專利名稱：Il-17家族細(xì)胞因子組合物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域是蛋白生物化學(xué)和免疫學(xué)。更具體地，該領(lǐng)域涉及修飾的免疫調(diào)節(jié)多肽。 政府資助本發(fā)明在國(guó)立衛(wèi)生研究院分配的政府支持(AI51321)下完成。美國(guó)政府具有本發(fā)明的某些權(quán)利。背景免疫系統(tǒng)保護(hù)個(gè)體免于感染性病原體(例如病毒、細(xì)菌和多細(xì)胞生物體)以及癌癥和腫瘤。免疫系統(tǒng)包括許多淋巴樣和骨髓樣細(xì)胞類型，諸如嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞(DC)、嗜酸性粒細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞。這些細(xì)胞能夠產(chǎn)生稱作細(xì)胞因子的信號(hào)傳遞蛋白。細(xì)胞因子是可溶性的小蛋白，其介導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)，包括誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化和/或遷移，以及調(diào)節(jié)許多細(xì)胞類型的生長(zhǎng)和分化(參見，例如，Arai 等 A ,Annu. Rev. Biochem. 5P: 783 (1990) ;Mosmann, Curr. Opin. Tmmunol5:311(1991) ;Paul和Seder, Cell76:241 (1994))。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的免疫功能也可以包括炎性應(yīng)答，其特征在于免疫細(xì)胞的全身性或局部性積累。盡管它們確實(shí)具有保護(hù)宿主的作用，但當(dāng)所述應(yīng)答涉及過度的和/或慢性的炎癥時(shí)，這些免疫應(yīng)答可以產(chǎn)生病理學(xué)后果，如在自身免疫障礙(諸如多發(fā)性硬化)和癌癥/腫瘤疾病中(Oppenheim和Feldmann (編)Cytokine Reference, Academic Press,San Diego, CA(2001);von Andrian 和 Mackay NewEngl. J. Med. 343:1020 (2000) ; Davidson 和 Diamond, New Engl. J. Med. 345:340 (2001) ; Lu等人，Mol.Cancer Res. 4:221 (2006) ;Dagleish 和 0 1 Byrne,Cancer TreatRes. 130:1(2006))。構(gòu)成細(xì)胞因子群體的蛋白包括白介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子和其它調(diào)節(jié)分子。例如，人白介素-17參與誘導(dǎo)和介導(dǎo)促炎性應(yīng)答。IL-17通常與變應(yīng)性應(yīng)答有關(guān)。IL-17誘導(dǎo)許多細(xì)胞類型(成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)產(chǎn)生許多其它細(xì)胞因子(諸如IL-6、G-CSF、GM-CSF、IL-I β、TGF-β、TNF_a )、趨化因子(包括IL-8、GR0-a和MCP-I)和前列腺素(例如PGE2)。近年來，大量證據(jù)提示，Thl7細(xì)胞在眾多自身免疫和炎性病況的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用。因此，細(xì)胞因子和它們的受體的經(jīng)證實(shí)的體內(nèi)活性說明了其它細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、細(xì)胞因子激動(dòng)劑和細(xì)胞因子拮抗劑的臨床潛力和需求。例如，促炎癥細(xì)胞因子家族的經(jīng)證實(shí)的體內(nèi)活性說明了促炎癥分子諸如IL-17和IL-23的拮抗劑的巨大臨床潛力和需求。日益需要可用于預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物的疾病和障礙的新的組合物。

發(fā)明內(nèi)容
提供了涉及細(xì)胞因子再工程化(reengineering)的組合物和方法。在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種分離的抗體(包括全長(zhǎng)抗體、抗體片段和結(jié)構(gòu)域)，所述抗體特異性地結(jié)合IL-17細(xì)胞因子多肽，例如，通過結(jié)合下述的一種或多種IL-17F 的大約氨基酸 21-41、42-78、82-103 或 104-133 ;IL_17A 的大約氨基酸 21-39、40-76,80-101 或 102-131 ;IL_17C 的大約氨基酸 44_65、78_117、121-143 或 153-179 ；IL-17D 的大約氨基酸 32-53、66-105、110-131 或 134-163 ;IL_17E 的大約氨基酸 27-49、50-87,93-114 和 / 或 120-148 ；或 IL-17B 的大約氨基酸 32_53、66_105、110-131 或135-158，根據(jù)圖4D中的編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合在IL-17細(xì)胞因子的區(qū)域I中的表位，其中區(qū)域I對(duì)應(yīng)著IL-17F的大約氨基酸21-41、IL-17A的大約氨基酸21-39、IL-17C的大約氨基酸44-65、IL-17D的大約氨基酸32-53、IL-17E的大約氨基酸27-49或IL-17B的大約氨基酸32-53，它們根據(jù)圖4D中的編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合在IL-17細(xì)胞因子的區(qū)域2中的表位，其中區(qū)域2對(duì)應(yīng)著IL-17F的大約氨基酸42-78、IL-17A的大約氨基酸40-76、IL-17C的大約氨基酸78-117、IL-17D的大約氨基酸66-105、IL-17E的大約氨基酸50-87或IL-17B的大約氨基酸66-105，它們根據(jù)圖4D中的編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合在IL-17細(xì)胞因子的區(qū)域3中的表位，其中區(qū)域3對(duì)應(yīng)著IL-17F的大約氨基酸82-103、IL-17A的大約氨基酸80-101、IL-17C的大約氨基酸121-143、IL-17D的大約氨基酸110_131、IL_17E的大約氨基酸93-114或IL-17B的大約氨基酸110-131，它們根據(jù)圖4D中的編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合在IL-17細(xì)胞因子的區(qū)域4中的表位，其中區(qū)域4對(duì)應(yīng)著IL-17F的對(duì)應(yīng)著大約氨基酸104-133、IL-17A的大約氨基酸102-131、IL-17C的大約氨基酸153-179、IL-17D的大約氨基酸134-163、IL-17E的大約氨基酸120-148或IL-17B的大約氨基酸135-158，它們根據(jù)圖4D中的編號(hào)。在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種分離的抗體(包括全長(zhǎng)抗體、抗體片段和結(jié)構(gòu)域)，其特異性地結(jié)合IL-17RA (SEQ ID NO: 14)的氨基酸22-36、氨基酸83-96、氨基酸118-147、氨基酸 152-179 或氨基酸 256-271。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種分離的抗體(包括全長(zhǎng)抗體、抗體片段和結(jié)構(gòu)域)，其特異性地結(jié)合IL-17RB (SEQ ID NO: 15)的氨基酸25-39、氨基酸86-100、氨基酸126-155、氨基酸160-187或氨基酸254-269，和/或SEQ ID NO: 15的氨基酸32-44 (例如，38-44),82-98 (例如，88-98)和 252-269 (例如，256-263)。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種分離的抗體(包括全長(zhǎng)抗體、抗體片段和結(jié)構(gòu)域)，其特異性地結(jié)合IL-17RC (SEQ ID NO: 16)的氨基酸15-30、氨基酸70-84、氨基酸96-124、氨基酸 129-156 或氨基酸 227-237，和 / 或 SEQ ID NO: 16 的氨基酸 24_35、78_91 和248-257。本公開內(nèi)容也表征了 一種分離的白介素-17F (IL-17F)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID NO: 12的大約21-41、42-78、82_103和104-133，且例如其中所述多肽包括與SEQ IDNO: 12具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有ιοο%同一11"生的序列； 一種分離的白介素-17A (IL-17A)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID勵(lì):2的大約21-39、40-76、80-101和102-131，且例如其中所述多肽包括與SEQ IDNO: 2具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列； 一種分離的白介素-17B (IL-17B)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID N0:4的32-53、66-105、110-131和135-158，且例如其中所述多肽包括與SEQ ID N0:4具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列；
一種分離的白介素-17C (IL-17C)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID N0:6的大約44-65、78-117、121-143和153-179，且例如其中所述多肽包括與SEQ IDNO: 6具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一1丨生的序列； 一種分離的白介素-17D (IL-17D)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID N0:8的32-53、66-105、110-131和134-163，且例如其中所述多肽包括與SEQ ID N0:8具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一11"生的序列； 一種分離的白介素-17E (IL-17E)多肽，其中一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變成任何其它氨基酸或被刪除SEQ ID NO: 10的27-49、50-87、93-114和120-148，且例如其中所述多肽包括與SEQ ID NO: 10具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性、但不具有100%同一性的序列。所述多肽可以包括另外的特征，包括N-和C-端序列，諸如標(biāo)簽和免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種組合物，所述組合物包括第一種和第二種IL-17多肽，其中所述第一種和第二種多肽中的至少一種是修飾的IL-17多肽(例如，突變的IL-17多肽)。例如，所述組合物包括與第二種IL-17多肽可操作地連接的第一種修飾的IL-17多肽(例如，突變的)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二種IL-17多肽也是修飾的(例如，突變的)IL_17多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二種IL-17多肽與天然存在的IL-17多肽(例如，成熟的人 IL-17，例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F)相同。所述第一種和第二種多肽可以相互作用，以形成與IL-17 二聚體(例如，單鏈二聚體)相對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)。第一種多肽可以位于第二種多肽的N-端，反之亦然。所述多肽鏈還可以包括其它元件；例如，它可以是融合蛋白。相對(duì)于參照IL-17多肽(諸如人IL-17，例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F)，一種或兩種多肽可以是修飾的，例如，突變的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種和第二種多肽是相同多肽鏈的組分。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種和第二種多肽通過卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域或亮氨酸拉鏈可操作地相連。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種多肽包括修飾的IL-17A多肽(例如，突變的人IL-17A，其與SEQ ID NO: 2或20具有例如至少85、90、95或98%同一性)，且所述第二種多肽包括選自下述的修飾的 IL-17 多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F(例如，突變的人IL-17細(xì)胞因子，其與這樣的細(xì)胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95或98%同一性，例如，如在本文中公開的)，或與天然成熟形式(例如，SEQ ID N0:2、4、
