毒化合物的化合物有可能被開發(fā)為治療青光眼的方法。這些化合物包括NMDA拮抗劑、NO合成酶抑制劑。由于青光眼與其它任何神經(jīng)變性性疾病一樣，不是單一化合物疾病，說(shuō)明為了獲得全面的保護(hù)，人們不得不將若干種藥物組合應(yīng)用。本發(fā)明疫苗接種的優(yōu)勢(shì)在于，它可以刺激機(jī)體自身除去應(yīng)激的途徑，并誘發(fā)免疫細(xì)胞的活性，該活性是位點(diǎn)特異性，而非損傷特異性，從而可以實(shí)現(xiàn)保護(hù)，以避免廣泛的威脅。根據(jù)本發(fā)明，在急性和慢性青光眼大鼠模型中發(fā)現(xiàn)，采用Copl滴眼劑進(jìn)行的單一治療是保護(hù)RGCs，使它們避免IOP-誘導(dǎo)的RGC損失的有效療法。由于本發(fā)明者以前的出版物顯示的是將Copl注射給動(dòng)物時(shí)所實(shí)現(xiàn)的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)，因此，將Copl作為滴眼劑施用可賦予系統(tǒng)性神經(jīng)保護(hù)作用的發(fā)現(xiàn)令人非常意外。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案中，含有共聚物I、共聚物I相關(guān)肽或共聚物I相關(guān)多肽的滴眼用疫苗被用于治療青光眼，即阻止該病的進(jìn)展，這是一種視神經(jīng)的神經(jīng)變性性疾病。如上所述，眼內(nèi)壓(IOP)的升高通常與慢性或急性青光眼有關(guān)。不過(guò)，非常常見的是， 降低壓力不足以阻止疾病的進(jìn)展。自我破壞的要素被發(fā)現(xiàn)與該病的進(jìn)展有關(guān)。在這里，我們證實(shí)采用Copl進(jìn)行單次疫苗接種，即以滴眼劑方式施用(或皮下注射方式，作為對(duì)比) 足以挽救RGCs，使它們避免IOP-誘導(dǎo)的損失。不過(guò)，我們也發(fā)現(xiàn)，在該病的慢性模型中，延遲的治療(7天)與即時(shí)治療在慢性IOP模型中一樣有效。證據(jù)在于采用滴眼劑或系統(tǒng)性施用方式進(jìn)行的治療均不是直接見效，而是由免疫介導(dǎo)。在缺乏T細(xì)胞的動(dòng)物體內(nèi)沒(méi)有獲得任何效果，不過(guò)，當(dāng)以對(duì)側(cè)方式將滴眼劑施用在眼內(nèi)壓升高一側(cè)時(shí)，便獲得了該滴眼劑的效果。這些結(jié)果和免疫接種的途徑均可被立即實(shí)施用于臨床研發(fā)。根據(jù)本發(fā)明，可作為本發(fā)明的活性劑應(yīng)用的優(yōu)選共聚物是Copl，最優(yōu)選的是其乙酸鹽形式，類名為glatiramer acetate。Copl的施用劑量應(yīng)由醫(yī)師根據(jù)患者的年齡和疾病的階段確定，可選范圍是O. 1-1，OOOmg,優(yōu)選的范圍是10-80mg,更優(yōu)選的范圍是20-60mg, 但本發(fā)明也包括其它任何合適的劑量。對(duì)多發(fā)性硬化患者而言，可每日以單劑或多劑方式給藥，優(yōu)選的是每日施用1-3 劑，共計(jì)O. 1-1，OOOmg,優(yōu)選地在10-80mg的范圍內(nèi)，更優(yōu)選的是20_60mg，或者是隔日施用， 但本發(fā)明也可根據(jù)患者的情況擬定其它任何合適劑量。對(duì)非多發(fā)性硬化患者而言，Copl的劑量如上所述，但以定期方式施用，例如至少一周一次，到至少一月一次或至少每2或3個(gè)月一次，或更低的頻次，但本發(fā)明也可根據(jù)患者的情況擬定每次免疫接種之間的其它任何合適的間隔時(shí)間。下列實(shí)施例例證了本發(fā)明的特征，但對(duì)本發(fā)明的范疇不構(gòu)成限制。實(shí)施例材料與方法(i)動(dòng)物。近交的成年雄性Lewis和Sprague-Dawley (SPD)大鼠(8周；平均重量 300g)由 Weizmann Institute of Science (Rehovot, Israel)的動(dòng)物育種中心提供。將這些大鼠飼養(yǎng)在照明和溫度受控的室內(nèi)，并在各組實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，根據(jù)年齡和重量配對(duì)。