專利名稱：一株飼用丁酸梭菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物菌株，特別是涉及一株丁酸梭菌菌株及其在制備飼料及飼料添加劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丁酸梭菌(Clostridium butyricum)又稱酪酸梭菌或丁酸梭狀芽孢桿菌，是存在于人和畜禽腸道的一種厭氧有益菌。丁酸梭菌能形成內(nèi)生芽孢，具有耐高溫、耐胃酸、耐膽鹽、耐部分抗生素(如慶大霉素、卡那霉素等)等特性。丁酸梭菌制劑作為飼料添加劑或獸藥，與非芽孢類活菌制劑相比具有顯著優(yōu)勢(shì)。目前，有關(guān)丁酸梭菌的研究和應(yīng)用還處于初級(jí)階段，專利文獻(xiàn)CN 101851596A公開(kāi)了一株高效解磷的丁酸梭菌及其制備方法和應(yīng)用；專利文獻(xiàn)CN 1246144A公開(kāi)了一種對(duì)肝臟損害具有治療和預(yù)防效果的丁酸梭菌；專利文獻(xiàn)CN 1995330A公開(kāi)了一種丁酸梭狀芽孢桿菌微生態(tài)制劑的生產(chǎn)方法；專利文獻(xiàn)CN 1771831A公開(kāi)了一種飼料級(jí)微生物添加劑及其制備與應(yīng)用，所述的微生物添加劑主要包括益生菌部分和營(yíng)養(yǎng)液部分，所述的益生菌部分含有嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、丁酸梭菌，所述的營(yíng)養(yǎng)液部分含有乙酸、丙酸、丁酸；專利文獻(xiàn)CN 1403567A公開(kāi)了一種制備乳酸芽孢、丁酸芽孢桿菌活菌制劑的新方法，利用酶生物技術(shù)處理植物蛋白原料制得培養(yǎng)基，用于乳酸芽孢、丁酸芽孢桿菌單獨(dú)發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵物經(jīng)離心、賦形、常溫以上溫度干燥制得乳酸芽孢、丁酸芽孢桿菌的干粉活菌制劑。上述專利文獻(xiàn)中公開(kāi)的丁酸梭菌微生態(tài)制劑均未涉及丁酸梭菌先進(jìn)行厭氧液態(tài)發(fā)酵、再用固體物料 (麩皮、豆粕、稻殼等)吸附、最后烘干的工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株對(duì)致病菌具有抑制作用的可用于制備飼料和飼料添加劑的丁酸梭菌。本發(fā)明所提供的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)菌株的名稱為Bi，該菌株已于2011年05月16日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 4845。丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845 是革蘭氏陽(yáng)性桿菌，光學(xué)顯微鏡下觀察，其大小為(0. 6 1. 2) μ mX (3. 0 7. 0) μ m，端圓，中間部分輕度膨脹，單個(gè)或成對(duì)，短鏈，偶見(jiàn)有絲狀菌體，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)；孢子卵圓，偏心或次端生芽孢；在厭氧瓊脂平板上形成白色或奶油色的小規(guī)則圓形菌落；在厭氧條件下生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍 20°C 60°C，最適生長(zhǎng)溫度30°C 42°C ；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 2 10，最適pH值為7. 0 ； 部分生化特性如表1所示表1 丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845 的部分生化特性
權(quán)利要求
1.丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845。
2.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845，其特征在于丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845是革蘭氏陽(yáng)性桿菌，光學(xué)顯微鏡下觀察，其大小為(0. 6 1. 2) μ mX (3. 0 7. 0) μ m，端圓，中間部分輕度膨脹， 單個(gè)或成對(duì)，短鏈，偶見(jiàn)有絲狀菌體，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)；孢子卵圓，偏心或次端生芽孢；在厭氧瓊脂平板上形成白色或奶油色的小規(guī)則圓形菌落；在厭氧條件下生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍 20°C 60°C，最適生長(zhǎng)溫度30°C 42°C ；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 2 10，最適pH值為7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)Bl CGMCC No. 4845，其特征在于丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845 對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli 0139、E. coli Κ88、Ε· coliK99)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium 04Hi)和金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus)有很強(qiáng)的抑制作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845，其特征在于丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845 可耐受 pH 1.0 3.0 磷酸鹽緩沖液池；可耐受濃度為0. 5% (質(zhì)量百分比濃度)的膽鹽20h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845，其特征在于丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845對(duì)氨芐青霉素、硫酸鏈霉素、紅霉素和氯霉素敏感，對(duì)慶大霉素和卡那霉素耐受能力較強(qiáng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845，其特征在于小鼠對(duì)丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845的最大耐受劑量 MTD > 15000mg/kg，根據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該菌株為無(wú)毒物質(zhì)。
7.一種丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845 菌劑，其活性成分為丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Bl CGMCC No. 4845。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的菌劑，其特征在于為丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)Bl CGMCC No. 4845發(fā)酵液與豆粕、麩皮和稻殼中的一種或幾種組合形成的微生態(tài)菌劑。
9.一種制備權(quán)利要求8所述微生態(tài)菌劑的方法，包括以下步驟1)配制梭菌增殖培養(yǎng)基(RCM培養(yǎng)基)，滅菌后備用；2)按1^5%(體積百分比濃度)的接種量，將丁酸梭菌(Clostridium butyricum) Bl CGMCC No. 4845菌液轉(zhuǎn)接到裝有無(wú)菌RCM培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，裝液系數(shù)70-80 %， 37 士 1°C條件下厭氧靜置培養(yǎng)M 48h，得到丁酸梭菌(Clostridium butyricum) Bl CGMCC No. 4845發(fā)酵液；3)將丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)Bl CGMCC No. 4845發(fā)酵液與豆粕、麩皮和稻殼中的一種或幾種按體積質(zhì)量比1 0.5 2拌勻后在50-60°C下烘干，再經(jīng)粉碎，得到權(quán)利要求8所述丁酸梭菌(Clostridium butyricum) Bl CGMCC No. 4845微生態(tài)制劑。
10.權(quán)利要求7或8所述的菌劑在制備飼料添加劑或獸藥中的應(yīng)用，可取代抗生素。
全文摘要
本發(fā)明一株飼用丁酸梭菌及其應(yīng)用，公開(kāi)了一株飼用丁酸梭菌(Clostridium butyricum)B1 CGMCC No.4845，是革蘭氏陽(yáng)性桿菌，光學(xué)顯微鏡下觀察，其大小為(0.6～1.2)μm×(3.0～7.0)μm，端圓，中間部分輕度膨脹，單個(gè)或成對(duì)，短鏈，偶見(jiàn)有絲狀菌體，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)；孢子卵圓，偏心或次端生芽孢；在厭氧瓊脂平板上形成白色或奶油色的小規(guī)則圓形菌落；在厭氧條件下生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍20℃～60℃，最適生長(zhǎng)溫度30℃～42℃；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 2～10，最適pH值為7.0。由該菌株制成的菌劑無(wú)毒無(wú)害，耐胃液，耐膽鹽，對(duì)多種有害菌有很強(qiáng)的抑制作用，可廣泛應(yīng)用到禽、畜養(yǎng)殖業(yè)，增強(qiáng)動(dòng)物抗病能力，有望成為飼用抗生素的替代物。
文檔編號(hào)A61K35/74GK102321552SQ20111023073
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月12日
發(fā)明者付生慧, 唐澤華, 張東曉, 方莉玉, 梁運(yùn)祥, 游偉, 謝樹(shù)貴, 趙述淼, 雷紅升 申請(qǐng)人:北京金泰得生物科技股份有限公司