專利名稱：前列腺素F2α及類似物用于愈合角膜和結(jié)膜損害的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療角膜和結(jié)膜損害的反應(yīng)/解決方案。角膜和結(jié)膜損害可以源于干眼癥、變態(tài)反應(yīng)、損傷、白內(nèi)障手術(shù)、LASIK或PRK屈光手術(shù)、化學(xué)燒傷、創(chuàng)傷、刺激、細(xì)菌、真菌或病毒感染或者一些藥物的副作用。角膜或結(jié)膜損害是角膜、結(jié)膜或杯狀細(xì)胞的局部破壞。此類損害可以是局部的或者彌散的并導(dǎo)致角膜糜爛、點(diǎn)狀角膜病變、上皮缺陷、角膜潰瘍、角膜疤痕形成、角膜變薄、角膜穿孔、角膜水腫、角膜炎、結(jié)膜炎、創(chuàng)傷、微小擦傷等。本發(fā)明的組合物能夠促進(jìn)這些損害的愈合過程。
背景技術(shù)：
角膜和結(jié)膜損害是向醫(yī)生就診的患者中診斷的最多的疾病之一，并且是失明主要原因之一。這些損害可以有不同的原因，但是它們主要是因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)、感染(細(xì)菌、病毒 和真菌)、干眼癥、手術(shù)和其它創(chuàng)傷。這些損害是有害的并且是非常疼的。這些損害的癥狀可以是干燥、燃燒樣和沙-礫樣眼刺激。癥狀還可以描述為眼睛發(fā)癢、刺癢、刺痛或者疲勞。其它癥狀有眼睛疼痛、發(fā)紅、脹痛和眼底壓迫感。眼睛表面的損傷增加了對(duì)強(qiáng)光的不適和敏感。眼睛表面的損害需要治療和極其快速地治愈以避免狀況惡化和出現(xiàn)并發(fā)癥例如潰瘍形成，在大多數(shù)嚴(yán)重病例中潰瘍形成會(huì)導(dǎo)致視敏度喪失和失明。對(duì)于因干眼癥而致?lián)p害的治療，存在許多起潤滑作用的溶液和吸水水凝膠。然而，這些產(chǎn)品僅緩解癥狀而不能加速損害的愈合過程。對(duì)于更深的損害，有一些維生素A溶液可幫助愈合但是效率有限。除此之外，增強(qiáng)黏蛋白分泌的組合物是引人關(guān)注的。黏蛋白是對(duì)上皮細(xì)胞，特別是角膜和結(jié)膜上皮細(xì)胞提供保護(hù)和潤滑作用的細(xì)胞外蛋白質(zhì)(跨膜或者分泌的蛋白質(zhì))。已經(jīng)證明，黏蛋白由人眼杯狀細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞囊泡分泌并且釋放在結(jié)膜上皮表面上(Greiner等，Mucus Secretory Vesicles in Conjunctival Epithelial Cells of Wearers ofContact Lenses, Archives of Ophthalmology,98 :1843-1846(1980)；以及 Dilly 等，Surface Changes in the Anaesthetic Conjunctiva in Man， with Special Referenceto the Production of Mucus from a Non-Goblet-Cell Source， British Journal ofOphthalmology,65 :833-842(1981))。當(dāng)對(duì)角膜和結(jié)膜損害進(jìn)行治療時(shí)，問題在于活化和促進(jìn)愈合的自然機(jī)制，例如細(xì)胞增殖和生長因子、黏蛋白和糖基氨基-聚糖分泌。另一個(gè)問題是促進(jìn)/增強(qiáng)愈合過程和緩解與干眼病有關(guān)或無關(guān)的癥狀。舒而坦 (Xalatan )是目前世界上處方開具最多的抗青光眼藥物。其包含0. 005%濃度的前列腺素F2 α類似物拉坦前列素(Iatanoprost)。該產(chǎn)品以通過0. 02%苯扎氯銨(benzalkonium chloride)防腐的5ml多劑量瓶銷售。盡管舒而坦 對(duì)于青光眼的治療非常不錯(cuò)，但是它具有副作用，一些副作用可能源于防腐劑的存在。在用舒而坦 滴眼劑對(duì)這種慢性終身性疾病治療數(shù)月之后，舒而坦 滴眼劑開始刺激和損害眼睛表面。因此，患有青光眼的患者隨后會(huì)患有角膜和結(jié)膜損害。還懷疑長期使用這種產(chǎn)品會(huì)引起干眼病(Erb等,2008 ；Eamon等，J Glaucoma, 2008年8月)。因此,對(duì)于患有眼睛表面疾病的青光眼患者不考慮使用經(jīng)防腐處理的藥物，包括舒而坦 。