6、8、10、12或20)具有100%同一性的多肽。因此，示例性的組合物包括與A/A同二聚體或A/F異二聚體相對(duì)應(yīng)的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種多肽包括修飾的IL-17F多肽(例如，突變的人IL-17F，其與SEQ ID NO: 12具有例如至少85、90、95或98%同一性)，且所述第二種多肽包括選自下述的修飾的 IL-17 多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和 IL-17F (例如，突變的人IL-17細(xì)胞因子，其與這樣的細(xì)胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95或98%同一性，例如，如在本文中公開的)，或與天然成熟形式(例如，SEQ ID N0:2、4、6、 8、10、12或20)具有100%同一性的多肽。因此，示例性的組合物包括與F/F同二聚體或A/F異二聚體相對(duì)應(yīng)的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種多肽包括修飾的IL-17細(xì)胞因子多肽(例如，突變的人 IL-17B、IL-17C、IL-17D 或 IL-17E，其與 SEQ ID N0:4、6、8 或 10 具有例如至少 85、90,95%同一性)，且所述第二種多肽包括選自下述的修飾的IL-17多肽IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F (例如，突變的人IL-17細(xì)胞因子，其與這樣的細(xì)胞因子的天然成熟形式具有例如至少85、90、95%同一性，例如，如在本文中公開的)。因此，示例性的組合物包括與B/B、C/C、D/D、E/E同二聚體和各種異二聚體相對(duì)應(yīng)的多肽。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種組合物，其包含分離的多肽，所述多肽包含IL-17RA的IL-17結(jié)合決定簇，其中所述多肽與IL-17RA的胞外結(jié)構(gòu)域不同。例如，所述 IL-17 結(jié)合決定簇選自IL-17RA (SEQ IDNO: 14)的氨基酸 22_36、83_96、118-147、152-179和256-271。所述結(jié)合決定簇可以是肽，例如，包括IL-17RA的氨基酸22-36、83-96、118-147、152-179和256-271或由其組成的肽。所述結(jié)合決定簇可以是，例如，IL-17F、IL-17A或IL-17C結(jié)合決定簇。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多肽能夠結(jié)合IL-17F和/或IL-17A。所述多肽與IL-17A的結(jié)合可以包括，與一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸接觸IL-17A的大約21-39、40-76、80-101和102-131。所述多肽與IL-17C的結(jié)合可以包括，與一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸接觸IL-17C的大約44-65、78-117、121-143和153-179。在一些實(shí)施方案中，所述多肽能夠形成半胱氨酸結(jié)基序或四螺旋束基序。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多肽可操作地結(jié)合IL-17RA多肽(例如，IL-17RA多肽的胞外區(qū))和IL-17RC多肽(例如IL-17RC多肽的胞外區(qū))。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種組合物，其包含分離的多肽，所述多肽包含IL-17RC的IL-17結(jié)合決定簇，其中所述多肽與IL-17RC的胞外結(jié)構(gòu)域不同。所述多肽可以與結(jié)合配偶體可操作地結(jié)合，所述結(jié)合配偶體選自IL-17RA多肽(例如，IL-17RA多肽的胞外區(qū))和IL-17RC多肽(例如，IL-17RC多肽的胞外區(qū))。所述多肽可以結(jié)合IL-17細(xì)胞因子，例如，結(jié)合IL-17A并接觸一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸IL-17A的大約21_39、40_76、80-101和102-131，或結(jié)合IL-17C并接觸一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸IL_17C的大約44-65、78-117、121-143 和 153-179。在另一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種IL-17R結(jié)合蛋白，其包括第一和第二IL-17亞基，且其中所述亞基形成二聚體，所述二聚體具有第一面和第二面，所述第一面能夠與第一 IL-17受體亞基相互作用，所述第二面與對(duì)應(yīng)的天然IL-17蛋白相比，具有減少的與第二 IL-17受體亞基相互作用的能力或不具有該能力。例如，所述第一亞基和第二亞基彼此不同。每個(gè)亞基可以與成熟的IL-17細(xì)胞因子具有至少85、87、90、92、94、95、96、97或98%同一性，所述成熟的IL-17細(xì)胞因子是例如人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或20)或鼠IL-17細(xì)胞因子，例如，對(duì)于兩個(gè)亞基而言，相同的參照細(xì)胞因子，或不同的參照細(xì)胞因子(例如，IL-17A和IL-17F)。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)亞基與成熟的IL-17細(xì)胞因子在與SEQ IDN0:127的1-127 或 SEQ ID NO:20 的 1-126 相對(duì)應(yīng)的區(qū)域中具有至少 85、87、90、92、94、95、96、97 或98%同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)亞基與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ IDN0:2、4、6、8、
10、12或20)相比具有1、2、3、4、5、6、7或更多個(gè)置換或刪除，優(yōu)選地少于12、10、9、8、7、6或5個(gè)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)亞基與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或20)相比具有I至5個(gè)、7個(gè)或8個(gè)突變，另一個(gè)亞基與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQID N0:2、4、6、8、10、12或20)相比具有至少1、2、3、4或5個(gè)氨基酸的C-端刪除和任選的1-5個(gè)置換。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述二聚體的第二面包含至少1、2或3個(gè)突變，例如，至少I、2或3個(gè)置換。例如，所述二聚體的第二面具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)突變(例如，置換)。所述突變可以位于一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)。所述第一面可以是這樣的，它與成熟的IL-17細(xì)胞因子相比不含有任何突變，所述成熟的IL-17細(xì)胞因子例如成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12 或 20)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述二聚體的第二面包含至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)I中的突變，例如，至少1、2或3個(gè)置換。例如，所述二聚體的第二面具有I至3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)在位點(diǎn)I中的突變(例如，置換)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述二聚體的第二面包含至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)2中的突變，例如，至少1、2或3個(gè)置換。例如，所述二聚體的第二面具有I至3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)在位點(diǎn)2中的突變(例如，置換)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述二聚體的第二面包含至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)3中的突變，例如，至少1、2或3個(gè)置換。例如，所述二聚體的第二面具有I至3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或6個(gè)在位點(diǎn)3中的突變(例如，置換)。所述第一亞基和第二亞基可以共價(jià)地連接，例如，它們可以是相同多肽鏈的組分。例如，它們可以通過柔性連接物相連。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合蛋白具有小于1%的IL-17A/A的細(xì)胞因子活性。例如，它基本上不激動(dòng)IL-17受體,例如,基于本文所述的試驗(yàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合蛋白對(duì)IL-17RA或IL-17RC的親和力不超過100倍，50倍，20倍，10倍弱于IL-17A/A、IL-17F/F或IL-17A/F。通常，所述結(jié)合蛋白不會(huì)結(jié)合IL-17RA和IL-17RC并形成含有結(jié)合蛋白以及IL-17RA和IL-17RC的復(fù)合物。所述結(jié)合蛋白可以具有本文所述的其它特征和性質(zhì)。本文所述的結(jié)合蛋白可以包括2個(gè)IL-17亞基，其中每個(gè)亞基與成熟的IL-17細(xì)胞因子(例如，人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12或20))具有至少85、87、90、92、94、95、96、97或98%同一性，并且共同地，所述亞基相對(duì)于這樣的成熟的IL-17多肽包括至少2、3、4、5或更多個(gè)下述的置換或刪除 在第一亞基中，在與R47 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，R47E、R47A 或 R47D)， 在第一亞基中，在與S65 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，S65K、S65R 或 S65W)， 在第一亞基中，在與W68 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，W68A、W68V、W68S、W68Q 或 W68N)， 在第一亞基中，在與R102 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，R102A、R102V、R102S 或 R102T), 在第二亞基中，在與N89 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，N89A或N89V)， 在第二亞基中，在與Q95 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換(例如，Q95A或Q95W)，和 在第二亞基中，在與127-132 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的一個(gè)或多個(gè)置換或刪除(例如，至少與128-132相對(duì)應(yīng)的位置的刪除)。例如，針對(duì)上面指出的位置，所述結(jié)合蛋白可以具有至少一個(gè)或多個(gè)的下述突變組合(例如，配對(duì))(R47、S65)、(R47、W68)、(R47、R102)、(S65、W68)、(S65、R102)、(R47、N89)、(R47、Q95)、(N89、R102)、(N89、刪除 128-132)、(R47、N89、R102)、(N89、Q95)、(W68、R102)、(N89、W68)、(R47、S65、N89)、(R47、W68、N89)、(R47、N89、R102)、(R47、W68、N89、刪除 128-132)、(R47、S65、N89、刪除 128-132)、(S65、N89、刪除 128-132)、(R47、S65、刪除