根據(jù) IACUC(國(guó)際動(dòng)物管理與使用委員會(huì)))制訂的規(guī)則處理所有動(dòng)物。(ii)慢性高眼內(nèi)壓(IOP)的誘導(dǎo)。阻斷房水流出可使IOP升高，進(jìn)而導(dǎo)致RGC死亡(Bakalash et al. ,2002 ；Schori et al. ,2001 ；Jia et al.，2000a ；Levkovitch-Verbin et al.，2002)。如下所述，在大鼠右眼內(nèi)獲得升高的Ι0Ρ。通過(guò)肌內(nèi)注射鹽酸氯胺酮(50mg/ kg)和鹽酸甲苯噻嗪(0.5mg/kg)，使大鼠深度麻醉。將可發(fā)射藍(lán)-綠氬激光照射的裂隙燈 (Haag-Streit7Koniz, Switzerland)用于處理已麻醉大鼠的右眼，采用80-120次應(yīng)用對(duì)準(zhǔn)大鼠4條鞏膜上靜脈中的3條，并與角膜緣叢成270°。應(yīng)用的激光束功率為1W，持續(xù) O. 2秒，在鞏膜上靜脈造成的光點(diǎn)直徑為100 μ m，在角膜緣叢上造成的光點(diǎn)直徑為50 μ m。 I周后進(jìn)行第二次激光操作，采用相同的參數(shù)，只是所有應(yīng)用中的光點(diǎn)直徑均為ΙΟΟμπι。照射對(duì)準(zhǔn)全部4條鞏膜上靜脈，并與角膜緣叢成360° (Schori et al.，2001)。(iii)急性高眼內(nèi)壓的誘導(dǎo)。通過(guò)插入與聚乙烯管相連的30號(hào)針，并輸注一袋生理鹽水(0. 9% ),在深度麻醉(鹽酸氯胺酮50mg/kg,鹽酸甲苯噻嗪0. 5mg/kg,肌內(nèi)注射) 大鼠的右眼內(nèi)獲得升高的Ι0Ρ。將輸注袋置于大鼠頭頂I米高處，形成封閉環(huán)路。誘導(dǎo)產(chǎn)生高IOP正好I小時(shí)后，從眼部取出針，針孔自動(dòng)封閉。(iv)眼內(nèi)壓的測(cè)定。大部分麻醉劑均可使IOP降低(Jia et al. , 2000b),從而妨礙可靠的測(cè)定。為了在大鼠尚處于麻醉狀態(tài)時(shí)實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的壓力測(cè)定，我們通過(guò)腹膜內(nèi) (I. P.)注射方式對(duì)大鼠施用10mg/ml乙酰丙嗪，這是一種不會(huì)降低IOP的鎮(zhèn)靜藥，并在對(duì)角膜施用 Localin 后，利用眼壓計(jì)(Tono-Pen XL !Automated Ophthalmics, Ellicott City, MD,USA)測(cè)定5分鐘后雙眼內(nèi)的壓力。因?yàn)閾?jù)報(bào)導(dǎo)，麻醉劑對(duì)Tono-Pen測(cè)定的IOP有影響 (Jia et al.，2000b)，所以總是在注射乙酰丙嗪后的同一時(shí)間測(cè)定壓力，記錄從各眼獲得的10次測(cè)定結(jié)果的平均值。測(cè)定以不同時(shí)間間隔進(jìn)行(每2天進(jìn)行一次，持續(xù)3周)，但均在一天的同一時(shí)間。以未經(jīng)處理的對(duì)側(cè)眼作為對(duì)照。(V)對(duì)IOP升高導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷的解剖學(xué)評(píng)估。將親水性的神經(jīng)示蹤染料葡聚糖四甲基羅丹明(Rhodamine Dextran ； (Molecular Probes, Eugene, OR, USA))直接應(yīng)用在視神經(jīng)的眼眶內(nèi)部分。只有可經(jīng)受住高IOP并與活細(xì)胞體一起保留功能的軸突可吸收該染料，證實(shí)了已標(biāo)記RGCs的存在。24小時(shí)后殺死大鼠，將它們的視網(wǎng)膜切除，完全地封固并保存在4%的低聚甲醒中。利用突光顯微鏡(Carl Zeiss,Oberkochen,Germany),在X800 放大倍數(shù)下對(duì)RGCs進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)每個(gè)視網(wǎng)膜的4個(gè)區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，這4個(gè)區(qū)域具有相同直徑(0. 