專利名稱：一種雞胚活性成分的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雞胚活性成分的制備方法，尤其是涉及一種具有高生產(chǎn)量的雞胚胎素的制備方法。
二.
背景技術(shù)：
雞胚胎素是一組具有高生物活性的生長刺激因子、神經(jīng)生長因子、活性多肽、活性多糖、多種氨基酸和豐富的其它營養(yǎng)物質(zhì)的小分子混合物，它們具有促進生長和活化生理功能的精華成分，能激活人體組織細胞，活化組織器官功能，調(diào)節(jié)人體各種免疫力，提高人體抵抗疾病的能力，并可延緩衰老，其中所含的生長刺激因子可以增加皮膚含水量、促進上 皮細胞的新陳代謝，經(jīng)過一定時間的應(yīng)用，可延緩真皮層衰老、萎縮，使皮膚真皮層飽滿，并可增加含水量，使表皮光滑滋潤。在雞受精卵孵化的短短過程中，發(fā)生了巨大的變化，在此變化過程中伴隨產(chǎn)生大量的生長刺激因子、神經(jīng)生長因子、活性多糖、活性多肽、多種氨基酸和豐富的其他營養(yǎng)物質(zhì)，具有極高的營養(yǎng)價值和美容藥用價值。在現(xiàn)有技術(shù)中，人們提常規(guī)提取具有較高活性的雞胚胎素的方法產(chǎn)量不是很高，本發(fā)明中選用孵育7 9天的雞受精卵，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化I 3天，然后將此雞胚作為材料提取雞胚胎素，其產(chǎn)量大大增加。這是因為植物血凝素能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫干擾素，白細胞介素等細胞因子，提高了某些活性蛋白的含量。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有的理論技術(shù)基礎(chǔ)上有所改進，選用和常規(guī)孵化不同的方式生產(chǎn)高含量的雞胚胎素。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種雞胚活性成分的制備方法，包括精選受精卵、孵化和植物血凝素尿囊腔接種，其特征是，包括下列具體步驟a :精選雞受精卵，表面常規(guī)去污，常規(guī)孵化7 9天，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化I 3天，孵化后去除蛋殼、胚體和蛋黃，將剩余物質(zhì)放入冰柜中，在(-20°C的溫度條件下，冰凍I 10小時，然后對雞胚成分進行粉碎。b :將粉碎后的雞胚成分進行打漿，打漿時在雞胚中加入4 6倍雞胚成分體積預(yù)冷至O 4°C的無菌生理鹽水,在50 80轉(zhuǎn)/分的攪拌速度下攪拌6 10分鐘。c :將打成漿的雞胚成分進行4 6次反復(fù)凍融，冰凍溫度為-20 _30°C，每次冰凍時間為I 4小時，室溫條件下融化。d :將反復(fù)凍融的雞胚成分經(jīng)20目絹布過濾。過濾后再加入4 6倍體積預(yù)冷的生理鹽水經(jīng)3 μ m過濾器再次進行過濾，獲得的濾液即為雞胚胎素溶液。e :在相對濕度小于30%的環(huán)境中，將所得到的雞胚胎素置于密閉容器中進行避光保存，以備用。所述的雞胚胎素制備方法，其中常規(guī)孵化方法中的孵化參數(shù)是
①孵化溫度36 38°C ;②孵化濕度相對濕度為40 60% ;③通風換氣保持孵蛋箱空氣中的氧含量在21%以上；④翻蛋每I 2小時翻蛋I次； 孵化至7 11天，取出孵化蛋后棄去蛋殼、雞胚胎、蛋黃。所述常規(guī)孵化7 9天，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化I 3天的方法是，將孵化7 9天的雞胚用稀釋至濃度O. I 100 μ g/ml的植物血凝素接種于尿囊腔中，每只雞胚O. 2ml，再常規(guī)孵化I 3天。所述雞胚成分粉碎的方法是將去除蛋殼、雞胚胎、蛋黃后的雞胚成分，主要成分包括尿囊液、羊水、尿囊液絨毛尿囊膜血管網(wǎng)在內(nèi)的物質(zhì)，置于低溫冰柜中-20 -30°C冰凍，冰凍I 10小時后用粉碎機將其粉碎至50 90目。