對(duì)于具有眼睛表面疾病并且還患有青光眼的患者，存在的問題是在實(shí)現(xiàn)對(duì)青光眼進(jìn)行有效治療的同時(shí)還治療(并且不惡化)他們的眼睛表面損害或疾病。US 2005124699描述了局部應(yīng)用前列腺素E用于治療或預(yù)防角膜和/或結(jié)膜上皮細(xì)胞疾病的用途。該專利更加特別地描述單獨(dú)的或者組合的前列腺素El或者E2，或者與抗炎藥組合的用途。前列腺素F2a既沒有被公開也沒有被建議作為對(duì)角膜和結(jié)膜疾病的可能的治療。前列腺素E可以用于治療角膜和結(jié)膜損害。然而，在對(duì)治療產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)或者抗性的病例中對(duì)患者進(jìn)行替代治療常常是有益的。

發(fā)明內(nèi)容
申請(qǐng)人:解決了上述技術(shù)問題，并且配制了用于治療角膜和/或結(jié)膜損害的新組合物，其中組合物包含治療量的，優(yōu)選占總組合物O. 0001 %至O. 005 % w/w范圍內(nèi)的濃度的前列腺素F2 α類似物或其衍生物，所述組合物為適宜在眼睛表面局部應(yīng)用的形式并且無任何類型的有害防腐劑。本發(fā)明的組合物在眼睛表面改變的動(dòng)物模型中測(cè)試以評(píng)價(jià)它們可能的毒性。如所預(yù)期，申請(qǐng)人注意到，本發(fā)明的組合物對(duì)角膜表面沒有顯示出毒性征兆，但是令人驚奇地是，組合物具有眼睛愈合特性。這些愈合特性在使用舒而坦 時(shí)沒有觀察到，盡管舒而坦 使用前列腺素(PG)F2a作為活性劑。這最有可能是因?yàn)槭娑耿嘀兴玫姆栏瘎┏洚?dāng)了PG類似物愈合特性的掩蔽劑。因此本發(fā)明的組合物適宜治療眼睛表面疾病，包括角膜和結(jié)膜損害，更加特別地是源于不同原因(手術(shù)、PRK、LASIK、感染等)的創(chuàng)傷和干眼癥(源于醫(yī)源性原因、免疫學(xué)原因或者環(huán)境原因)。本發(fā)明的組合物還具有更多的優(yōu)點(diǎn)。例如，前列腺素F2ci已經(jīng)在眼科中使用多年并且它們的毒性、副作用和藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征眾所周知。使用前列腺素F2a開發(fā)的本發(fā)明的組合物可以快速地應(yīng)用于患者，因?yàn)殛P(guān)于這些治療劑積累了很多知識(shí)。由于迫切需要治療角膜和結(jié)膜損害，選擇前列腺素F2 α似乎是恰當(dāng)?shù)摹＝M合物的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于它組合了不同的作用機(jī)制。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是低滲性的以校正干燥的結(jié)果。滲透保護(hù)劑例如赤蘚糖醇可加入到組合物中以保護(hù)角膜細(xì)胞不會(huì)滲透性外流。還可加入增稠劑和/或增濕劑以產(chǎn)生潤滑效果和濕潤效
果O在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是等滲的。前列腺素可以作為滴眼劑或人工淚液；凝膠，優(yōu)選粘稠凝膠；固體插入物或者軟膏劑局部施用。組合物可以是溶液形式，例如水溶液，膠束溶液；或者懸浮液形式；或者陰離子或陽離子乳狀液形式。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，組合物是陽離子乳狀液。不希望被任何理論所聯(lián)系，申請(qǐng)人證明，前列腺素F2ci的效果可以根據(jù)下列機(jī)制解釋前列腺素F2ci類似物可活化FP受體(細(xì)胞表面上的前列腺素F受體)。這種結(jié)合可活化黏蛋白MUC5AC從杯狀細(xì)胞分泌，因此增加了眼睛表面的水化作用和保護(hù)了眼睛表面(Chung WC, Ryu SH, Sun H，Zeldin DC，Koo JS. CREB mediates prostaglandinF2alpha_induced MUC5AC overexpres sion. J Immunol. 2009 ; 182 (4) :2349-56)。前列腺素可同時(shí)增加基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)分泌，這有利于創(chuàng)傷愈合過程中的細(xì)胞重塑和細(xì)胞形狀改變(Mietz H，Esser JM, Welsandt G，Kociok N，Hueber A，Joussen A，Esser P，Krieglstein GK. Latanoprost stimulates secretion of matrix metalloproteinasesin tenon fibroblasts both in vitro and in vivo. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003 ；44(12) :5182-8)。