076mm2),且距視神經(jīng)盤的距離相同(Kipnis et al. , 2001 ；Yoles et al. ,2001)。以未經(jīng)處理的大鼠來(lái)源的眼作為對(duì)照。RGCs的個(gè)數(shù)是由不了解視網(wǎng)膜狀況的觀察者計(jì)數(shù)的。(vi)采用Copl和佐劑進(jìn)行的主動(dòng)免疫接種。采用在2. 5mg/ml CFA中乳化且總體積為100 μ I的Copl (100 μ g) (Kipnis et al.，2000)使經(jīng)由激光誘導(dǎo)導(dǎo)致IOP升高的大鼠或存在急性IOP升高情況的大鼠免疫(Teva Pharmaceutical Industries Ltd. ,Petach Tikva, Israel)。每只動(dòng)物均通過(guò)尾根處的皮下注射接種疫苗。(vii)采用無(wú)佐劑的Cop I進(jìn)行的自動(dòng)免疫接種。在通過(guò)皮下造成原發(fā)性損傷后的不同時(shí)間點(diǎn)施用經(jīng)由PBS稀釋至不同濃度的Cop-1。Cop-I的體表施用是在將該物質(zhì)浸入PBS中，直至20mg/ml濃度后進(jìn)行的。由于每一滴均為50 μ 1，我們每5分鐘施用I滴，在 25分鐘內(nèi)共施用5滴。實(shí)施例I。在無(wú)載體條件下施用時(shí)進(jìn)行的Cop-I疫苗接種可保護(hù)RGCs，使其避免 IOP誘導(dǎo)的死亡之前已有研究顯示，乳化在佐劑中的Copl對(duì)RGC具有保護(hù)作用，可使其避免IOP 誘導(dǎo)的死亡。在這里，我們檢驗(yàn)該作用是否在慢性模型中長(zhǎng)期存在。使動(dòng)物的IOP單側(cè)升高，并在激光處理當(dāng)天進(jìn)行免疫(以誘導(dǎo)IOP升高)。在第一次激光照射的當(dāng)天，使大鼠的IOP緩慢升高。將動(dòng)物分為4組2組接受乳化在CFA中的 Cop-l，2組接受溶解中CFA中的PBS。3周后，將其中一組經(jīng)由Cop-I處理的動(dòng)物的視網(wǎng)膜切除，另一組則在2、6和9周后接受Cop-Ι。該組在第一次激光照射后12周切除視網(wǎng)膜。 在經(jīng)由PBS-CFA處理的2組中，其中一組是在第一次激光照射后3周被分析RGC的存活情況，另一組則在此次激光照射后2、6和9周另外接受PBS-CFA，并在此次激光照射后12周切除視網(wǎng)膜。結(jié)果如圖I所示。對(duì)3和12周后存活的RGCs數(shù)量的評(píng)估表明，在對(duì)照大鼠與經(jīng)由Cop-I免疫和PBS免疫的大鼠之間存在顯著差異，甚至在IOP升高開始后12周也是如此。Cop-I的有益效果(被表達(dá)為RGC死亡的百分?jǐn)?shù)％ )可見于3周時(shí)(12. 6±5對(duì)比 45. 7±8，n = 7)和12周時(shí)(33. 7± I. 4對(duì)比57. 2±6. 3，分別地，η = 5和4)。因此，在第一次激光照射后12周，RGCs損失的情況與第3周時(shí)的損失進(jìn)了一步(從第3周時(shí)的45. 7% 到第12周時(shí)的57. 20% )0但疫苗接種將第一次激光照射后12周時(shí)的損失降低至33. 7%。 一部分損失似乎是不可避免的，而另有一部分損失則可以被影響，從而獲得甚至可以在IOP 第一次升高后持續(xù)12周的保護(hù)。實(shí)施例2。無(wú)佐劑條件下進(jìn)行的Cop-I免疫接種由于Cop-I是具有多個(gè)表位的高分子量化合物，我們甚至考慮了其在無(wú)佐劑條件下可能具有免疫原性的可能。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，使大鼠的IOP升高，并在激光處理的第一天接受皮下注射不同劑量的無(wú)佐劑Cop-I (100,250,500和1000 μ g);對(duì)照動(dòng)物則接受PBS。結(jié)果如圖2A 所示，對(duì)大鼠皮下注射500μ gCop-Ι可獲得最佳效果；較高或較低劑量的效果均較差。 經(jīng)由500ygCop-l處理的實(shí)驗(yàn)組顯示的最大效果為RGC死亡率為26.6±10%，經(jīng)由 100 μ gCop-1處理的實(shí)驗(yàn)組的RGC死亡率則為44±6%，經(jīng)由250 μ gCop-Ι處理的實(shí)驗(yàn)組的 RGC死亡率則為50. 