專利名稱：一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法。
背景技術(shù)：
蘆根為禾本科多年生草本植物蘆葦?shù)牡叵赂o，是一種較常用的中藥材。性寒、味甘，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱、生津、除煩、止嘔、利尿之功效。臨床主要用于發(fā)燒、尿路感染、肺膿瘍、支氣管炎等病的治療。蘆根提取物對化學(xué)性肝損傷有良好的保護(hù)和恢復(fù)作用，近來有報道，其具有疏肝解郁的作用，所以研究其提取分離方法具有現(xiàn)實(shí)的意義，在保健品、飲食方面的運(yùn)用極具潛力。我國適宜種植蘆根的地域廣闊，春末夏初或秋季均可采挖，洗凈，切段，鮮用或曬干用，蘆根產(chǎn)品市場很大，但蘆根深加工技術(shù)還比較薄弱。氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動有關(guān)的最基本的物質(zhì)，是在生物體內(nèi)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動有著密切的關(guān)系。它在抗體內(nèi)具有特殊的生理功能，是生物體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)成分之一。氨基酸在醫(yī)藥上主要用來制備復(fù)方氨基酸輸液，也用作治療藥物和用于合成多肽藥物。目前用作藥物的氨基酸有一百幾十種，其中包括構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸有20種和構(gòu)成非蛋白質(zhì)的氨基酸有100多種。由多種氨基酸組成的復(fù)方制劑在現(xiàn)代靜脈營養(yǎng)輸液以及“要素飲食”療法中占有非常重要的地位，對維持危重病人的營養(yǎng)，搶救患者生命起積極作用，成為現(xiàn)代醫(yī)療中不可少的醫(yī)藥品種之一。谷氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、胱氨酸、L 一多巴等氨基酸單獨(dú)作用治療一些疾病， 主要用于治療肝病疾病、消化道疾病、腦病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、 兒科營養(yǎng)和解毒等。此外氨基酸衍生物在癌癥治療上出現(xiàn)了希望。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法，該方法具有操作簡單、制作簡單和樣品用量少等特點(diǎn)。本發(fā)明提供了一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法，該方法步驟如下
(1)將新鮮蘆根用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗一次，淋干水后，60°c恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干ωτι !，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過濾后的粉末備用；(2)稱取粉碎后的蘆根粉末，加入一定比例的提取溶劑，水浴回流提取；(3)提取液過濾，加入95%乙醇至終濃度為 75%，除去水溶性多糖和蛋白質(zhì)；(4)離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素； 沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾除脂肪；(5)濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液，4°C保存?zhèn)溆茫崛壬z測游離氨基酸含量。本發(fā)明提供的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，所述步驟(1)中粉碎的蘆根經(jīng)40 目篩子過濾，用過濾后的較細(xì)粉末進(jìn)行提取以保證所需物質(zhì)有效地提取出來。本發(fā)明提供的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，所述步驟(2)中提取溶劑為水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙醇溶液中的一種或多種(提取溶劑優(yōu)選為水)；蘆根粉末與提取溶劑的比例(料液比)為1:15-1:30 (料液比優(yōu)選為水)；水浴回流提取的條件為 50-90°C水浴回流提取1- (優(yōu)選為60°C水浴回流提取池)。本發(fā)明提供的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，所述步驟(5)中茚三酮比色法檢測蘆根中游離氨基酸的含量，以天冬氨酸為對照品。本發(fā)明的有益效果是通過本發(fā)明，獲得了蘆根游離氨基酸，經(jīng)茚三酮比色法測定，游離氨基酸含量為8. 24mg/go本發(fā)明采用回流提取的方法，首次從蘆根中提取出游離氨基酸。


圖1是各因素對蘆根游離氨基酸含量的影響。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例將對本發(fā)明予以進(jìn)一步的說明，但并不因此而限制本發(fā)明。實(shí)施例1
1.蘆根的前處理
(1)將新鮮蘆根用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗一次，淋干水后，60°c恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干6h。(2)然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，粉碎的蘆根經(jīng)40目篩子過濾，過濾后的粉末備用。2.提取溶劑的選擇
水
95%乙醇溶液 75%乙醇溶液 50%乙醇溶液
3.提取游離氨基酸的步驟