128-132)和(N89、Q95、刪除128-132)。所述結(jié)合蛋白可以具有本文所述的其它特征和性質(zhì)。還表征了核酸，其包括編碼本文所述的多肽的序列，包括編碼本文所述的一種或多種細(xì)胞因子亞基的序列。所述核酸可以另外包括載體序列、以及轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列。還表征了含有這樣的核酸的宿主細(xì)胞，和包括表達(dá)這樣的核酸(例如，在細(xì)胞中)的方法。所述方法可以另外包括，回收蛋白，例如，通過從細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)基中純化?，F(xiàn)在，將在下面的詳細(xì)描述和權(quán)利要求書中更具體地描述其它特征和優(yōu)點(diǎn)。附圖
簡(jiǎn)述圖I是IL-17RA-IL-17F復(fù)合物的結(jié)構(gòu)的示意圖。通過球-和-棒(ball-and-stick)表示法顯示了與IL-17F(鏈A和鏈B)結(jié)合的IL-17RA，N-連接的聚糖的條帶圖。IL-17RA包含2個(gè)通過短螺旋連接物相連的纖連蛋白III型結(jié)構(gòu)域(Dl和D2)。右側(cè)的圖顯示了繞著y-軸旋轉(zhuǎn)60°的復(fù)合物。圖2的示意圖證實(shí)了 IL-17F與IL-17RA的結(jié)合由3個(gè)獨(dú)特界面介導(dǎo)。(A)位點(diǎn)2，IL-17RA Dl C-C’環(huán)插入在N-端螺旋區(qū)和IL-17F鏈B的鏈I和2之間。N-端螺旋在未結(jié)合構(gòu)象和結(jié)合構(gòu)象之間經(jīng)歷構(gòu)象變化。(B)位點(diǎn)2,knob-in_hole IL-17F結(jié)合槽互補(bǔ)性的表面表示。(C)位點(diǎn)1，IL-17RA Dl N-端結(jié)合位點(diǎn)。(D)位點(diǎn)3，IL-17RA D2結(jié)合位點(diǎn)。接觸殘基被顯示為棒模型。虛線表示氫鍵和鹽橋。圖3是異二聚的IL-17信號(hào)傳遞復(fù)合物的裝配和模型。(A)通過表面等離子體共振(SPR)測(cè)量IL-17受體-細(xì)胞因子親和力。將IL-17RA、IL-17RB和IL-17RC固定化在SPR芯片表面上，測(cè)量IL-17A、IL-17F或IL-17E的結(jié)合親和力。在指明的情況下，然后測(cè)量第二受體與在芯片上的預(yù)裝配的受體-細(xì)胞因子復(fù)合物的結(jié)合親和力。對(duì)于動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)(前3行)，將代表性的SPR傳感圖顯示為彩色線，將曲線擬合顯示為黑線。針對(duì)應(yīng)答(RU，共振單位)和以秒(S)為單位的時(shí)間繪圖。注射濃度顯示在傳感圖的右側(cè)。對(duì)于平衡實(shí)驗(yàn)(第4行)，針對(duì)代表性實(shí)驗(yàn)的最大應(yīng)答(RU)和注射濃度(M)繪圖；將曲線擬合顯示為黑線，將解離常數(shù)(Kd)標(biāo)記為垂直線。插圖顯示了結(jié)合事件的圖形表示。將Kd報(bào)告為至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值土平均值標(biāo)準(zhǔn)誤差。(B)異二聚的信號(hào)傳遞復(fù)合物形成模型。假定兩種受體以相同朝向結(jié)合IL-17F，建立第二受體(紅紫色)的模型。受體的C-端結(jié)構(gòu)域(D2)變得緊鄰，如通過框突出顯示的。圖4的示意圖顯示了結(jié)合界面和保守的IL-17殘基。IL-17F的表面表示是白色，條帶形式的IL-17RA是黃色。(A)IL-17RA-IL-17F接觸殘基用青色突出顯示。(B)將在IL-17A和IL-17F中保守的殘基映射到IL-17F結(jié)構(gòu)上；以點(diǎn)刻法表示相同的殘基，以淺粉紅色表示保守置換。(C)指明了在4、5或6個(gè)IL-17細(xì)胞因子家族成員中相同的殘基，還鑒定了在所 有6個(gè)細(xì)胞因子之間的保守置換。(D)人IL-17細(xì)胞因子的比對(duì)。在IL-17RA-IL-17F結(jié)構(gòu)中形成接觸的殘基用在IL-17F序列上和在比對(duì)的下方的黑框突出顯示。以點(diǎn)刻法表示在4、5或6個(gè)細(xì)胞因子中相同的殘基；還用標(biāo)記在所有6個(gè)細(xì)胞因子中相同的殘基；用‘’標(biāo)記保守基團(tuán)。所述序列分別對(duì)應(yīng)著SEQ ID N0:12、2、6、8、10和4。圖5是IL-17RA-IL-17F受體復(fù)合物與同二聚的半胱氨酸-結(jié)生長(zhǎng)因子受體復(fù)合物的對(duì)比。(A) IL-17RA-IL-17F、(B) P75NTR-NGF 和(C) TrkA-NGF 被顯示為條帶模型。詳細(xì)描述為了更容易地理解本發(fā)明，在下面以及在本說明書中定義了某些術(shù)語和短語。定義本文使用的術(shù)語“有效量”表示，引起希望的生物學(xué)應(yīng)答所需的量。藥物的有效量可以隨諸如下述因素而變化希望的生物學(xué)終點(diǎn)、要遞送的藥物、任何其它有活性的或無活性的成分的組成等。術(shù)語“表達(dá)”在本文中用于表示，從DNA產(chǎn)生多肽的過程。所述過程包括，基因轉(zhuǎn)錄成mRNA，和該mRNA翻譯成多肽。根據(jù)它所使用的背景，“表達(dá)”可能表示RNA、蛋白或二者的產(chǎn)生。本文使用的術(shù)語“基因產(chǎn)物”是指，由該基因編碼的RNA (例如，信使RNA (mRNA)或微RNA (miRNA))或蛋白。本文使用的術(shù)語“分離的”表示，基本上純的分子。分離的蛋白可以是基本上純的，例如，60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%不含有其它不同的蛋白分子。本文使用的術(shù)語“調(diào)節(jié)”和“調(diào)控”通常表示，被特異性地靶向的基因(包括它們的RNA和/或蛋白產(chǎn)物)、信號(hào)傳遞途徑、細(xì)胞和/或被靶向的表型的下調(diào)(即，抑制或壓抑)，或被靶向的基因的上調(diào)(即，誘導(dǎo)或增加)。例如，“調(diào)節(jié)”和“調(diào)控”可以表示IL-17受體信號(hào)傳遞的下調(diào)?！盎颊摺被颉笆茉囌摺笔侵覆溉閯?dòng)物,例如人,其具有疾病或病癥(諸如炎性疾病)或處于發(fā)展所述疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，或其具有或被診斷為具有炎性疾病，或其能夠以其它方式從本文所述的組合 物和方法獲益。本文使用的術(shù)語“減少”表示，表達(dá)或基因產(chǎn)物活性的任何抑制、減少、下降、壓抑、下調(diào)或阻止。例如，表達(dá)或活性的水平可以是，例如，未抑制的表達(dá)或活性的100%或小于100%，例如小于95%、小于90%、小于85%、小于80%、小于75%、小于70%、小于65%、小于60%、小于55%、小于50%、小于45%、小于40%、小于35%、小于30%、小于25%、小于20%、小于15%、小于10%或小于5%ο術(shù)語“治療”或“醫(yī)治”或“減輕”或“改善”表示，治療性處理和預(yù)防性或防止性措施，其中目的是阻止或減慢(減輕)被靶向的病理學(xué)狀況或障礙。術(shù)語“IL-17受體”是指，結(jié)合IL-17細(xì)胞因子的蛋白，諸如IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE受體，特別是這些受體的人同種型和這些受體的胞外結(jié)構(gòu)域。如下計(jì)算2個(gè)序列之間的“同源性”或“序列同一性”(這2個(gè)術(shù)語在本文中可互換地使用)。為了最佳比較的目的，比對(duì)序列(例如，為了最佳比對(duì)，可以在第一個(gè)和第二個(gè)氨基酸或核酸序列之一或二者中引入缺口)。將最佳比對(duì)確定為使用Needleman和Wunsch算法獲得的最佳評(píng)分，所述算法在EMBOSS包的Needle算法中實(shí)現(xiàn)，其使用Blossum62評(píng)分矩陣，缺口罰分為10，缺口延伸罰分為I。參見Needleman, S. B.和Wunsch, C. D. (1970)J. Mol. Biol. 48, 443-453; Kruskal, J. B. (1983)An overview of sequence comparison,見D. Sankoff 和 J. B. Kruskal,(編),Time warps, string edits and macromolecules: thetheory and practice of sequence comparison,第 1-44 頁 Addison Wesley,工具可來自歐洲生物信息學(xué)研究所(European Bioinformatics Institute,英國(guó)劍橋)EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟件包(2000), Rice, P.等人，A.，Trends in Genetics 16，(6)第 276—277頁，且可在下述位置在線得到http://www. ebi. ac. uk/Tools/emboss/align/index, html和 http://emboss, open-bio. org/wiki/Appdoc:Needle0 然后比較在對(duì)應(yīng)的氨基酸位置或核苷酸位置處的氨基酸殘基或核苷酸，且2個(gè)序列之間的同一性百分比是所述序列共有的相同位置的數(shù)目的函數(shù)。免疫調(diào)節(jié)多肽稚T細(xì)胞(MtfveT cells)受到刺激后會(huì)分化成專門的效應(yīng)細(xì)胞，這主要是通過分泌的細(xì)胞因子的作用。通常，基于它們的細(xì)胞因子表達(dá)特性，已經(jīng)認(rèn)為T輔助(TH)細(xì)胞屬于2個(gè)效應(yīng)細(xì)胞譜系之一 TH1和TH2細(xì)胞，它們分別調(diào)節(jié)細(xì)胞和體液T細(xì)胞免疫(I)。更近的工作描述了 Thl7細(xì)胞，即效應(yīng)TH細(xì)胞的第三譜系，其不同于Thl和Th2譜系，且事實(shí)上受到Thl和Th2譜系的產(chǎn)物的拮抗(2，3)。以它們的特征性細(xì)胞因子白介素17 (IL-17)命名的該Th細(xì)胞子集似乎已經(jīng)進(jìn)化成適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的一個(gè)分支，其專門增強(qiáng)對(duì)抗胞外細(xì)菌和某些真菌的宿主保護(hù)，因?yàn)門hl或Th2應(yīng)答可能不能有效地控制這些微生物(4，5)。誘導(dǎo)分化和調(diào)節(jié)Thl7細(xì)胞的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞因子(S卩IL-23、IL-6和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β ))的不同組織來源，與IL-17受體在造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞上的存在一起，已經(jīng)凸顯了在適應(yīng)性和先天性免疫細(xì)胞之間存在的復(fù)雜關(guān)系。盡管Thl7細(xì)胞效應(yīng)子功能的完整范圍仍然在開發(fā)中，但已經(jīng)將Thl7細(xì)胞促進(jìn)的強(qiáng)炎性應(yīng)答與許多以前歸因于Thl或Th2細(xì)胞的自身免疫和炎性障礙(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和銀屑病)的發(fā)病機(jī)制相關(guān)聯(lián)
(4)。除了IL-17A 以外，IL-17 家族的成員包括 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也稱作IL-25)和IL-17F。IL-17家族的所有成員具有類似的蛋白結(jié)構(gòu)，包括4個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基。IL-17A 和 F 最密切相關(guān)，其次是 IL-17B (29%)、IL_17D (25%)、IL_17C (23%)，IL-17E與IL-17A的相關(guān)性最低(17%)。這些細(xì)胞因子在哺乳動(dòng)物中都是相當(dāng)保守的，在人和小鼠同系物之間保守的氨基酸多達(dá)62-88%。與其它細(xì)胞因子沒有序列相似性?；贗L-17F的晶體結(jié)構(gòu)，預(yù)測(cè)6種結(jié)構(gòu)上相關(guān)的IL-17細(xì)胞因子(IL-17A —一 IL-17F)形成同二聚折疊(或異二聚折疊，在IL-17A-F的情況下)，其與半胱氨酸-結(jié)生長(zhǎng)因子諸如神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的折疊具有同源性(7，8)。Thl7細(xì)胞-衍生的IL-17A和IL-17F在該家族內(nèi)具有最大同源性，并且需要IL-17RA和IL-17RC來進(jìn)行信號(hào)傳遞(9，10)。盡管已經(jīng)證實(shí)，成纖維細(xì)胞、上皮和內(nèi)皮細(xì)胞共表達(dá)IL-17RA和IL-17RC，但T細(xì)胞未被證實(shí)會(huì)表達(dá)IL-17RC，而僅表達(dá)IL-17RA (11)。之前認(rèn)為，淋巴細(xì)胞不會(huì)對(duì)IL-17做出響應(yīng)；但是，F(xiàn)lavell和同事報(bào)道，T細(xì)胞實(shí)際上可以直接地對(duì)IL-17做出響應(yīng)(12)。部分地通過它們作為Thl7譜系的效應(yīng)細(xì)胞因子的作用，IL-17家族的細(xì)胞因子提 供操縱免疫和炎性應(yīng)答的創(chuàng)新方案。