前列腺素還通過誘導(dǎo)EGR-I (早期生長應(yīng)答因子-I)改善創(chuàng)傷愈合(Xu W，ChouCL，Sun H，F(xiàn)ujino H，Chen QM, Regan JW. FP prostanoid receptor-mediated inductionof the expression of early growth response factor-1 by activation of a Ras/Raf/mitogen-activated protein kinase signaling cascade. Mol Pharmacol. 2008 ;73 (I)
111-8)o下面圖示說明接觸前列腺素F2 α后連續(xù)的級(jí)聯(lián)事件(+)代表“活化”。
PGF2a — (+) FP 受體—(+) PLC, PKC, Ca2+ 信號(hào)傳導(dǎo)
i(+)
IP.S 和 DAG
U+) 4 ㈩
增加 Ca2+ PKC
i(+)
SPLA2 (具有創(chuàng)傷愈合活性)
PGF2a (+) EGF + EGFR (+)細(xì)胞增殖
4 (+)
15-HETE (具有黏蛋白的促分泌活性)
4 (+)
LXA4 (是抗炎性的并且有利于再次形成上皮)這些級(jí)聯(lián)的活化會(huì)導(dǎo)致黏蛋白分泌，這有效促進(jìn)損害的愈合(Landreville S，Coulombe S，Carrier P，Gelb MH,Guerin SL，Salesse C. Expression of phospholipasesA2 and C in human corneal epithelial cells.Invest Ophthalmol Vis Sci.2004 年11 月；45 (11) :3997-4003 ；Gronert K.Lipid autacoids in inflammation and injuryresponses a matter of privilege. Mol Interv. 2008 ；8 (I) :28-35)。根據(jù)本發(fā)明，申請(qǐng)人選擇但不限于前列腺素F2a或其類似物和衍生物，更優(yōu)選拉坦前列素、拉坦前列素游離酸、15-酮-拉坦前列素、拉坦前列素氮氧化物、烏諾前列酮(unoprostone)、比馬前列素(bimatoprost)、曲伏前列素(travoprost)、他氟前列素(tafIuprost)和其它衍生物作為活性物質(zhì)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，組合物中的前列腺素濃度在O. 0001%和O. 005%重量/重量之間。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物是未經(jīng)防腐的。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，組合物在室溫下是穩(wěn)定的。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物通過溫和防腐劑防腐。溫和防腐劑可以是山梨酸、硼酸、EDTA、硫酸鋅、過硼酸鈉、purite或者聚六亞甲基雙胍。眼用組合物可以包含抗氧化劑(抗壞血酸、維生素E、EDTA)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物是無菌的。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物通過加熱或者過濾除菌。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，組合物是低滲性的。