專利名稱：一種復方茵陳蒿制劑及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產品研究開發(fā)技術領域。本發(fā)明涉及一種復方茵陳蒿制劑及其用途。本發(fā)明產品對D31 (鰻弧菌V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻膠弧菌V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibrio vulnificus)具有抑菌作用，可開發(fā)相應制劑用于防治水產養(yǎng)殖過程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產品適合工業(yè)化生產。
背景技術：
近年來我國大力發(fā)展海水養(yǎng)殖業(yè)，但因養(yǎng)殖面積過速擴展、養(yǎng)殖密度過高和管理不當，養(yǎng)殖魚類疾病繁生，造成了巨大的經濟損失。這其中由D31(鰻弧菌 V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌 V. harveyi)、D61(溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、 D230 (Vibrio vulnificus)引起的弧菌病是被公認的魚類養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的最為嚴重的病害之一，也是限制該產業(yè)發(fā)展的重要性因素，此外弧菌還可以通過食物鏈引起食物中毒，危害食用者的身體健康。然而，目前我國對于水產養(yǎng)殖動物的疾病防治主要以抗生素等化學藥物為主，但由于長期濫用已經造成了嚴重的環(huán)境污染、病菌抗藥、人畜安全受到威脅等一系列問題。相比較化學藥物，植物源抑菌藥物具有殺菌功效較強，毒性較低，不易產生抗藥性，以及成本低廉等優(yōu)點，因此從植物中尋找抑菌活性物質是保障魚類養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)步發(fā)展的一條有效途徑。但是令人遺憾的是近年來從事致魚病菌抑菌活性植物篩選工作卻與其優(yōu)點相背離，一味的追求強效殺菌活性，使得被篩選植物聚集到高毒高成本的一類植物中，這使得植物源殺菌劑的開發(fā)普及停滯不前，因此探討開發(fā)高效、低毒、價廉的植物源殺菌劑刻不容緩。茵陳蒿為屬菊科植物茵陳蒿Artemisia capillaries的莖葉。茵陳蒿煎劑對金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用。對痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、白喉桿菌、牛型及人型結核桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、腦膜炎雙球菌等有不同程度的抑制作用。茵陳蒿乙醇提取物對流感病毒有抑制作用。黃芩為唇形科植物黃.kutellaria baicalensis Georgi的根。有清熱燥濕，涼血安胎，解毒功效。主治溫熱病、上呼吸道感染、肺熱咳嗽、濕熱黃膽、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎動不安、高血壓、癰腫癤瘡等癥。黃芩的臨床應用抗菌比黃連還好，而且不產生抗藥性。連翹葉為木犀科植物連翹R)rsythia suspense(Thunb. ) Vahl.的干燥葉。連翹通常以果實入藥，對多種革蘭陽性及陰性細菌均有抑制作用.其濃縮煎劑在體外可抑制傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、白喉桿菌及霍亂弧菌、葡萄球菌、鏈球菌等。對于連翹葉抗菌作用鮮見報道。大蒜精油為蒜Allium sativum L. (Garlic)的鱗莖經水蒸氣蒸餾獲得的揮發(fā)油。 大蒜含揮發(fā)油約0.2%，油中主要成分為大蒜辣素，具有殺菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解產生。

發(fā)明內容
1、一種復方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g_3g、黃芩提取物lg_2g、連翹葉提取物lg_2g、大蒜精油 0.OOlg-O. 002go2、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干， 得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權利要求1所述的重量配比制成復方茵陳蒿制劑。3、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發(fā)明所述的涉及一種復方茵陳蒿制劑及其用途包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1 1、一種復方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g、黃芩提取物lg、連翹葉提取物lg、大蒜精油0. OOlg。2、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g，分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間1.5h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權利要求1所述的重量配比制成復方茵陳蒿制劑。
3、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。實施例2 1、一種復方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物3g、黃芩提取物2g、連翹葉提取物2g、大蒜精油0. 002g。2、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各40g，分別加入SOOmL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權利要求1所述的重量配比制成復方茵陳蒿制劑。3、權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。藥理實驗復方茵陳蒿制劑的抑菌作用實驗1材料及方法1. 1供試材料1. 1. 1供試菌株本實驗所使用的四致魚病菌均來自山東大學威海分校微生物實驗室，分別是D31 (鰻弧菌V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibriovulnif icus)。試驗中病菌用2216E固體和液體
