專利名稱：具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分及制備方法和制 藥用途。
背景技術(shù)：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重 威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質(zhì)，是發(fā)現(xiàn)、開發(fā)新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產(chǎn)物中提取 活性物質(zhì)，用于開發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活 性物質(zhì)，開發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣 闊發(fā)展前景。赤芍為毛茛科芍藥(Paeonialactiflora Pall.)或川赤芍(A veitchii Lynch.)的干燥根。其味苦，微寒，歸肝經(jīng)，具有清熱涼血，散瘀鎮(zhèn)痛之功效?，F(xiàn)代研究表明， 赤芍中主要含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥花苷、沒食子酰芍藥 苷等苷類化合物，此外還有環(huán)烯醚萜類、三萜類、酚及其苷類、留醇及其苷類、鞣質(zhì)、酸類、酯 類、黃酮類、酮類、烷類、揮發(fā)油、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪油、樹脂、黏液質(zhì)、生物堿、色素、微 量元素等物質(zhì)。赤芍是傳統(tǒng)的活血化瘀類中藥，有較強(qiáng)的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，該藥也能擴(kuò)張冠 脈血管，增加冠脈血流量從而增加心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量，保護(hù)缺血心肌，提高心肌對(duì)低氧的耐 受性，降低肺血管阻力，減輕后負(fù)荷。同時(shí)赤芍能夠降低門脈高壓，對(duì)微循環(huán)也有影響。藥理 學(xué)研究表明赤芍能抑制血小板聚集，改善紅細(xì)胞的通透性，增加紅細(xì)胞對(duì)低滲張力的抗性， 有一定穩(wěn)定紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的作用。另外，赤芍總苷能明顯延長(zhǎng)大鼠和小鼠的凝血時(shí)間，并能 延長(zhǎng)電刺激大鼠頸總動(dòng)脈血栓形成的時(shí)間，提示赤芍總苷通過對(duì)凝血系統(tǒng)和血小板功能的 影響而產(chǎn)生抗血栓作用。赤芍具有以上對(duì)心血管系統(tǒng)的明顯藥理作用，因此，從赤芍中分離 出有效組分，開發(fā)出治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種赤芍有效組分，通過以下步驟制備獲得將赤芍藥材 粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用 反相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改用高 濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；再用制備液相色譜繼 續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗 脫，收集洗脫液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。低濃度甲醇為3% -8%甲醇溶液，高濃度甲醇50% -80%甲醇溶液。具體制備步驟如下取赤芍藥材，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙 醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小 時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用 ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用60%甲醇溶 液作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制 備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18 ； 10. Omm ‘ 250mm，5mm)，流動(dòng)相為 水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為90%的水，流動(dòng)相B為10%的乙腈 溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為75%的水，流動(dòng)相B為25%的乙腈溶液；時(shí)，流動(dòng)相A為 70%的水，流動(dòng)相B為30%的乙腈溶液；40min時(shí)，流動(dòng)相A為5%的水，流動(dòng)相B為95%的 乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品經(jīng)制備液相色譜分離，在31. (Γ35. Imin時(shí)間 段收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述赤芍有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中 的應(yīng)用。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的赤芍有效組分對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。本發(fā)明提供的赤芍有效組分作為活性成分，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑 學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發(fā)明提供的赤芍有效組分可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā) 明提供的制備方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控 制。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容和有益效果，該實(shí)施例僅用 于說明本發(fā)明而非對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例一赤芍有效組分的制備
將赤芍藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液I，棄之。藥渣加入乙醇，加 熱提取得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn) 行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用高濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗 脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，經(jīng)制備液相色譜分離， 在31. (Γ35. Imin時(shí)間段收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分。實(shí)施例二赤芍有效組分的制備
取赤芍藥材250g，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)， 提取2次，濾液合并得提取液I，藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合 并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn) 行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用60%甲醇溶液作為流動(dòng)相， 得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離 條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18 ； 10. Omm ‘ 250mm，5mm)，流動(dòng)相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下=Omin時(shí)，流動(dòng)相A為90%的水，流動(dòng)相B為10%的乙腈溶液；15min時(shí)， 流動(dòng)相A為75%的水，流動(dòng)相B為25%的乙腈溶液；時(shí)，流動(dòng)相A為70%的水，流動(dòng) 相B為30%的乙腈溶液；40min時(shí)，流動(dòng)相A為5%的水，流動(dòng)相B為95%的乙腈溶液；流速 為3ml/min，柱溫為室溫；樣品經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段31. (Γ35. Imin收集溶液，溶 液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。實(shí)施例三滴丸制劑的制備
取赤芍有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實(shí)施例四凍干粉針劑的制備
取赤芍有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻后，分裝400支，冷凍干燥，即得。實(shí)施例五赤芍組分的活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
1.赤芍組分對(duì)H》2損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細(xì)胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分孵育M h，采用MTT法測(cè)定細(xì) 胞活力。結(jié)果表明，該組分對(duì)H2A損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)率為92. 30%。2.赤芍組分對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，在缺氧小室中培養(yǎng)6 h。 缺氧結(jié)束后，取出細(xì)胞培養(yǎng)板加入經(jīng)無糖Hank’ s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分，在 正常培養(yǎng)條件下孵育6 h，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結(jié)果表明，該組 分對(duì)缺氧復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞保護(hù)率為41. 30%。
權(quán)利要求
1.一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得將赤芍 藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸 膏，用反相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改 用高濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品，再用制備液相色 譜繼續(xù)分離得到的樣品，制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯 度洗脫，收集洗脫液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分，其特征在于，低濃 度甲醇為3 % -8 %甲醇溶液，高濃度甲醇50 % -80 %甲醇溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分，其特征在于，通過 以下步驟獲得取赤芍藥材，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1 小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I，藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小時(shí)，提取2次， 濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，采用ODS-C18柱 對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用60%甲醇溶液作為流 動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品，再用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，制備色譜 的分離條件色譜柱為半制備柱，Lichrospher C18 ； 10. Omm ‘ 250mm，5mm，流動(dòng)相為水A和 乙腈 B，梯度洗脫程序?yàn)?0min, 10%B ； 15min,25%B ；34min,30%B ；40min,95%B ；流速為 3ml/ min，柱溫為室溫；樣品經(jīng)制備液相色譜分離，在31. (Γ35. Imin時(shí)間段收集溶液，溶液經(jīng)濃 縮干燥后得到有效組分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分在制備治療心血 管疾病的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由赤芍有效組分加入藥劑學(xué)上 可接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑制備方法制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的制劑包括液體制劑或固體制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有心肌保護(hù)作用的赤芍有效組分的制備方法及用途。藥材通過加熱提取，濃縮，反相硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明提供的赤芍有效組分具有心肌保護(hù)作用，可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)A61K36/71GK102125609SQ20111005763
公開日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2011年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月10日
發(fā)明者李云飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)