組合物可以是前列腺素F2 α或其類似物和衍生物與增稠劑和/或增濕劑的組合，所述增稠劑和/或增濕劑是例如用于緩解干眼癥的聚合物，例如但不限于聚乙烯醇、葡聚糖、聚卡波非(polycarbophil)、羥丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚維酮、PEG-400、卡波普(carbopols)、輕丙基甲基纖維素(hypromellose)、聚山梨酸酯80、羥丙基瓜爾膠、透明質(zhì)酸、殼聚糖、葡聚糖及其它。這些聚合物可以單獨(dú)或者與其它成分一起加入到組合物中。組合物可以與滲透保護(hù)劑組合，諸如甘油、右旋糖、丙二醇、谷氨酸、膽堿、N-乙酰天冬氨酸、甘氨酸、甜菜堿、海藻糖、脯氨酸、L-肉堿、肌氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、二甲基甘氨酸、?；撬?、β -丙氨酸、赤藻糖醇、葡萄糖和麥芽糖。組合物可含有一種或更多種滲透保護(hù)劑。組合物還可以與其它愈合劑相組合，諸如乙?；腚装彼帷⒕S生素A、D、E和K、葉黃素、蘆薈提取物例如aloine、氰基鈷胺素和衍生物。組合物可以與可阻止感染或者活化上皮生長因子的其它試劑，即促分泌劑，諸如15(S)_HETE、前列腺素E和Fl α，或者可通過與F2 α前列腺素互補(bǔ)的作用機(jī)制幫助損害愈合的抗炎劑相組合。這些試劑可以是抗生素，諸如氯霉素(chloramphenicol)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、慶大霉素(gentamycin)、紅霉素(erythromycin)、萬古霉素(vancomycine)、亞胺硫霉素(imipeneme)、磺胺卩密I淀(sulfadiazine);抗真菌劑，諸如兩性霉素 B (amphotericin B)、酮康唑(ketoconazole)、益康唑(econazole)、氟康唑(fluconazole)、咪康唑(iconazole);抗病毒劑，諸如碘苷(idoxuridine)、阿昔洛韋(acyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、西多福韋(cidofovir)、干擾素、DDI> AZT、磷甲酸(foscarnet)、阿糖腺苷(vidarabine);抗炎性劑,諸如非類固醇抗炎性劑,諸如水楊酸鹽(salicylate)、卩引哚美辛(indomethacin)、布洛芬(ibuprofen)、雙氯酌·酸(diclofenac) >氟比洛芬(flurbiprofen)、卩比羅昔康(piroxicam),或者類固醇治療劑，包括但不限于倍氯米松(beclomethasone)、倍他米松(betamethasone)、皮質(zhì)酮(corticosterone)、可的松(cortisone)、地塞米松(dexamethasone)、地塞米松掠櫚酸酯(dexamethasonepalmitate)、二氟潑尼酯(difIuprednate)、氟米松(fIumethasone)、醋酸氟輕松(fluocinolone acetonide)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、利美索龍(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、去炎松(triamcinolone)及其類似物、衍生物、前體藥物、鹽和親脂性酯、前列腺素E2衍生物。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療劑可以與愈合劑相組合，所述愈合劑包括但不限于維生素A、維生素E、維生素D和維生素K、α -生育酚衍生物、視黃醇衍生物、葉黃素、蘆薈提取物諸如aloine、ω-3脂肪酸、氰鈷胺、L-胱氨酸、吡哆醇、乙?；腚装彼?、精油諸如金盞花、雪松、薰衣草的油，及其類似物和衍生物根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，可以通過包含合適的緩沖液諸如磷酸鹽或硼酸鹽緩沖液而緩沖組合物以維持PH穩(wěn)定性。本發(fā)明的組合物可以包含增稠劑和/或增濕劑。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，組合物包裝在單次使用瓶、多劑量滴管或無防腐劑多劑量滴管內(nèi)。使用方法本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是用于治療眼睛表面疾病的方法，包含向需要治療的患者施用如上所述的本發(fā)明的組合物，組合物中前列腺素F2a的治療量范圍以重量計(jì)優(yōu)選占組合物總重量的O. 0001 %至O. 005 %。