a)將新鮮蘆根用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗一次，淋干水后，60°C恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干MTiai，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎；b)稱取一定量的蘆根粉末，加入一定比例的提取溶劑，水浴回流提??；c)提取液過濾，加入95%乙醇至終濃度為75%，除去水溶性多糖和蛋白質(zhì)；d)離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素；沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾除脂肪；e)濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液。 4°C保存?zhèn)溆谩?.檢測
茚三酮比色法檢測游離氨基酸含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備準(zhǔn)確吸取lmg/mL的天冬氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 0,0. 05,0. 1,0. 2,0. 3、 0.4、0.5mL (相當(dāng)于0、50、100、200、300、400、500μ g氨基酸)，分別置于5mL刻度試管中，各加水補(bǔ)充至體積為800 μ 1，然后加入洲茚三酮乙醇溶液和磷酸鹽緩沖溶液(pH為 8. 04)各200 μ 1，混合均勻，于沸水浴上加熱15min，冷卻至室溫，靜置15min，加水定容至 5ml，搖勻。在570nm波長下，以試劑空白為對照測定其余各溶液的吸光度Α。得回歸方程Y=O. 2669X+0. 0041 (R2 =0. 9974)，結(jié)果表明在10(Γ500μβ范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
5.正交試驗設(shè)計
權(quán)利要求
1.一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于該方法步驟如下(1)將新鮮蘆根用水沖洗干凈，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過濾，過濾后的粉末備用；(2)稱取粉碎后的蘆根粉末，加入一定比例的提取溶劑，水浴回流提?。?3)提取液過濾，加入高濃度乙醇至終濃度為75%，除去水溶性多糖和蛋白質(zhì)；(4)離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素；沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾除脂肪；(5)濾液定容，加入活性炭攪拌，過濾，即得游離氨基酸提取液，4°C保存?zhèn)溆茫崛壬z測游離氨基酸含量。
2.按照權(quán)利要求1所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(1) 中烘干條件為60°C恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干MTiai。
3.按照權(quán)利要求1所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(1) 中粉碎的蘆根經(jīng)40目篩子過濾，過濾后的粉末備用。
4.按照權(quán)利要求1所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(2) 中提取溶劑為水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙醇溶液中的一種或多種；蘆根粉末與提取溶劑的比例為1:15-1:30 ；水浴回流提取的條件為50-90°C水浴回流提取1_證。
5.按照權(quán)利要求4所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(2) 中提取溶劑為水；蘆根粉末與水的比例為1:15 ；水浴回流提取的條件為60°C水浴回流提取 2h。
6.按照權(quán)利要求1所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(3) 中高濃度乙醇為95%乙醇。
7.按照權(quán)利要求1所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(5) 中濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液，4°C保存?zhèn)溆?，茚三酮比色法檢測游離氨基酸含量。
8.按照權(quán)利要求1、7所述的從蘆根中提取游離氨基酸的方法，其特征在于所述步驟 (5)中茚三酮比色法檢測蘆根中游離氨基酸的含量，以天冬氨酸為對照品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法，該方法為將新鮮蘆根用水沖洗干凈，烘干，粉碎；稱取粉碎后的蘆根粉末，加入提取溶劑，水浴回流提?。惶崛∫哼^濾，加入95%乙醇至終濃度為75%；離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素；沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾除脂肪；濾液定容，加入活性炭，過濾，即得游離氨基酸提取液，4℃保存?zhèn)溆?，茚三酮比色法檢測游離氨基酸含量。該方法采用水浴回流提取的方法從蘆根中獲得了游離氨基酸，具有操作簡單、制作簡單和樣品用量少等特點(diǎn)，為蘆根游離氨基酸的研究打下了基礎(chǔ)。
文檔編號A61K125/00GK102430062SQ201110359068
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月14日
發(fā)明者劉宏生, 朱俊豐, 趙健, 邵麗杰 申請人:遼寧仙鶴礦泉水有限公司