5±8%。所有組均包括4-6只動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，我們還檢驗(yàn)了時(shí)機(jī)和頻率，發(fā)現(xiàn)在IOP升高后第7天注射的效果比第O天注射的效果好，而每隔一周或每日進(jìn)行的重復(fù)注射的效果則較差。使大鼠經(jīng)受 Ι0Ρ，并在第一次激光照射后立即(O)，或一周后(7)或在第O和7天(0、7)或從第O天開始連續(xù)7天每日(0-7)接受500 μ g的無(wú)佐劑Cop-Ι。對(duì)照組接受PBS。3周后切除視網(wǎng)膜。 結(jié)果如圖2B所示，第7天接受單次注射的實(shí)驗(yàn)組的RGC死亡率最低，而接受連續(xù)7天的每日注射的實(shí)驗(yàn)組的死亡率最高(19. I±4. 7對(duì)比41. 4±6，P <0.01)。
還測(cè)試了施用無(wú)佐劑Cop-I在IOP首次升高后6周的效果。發(fā)現(xiàn)兩次注射一一一 次在第O天，第二次在3周后一一比3周后進(jìn)行的單次注射更有效，說(shuō)明該疫苗接種應(yīng)當(dāng)與死亡動(dòng)力學(xué)同步，否則效果則較差。由于死亡開始得比IOP首次升高后3周早，所以在IOP 首次升高后3周進(jìn)行第一次注射的效果較差。實(shí)施例3。Cop-I作用是T-細(xì)胞依賴型的為檢驗(yàn)Cop-I的作用的確是免疫介導(dǎo)的，并且沒(méi)有充當(dāng)局部藥物，我們對(duì)已失去T 細(xì)胞且IOP升高的動(dòng)物施用Cop-1。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，使正常的成年大鼠和已失去T細(xì)胞的成年大鼠(出生時(shí)接受胸腺切除術(shù)的后果)的IOP升高。在IOP升高后即刻，使動(dòng)物接受單次注射Cop-Ι，或PBS或每日注射溴莫尼定。3周后切除視網(wǎng)膜，并對(duì)RGCs計(jì)數(shù)。未切除胸腺的動(dòng)物在IOP升高后的RGCs死亡百分?jǐn)?shù)低于已切除胸腺的動(dòng)物(34±3對(duì)比50. 2±3，p < O. 001，分別地，η = 6和5)。如圖3Α和3Β所示，在已切除胸腺并經(jīng)由α 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑青光眼藥物溴莫尼定處理的動(dòng)物體內(nèi)，RGCs的損失少于已切除胸腺但未經(jīng)由該藥物處理的動(dòng)物或已切除胸腺并經(jīng)由Cop-I處理的大鼠[38±7(η = 6)對(duì)比55±5· 2 (η = 5)，ρ = O. 001]。溴莫尼定和Cop-I在未切除胸腺且IOP升高的動(dòng)物體內(nèi)的作用如圖3Β所示。在未切除胸腺的動(dòng)物中采用Cop-I進(jìn)行的治療比采用溴莫尼定進(jìn)行的治療更有效(23. 5±5. 7對(duì)比34. 5±3. 51， P < O. 05)。未經(jīng)處理的對(duì)照組的死亡百分?jǐn)?shù)為47. 9±7. 5。兩種處理之間的協(xié)同作用不明顯。因此，與預(yù)期一樣，已失去T細(xì)胞的動(dòng)物的RGC損失比正常動(dòng)物的高(50%對(duì)比 30% )0其次，Cop-I在已失去T細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)未減少IOP-誘導(dǎo)的RGC損失(55%對(duì)比 50%)。與之相比，以α 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑作為陽(yáng)性對(duì)照，甚至在已切除胸腺的動(dòng)物體內(nèi)也可避免RGC損失(圖3Α)。我們還測(cè)試了在正常動(dòng)物體內(nèi)，α 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑溴莫尼定與Cop-I在保護(hù)RGCs，使其避免IOP誘導(dǎo)的死亡方面是否存在協(xié)同作用。圖3B 所示為，就皮下施用所實(shí)現(xiàn)的RGC保護(hù)的程度而言，這兩種化合物之間不存在加成或協(xié)同作用。