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物優(yōu)選每天至少一次施用，每天最多4滴。本發(fā)明的另一目標(biāo)是用于治療眼睛表面疾病，優(yōu)選角膜和/或結(jié)膜損害的方法，包含向需要治療的患者施用本發(fā)明的組合物，即包含治療量的前列腺素F2a或其類似物或衍生物的組合物。在本發(fā)明的方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物中前列腺素F2a或其類似物或衍生物的治療量范圍以重量計(jì)占組合物總重量的O. 0001%至O. 005%。有利地，在本發(fā)明方法中使用的組合物無有害的防腐劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺素F2 a類似物選自由拉坦前列素、拉坦前列素游離酸、15-酮-拉坦前列素、拉坦前列素氮氧化物、烏諾前列酮、比馬前列素、曲伏前列素、他氟前列素組成的群組。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，組合物是水溶液、粘稠或半粘稠凝膠、懸浮液、固體插入物或者陰離子或陽離子乳狀液。優(yōu)選地，組合物是滴眼劑、人工淚液、凝膠或軟膏劑形式。在本發(fā)明方法中使用的組合物可以是等滲的或者低滲的。組合物還可包含滲透保護(hù)劑，或其它愈合劑、緩沖液、增稠劑、增濕劑和抗氧化劑。如在方法中所使用，本發(fā)明的組合物可以是未經(jīng)防腐的、無防腐劑的、自身防腐的或者用溫和防腐劑防腐。根據(jù)本發(fā)明的方法，組合物可以每天至少一次施用，每天最多4滴。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物在3至5天過程中施用。根據(jù)本發(fā)明的方法，組合物還可包含抗青光眼試齊IJ、抗炎劑、抗生素、抗病毒劑或抗真菌劑和其它促分泌化合物。根據(jù)第一實(shí)施方案，患者沒有患青光眼。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中前列腺素F2 a ,優(yōu)選拉坦前列素的治療量范圍以重量計(jì)占組合物總重量的O. 0001%至O. 004%或者至小于O. 004%，優(yōu)選O. 0005%至O. 002% ;在該實(shí)施方案中，優(yōu)選地，組合物在3至5天過程中施用。根據(jù)第二實(shí)施方案，患者患有青光眼。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中前列腺素F2 a ,優(yōu)選拉坦前列素的治療量范圍以重量計(jì)占組合物總重量的O. 004%至O. 005%或者從大于O. 004%至小于O. 005%。在該適應(yīng)癥中，劑量方案優(yōu)選每天一滴。牛產(chǎn)過稈水溶液前列腺素以足夠的濃度置于水中并通過磁力攪拌混合。如果前列腺素難以溶解，可以將溶液經(jīng)高剪切混合器混合10分鐘。還可加入表面活性劑或者共溶劑或者將溶液稍微加熱至50°c幫助溶解。乳狀液本發(fā)明的乳狀液可以根據(jù)下列步驟制備
-通過混合前列腺素和飽和油(諸如MCT)制備油相，-通過混合水溶性成分(滲透保護(hù)劑、稠化劑、緩沖液)和純化水制備水相；-將油相摻入到水相中；-快速加熱所得到的粗制乳狀液，優(yōu)選在75°C下；-通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜方法，例如通過剪切混合降低乳狀液微滴大??；-使用冰浴將乳狀液優(yōu)選冷卻至大約20V ；-將冷卻的乳狀液均勻化處理；-任選地，通過使用例如NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH至生理pH；-任選地通過高壓蒸汽滅菌法將乳狀液滅菌。[定義]在本發(fā)明的意圖中，下列術(shù)語具有下列含義溫和防腐劑防腐劑是保持在使用階段過程中組合物中無微生物的化合物。溫和防腐劑是對(duì)眼睛表面沒有有害作用的防腐劑。其包括山梨酸、硼酸、EDTA、硫酸鋅、過硼酸鈉、purite或者聚六亞甲基雙胍。其排除以通常濃度使用的苯扎氯銨、硫柳汞、聚季銨鹽、對(duì)輕基苯甲酸甲酯和丙酯、三氯叔丁醇、西卩比氯銨(cetylpyridinium chloride)、苯扎溴銨(benzododecinium bromide)。有害防腐劑是在一次至多次應(yīng)用后損傷眼睛表面的防腐劑，或者充當(dāng)掩蔽劑以阻止前列腺素使角膜和結(jié)膜損害愈合的防腐劑。