由此，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F和它們的受體的拮抗劑(單獨(dú)地或一起地，諸如本文所述的拮抗劑)，可用于治療性地處理炎性疾病，諸如多發(fā)性硬化、炎性腸病(IBD)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病和癌癥。此外，IL-17家族成員活性的拮抗劑，諸如本文所述的拮抗劑，可用于治療性地處理其它炎性疾病。人IL-17細(xì)胞因子的一些示例性的序列如下。IL-17A。一個(gè)示例性的人IL-17A細(xì)胞因子序列如下，且被描述于Uniprot 標(biāo)識(shí)符 Q16552 (參見網(wǎng)絡(luò)資源 uniprot. org 和 The UniProt Consortium,Nucleic Acids Res.D142-D148 (2010)) MTPGKTSLVSLLLLLSLEAI VKAGITIPRNPGCPNSEDKN FPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRS TSPffNLHRNE DPERYPSVIffEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEIL VLRREPPHCP NSFRLEKILV SVGCTCVTPIVHHVA(SEQ IDNO I)另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸24-155 (缺少IL-17A信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所示的序列ITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWNLHRNEDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPNSFRLEKILVSVGCTCVTPIVHHVA(SEQ ID NO 2).所述序列還可以包括在SEQ ID NO:2的第一個(gè)殘基之前的甘氨酸。本文參照SEQID NO: 2描述的每個(gè)IL-17A序列也都可以包括在異亮氨酸之前的該甘氨酸，所述異亮氨酸是在SEQ ID N0:2中的第一個(gè)列出的氨基酸。也可以使用其它殘基。其它示例性的IL-17A序列包括鼠(Q62386 )、大鼠(Q61453 )和牛序列(Q687Y7 )?？梢栽趤碜匀魏挝锓N(例如，如本文所述)的IL-17A序列中產(chǎn)生本文所述的突變和修飾。IL-17B。一個(gè)示例性的人IL-17B細(xì)胞因子序列如下，且被描述于Uniprot標(biāo)識(shí)符Q9UHF5:MDffPHNLLFLLTISIFLGLGQPRSPKSKRKGQGRPGPLAPGPHQVPLDLVSRMKPYARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQRKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPVDLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPPPPRTGPCRQRAVMETIAVGCTCIF(SEQ ID NO 3).另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸21-180 (缺少IL-17B信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所示的序列
RSPKSKRKGQGRPGPLAPGPHQVPLDLVSRMKPYARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQRKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPVDLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPPPPRTGPCRQRAVMETIAVGCTCIF(SEQ ID NO 4).IL-17C。一個(gè)示例性的IL-17C細(xì)胞因子序列如下，且被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q9P0M4:MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV(SEQ ID NO 5).另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸19-197 (缺少IL-17C信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所示的序列 HHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV(SEQ ID NO 6).IL-17D。一個(gè)示例性的IL-17D細(xì)胞因子序列如下，且被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q8TAD2:MLVAGFLLALPPSWAAGAPRAGRRPARPRGCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGP(SEQ IDN0:7)。另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸16-202 (缺少IL-17D信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所不的序列AGAPRAGRRPARPRGCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGP(SEQ ID NO 8).IL-17E。一個(gè)示例性的IL-17E細(xì)胞因子序列(也稱作IL-25)如下且被描述在Uniprot 標(biāo)識(shí)符 Q9H293:MRERPRLGEDSSLISLFLQVVAFLAMVMGTHTYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDGPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG(SEQ ID NO 9).另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸33-177 (缺少IL-17E信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所示的序列THTYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDGPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG(SEQ IDNO 10).IL-17F。一個(gè)示例性的IL-17F細(xì)胞因子序列如下，且被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q96PD4:MTVKTLHGPAMVKYLLLSILGLAFLSEAAARKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEVVQAQCRNLGCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCTCVTPVIHHVQ (SEQ ID N0:11)。所述細(xì)胞因子的翻譯可以在前述序列的METl或METll處開始。另一個(gè)示例性的序列包括上述序列的氨基酸31-163 (缺少IL-17F信號(hào)序列的形式)，或在圖4D中所示的序列RKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEVVQAQCRNLGCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCTCVTPVIHHVQ(SEQ ID NO 12).所述序列與圖4D—起提供了用于鑒別IL-17家族成員中的殘基的位置的有用的默認(rèn)參照。其它示例性的IL-17F序列包括鼠(Q7TNI7)、大鼠(Q5BJ95)和豬序列(Q5BJ95)。幾種其它的哺乳動(dòng)物IL-17細(xì)胞因子的序列也是已知的。參見，例如，Uni pro t條目:Q62386 (鼠 IL-17A)、Q61453 (大鼠 IL_17A)、Q687Y7 (牛 IL_17A)、Q7TNI 7 (鼠 IL-17F)、Q5BJ95 (大鼠 IL-17F)、Q9QXT6 (鼠 IL_17B)、Q9EQI 6 (倉鼠 IL_17B)、Q8K4C5 (鼠 IL-17C)、 Q8K4C4 (鼠 IL-17D)和 Q9VHH8 (鼠 IL-17E)。IL-17RA。一個(gè)示例性的人IL-17RA受體序列如下，且被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q96F46 MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEffTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRffRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVffIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTffVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYWCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRYPLMDRFEL·VYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS ⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGffDTMGSESEGPSA(SEQ ID NO 13)還提供了一種IL-17RA多肽，其中信號(hào)序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-31或1-32被刪除，并任選地存在其它刪除、插入和置換。一種示例性的IL-17RA多肽如下SLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPD⑶PNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYWCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRY PLM DRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGWDTMGSESEGPSA(SEQ ID NO: 14)，并代表下文實(shí)施例1_3中使用的編號(hào)。另一種示例性的IL-17RA多肽包括IL-17RA的胞外結(jié)構(gòu)域，例如，SEQ ID NO: 13的大約氨基酸33-320。其它示例性的IL-17RA序列包括鼠(Q60943)、大鼠(NP_001101353. 2，GenBank)和牛序列(ΧΡ_603383· 5, GenBank)。IL-17RB。一個(gè)示例性的人IL-17RB受體序列如下，且具有Q9NRM6UniProt標(biāo)識(shí)
付MSLVLLSLAALCRSAVPREPTVQCGSETGPSPEWMLQHDLIPGDLRDLRVEPVTTSVATCDYSILMNVSWVLRADASIRLLKATKICVTGKSNFQSY SCVRCNYTEAFQTQTRPSGGKWTFSYIGFPVELNTVYFIGAHNIPNANMNEDGPSMSVNFTSPGCLDHIMKYKKKCVKAGSLWDPNITACKKNEETVEVNFTTTPLGNRYMALIQHSTIIGFSQVFEPHQKKQTRASVVIPVTCDSEGATVQLTPYFPTCGSDCIRHKGTVVLCPQTGVPFPLDNNKSKPGGWLPLLLLSLLVATWVLVAGIYLMWRHERIKKTSFSTTTLLPPIKVLVVYPSEICFHHTICYFTEFLQNHCRSEVILEKffQKKKIAEMGPVQWLATQKKAADKWFLLSNDVNSVCDGTCGKSEGSPSENSQDLFPLAFNLFCSDLRSQIHLHKYVWYFREIDTKDDYNALSVCPKYHLMKDATAFCAELLHVKQQVSAGKRSQACHDGCCSL(SEQ ID NO 15)也參見Tian 等人，Oncogene 19:2098-2109 (2000)和 Shi 等人，J. Biol.Chem. 275:19167-19176 (2000)。還提供了一種IL-17RB多肽，其中信號(hào)序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-17被刪除，并任選地存在其它刪除、插入和置換。另一種示例性的IL-17RB多肽包括IL-17RB的胞外結(jié)構(gòu)域，例如，Q9NRM6的大約氨基酸18-292。IL-17RC。一個(gè)示例性的人IL-17RC受體序列如下，且具有Q8NAC3UniProt標(biāo)識(shí)