因此，這些結(jié)果表明Cop-I是強(qiáng)免疫原，可在IOP升高后7天進(jìn)行的單次注射后保護(hù) RGCs，使其避免IOP誘導(dǎo)的死亡。實(shí)施例4。Cop-I滴眼劑在慢性IOP模型中可保護(hù)RGCs由于Cop-I療法為T細(xì)胞介導(dǎo)型，并且我們已在上文中顯示在無(wú)佐劑的條件下進(jìn)行的單次注射足以發(fā)揮保護(hù)作用，目前，我們探索了以Cop-I作為滴眼劑而無(wú)需佐劑的可能性。假設(shè)有大約10%的滴眼劑進(jìn)入血液，我們應(yīng)用的滴眼劑相當(dāng)于5mg Cop-I (是皮下施用時(shí)被發(fā)現(xiàn)有效的最佳劑量500 μ g的10倍)。在慢性模型中IOP升高后即刻(圖4A)或第7天(圖4B)施用該Cop-I滴眼劑。在壓力升高后3周進(jìn)行評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)，以滴眼劑形式實(shí)現(xiàn)的Cop-I保護(hù)與皮下施用時(shí)一樣有效(P < 10_5 ；103RGCs對(duì)比150RGCs)。實(shí)施例5 Xop-I滴眼劑在急性IOP (升高)模型中可保護(hù)RGCs，使它們避免IOP-誘導(dǎo)的死亡慢性IOP (升高)的結(jié)果促使我們檢驗(yàn)Cop-I是否可以在急性青光眼模型中保護(hù) RGCs,使其避免IOP誘導(dǎo)的損失。我們之前已建立了一個(gè)經(jīng)過(guò)良好標(biāo)準(zhǔn)化的IOP短暫升高的模型(I小時(shí)升至40mm/ Hg)，IOP的短暫升高導(dǎo)致2周后RGCs的損失率約為50%。在該急性IOP升高模型中應(yīng)用
16無(wú)佐劑的Cop-Ι，導(dǎo)致2周后的損失率僅為20%。利用平均IOP為54. 75±llmmHg的Lewis大鼠的急性IOP升高模型，我們通過(guò)皮下(圖5A)或體表(滴眼劑；圖5B)兩種方式接種Cop-I或載體(PBS)。在IOP升高I小時(shí)后立即開始的25分鐘時(shí)程內(nèi)，對(duì)每只動(dòng)物施用共計(jì)5mg的Cop-Ι。對(duì)照組在IOP升高后2周的平均死亡率為58. 58% ±7. 42 (n = 4)，Cop-I接種組的平均死亡率則為31. 12% ±3. 22 (n = 4) (ρ < O. 001)。由IOP升高后2周的評(píng)估結(jié)果看來(lái)，兩種施用途徑在保護(hù)RGCs方面的效果類似。 為證明所述滴眼劑提供了一種免疫接種途徑，而并非局部藥物應(yīng)用方式，我們使一只眼的壓力升高，并將滴眼劑形式的Cop-I施用于對(duì)側(cè)眼。獲得了與同側(cè)施用時(shí)相同的效果。參考文獻(xiàn)Aharoni R.，Teitelbaum D.，Arnon R.，Sela M. Copolymer I inhibits manifestation of graft rejection.Transplantation 27,598 (2001)Bakalash，S.，Kipnis，J.，Yoles，E. & Schwartz, M. Resistance of retinal ganglion cells to an increase in intraocular pressure is immune-dependent. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 43，2648-2653 (2002)Fridkis-Hareli M，Neveu JM, Robinson RA，Lane WS, Gauthier L, Wucherpfennig KW, Sela M， Strominger JL.Binding motifs of copolymer I to multiple sclerosis—and rheumatoid arthritis-associated HLA-DR molecules. J Immunol. 