它們包括以通常濃度，即從O. 006%至O. 2%范圍內(nèi)的濃度使用的苯扎氯銨、硫柳汞、聚季銨鹽、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和丙酯、三氯叔丁醇、西吡氯銨、苯扎溴銨。治療量意思是指活性物質(zhì)足以對(duì)眼睛疾病產(chǎn)生治療效果，以致于與未治療眼睛相比減少或者防止所述眼睛疾病癥狀的量或者濃度。多劑量的無防腐劑瓶是系統(tǒng)可以不使用防腐劑而維持無菌的多劑量容器。滲透保護(hù)劑滲透保護(hù)劑是通過穿透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并調(diào)節(jié)滲透流量防止細(xì)胞在滲透休克時(shí)爆裂或者質(zhì)壁分離的化合物。這些化合物包括甘油、右旋糖、丙二醇、谷氨酸、膽堿、N-乙酰天冬氨酸、甘氨酸、甜菜堿、海藻糖、脯氨酸、L-肉堿、肌氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、二甲基甘氨酸、牛磺酸、β -丙氨酸、赤藻糖醇、葡萄糖和麥芽糖。角膜和結(jié)膜損害定義為通過變態(tài)反應(yīng)、來自醫(yī)源性原因、免疫學(xué)原因或者環(huán)境原因的干眼癥、化學(xué)燒傷、來自病毒、細(xì)菌或真菌來源的感染、損傷或手術(shù)(PRK、LASIK)或者其它物理和化學(xué)損傷或創(chuàng)傷引起的角膜和結(jié)膜細(xì)胞/組織的任何損害、創(chuàng)傷、損傷或刺激。未經(jīng)防腐的是表示滴眼劑沒有通過歐洲和美國藥典抗菌有效性測(cè)試。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，未經(jīng)防腐的組合物是無任何防腐劑的?？伤幱幂d體是指當(dāng)配制時(shí)其是安全的并正確遞送有效量前列腺素F2 α至眼睛表面的任何媒介物。前列腺素F2a或前列腺素F2 a類似物前列腺素是從脂肪酸酶促衍生并在體內(nèi)具有重要功能的一組脂質(zhì)化合物的成員。每一前列腺素F2 a包含20個(gè)碳原子，包括一個(gè) 5碳環(huán)。它們是介導(dǎo)物并具有許多種強(qiáng)的生理效應(yīng)。存在許多不同的前列腺素家族，每一家族對(duì)于特定的受體具有特異性，產(chǎn)生特定的效應(yīng)。前列腺素F2a及類似物結(jié)合前列腺素F2a受體。類似物可代表不同的同種型，諸如5-6反式、15-酮、15-表(epi)、15(S)前列腺素F2a、修飾的前列腺素諸如酯、醚、酰胺、氮氧化物、肽基，諸如拉坦前列素、曲伏前列素、烏諾前列酮、比馬前列素和其它。愈合劑是啟動(dòng)、促進(jìn)、改善、增強(qiáng)或者利于人體內(nèi)損害天然愈合過程的化合物。它們包括乙?；腚装彼?、維生素A、D、E和K、葉黃素、蘆薈提取物諸如aloine、氰鈷胺。緩沖液是維持組合物pH為規(guī)定值的化合物它們可包括磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、碳酸鹽或硼酸鹽緩沖液或其組合。增稠劑和/或增濕劑是用于緩解干眼癥的化合物。它們可包括但不限于聚乙烯醇、葡聚糖、聚卡波非、羥丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚維酮、PEG-400、卡波普、羥丙基甲基纖維素、聚山梨酸酯80、羥丙基瓜爾膠、透明質(zhì)酸、殼聚糖、葡聚糖和其它，或者它們的組合。
抗氧化劑是阻止或延緩由空氣中所存在的氧導(dǎo)致產(chǎn)物變質(zhì)的化合物。它們可包括維生素C、維生素E、EDTA、亞硫酸氫鈉或其組合。促分泌化合物是引起另一物質(zhì)以受控方式分泌的物質(zhì)，諸如前列腺素E，它促進(jìn)黏蛋白的分泌。