付MPVPWFLLSLALGRSPVVLSLERLVGPQDATHCSPVSLEPWGDEERLRVQFLAQQSLSLAPVTAATARTALSGLSGADGRREERGRGKSWVCLSLGGSGNTEPQKKGLSCRLWDSDILCLP⑶IVPAPGPVLAPTHLQTELVLRCQKETDCDLCLRVAVHLAVHGHWEEPEDEEKFGGAADSGVEEPRNAS LQAQVVLSFQAYPTARCVLLEVQVPAALVQFGQSVGSVVYDCFEAALGSEVRIffSYTQPRYEKELNHTQQLPDCRGLEVWNSIPSCWALPffLN VSADiiDNVHLVLNVSEEQHFGLSLYWNQVQGPPKPRWHKNLTGPQIITLN HTDLVPCLCIQVWPLEPDSVRTNICPFREDPRAHQNLWQAARLQLLTLQSWLLDAPCSLPAEAALCWRAPGGDPCQPLVPPLSWENVTVDKVLEFPLLKGHPNLCVQVNSSEKLQLQECLWADSLGPLKDDVLLLETRGPQDNRSLCALEPSGCTSLPSKASTRAARLGEYLLQDLQSGQCLQLWDDDLGALWACPMDKYIHKRffALVffLACLLFAAALSLILLLKKDHAKGffLRLLKQDVRSGAAARGRAALLLYSADDSGFERLVGALASALCQLPLRVAVDLWSRRELSAQGPVAWFHAQRRQTLQEGGVVVLLFSPGAVALCSEWLQDGVSGPGAHGPHDAFRASLSCVLPDFLQGRAPGSYVGACFDRLLHPDAVPALFRTVPVFTLPSQLPDFLGALQQPRAPRSGRLQERAEQVSRALQPALDSYFHPPGTPAPGRGVGPGAGPGAGDGT(SEQ ID NO 16).還提供了一種IL-17RC多肽，其中信號(hào)序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-20被刪除，并任選地存在其它刪除、插入和置換。另一種示例性的IL-17RC多肽包括IL-17RC的胞外結(jié)構(gòu)域，例如，SEQ ID NO: 14的大約氨基酸21-538。其它示例性的IL-17RC 序列包括鼠(Q8K4C2)、大鼠(ΧΡ_216240· 5，GenBank)和牛序列(ΝΡ_001068646· 1，GenBankXIL-17RD。一個(gè)示例性的人IL-17RD受體序列被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q8NFM7。 也參見 Xiong 等人，J. Biol. Chem. 278:50273-50282(2003)。還提供了一種 IL-17RD 多肽，其中號(hào)序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1_16被刪除，并任選地存在其它刪除、插入和置換。另一種示例性的IL-17RD多肽包括IL-17RD的胞外結(jié)構(gòu)域，例如，Q8NFM7的大約氨基酸17-299。IL-17RE。一個(gè)示例性的人IL-17RE受體序列被描述在Uniprot標(biāo)識(shí)符Q8NFR9。還提供了一種IL-17RE多肽，其中信號(hào)序列被去除(例如，被加工)，或其中氨基酸1-23被刪除，并任選地存在其它刪除、插入和置換。另一個(gè)示例性的IL-17RE多肽包括IL-17RE的胞外結(jié)構(gòu)域，例如，Q8NFR9的大約氨基酸24-454。本發(fā)明提供了 IL-17受體信號(hào)傳遞的新拮抗劑，例如，IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE信號(hào)傳遞中的一種或多種的拮抗劑，以及這類拮抗劑在治療炎性疾病和自身免疫疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了 IL-17細(xì)胞因子信號(hào)傳遞(例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F信號(hào)傳遞)的新拮抗劑，以及它們?cè)谥委熝仔约膊『妥陨砻庖呒膊≈械膽?yīng)用。本發(fā)明的拮抗劑(其示例性的成員是針對(duì)IL-17RA的拮抗劑，且包括本發(fā)明的中 和抗-IL-17RA設(shè)計(jì)者細(xì)胞因子拮抗劑)可以用于阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A、IL-17F或IL-17A/F或其任何組合的活性，從而用于治療炎癥和炎性疾病，諸如多發(fā)性硬化、癌癥(特別是特征在于IL-17和/或IL-23的表達(dá)的癌癥)、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫眼疾病、內(nèi)毒素血癥、IBS和炎性腸病(IBD)、結(jié)腸炎、哮喘、C0PD、囊性纖維化、同種異體移植物排斥、免疫介導(dǎo)的腎疾病、肝膽疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤生長(zhǎng)的增進(jìn)、或變性關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈粥樣硬化和本文公開的其它炎性病癥。本發(fā)明提供了分離的多肽，其結(jié)合IL-17配體和/或受體的接觸表面，從而阻止它們的生產(chǎn)性相互作用。更具體地，本發(fā)明提供了這樣的多肽其結(jié)合IL-17配體和/或受體，并抑制炎性介質(zhì)在表達(dá)IL-17受體的細(xì)胞中的產(chǎn)生。5種IL-17受體(IL-17RA—IL-17RE)與任何已知的受體不具有同源性，并表現(xiàn)出相當(dāng)大的序列差異。它們?nèi)及欣w連蛋白III型(FnIII)結(jié)構(gòu)域的胞外結(jié)構(gòu)域，以及細(xì)胞質(zhì)SEF/IL-17R (SEFIR)結(jié)構(gòu)域，后者表現(xiàn)出與Toll/IL_lR (TLR)結(jié)構(gòu)域的松散同源性(13，14)。IL-17受體介導(dǎo)的信號(hào)傳遞事件不同于由I型四螺旋細(xì)胞因子的更廣泛已知的受體觸發(fā)的那些信號(hào)傳遞事件(15，16)。象TLR刺激一樣，IL-17受體刺激導(dǎo)致NF- κ B和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化。但是，IL-17受體信號(hào)傳遞不利用相同的膜近端接頭分子集合進(jìn)行TLR信號(hào)傳遞；IL-17R需要接頭Actl，后者也含有SEFIR結(jié)構(gòu)域(17-19)。IL-17受體的這些獨(dú)特的信號(hào)傳遞性質(zhì)使得TH-17細(xì)胞能夠充當(dāng)先天性和適應(yīng)性免疫細(xì)胞之間的橋梁。在機(jī)理上，熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)研究已經(jīng)提示，IL-17RA可以作為預(yù)先形成的二聚體存在于細(xì)胞表面上，其在IL-17結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象變化，以與IL-17RC形成異二聚信號(hào)傳遞復(fù)合物。但是，同二聚的IL-17細(xì)胞因子如何與2種不同受體配對(duì)的分子基礎(chǔ)仍然未知(14，20)。本文提供的結(jié)構(gòu)和生物化學(xué)分析首次實(shí)現(xiàn)了 IL-17系統(tǒng)的特異性拮抗劑的合理設(shè)計(jì)。基于該分析，我們提供了一系列拮抗劑，所述拮抗劑可用于阻止IL-17信號(hào)傳遞和用于治療具有多種疾病的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案包括結(jié)合IL-17R或IL-17細(xì)胞因子的結(jié)合肽、蛋白和它們的任何片段或變換，它們可互換地稱作“ IL-17R拮抗劑”、“ IL-17拮抗劑”、“ IL-17R中和實(shí)體”、“IL-17R設(shè)計(jì)者細(xì)胞因子拮抗劑”和“IL-17設(shè)計(jì)者細(xì)胞因子拮抗劑”。特別地，在一些實(shí)施方案中，這樣的結(jié)合肽或蛋白能夠特異性地結(jié)合人IL-17R，并被稱作“IL-17R結(jié)合蛋白”。此外，這些結(jié)合肽或蛋白能夠調(diào)節(jié)與IL-17有關(guān)的生物學(xué)活性，例如，拮抗IL-17受體的IL-17活化，因而可用于治療不同的疾病和病理學(xué)狀況，諸如炎癥和免疫相關(guān)的疾病。示例性的拮抗劑具有小于200、50、20或IOnM的IC50。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種分離的多核苷酸，其編碼本發(fā)明的多肽，其中所述多肽能夠結(jié)合 IL-17R (例如，IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD 或 IL-17RE)，并減少它的信號(hào)傳遞能力。本發(fā)明也提供了融合蛋白，其包含本發(fā)明的拮抗劑和免疫球蛋白部分，例如，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域或區(qū)域。在這樣的融合蛋白中，所述免疫球蛋白部分可以是免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，諸如人F。片段。本發(fā)明還包括編碼這樣的融合蛋白的分離的核酸分子。
本發(fā)明也提供了蛋白綴合物，其包含與聚乙二醇聚合物綴合的本發(fā)明的拮抗劑。 本發(fā)明還包括藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和本文所述的IL-17R拮抗劑。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于治療炎性疾病的方法，所述炎性疾病的特征在于IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y在哺乳動(dòng)物受試者中升高的表達(dá)，所述方法包括給所述受試者施用有效量的IL-17信號(hào)傳遞拮抗劑。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制炎性介質(zhì)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的產(chǎn)生的方法，其中用IL-17R的拮抗劑處理所述細(xì)胞或它的培養(yǎng)基。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于治療炎性疾病的方法，所述炎性疾病的特征在于IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y在哺乳動(dòng)物受試者中升高的表達(dá)，所述方法包括給所述受試者施用有效量的IL-17信號(hào)傳遞拮抗劑。本發(fā)明的典型方法包括，治療哺乳動(dòng)物的病理學(xué)狀況或疾病的方法，所述病理學(xué)狀況或疾病源自增加的或增強(qiáng)的IL-17和/或IL-23和/或IFN- Y表達(dá)和/或活性或與其有關(guān)。在所述治療方法中，可以施用本發(fā)明的拮抗劑，其優(yōu)選地減少各自的受體活化。所述方法涉及IL-17R的拮抗劑的應(yīng)用，所述拮抗劑通過阻斷IL-17R復(fù)合物形成而減少信號(hào)傳遞。本發(fā)明的拮抗劑(例如，IL-17R的拮抗劑)也可用于制備藥物和藥劑，所述藥物和藥劑用于治療免疫相關(guān)疾病和炎性疾病，包括例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病(諸如多發(fā)性硬化、特發(fā)性脫髓鞘性多神經(jīng)病或格-巴二氏綜合征)、炎性腸病、結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、谷蛋白敏感性腸病、自身免疫眼疾病、癌癥、腫瘤疾病、動(dòng)脈粥樣硬化和血管產(chǎn)生。在一個(gè)具體的方面，這樣的藥物和藥劑包含治療有效量的IL-17R拮抗劑和藥學(xué)上可接受的載體。優(yōu)選地，所述混合物是無菌的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制IL-17產(chǎn)生和/或維持的方法，其中用IL-17R拮抗劑處理T細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種降低哺乳動(dòng)物中的T-淋巴細(xì)胞的活性的方法，所述方法包括給所述哺乳動(dòng)物施用IL-17R拮抗劑，諸如IL-17R結(jié)合蛋白，其包含與IL-17細(xì)胞因子序列同源的序列，其中哺乳動(dòng)物中的T-淋巴細(xì)胞活性被降低。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種減少哺乳動(dòng)物中的T-淋巴細(xì)胞的增殖的方法，所述方法包括給所述哺乳動(dòng)物施用IL-17R拮抗劑，諸如IL-17R結(jié)合蛋白，其包含與IL-17細(xì)胞因子序列同源的序列，其中T-淋巴細(xì)胞在哺乳動(dòng)物中的增殖被減少。本文也描述了用于產(chǎn)生它們的方法，其中這些方法包括在適合表達(dá)所述抗體的條件下，培養(yǎng)包含載體的宿主細(xì)胞，所述載體含有適當(dāng)?shù)木幋a核酸分子，并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述抗體。IL-17R結(jié)合蛋白IL-17細(xì)胞因子可以包括至少3個(gè)在它的受體結(jié)合面之一上接觸IL-17R的位點(diǎn)。IL-17通常包括2個(gè)亞基(本文命名為鏈A和B)，每個(gè)亞基為特定受體結(jié)合面貢獻(xiàn)氨基酸。術(shù)語“鏈A”和“鏈B”的使用僅僅是為了索引。例如，在使用單鏈形式的實(shí)施方案中，“鏈A”可以置于“鏈B”的C-端，或者，它可以置于“鏈B”的N-端。結(jié)合IL-17RA的IL-17界面包括3個(gè)位點(diǎn)(位點(diǎn)I、位點(diǎn)2和位點(diǎn)3),所述位點(diǎn)包 括下述接觸殘基，如在表I中顯示的(根據(jù)IL-17F和SEQ IDNO: 12的編號(hào))表I
... 鏈 A鏈.B''
故良 I MIi I-25, LYSl 151LE29, 1LE3 L TRP58, ASN61.