所述的反復(fù)凍融是將打漿后的雞胚成分置于低溫冰柜中，將樣品冷凍至-20 -30°C后，冰凍I 4小時，然后置于室溫條件下自然融化至冰水共存時，再置于低溫冰柜中，將樣品冷凍至-20 -30°C，冰凍I 4小時，如此反復(fù)凍融3 5次。 所述的過濾方法是將反復(fù)凍融后的雞胚成分經(jīng)過20目絹布過濾，然后再經(jīng)過3μπι過濾器過濾。本發(fā)明的積極有益效果是I.本發(fā)明在簡單快速制備雞胚胎素的基礎(chǔ)上進行了改進，在常規(guī)孵化雞受精卵7 9天后將植物血凝素接種于尿囊腔中，因為植物血凝素能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫干擾素，白細胞介素等細胞因子，使得某些活性蛋白的含量得到了提高。2.本發(fā)明雞胚胎素的制備方法，保持了雞胚胎中的各種生物活性物質(zhì)。所生產(chǎn)的雞胚胎素不但營養(yǎng)機體，還能促進機體組織的代謝，對機體的免疫起到調(diào)節(jié)作用。3.本發(fā)明雞胚胎素的制備方法所獲得的雞胚胎素是一組具有高生物活性的生長刺激因子、神經(jīng)生長因子、活性多糖、活性多肽、多種氨基酸和豐富的其他營養(yǎng)物質(zhì)的小分子混合物，它們具有促生長和活化生理功能的精華成分，能激活人體組織細胞，活化組織器官功能，調(diào)節(jié)人體各種免疫力，提高人體抵抗疾病的能力，并可延緩衰老的作用。所獲得的高生物活性雞胚胎素可以被廣泛用于制備高活性生物藥品、功能性食品和化妝品等行業(yè)。
四.
具體實施例方式實施例I :精選雞受精卵，表面常規(guī)去污，常規(guī)孵化9天，所選雞受精卵為產(chǎn)后3 7天內(nèi)，夕卜形規(guī)則，無損傷。常規(guī)孵化方法中的孵化參數(shù)是①孵化溫度37°C、孵化濕度60%左右③通風換氣保持孵蛋箱空氣中的氧含量在21%以上；④翻蛋每2小時翻蛋I次，孵化至第9天時用稀釋至濃度O. I μ g/ml的植物血凝素接種于尿囊腔中，每只雞胚O. 2ml，再常規(guī)孵化2天。此時，將孵化蛋取出棄去蛋殼、雞胚胎、蛋黃。將粉碎后的雞胚成分進行打漿，打漿時在雞胚中加入4倍雞胚成分體積預(yù)冷至4°C的無菌生理鹽水，在80轉(zhuǎn)/分的攪拌速度下攪拌10分鐘，制成漿。將打成漿的雞胚成分進行6次反復(fù)凍融，冰凍溫度為_25°C，每次冰凍時間為4小時，室溫條件下融化。反復(fù)凍融后20目絹布過濾。過濾后加入6倍體積預(yù)冷的生理鹽水經(jīng)3 μ m過濾器再次進行過濾，獲得的濾液即為雞胚胎素溶液。實施例2
精選雞受精卵，表面常規(guī)去污，常規(guī)孵化8天。常規(guī)孵化方法中的孵化參數(shù)是①孵化溫度36°C、孵化濕度55%左右③通風換氣保持孵蛋箱空氣中的氧含量在21%以上；④翻蛋每I小時翻蛋I次，孵化至第8天時用稀釋至濃度9 μ g/ml的植物血凝素接種于尿囊腔中，每只雞胚O. 2ml，再常規(guī)孵化3天。此時，將孵化蛋取出棄去蛋殼、雞胚胎、蛋黃。將粉碎后的雞胚成分進行打漿，打漿時在雞胚中加入5倍雞胚成分體積預(yù)冷至4°C的無菌生理鹽水，在60轉(zhuǎn)/分的攪拌速度下攪拌10分鐘，制成漿。將打成漿的雞胚成分進行5次反復(fù)凍融，冰凍溫度為_20°C，每次冰凍時間為3小時，室溫條件下融化。反復(fù)凍融后20目絹布過濾。過濾后加入5倍體積預(yù)冷的生理鹽水經(jīng)3 μ m過濾器再次進行過濾，獲得的濾液即為雞胚胎素溶液。在相對濕度小于30%的環(huán)境中，將所得到的雞胚胎素置于密閉容器中進行避光保存，以備用。雞胚胎素活性測定I.雞胚胎素含量測定實驗如下將40只雞受精卵隨機分為兩組，每組20只，常規(guī) 孵化至第9天時第一組用稀釋至濃度O. I μ g/ml的植物血凝素接種于尿囊腔中，每只雞胚
O.2ml，再繼續(xù)孵化2天。第二組不做任何處理繼續(xù)孵化2天。詳細結(jié)果參加表I:表I :植物血凝素對活性蛋白含量的影響
權(quán)利要求