162(8) :4697-4704(1999)Fridkis-Hareli M，Santambrogio L，Stern JN，F(xiàn)ugger L，Brosnan C，Strominger JL Novel synthetic amino acid copolymers that inhibit autoantigen-specific T cell responses and suppress experimental autoimmune encephalomyelitis. J Clin Invest 109(12) :1635-1643(2002)Hauben, E.，Nevo, U.，Yoles, E.，Moalem，G.，Agranov, E.，Mor, F.，Akselrod, S.，Neeman, M.，Cohen, I. R.，and Schwartz, M. Autoimmune T cells as potential neuroprotective therapy for spinal cord injury. Lancet 355:286-287(2000)Jia，L ,Cepurna,W. 0. , Johnson,E. C. & Morrison, J. C. Patterns of intraocular pressure elevation after aqueous humor outflow obstruction in rats.Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41，1380-1385 (2000a)Jia, L.，Cepurna，W. 0.，Johnson，E. C. Morrison, J. C. Effect of general anesthetics on IOP in rats with experimental aqueous outflow obstruction. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41，3415-3419. (2000b)Kipnis, J. & Schwartz, M. Dual Action of Glatiramer Acetate (Cop-1)as aTreatment for Autoimmune Diseases and a Vaccine for Protective Autoimmunity after CNS Injury.Trends Mol. Med. 8，319-323(2002)Kipnis J，Yoles E，Porat Z，Cohen A，Mor F，Sela M，Cohen IR，Schwartz M. T cell immunity to copolymer I confers neuroprotection on the damaged optic nerve !possible therapy for optic neuropathies. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 97， 7446-7451. (2000)
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權(quán)利要求
1.一種用于治療性免疫接種哺乳動(dòng)物的滴眼用疫苗，含有選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑。
2.權(quán)利要求I的滴眼用疫苗，用于治療因中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS) 中的損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性，預(yù)防或抑制可能在CNS中的原發(fā)性損傷后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性，促進(jìn)CNS或PNS中在損傷或疾病、失調(diào)或狀況后的神經(jīng)再生，或保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性。
3.權(quán)利要求2的滴眼用疫苗，其中所述損傷為脊髓損傷、鈍傷、穿透性創(chuàng)傷、腦外傷或?qū)?cè)外傷、出血性卒中或缺血性卒中。