TYR63, PROM. SER65, GLU66, VAL100, ARG102, HIS 104,
VAL109, PHHl! I
仗表 2 GLN94, GLN95, GLU96,GLN36, ARG37, MET40, SER41,
LYSI i 5. LEU117ASN43, GLU45. TYR54, VAL56,
GLU66，VAL68, VALl 18位點(diǎn) 3 I.RU75, II..R86, SBRS7, ASNS9.VlBT40, ARG42, II.R44, ARG47^
VAL91, VAL125，PRO 127,
VAL128,1LE129, HIS 130
HIS131, VALI32某些殘基位于2個(gè)鄰近位點(diǎn)的連接處，因此列于兩個(gè)位點(diǎn)中。幾個(gè)界面殘基在結(jié)合IL-17RA后被埋藏，如在下面的實(shí)施例20的表中所顯示的。在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容表征了一種IL-17R結(jié)合蛋白，其包含含有2個(gè)亞基的IL-17細(xì)胞因子，其中由所述2個(gè)亞基形成的二聚體的一個(gè)受體結(jié)合面包括一個(gè)或多個(gè)置換，例如，至少2個(gè)或3個(gè)置換，例如，非保守置換或本文所述的置換。例如，所述細(xì)胞因子在上面表I中鑒別的位置處具有至少1、2、3、4、5、6或7個(gè)置換(或刪除)，例如2_10個(gè)、2_7個(gè)或3-10個(gè)或3-6個(gè)。在某些情況下，一個(gè)細(xì)胞因子亞基與另一個(gè)亞基的差別在于至少1、2、
3、4、5、6或7個(gè)置換(或刪除)。例如，在IL-17R結(jié)合蛋白中，2個(gè)受體結(jié)合面可以包括不同的氨基酸，例如，至少1、2、3、4、5、6或7個(gè)差異，例如，在與表I中的那些相對(duì)應(yīng)的位置處。
一個(gè)或兩個(gè)亞基可以具有一個(gè)或多個(gè)保守置換和/或一個(gè)或多個(gè)非保守置換。通常，至少一個(gè)亞基或兩個(gè)亞基與成熟的人IL-17(例如，SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12或20)具有至少90、92、94、95、96、97或98%同一性，但不具有100%同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，任一個(gè)亞基與成熟的人IL-17都不具有100%同一性，例如，它們與它們所源自的人IL-17相差至少1、2或3個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)亞基不同于成熟的人IL-17,而另一個(gè)亞基與成熟的人IL-17相同。在某些實(shí)施方案中，在亞基中的置換不是至對(duì)應(yīng)的鼠蛋白中的殘基的置換。位點(diǎn)I在一個(gè)實(shí)施方案中，IL-17R結(jié)合蛋白包含含有2個(gè)亞基的IL-17細(xì)胞因子，其中一個(gè)受體結(jié)合面的位點(diǎn)I包括一個(gè)或多個(gè)突變，例如，至少2個(gè)或3個(gè)突變，例如，非保守突變或本文所述的突變。例如，一個(gè)或多個(gè)下述的位點(diǎn)I殘基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的編號(hào)而鑒別)被突變 M A MET25 和 LYSl 15 ;和鏈 B :ILE29、ILE 31、TRP58、ASN61、TYR63、PR064、SER65、GLU66、VAL100, ARG102、HI S104、VAL109 和 PHE111,和在如圖 4D 所示的 IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的對(duì)應(yīng)殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合蛋白包括至少一個(gè)在位點(diǎn)I的前述鏈A殘基之一中的突變和至少一個(gè)在前述鏈B殘基之一中的突變。可以在位點(diǎn)I中獲得的一些示例性突變包括鏈A中的MET25可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，MET25突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，MET25突變?yōu)門rp或Tyr。可以突變MET25，以破壞表面附近的疏水包裝，例如，通過突變?yōu)閹щ姾傻臍埢虼蟮姆甲鍤埢?。針?duì)SEQ ID N0:2的VAL23、SEQ ID NO:4的ARG36、SEQIDN0:6的LEU48、SEQ ID NO:8的LEU36和SEQ ID NO: 10的LEU33，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ILE29可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE29突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQID NO:2的ILE27，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ILE31可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE31突變?yōu)樾〉闹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。針?duì)SEQ ID N0:2的ASN29，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的TRP58可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TRP58突變?yōu)樾〉闹鍤埢?。針?duì)SEQ ID NO: 2的GLU56、SEQ ID N0:4的HIS85、SEQ ID NO:6 的 THR97、SEQ ID NO:8 的 TYR85 和 SEQ ID NO: 10 的 ARG67，可以進(jìn)行相應(yīng)的
突變或非保守的突變。鏈B中的ASN61可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ASN61突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。針?duì)SEQ ID N0:2的GLU59、SEQ ID N0:4 的 SER88、SEQ ID NO:6 的 ASP100、SEQ ID NO:8 的 ALA88 和 SEQ ID NO:10 的ASN70，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的TYR63可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TYR63突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基或帶電荷的殘基。例如，TYR63突變?yōu)锳la或 Lys。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 TYR61、SEQ ID NO:4 的 ILE90、SEQ ID NO:6 的 TYR102、SEQID NO:8的TYR90和SEQ ID NO: 10的LEU72，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的PR064可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，PR064突變?yōu)楦拾彼?、脂族殘基、中性親水殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì) SEQ ID N0:2 的 PR062、SEQ ID N0:4 的 PR091、SEQ ID NO:6 的 PR0103、SEQ ID NO:8 的PR091和SEQ ID NO: 10的PR073，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的SER65可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，SER65突變?yōu)橹鍤埢?、特別是大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，SER65 突變?yōu)?Lys 或 Trp。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 SER63、SEQ ID NO: 4 的 VAL92、SEQ ID NO: 6的GLN104、SEQ ID NO:8的ARG92和SEQ ID NO: 10的GLN74，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的VAL100可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨 基酸。例如，VAL100突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQ ID NO:2 的 LEU98、SEQ ID NO:4 的 ARG128、SEQ ID NO:6 的 LEU140、SEQ ID NO:8 的LEU128和SEQ ID NO: 10的PHE111，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ARG102可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG102突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、酸性殘基或芳族殘基。例如，ARG102突變?yōu)?Ala、Ser、Gln 或 Asn。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 ARG100、SEQ ID NO:4 的 ARG130、SEQ IDN0:6 的 ARG142、SEQ ID NO: 8 的 ARG130 和 SEQ ID NO: 10 的 ARG113，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變。鏈B中的HIS104可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，HIS104突變?yōu)橹鍤埢蛩嵝詺埢?。例如，HIS104突變?yōu)镚lu或Asp。針對(duì)SEQ ID NO:2 的 PR0102、SEQ ID NO:4 的 PR0136、SEQ ID NO:6 的 PR0153、SEQ ID NO:8 的CYS134和SEQ ID NO: 10的GLY121，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的VAL109可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL109突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。鏈B中的PHElll可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，PHEl 11突變?yōu)樾〉闹鍤埢?、中性親水殘基或帶電荷的殘基。例如，PHEl 11突變?yōu)?Ala。針對(duì) SEQ ID NO:2 的 PHE109、SEQ ID NO:4 的 GLN143、SEQ ID N0:6 的 PHE160、SEQ ID N0:8的TYR141和SEQ ID NO: 10的LEU128，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的GLU66可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU66突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、堿性殘基或芳族殘基。例如，進(jìn)行突變以破壞 GLU66 的氫鍵鍵合。針對(duì) SEQID NO: 2 的 VAL64、SEQ ID NO:4 的 ASP93、SEQ ID NO:6的LYS105,SEQID NO:8的TYR93和SEQ ID NO: 10的ASP75，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的LYS115可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LYS115突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、酸性殘基或芳族殘基。例如，LYS115突變?yōu)?Ala。針對(duì) SEQ ID NO:2 的 LYS113、SEQ ID NO:4 的 MET147、SEQ ID N0:6 的 PHE164、SEQ ID N0:8的TYR145和SEQ ID NO: 10的LEU132，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。位點(diǎn)2在一個(gè)實(shí)施方案中，IL-17R結(jié)合蛋白包含含有2個(gè)亞基的IL-17細(xì)胞因子，其中一個(gè)受體結(jié)合面的位點(diǎn)2包括一個(gè)或多個(gè)突變，例如，至少2個(gè)或3個(gè)突變，例如，非保守突變或本文所述的突變。例如，一個(gè)或多個(gè)下述的位點(diǎn)2殘基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的編號(hào)而鑒別)被突變:鏈 A :GLN94、GLN95、GLU96、LYS115 和 LEUl 17 ;和鏈 B :GLN36、ARG37、MET40、SER41、ASN43、GLU45、TYR54、VAL56、GLU66、VAL68 和 VALl 18，和在如圖 4D 所示的IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的對(duì)應(yīng)殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合蛋白包括至少一個(gè)在位點(diǎn)2的前述鏈A殘基之一中的突變和至少一個(gè)在前述鏈B殘基之一中的突變?？梢栽谖稽c(diǎn)2中進(jìn)行的一些示例性突變包括鏈B中的GLN36可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN36突變?yōu)橹鍤埢щ姾傻臍埢蚍甲鍤埢?。例如，突變GLN36以破壞該殘基的氫鍵鍵合。針對(duì) SEQ ID N0:2 的 THR34、SEQ ID NO:4 的 MET47、SEQ ID N0:6 的 GLY59、SEQ ID N0:8的PR047和SEQ ID NO: 10的SER44，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ARG 37可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG37突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、酸性殘基或芳族殘基。例如，ARG37突變 為 Ala 或 Glu。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 ASN35、SEQ ID NO:4 的 VAL48、SEQ ID N0:6 的 ARG60、SEQ ID N0:8的ARG48和SEQ ID NO: 10的CYS45，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的MET40可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，MET40突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQID NO:2 的 ARG38、SEQ ID NO:4 的 LEU5USEQ ID NO:6 的 ARG63、SEQ ID NO:8 的 ALA51 和SEQ ID NO: 10的SER48，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。例如，可以將SEQ IDNO:2的ARG 38和SEQ ID NO: 6的ARG63突變成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser，或突變成破壞它的氫鍵鍵合或形成鹽橋的能力的另一種殘基。鏈B中的SER41可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，SER41突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，SER41突變?yōu)锳la、Trp、Tyr、Arg或Lys。針對(duì)SEQ IDN0:2的SER39，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ASN43可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ASN43突變?yōu)橹鍤埢щ姾傻臍埢蚍甲鍤埢?。例如，ASN43突變?yōu)镚lu或Asp。針對(duì) SEQ ID N0:2 的 ASP41、SEQ ID NO:4 的 MET70、SEQ ID NO:6 的 ASP82、SEQ IDNO:8的PR070和SEQ ID NO: 10的PR052，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。例如，可以將 SEQ ID N0:2 的 ASP41 突變成 I I e、Leu、Tyr、Arg 或 Lys。鏈B中的GLU45可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU45突變?yōu)橹鍤埢蚍甲鍤埢?。針?duì)SEQID NO:2的TYR43、SEQ ID NO:4的ASN72、SEQ ID N0:6 的 HI S84、SEQ IDN0:8 的 ASN72 和 SEQ ID NO: 10 的 ASN54，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的TYR54可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，TYR54突變?yōu)橹鍤埢⒅行杂H水殘基或帶電荷的殘基。針對(duì)SEQ ID N0:2的LEU52、SEQ ID N0:4 的 TYR81、SEQ IDN0:6 的 TYR93、SEQ ID NO: 8 的 TYR81 和 SEQ ID NO: 10的TYR63，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的VAL56可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL56突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQID NO:2 的 ARG54、SEQ ID NO:4 的 ILE83、SEQ ID NO:6 的 VAL95、SEQ ID NO:8 的 ILE83 和SEQ ID NO: 10的LEU65，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的VAL68可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL68突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，VAL68 突變?yōu)?Gin、Asn、Ser 或 Thr。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 TRP66、SEQ ID NO:4 的 PR095、SEQ ID N0:6 的 ALA107、SEQ ID NO:8 的 PR095 和 SEQ ID NO: 10 的 TYR77，可以進(jìn)行相應(yīng)的