1.一種雞胚活性成分的制備方法，包括精選受精卵、孵化和植物血凝素尿囊腔接種，其特征是包括下列具體步驟 a.精選雞受精卵，表面常規(guī)去污，常規(guī)孵化7 9天，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化I 3天，孵化后去除蛋殼、胚體和蛋黃，將剩余物質(zhì)放入冰柜中，在< _20°C的溫度條件下，冰凍I 10小時，然后對雞胚成分進行粉碎； b.將粉碎后的雞胚成分進行打漿，打漿時在雞胚中加入4 6倍雞胚成分體積預(yù)冷至O 4°C的無菌生理鹽水,在50 80轉(zhuǎn)/分的攪拌速度下攪拌6 10分鐘； c.將打成漿的雞胚成分進行4 6次反復(fù)凍融，冰凍溫度為-20 -30°C，每次冰凍時間為I 4小時，室溫條件下融化； d.將反復(fù)凍融的雞胚成分經(jīng)20目絹布過濾，過濾后再加入4 6倍體積預(yù)冷的生理鹽水經(jīng)3 μ m過濾器再次進行過濾，獲得的濾液即為雞胚胎素溶液； e.在相對濕度小于30%的環(huán)境中，將所得到的雞胚胎素置于密閉容器中進行避光保存，以備用。
2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的雞胚胎素制備方法，其特征是所述常規(guī)孵化方法中的孵化參數(shù)是 ①孵化溫度36 38°C ;②孵化濕度相對濕度為40 60% ;③通風換氣保持孵蛋箱空氣中的氧含量在21%以上；④翻蛋每I 2小時翻蛋I次； 孵化至7 11天，取出孵化蛋后棄去蛋殼、雞胚胎、蛋黃。
3.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的雞胚胎素制備方法，其特征是常規(guī)孵化7 9天，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化I 3天的方法是，將孵化7 9天的雞胚用稀釋至濃度O. I 100 μ g/ml的植物血凝素接種于尿囊腔中，每只雞胚O. 2ml，再常規(guī)孵化I 3天。
4.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的雞胚胎素制備方法，其特征是所述雞胚成分粉碎的方法是將去除蛋殼、雞胚胎、蛋黃后的雞胚成分，主要成分包括尿囊液、羊水、尿囊液絨毛尿囊膜血管網(wǎng)在內(nèi)的物質(zhì)，置于低溫冰柜中-20 -30°C冰凍，冰凍I 10小時后用粉碎機械將其粉碎至50 90目。
5.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的雞胚胎素制備方法，其特征是所述的反復(fù)凍融是將打漿后的雞胚成分置于低溫冰柜中，將樣品冷凍至-20 -30°C后，冰凍I 4小時，然后置于室溫條件下自然融化至冰水共存時，再置于低溫冰柜中，將樣品冷凍至-20 -30°C，冰凍I 4小時，如此反復(fù)凍融3 5次。
6.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的雞胚胎素制備方法，其特征是所述的過濾方法是將上述反復(fù)凍融后的雞胚成分經(jīng)過20目絹布過濾，然后再經(jīng)過3 μ m過濾器過濾。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種雞胚活性成分的制備方法，首先是精選雞受精卵，將其表面進行消毒，消毒后常規(guī)孵化7～9天，然后將植物血凝素接種于尿囊腔中，繼續(xù)孵化1～3天，此時將孵化的雞胚進行如下處理去除蛋殼、棄去卵黃和胚體，將剩余物質(zhì)即雞胚成分冰凍粉碎，然后加入預(yù)冷的生理鹽水制漿，經(jīng)20目絹布和3μm過濾器過濾，最終得到的濾液即為雞胚胎素溶液。此胚胎素含有氨基酸、小分子多肽、生長調(diào)節(jié)因子、核酸衍生物等多種生物活性物質(zhì)，具有較高的營養(yǎng)價值、美容價值與藥用價值。該方法能夠大量地提取具有較高生物活性胚胎素。
文檔編號A61K8/98GK102908366SQ201110219378
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者李婷 申請人:天津澤世德生物醫(yī)藥有限公司