4.權(quán)利要求2的滴眼用疫苗，其中所述疾病、失調(diào)或狀況為老年性癡呆，包括阿爾茨海默氏病、帕金森綜合征，包括帕金森氏病、面神經(jīng)(Bell’ s)麻痹、亨廷頓舞蹈病、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病，包括肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化、朊病毒病，包括克-雅病、阿爾珀病、Batten病、科凱恩綜合征、路易體病、癲癇持續(xù)狀態(tài)、腕管綜合征、椎間盤突出、諸如維生素B缺乏的維生素缺乏、發(fā)作性失常，諸如癲癇、精神病失常，諸如精神分裂癥和焦慮、遺忘癥、痛覺(jué)過(guò)敏、氧化應(yīng)激、阿片制劑耐受和依賴、自身免疫病、與諸如淀粉樣蛋白多神經(jīng)病的疾病相關(guān)的外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、尿毒癥神經(jīng)病、卟啉癥多神經(jīng)病、低血糖、斯-拉綜合征、急性感覺(jué)神經(jīng)病、慢性共濟(jì)失調(diào)神經(jīng)病、膽汁性肝硬變、原發(fā)性淀粉樣變性、阻塞性肺病、肢端肥大癥、 吸收不良綜合征、真性紅細(xì)胞增多、IgA和IgGY球蛋白病、多種藥物，諸如呋喃妥因、甲硝噠唑、異煙肼和諸如酒精或有機(jī)磷酸鹽的毒素的并發(fā)癥、Charcot-Marie-Tooth病、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張、遺傳性共濟(jì)失調(diào)、腎上腺髓質(zhì)神經(jīng)病、巨軸突神經(jīng)病、雷夫敘姆病、法布里病、脂蛋白血癥、非動(dòng)脈視神經(jīng)病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、視網(wǎng)膜病，諸如視網(wǎng)膜變性、或與眼內(nèi)壓異常升高有關(guān)的疾病，諸如青光眼。
5.權(quán)利要求4的滴眼用疫苗，其中所述自身免疫病為多發(fā)性硬化。
6.權(quán)利要求I的滴眼用疫苗，其中該疫苗包括無(wú)佐劑的活性劑。
7.權(quán)利要求I的滴眼用疫苗，其中該疫苗包括活性劑和可溶性佐劑。
8.權(quán)利要求7的滴眼用疫苗，其中所述可溶性佐劑為細(xì)胞因子。
9.權(quán)利要求8的滴眼用疫苗，其中所述細(xì)胞因子為IL-2、IL-12、IFN-y或GM-CSF。
10.權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的滴眼用疫苗，其中所述活性劑為共聚物I。
11.權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)的滴眼用疫苗，其中所述活性劑為共聚物I相關(guān)肽或共聚物I相關(guān)多肽。
12.權(quán)利要求I的滴眼用疫苗，用于以至少每天I次或每隔一天I次的頻率施用于多發(fā)性硬化患者。
13.權(quán)利要求I的滴眼用疫苗，用于以至少每7天I次，到至少每月I次，到至少每2-3 月I次的頻率定期施用于非多發(fā)性硬化患者。
14.權(quán)利要求13的滴眼用疫苗，用于施用于青光眼患者。
15.選自共聚物I、共聚物I相關(guān)肽和共聚物I相關(guān)多肽的活性劑在制備用于治療性免疫接種哺乳動(dòng)物的滴眼用疫苗方面的用途。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述滴眼用疫苗用于治療因中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中的損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性，預(yù)防或抑制可能在CNS中的原發(fā)性損傷后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性，促進(jìn)CNS或PNS中在損傷或疾病、失調(diào)或狀況后的神經(jīng)再生，或保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性。
17.權(quán)利要求16的用途，其中所述損傷為脊髓損傷、鈍傷、穿透性創(chuàng)傷、腦外傷或?qū)?cè)外傷、出血性卒中或缺血性卒中。