突變或非保守的突變。鏈A中的GLN94可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN94突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。針?duì)SEQ ID N0:2的GLN92、SEQ ID NO:4 的 PHE122、SEQ ID NO:6 的 LEU134、SEQ ID NO:8 的 TYR122 和 SEQ ID NO: 10的TYR105，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的GLN95可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLN95突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，GLN95突變?yōu)锳sp、Glu、Ala 或 Trp。針對(duì) SEQ ID NO:2 的 GLN93、SEQ ID NO:4 的 SER123、SEQ ID N0:6 的 GLN135、SEQ ID N0:8的MET123和SEQ ID N0:10的HI S106，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的GLU96可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，GLU96突變?yōu)橹鍤埢?、堿性殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQ ID NO: 2的GLU94、SEQID NO:4 的 GLN124、SEQ ID NO:6 的 SER136、SEQ ID NO:8 的 PR0124 和 SEQ ID NO: 10 的ASN107，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的LEU117可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LEU117突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQ ID N0:2 的 LEU115、SEQ ID NO:4 的 THR149、SEQ ID NO:6 的 HIS166、SEQ ID NO:8 的THR147和SEQ ID NO: 10的ARG134，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的VAL118可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL118突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQ ID NO:2 的 VAL116、SEQ ID NO:4 的 ILE150、SEQ ID NO:6 的 VAL167、SEQ ID NO:8 的ILE148和SEQ ID NO: 10的VAL135，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。另外，例如，SEQ ID N0:2的LYS 37可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，它可以突變成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser,或破壞它的氫鍵鍵合或形成鹽橋的能力的另一種殘基。SEQ ID NO: 2的ARG30和SEQ ID NO: 10的ARG40可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，它可以突變成Glu、Asp、Gln、Asn、Thr或Ser,或破壞它的氫!鍵鍵合或形成鹽橋的能力的另一種殘基。位點(diǎn)3在一個(gè)實(shí)施方案中，IL-17R結(jié)合蛋白包含含有2個(gè)亞基的IL-17細(xì)胞因子，其中一個(gè)受體結(jié)合面的位點(diǎn)3包括一個(gè)或多個(gè)突變，例如，至少2個(gè)或3個(gè)突變，例如，非保守突變或本文所述的突變。例如，一個(gè)或多個(gè)下述的位點(diǎn)3殘基(基于IL-17F和SEQ ID NO: 12的編號(hào)而鑒別)被突變鏈 A :LEU75、ILE86、SER87、ASN89、VAL91、VAL125、PR0127、VAL128、ILE129、HIS130、HIS131 和 VAL132 和 / 或鏈 A 可以在 VAL125、THRl26, PR0127、VAL128,ILE129、HIS130、HIS131 或 VAL132 之前的殘基處被截短；和鏈 B :MET40、ARG42、ILE44 和ARG47，和在如圖4D所示的IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D和IL-17E中的對(duì)應(yīng)殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合蛋白包括至少一個(gè)在位點(diǎn)3的前述鏈A殘基之一中的突變和至少一個(gè)在前述鏈B殘基之一中的突變。可以在位點(diǎn)3中進(jìn)行的一些示例性突變包括鏈B中的ARG42可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG42突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、酸性殘基或芳族殘基。例如，ARG42突變?yōu)?Glu、Asp、Trp 或 Ala。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 SER40、SEQ ID NO: 4 的 TRP69、SEQ ID NO: 6的ALA81、SEQ ID NO:8的PR069和SEQ ID NO: 10的GLY51，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守
的突變。鏈B中的ILE44可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE44突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQID NO:2 的 TYR42、SEQ ID NO:4 的 SER7USEQ ID NO:6 的 THR83、SEQ ID NO:8 的 THR71 和SEQ ID NO: 10的LEU53，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈B中的ARG47可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ARG47突變?yōu)橹鍤埢⒅行杂H水殘基、酸性殘基或芳族殘基。例如，ARG47突變?yōu)?Glu、Asp、Gln 或 Asn。針對(duì) SEQ ID NO: 2 的 ARG45、SEQ ID NO: 4 的 ARG74、SEQ ID NO: 6的ARG86、SEQ ID NO:8的ARG74和SEQ ID NO: 10的ARG56，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守
的突變。鏈A中的LEU75可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，LEU75突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQID N0:2 的 LEU73、SEQ ID NO:4 的 LEU102、SEQ ID NO:6 的ARGl14、SEQ ID N0:8 的ARG102和SEQ ID NO: 10的PR084，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的ILE86可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE86突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基，或帶電荷的殘基。針對(duì)SEQ ID NO: 2的 TYR84、SEQ ID NO:4 的 ARGl 14, SEQ ID NO:6 的 ALA126, SEQ ID NO:8 的 VALl 14 和 SEQID NO: 10的PR097，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的SER87可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，SER87突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。針?duì)SEQ ID N0:2的HI S85、SEQ ID N0:4 的 SER115、SEQ ID NO:6 的 ALA127、SEQ ID NO:8 的 ARGl 15 和 SEQ ID NO: 10的ARG98，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的ASN89可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ASN89突變?yōu)橹鍤埢?、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，ASN89突變?yōu)锳la。針對(duì) SEQ ID N0:2 的 ASN87、SEQ IDN0:4 的 VAL117、SEQ ID NO:6 的 ASNl29、SEQ ID NO:8 的ARG117和SEQID NO: 10的ASN100，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的VAL91可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨 基酸。例如，VAL91突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。例如，VAL91 突變?yōu)?Asp 或 Glu。針對(duì) SEQ IDN0:2 的 VAL89、SEQ ID N0:4 的 VAL119、SEQ ID NO: 6的VAL13USEQ IDNO:8的ALAl 19和SEQ ID NO: 10的GLU102，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的VAL125可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL125突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。針對(duì)SEQ ID NO:2 的 VAL123、SEQ ID NO:4 的 ILE157、SEQ ID NO:6 的 VAL174、SEQ ID NO:8 的VAL155和SEQ ID NO: 10的VAL142，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的PR0127可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，PR0127突變?yōu)橹鍤埢?、中性親水殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，PR0127 被刪除。針對(duì) SEQ IDN0:2 的 PR0125、SEQ ID NO:6 的 PR0176、SEQ IDNO:8的GLU157和SEQID NO: 10的PR0144，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的VAL128可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL128突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，VAL128 被刪除。針對(duì) SEQID NO: 2 的 ILE126、SEQ ID NO:6 的 ARG177、SEQID NO:8的PR0158和SEQ ID NO: 10的ARG145，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的ILE129可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，ILE129突變?yōu)橹行杂H水殘基、小的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，ILE129 被刪除。針對(duì) SEQID NO:2 的 VAL127、SEQ ID NO:6 的 SER178、SEQID NO:8的GLU159和SEQ ID NO: 10的VAL146，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的HI S130可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，HIS130突變?yōu)橹鍤埢蛩嵝詺埢Ｔ谝粋€(gè)實(shí)施方案中，HI S130被刪除。針對(duì) SEQ ID NO:2 的 HI S128、SEQ ID NO:6 的 VAL179, SEQ ID NO:8 的 LYS160 和 SEQ IDNO: 10的MET147，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的HI S131可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，HIS131突變?yōu)橹鍤埢蛩嵝詺埢?。在一個(gè)實(shí)施方案中，HI S131被刪除。針對(duì) SEQ ID N0:2 的 HI S129、SEQ ID NO:8 的 ASP161 和 SEQ ID NO: 10 的 GLY148，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。鏈A中的VAL132可以突變成另一種氨基酸，例如，丙氨酸或除了丙氨酸以外的氨基酸。例如，VAL132突變?yōu)橹行杂H水殘基、大的脂族殘基、帶電荷的殘基或芳族殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，VAL132被刪除。針對(duì)SEQID NO: 2的VAL130和SEQ ID NO:8的ALA162，可以進(jìn)行相應(yīng)的突變或非保守的突變。所述細(xì)胞因子亞基可以在下述殘基和所述亞基的天然C-端之間含有一個(gè)或多個(gè)刪除(例如,至少 2、3、4 或 5 個(gè))SEQ ID NO: 12 的 PR0127、SEQ ID NO: 2 的 PR0125、SEQ IDN0:6 的 PR0176、SEQ ID NO:8 的 GLU157 和 SEQ ID NO: 10 的 PR0144。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞因子亞基在前述位置之一以后立即截短，或從離所述位置1、2或3個(gè)殘基處截短。含有所述細(xì)胞因子亞基的多肽可以在這樣的截短處終止，或者可以包括與截短的細(xì)胞因子亞基的末端融合的其它外源序列(諸如多肽標(biāo)簽)。示例性的IL-17R結(jié)合蛋白包括多個(gè)突變，例如 至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)I中的置換，和至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)2中的置換； 至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)I中的置換，和至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)3中的置換或刪除；
至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)2中的置換，和至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)3中的置換或刪除； 至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)I中的置換，至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)2中的突變，和至少1、2或3個(gè)在位點(diǎn)3中的置換或刪除。示例性的IL-17R結(jié)合蛋白包括多個(gè)在IL-17細(xì)胞因子中的置換和/或刪除。例如，IL-17結(jié)合蛋白可以包括下述特征中的至少2、3或4項(xiàng)(根據(jù)在SEQ ID N0:12中的編號(hào))(i)在鏈A中在R47處的置換，(ii)在鏈A中在S65處的置換，(iii)在鏈A中在W68處的置換，(iv)在鏈A中在R102處的置換，(V)在鏈B中在N89處的置換，和(vi) SEQ IDNO: 12的至少2個(gè)C-端殘基的刪除，或與SEQ ID NO: 12的127-132相對(duì)應(yīng)的至少2、3、4或5個(gè)殘基的刪除。所述蛋白可以還具有本文所述的其它特征。在實(shí)施例24-27中列出了一些示例性的突變的IL-17細(xì)胞因子序列。也可以使用這樣的序列其與此類序列具有至少85、90、92、94、96、98或99%同一性，且包括在此類序列的相同位置處的置換。可以在其它IL-17細(xì)胞因子中產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的突變，如圖4D中所示的對(duì)應(yīng)性所指示的。另外，下述殘基可能埋入IL-17細(xì)胞因子的核心中，且在某些實(shí)施方案中，這些殘基中的至少50、60、70、80、90或100%未被突變
權(quán)利要求
1.一種分離的蛋白，所述蛋白包含抗體，所述抗體在下述區(qū)域中的表位處結(jié)合IL-17細(xì)胞因子 a.IL-17F (SEQ ID NO: 12)的大約氨基酸 21-41 ； b.IL-17A (SEQ ID NO:2)的大約氨基酸 21-39 ； c.IL-17C (SEQ ID NO:6)的大約氨基酸 44-65 ； d.IL-17D (SEQ ID N0:8)的大約氨基酸 32-53 ； e.IL-17E (SEQ ID NO: 10)的大約氨基酸 27-49 ;或 f.IL-17B (SEQ ID NO:4)的大約氨基酸 32-53。