圖I.在大鼠中角膜去上皮后4天時(shí)的眼睛表面疤痕。圖2.在治療期結(jié)束時(shí)測(cè)量的角膜疤痕面積。*，當(dāng)與舒而坦@或O. 02% BAK相比時(shí) P < O. 05。圖3.在第4天時(shí)，所治療眼睛表面的表面上皮的體外共聚焦顯微鏡圖像，并且與第O天時(shí)的基礎(chǔ)情況相比較。圖4.所治療大鼠角膜的蘇木精-曙紅染色。*定位角膜上的上皮。圖5.在實(shí)驗(yàn)階段結(jié)束時(shí)結(jié)膜中的杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)。#，當(dāng)與PBS相比時(shí)P < 0.02 ;*，當(dāng)與PBS或者本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液相比時(shí)P < O. 0001。圖6.所治療眼睛結(jié)膜上的MUC5AC免疫組織學(xué)定位。圖7.行刮術(shù)和滴眼劑刺激后2小時(shí)不同治療對(duì)細(xì)胞存活和遷移的有效性。圖8.行刮術(shù)和滴眼劑刺激后24小時(shí)不同治療對(duì)細(xì)胞存活和遷移的有效性。圖9.行刮術(shù)后2小時(shí)和24小時(shí)時(shí)的創(chuàng)傷閉合，測(cè)量為單細(xì)胞層邊緣之間的距離。*，當(dāng)與PBS或本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液比較時(shí)P < O. 01 ;#，當(dāng)與PBS或本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液比較時(shí)P < O. 002。圖10.所治療細(xì)胞的Ki67免疫組織學(xué)鑒定。注意圖片上表現(xiàn)出灰色至白色的分裂細(xì)胞。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例實(shí)施例I :體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方案的簡單描述:體重100至125g的16只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為4組(每組(Gp)4只大鼠):Gpl，磷酸鹽緩沖溶液(PBS) ;Gp2，0.02%苯扎氯銨(BAK) ;Gp3，舒而坦 ;Gp4，拉坦前列素乳狀液。在分別用氯胺酮/賽拉嗪和表面Oxybucaine全身和局部麻醉后，在應(yīng)用50μ I的50%乙醇溶液后每一只大鼠的右眼角膜的上部分用手術(shù)刀刮傷。去除上部分角膜和角膜緣上皮(在DO天時(shí))。在刮術(shù)后立即滴注一滴托百士(Tobrex)。行刮術(shù)后2小時(shí)和5小時(shí)時(shí)，向右眼角膜上施用一滴不同的測(cè)試物品。每天重復(fù)后一種滴注持續(xù)4天，并且在第4天在最后一次滴注后用體內(nèi)共聚焦顯微鏡(IVCM-HRT)評(píng)價(jià)角膜。在實(shí)驗(yàn)過程結(jié)束時(shí)(治療的總持續(xù)時(shí)間為5天；從DO天至D4天)，處死動(dòng)物并取得眼睛以表征所治療角膜的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。分別通過杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)和MUC5AC分泌特征的免疫組織學(xué)表征評(píng)價(jià)結(jié)膜完整性和功能性。益里 第4天時(shí)角膜混濁證明，在重復(fù)滴注舒而坦⑧或O. 02% BAK溶液后的角膜劃痕是明顯的。相反，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液有利于角膜愈合而沒有這些威脅視力的疤痕。圖I給出行刮術(shù)和重復(fù)滴注不同測(cè)試物品后第4天時(shí)所治療角膜的圖片。明顯地，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液有利于安全的角膜創(chuàng)傷愈合，因?yàn)榻悄ど蟽H存在極其小的白色 疤痕組織。對(duì)于每一只所治療的眼睛，在第4天時(shí)測(cè)量該白色區(qū)域的表面(見圖2)。明顯地，與舒而坦⑧相比，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液表現(xiàn)出極佳的愈合特性。此外，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液具有優(yōu)于PBS的改善的功效。IVCM(體內(nèi)共聚焦顯微術(shù))數(shù)據(jù)證實(shí)，角膜的確愈合非常好，而沒有形成疤痕組織(圖3圖片上可見白色區(qū)域)。請(qǐng)注意，對(duì)于舒而坦@和O. 02% BAK溶液在第4天時(shí)得到的圖片中可見疤痕組織(高反射性)，這是角膜水腫和組織結(jié)構(gòu)破壞的結(jié)果，因此清楚地表明了兩種測(cè)試物品的毒性。