18.權(quán)利要求16的用途，其中所述疾病為老年性癡呆，包括阿爾茨海默氏病、帕金森綜合征，包括帕金森氏病、面神經(jīng)(Bell’ s)麻痹、亨廷頓舞蹈病、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病，包括肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化、朊病毒病，包括克-雅病、阿爾珀病、Batten病、科凱恩綜合征、路易體病、 癲癇持續(xù)狀態(tài)、腕管綜合征、椎間盤突出、諸如維生素B缺乏的維生素缺乏、癲癇、遺忘癥、 焦慮、痛覺(jué)過(guò)敏、精神病、發(fā)作、氧化應(yīng)激、阿片制劑耐受和依賴、自身免疫病、或與諸如淀粉樣蛋白多神經(jīng)病的疾病相關(guān)的外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、尿毒癥神經(jīng)病、葉啉癥多神經(jīng)病、低血糖、斯-拉綜合征、急性感覺(jué)神經(jīng)病、慢性共濟(jì)失調(diào)神經(jīng)病、膽汁性肝硬變、原發(fā)性淀粉樣變性、阻塞性肺病、肢端肥大癥、吸收不良綜合征、真性紅細(xì)胞增多、IgA和IgGY球蛋白病、多種藥物，諸如呋喃妥因、甲硝噠唑、異煙肼和諸如酒精或有機(jī)磷酸鹽的毒素的并發(fā)癥、Charcot-Marie-Tooth病、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張、遺傳性共濟(jì)失調(diào)、腎上腺髓質(zhì)神經(jīng)病、巨軸突神經(jīng)病、雷夫敘姆病、法布里病、脂蛋白血癥、非動(dòng)脈視神經(jīng)病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、視網(wǎng)膜病，諸如視網(wǎng)膜變性、或與眼內(nèi)壓異常升高有關(guān)的疾病，諸如青光眼。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述自身免疫病為多發(fā)性硬化。
20.權(quán)利要求15的用途，其中所述滴眼用疫苗包括無(wú)佐劑的活性劑。
21.權(quán)利要求15的用途，其中所述滴眼用疫苗包括活性劑和可溶性佐劑。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述可溶性佐劑為細(xì)胞因子。
23.權(quán)利要求22的用途，其中所述細(xì)胞因子為IL-2、IL-12、IFN-y或GM-CSF。
24.權(quán)利要求15-23中任意一項(xiàng)的用途，其中所述活性劑為共聚物I。
25.權(quán)利要求15-23中任意一項(xiàng)的用途，其中所述活性劑為共聚物I相關(guān)肽或共聚物I 相關(guān)多肽。
26.權(quán)利要求15的用途，其中所述滴眼用疫苗用于以至少每天I次或每隔一天I次的頻率施用于多發(fā)性硬化患者。
27.權(quán)利要求15的用途，其中所述滴眼用疫苗用于以至少每7天I次，到至少每月I 次，到至少每2-3月I次的頻率定期施用于非多發(fā)性硬化患者。
28.權(quán)利要求27的用途，施用于青光眼患者。
29.共聚物I在制備用于治療青光眼的滴眼用疫苗方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療性免疫接種哺乳動(dòng)物的滴眼用疫苗，該疫苗含有共聚物1，共聚物1相關(guān)肽或共聚物1相關(guān)多肽，用于治療因中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中的損傷、疾病、失調(diào)或狀況導(dǎo)致的神經(jīng)元變性，預(yù)防或抑制可能在CNS中的原發(fā)性損傷后另外發(fā)生的神經(jīng)元繼發(fā)性變性，促進(jìn)CNS或PNS中在損傷或疾病、失調(diào)或狀況后的神經(jīng)再生，或保護(hù)CNS和PNS細(xì)胞免受谷氨酸鹽毒性。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102580069SQ201110438909
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2004年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月7日
發(fā)明者M·埃森巴奇-施瓦茨, S·巴卡拉斯, V·富加 申請(qǐng)人:耶達(dá)研究及發(fā)展有限公司