2.一種分離的蛋白，所述蛋白包含抗體，所述抗體在下述區(qū)域中的表位處結(jié)合IL-17R IL-17RA (SEQ ID NO: 14)的大約氨基酸 22_36、83_96、118-147、152-179 和 / 或256-271 ；IL-17RB (SEQ ID NO: 15)的大約氨基酸 25-39、86_100、126-155、160-187 和 / 或254-269 ;或IL-17RC (SEQ ID NO: 16)的大約氨基酸 15-30、70-84、96_124、129-156 和 / 或227-237。
3.一種分離的蛋白，所述蛋白包含分離的白介素17 (IL-17)多肽，所述多肽包含這樣的序列 所述序列與IL-17A (SEQ ID NO:2)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除大約21-39、40-76、80-101 和 102-131 ； 所述序列與IL-17B (SEQ ID N0:4)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除32-53、66-105、110-131和 135-158 ； 所述序列與IL-17C (SEQ ID NO:6)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除大約44-65、78-117、121-143 和 153-179 ； 所述序列與IL-17D (SEQ ID NO:8)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除32-53、66-105、110-131和 134-163 ； 所述序列與IL-17E (SEQ ID NO: 10)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除27-49、50-87、93-114和 120-148 ;和 所述序列與IL-17F (SEQ ID NO: 12)具有至少90%同一性、但是小于100%同一性，且一個(gè)或多個(gè)選自下述的氨基酸被突變?yōu)槿魏纹渌被峄虮粍h除:大約21-41、42-78、82-103 和 104-133。
4.一種分離的蛋白，所述蛋白包含第一和第二 IL-17亞基，其中所述亞基的氨基酸序列彼此不同，且 所述亞基形成二聚體，所述二聚體具有第一面和第二面，所述第一面能夠與第一 IL-17受體亞基相互作用，所述第二面與相應(yīng)的天然IL-17蛋白相比，具有減少的與第二 IL-17受體亞基相互作用的能力。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中各亞基在與SEQID NO: 12的1-127和SEQ ID NO:2的1-125相對(duì)應(yīng)的區(qū)域，與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10或12)具有至少90%同一性。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中至少一個(gè)亞基在與SEQIDNO: 12的1-127和SEQID NO:2的1-125相對(duì)應(yīng)的區(qū)域，與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10或12)相比，具有I至7個(gè)置換或刪除。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中至少一個(gè)亞基在與SEQIDNO: 12的1-127和SEQID N0:2的1-125相對(duì)應(yīng)的區(qū)域，與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO: 2、4、6、8、10或12)相比，具有I至7個(gè)突變，并具有與SEQ ID NO: 12的128-133或SEQ ID NO:2的126-131相對(duì)應(yīng)的殘基的C-端截短。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中至少一個(gè)亞基與成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQIDN0:2、4、6、8、10 或 12)相同。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中一個(gè)亞基相對(duì)于成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQIDN0:2、4、6、8、10或12)具有I至5個(gè)突變，且另一個(gè)亞基相對(duì)于成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQ ID NO:2、4、6、8、10或12)具有至少4個(gè)氨基酸的C-端刪除和任選的I至5個(gè)突變。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中每個(gè)亞基與另一個(gè)亞基一樣，與相同的人IL-17細(xì)胞因子具有至少90%同一性。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白，其中一個(gè)亞基與成熟的人IL-17A具有至少90%同一性，另一個(gè)亞基與成熟的IL-17F具有至少90%同一性。
12.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面包含至少一個(gè)在位點(diǎn)I中的突變。
13.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面具有I至4個(gè)在位點(diǎn)I中的突變。
14.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面包含至少一個(gè)在位點(diǎn)2中的突變。
15.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面具有I至4個(gè)在位點(diǎn)2中的突變。
16.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面包含至少一個(gè)在位點(diǎn)3中的置換或刪除。
17.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面具有I至4個(gè)在位點(diǎn)3中的置換和/或至少一個(gè)氨基酸的C-端刪除。
18.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面在下述位點(diǎn)的至少2個(gè)中具 有至少一個(gè)置換或刪除位點(diǎn)I、位點(diǎn)2和位點(diǎn)3。
19.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述二聚體的第二面在下述位點(diǎn)的每一個(gè)中具有至少一個(gè)置換或刪除位點(diǎn)I、位點(diǎn)2和位點(diǎn)3。
20.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一亞基包含在與R47(根據(jù)在SEQ IDNO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的蛋白，其中所述在與R47相對(duì)應(yīng)的位置處的置換是至非堿性殘基的置換。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的蛋白，其中所述在與R47相對(duì)應(yīng)的位置處的置換是至酸性或疏水殘基的置換。
23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的蛋白，其中所述第一亞基另外至少包含在與S65、V68或R102 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))或S64、W67或RlOl (根據(jù)在SEQ ID NO: 20中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的一個(gè)或多個(gè)位置處的第二置換。
24.根據(jù)權(quán)利要求4或20所述的蛋白，其中所述第二亞基包含在與N89(根據(jù)在SEQID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換。
25.根據(jù)權(quán)利要求4或20所述的蛋白，其中所述第二亞基包含與128-133(根據(jù)在SEQID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的一個(gè)或多個(gè)C-端殘基的刪除或突變。
26.根據(jù)權(quán)利要求4或20所述的蛋白，其中所述第二亞基被刪除了與128-133(根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的C-端殘基。
27.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一亞基和第二亞基共價(jià)地相連。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的蛋白，其中所述第一亞基和第二亞基是相同多肽鏈的組分。
29.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，所述蛋白對(duì)IL-17RA的親和力不超過100倍地弱于IL-17A/A、IL-17F/F 或 IL-17A/F。
30.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，所述蛋白對(duì)IL-17RC的親和力不超過100倍地弱于IL-17A/A、IL-17F/F 或 IL-17A/F。
31.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一面相對(duì)于成熟的人IL-17細(xì)胞因子(SEQI D N0:2、4、6、8、10或12)不含有任何突變。
32.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一亞基在與MET25和LYS115(根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變，和/或所述第二亞基在與ILE29、ILE31、TRP58、ASN61、TYR63、PR064、SER65、GLU66、VAL100、ARG102、HIS104、VAL109和PHElll (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變。
33.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一亞基在與61^94、61^95、61^96、1^5115和LEU117 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變，和/或所述第二亞基在與 GLN36、ARG37、MET40、SER41、ASN43、GLU45、TYR54、VAL56、GLU66、VAL68和VAL118 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變。
34.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白，其中所述第一亞基在與LEU75、ILE86、SER87、ASN89、VAL91、VAL125、PR0127、VAL128、ILE129、HIS130、HI S131 和 VAL132 (根據(jù)在 SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變，和/或所述第二亞基在與MET40、ARG42、ILE44和ARG47 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處包含一個(gè)或多個(gè)突變。
35.一種分離的蛋白，所述蛋白包含第一和第二 IL-17亞基，其中 每個(gè)亞基與人IL-17多肽具有至少90%同一性，且共同地，所述亞基相對(duì)于這樣的人IL-17多肽包括下述置換或刪除中的至少2個(gè) 在所述第一亞基中，在與R47 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換， 在所述第一亞基中，在與S65 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換， 在所述第一亞基中，在與W68 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換， 在所述第一亞基中，在與R102 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的 置換， 在所述第二亞基中，在與N89 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換， 在所述第二亞基中，在與Q95 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的置換，和 在所述第二亞基中，在與127-132 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的一個(gè)或多個(gè)置換或刪除。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的蛋白，其中共同地，所述亞基相對(duì)于這樣的人IL-17多肽包括下述置換或刪除中的至少2個(gè) 在所述第一亞基中，在與R47 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的R47E、R47A 或 R47D 置換， 在所述第一亞基中，在與S65 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的S65K、S65R 或 S65W 置換， 在所述第一亞基中，在與W68 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的W68A、W68V、W68S、W68Q 或 W68N 置換， 在所述第一亞基中，在與R102 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的R102A、R102V、R102S 或 R102T 置換， 在所述第二亞基中，在與N89 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的N89A或N89V置換， 在所述第二亞基中，在與Q95 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置處的Q95A或Q95W置換，和 在所述第二亞基中，至少與128-132 (根據(jù)在SEQ ID NO: 12中的編號(hào))相對(duì)應(yīng)的位置的刪除。
37.一種分離的蛋白，其包含含有下述多肽的蛋白(1)第一白介素-17多肽，和(2)第二白介素-17多肽，其中所述IL-17多肽之一或兩者是人IL-17細(xì)胞因子的突變形式，且所述第一和第二 IL-17多肽結(jié)合形成二聚體。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的分離的蛋白，其中所述第一和第二IL-17多肽各自與人IL-17細(xì)胞因子具有至少95%同一性。
39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的分離的蛋白，其中所述第一和第二IL-17多肽是單個(gè)多肽鏈的組分。
40.根據(jù)權(quán)利要求37所述的分離的蛋白，其中所述蛋白另外包含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域或白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
41.根據(jù)權(quán)利要求37所述的分離的蛋白，其中所述第一和第二多肽通過卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域或亮氨酸拉鏈可操作地相連。
42.根據(jù)權(quán)利要求37所述的分離的蛋白，其中所述第一或第二多肽包含與人IL-17細(xì)胞因子相同的序列。
43.一種分離的蛋白，所述蛋白包含一個(gè)或多個(gè)選自下列的多肽序列SEQ IDNO: 21-46，或與SEQ ID NO: 21-46具有至少95%同一性、但是與天然的成熟的IL-17細(xì)胞因子不同的序列。
44.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)所述的蛋白。
45.一種調(diào)節(jié)受試者的免疫或炎性應(yīng)答的方法，所述方法包括 以有效地調(diào)節(jié)所述受試者的免疫或炎性應(yīng)答的量，給所述受試者施用根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物。
46.一種治療受試者的IL-17介導(dǎo)的障礙的方法，所述方法包括 以有效地調(diào)節(jié)所述受試者的免疫或炎性應(yīng)答的量，給所述受試者施用根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物。
47.一種分離的核酸，其包含一個(gè)或多個(gè)編碼根據(jù)權(quán)利要求I至44中任一項(xiàng)所述的蛋白或其多肽鏈的序列。
48.一種重組宿主細(xì)胞，其包含重組核酸，所述重組核酸含有一個(gè)或多個(gè)編碼根據(jù)權(quán)利要求I至44中任一項(xiàng)所述的蛋白或其多肽鏈的序列。
49.一種制備重組蛋白的方法，所述方法包括 在允許表達(dá)所述重組蛋白的條件下，培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求48所述的宿主細(xì)胞，和 回收所述重組蛋白。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中從細(xì)胞裂解物或細(xì)胞培養(yǎng)基純化所述重組蛋白，和/或所述方法包括用賦形劑、穩(wěn)定劑和緩沖劑中的一種或多種配制所述重組蛋白。
全文摘要
提供了結(jié)合蛋白(其包括非天然存在的和重組地修飾的結(jié)合IL-17R的蛋白，和包括具有突變的IL-17細(xì)胞因子序列的蛋白)，制備這樣的分子的方法，和使用這樣的分子作為治療劑、預(yù)防劑和診斷劑的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102648002SQ201080053654
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2010年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月10日
發(fā)明者B·M·金, C·K·加西亞, G·J·斯茨克維奇, L·K·埃里, M·M·施密特, S·雷迪, T·M·巴尼斯 申請(qǐng)人:十一生物療法股份有限公司, 斯坦福大學(xué)托管董事會(huì)