培養(yǎng)基培養(yǎng)。2216E培養(yǎng)基蛋白胨5g，酵母膏l(xiāng)g，磷酸高鐵0. Olg，陳海水IOOOmL,煮沸的5% 氫氧化納溶液調PH值7. 6-7. 8，瓊脂15-20g (液體培養(yǎng)基不加)。1. 1.2試驗儀器超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、電子游標卡尺、離心機、旋轉蒸發(fā)儀、烘箱、中藥粉碎機、 高壓滅菌鍋等。1.1. 3供試植物樣品本實驗選取植物為茵陳蒿、黃芩、連翹葉、大蒜。1. 2實驗方法1. 2. 1植物提取物的制備及復方茵陳蒿制劑的配制分別取茵陳蒿、黃芩、連翹葉各40g，分別加入SOOmL mL乙醇，用搖床震蕩浸提 Mh，用離心機離心得上清液(1)和殘渣(1)；將殘渣(1)分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離心得上清液⑵和殘渣O)；將殘渣⑵分別加入400mL乙醇，震蕩浸提 12h，離心機離心得上清液(3)和殘渣(3)，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩、連翹葉提取物；取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL 圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間2. 0h，靜置，得大蒜精油；取茵陳蒿提取物3g、黃芩提取物2g、連翹葉提取物2g、大蒜精油0. 002g配制復方茵陳蒿制劑。以旋蒸回收乙醇做為溶劑溶解復方茵陳蒿制劑，使生藥含量為lg/mL，密封后 0 4°C冰箱保存待用。1. 2. 2復方茵陳蒿制劑對致魚病弧菌抑茵活性的測定1. 2. 2. 1菌懸液的制備菌株經活化后轉接于固體平板于培養(yǎng)24h后，挑起適量菌苔接種于液體培養(yǎng)基，而后再于振蕩培養(yǎng)箱內培養(yǎng)Mh，各錐形瓶均渾濁后涂布平板計數(shù)并稀釋至 4X108CFU/mL 備用。1. 2. 2. 2復方茵陳蒿制劑對致魚病弧菌抑菌活性試驗采用平板擴散法，制備直徑為IOcm的2216E固體培養(yǎng)基平板，要求每個平板厚度 4mm，加100 μ 1各菌懸液涂布均勻后放置30min，平板底部畫線分三區(qū)，于每個區(qū)中央打孔器各打一孔，打孔器直徑為5mm ；試驗以多菌靈為陽性對照，多菌靈濃度為lmg/mL，以旋蒸回收乙醇做為溶劑對照，每種菌做三個平行，于各個孔滴加復方茵陳蒿制劑30 μ L，結束后放置30min。放置完畢后將平板置于培養(yǎng)箱內培養(yǎng)Mh，游標卡尺測量抑菌圈直徑。抑菌效果的判定參照參考文獻，抑菌圈直徑> 20mm為極敏，以“***”表示； 15-19mm為高敏，以“**”表示；10-14為中敏，以“*”表示；10以下為低敏，以“_”表示。2 結果2. 1復方茵陳蒿制劑對致魚病弧菌的抑制作用見表1。表1復方茵陳蒿制劑對致魚病弧菌的抑制活性
供試植物
D31
VanuguiUarum
D32 Vharveyi
D230 Vibrio vulnificus
A
B
A
B
D61
V.algmolyticus
A
溶劑對照5.00 -5.005.005.00-多菌靈26.5522.4925.97***21.32***復方鹵陳蒿制劑22.0121.5823.1118.86**
B 注“A”表示抑菌圈直徑/mm ；“B”表示相對敏感性。
權利要求
1.一種復方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g-3g、黃芩提取物lg_2g、連翹葉提取物lg_2g、大蒜精油 0.OOlg-O. 002g。
2.權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機離心得上清液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣分別加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機離心得上清液和殘渣；步驟(三)將(二)中殘渣分別加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機離心得上清液和殘渣，殘渣棄去，合并三次上清液，過濾，得濾液，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權利要求1所述的重量配比制成復方茵陳蒿制劑。
3.權利要求1所述的一種復方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對鰻弧菌、哈維氏弧菌、 溶藻膠弧菌和嗜鹽弧菌具有抑菌作用。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產品研究開發(fā)技術領域。本發(fā)明涉及一種復方茵陳蒿制劑及其用途。分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉分別加入乙醇，用搖床震蕩浸提，用離心機離心得上清液；重復提取2次，合并三次上清液，過濾，將濾液進行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；取搗碎的大蒜，加入圓底燒瓶中，進行水蒸氣蒸餾，得大蒜精油；取茵陳蒿提取物、黃芩提取物、連翹葉提取物和大蒜精油制成復方茵陳蒿制劑。本發(fā)明產品對鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌和嗜鹽弧菌具有抑菌作用，可開發(fā)相應制劑用于防治水產養(yǎng)殖過程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產品適合工業(yè)化生產。
文檔編號A61K36/8962GK102266469SQ20111008205
公開日2011年12月7日 申請日期2011年3月28日 優(yōu)先權日2011年3月28日
發(fā)明者張崇禧, 潘漫, 盛園園, 程傲星, 邢翔, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校