相反，在用本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液治療的眼睛中缺乏這種高反射性證明了前列腺素類似物的有益效果，甚至PBS對(duì)照也呈現(xiàn)出輕微水腫(即細(xì)胞之間的彌散的白色區(qū))。值得注意的是，拉坦前列素的可能的愈合效果被BAK(O. 02% )的存在所掩蔽和阻止，因?yàn)槭娑?中存在的前列腺素類似物不能夠保護(hù)角膜上皮和基質(zhì)不受防腐劑的有咅作用。所治療角膜的蘇木精-曙紅染色證實(shí)了本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液的積極作用。在用所述的本發(fā)明拉坦前列素乳狀液治療的大鼠角膜中沒有觀察到上皮變薄，或者具有大量炎癥性滲透物的較多間質(zhì)滲透(見圖4)。在O. 02% BAK治療動(dòng)物和舒而坦⑧治療動(dòng)物中，水腫和炎癥性滲透特別明顯。本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液明顯與角膜愈合過程的改善和角膜完整性的保持有關(guān)。從功能角度上，與PBS治療的(對(duì)照)、舒而坦⑧治療的和O. 02% BAK治療的眼睛相比，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液還具有有益的作用。結(jié)膜杯狀細(xì)胞得到維持(圖5)，因?yàn)槊恳灰曇皟?nèi)的活細(xì)胞數(shù)提高了。杯狀細(xì)胞是在眼睛表面保護(hù)中具有重要作用的黏蛋白分泌性細(xì)胞。因此，重要的是，這些細(xì)胞的MUC5AC分泌能力得到維持。這通過對(duì)治療眼睛的MUC5AC免疫組織學(xué)染色證實(shí)(圖6)。再次，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液，與其它測(cè)試物品治療的眼睛相比，呈現(xiàn)出更佳的MUC5AC染色。本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液還能夠改善天然愈合過程并控制和緩解不受控纖維化的消極信號(hào)。實(shí)施例2 :體外實(shí)驗(yàn)方案的簡單描述:人角膜上皮(HCE)細(xì)胞(每孔100000個(gè)細(xì)胞)平板接種于6
孔板中并培養(yǎng)直到匯合。在匯合時(shí)，用黃色移液管尖刮擦細(xì)胞單層，去除培養(yǎng)基并用1/10稀釋的不同測(cè)試物品(PBS(磷酸鹽緩沖溶液)，舒而坦 (O. 005%的拉坦前列素水溶液)，O. 02% BAK(苯扎氯銨水溶液)，和本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液(含O. 005%拉坦前列素))孵育30分鐘。在治療之后，去除測(cè)試物品稀釋液并換成新鮮的培養(yǎng)基。在治療后2小時(shí)和24小時(shí)時(shí)評(píng)價(jià)刮傷的閉合。對(duì)行刮術(shù)后培養(yǎng)24小時(shí)的細(xì)胞還開展增殖標(biāo)志物(Ki67)的免
疫組織學(xué)。MM :行刮術(shù)后2小時(shí)和24小時(shí)時(shí)，拍攝細(xì)胞單層的照片以評(píng)價(jià)不同治療對(duì)刮傷后閉合的有效性。明顯地，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞存活和遷移具有積極的效果(圖7和8)。使用本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液時(shí)，存在較少的死亡細(xì)胞并且僅在刮術(shù)后24小時(shí)完成了裂口的閉合，而舒而坦 , O. 02% BAK溶液甚至PBS表現(xiàn)出不閉合或者僅較少閉合。對(duì)于測(cè)試中不同條件的這些數(shù)據(jù)的匯總表明，本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液能夠增加創(chuàng)傷閉合速度，而舒而坦@和O. 02% BAK溶液均改變體外創(chuàng)傷愈合過程。使用后面的兩種測(cè)試物品沒有觀察到閉合(見圖9)，如通過刮術(shù)后24小時(shí)的創(chuàng)傷閉合％仍保持很低所證明，對(duì)于舒而坦@和O. 02% BAK溶液分別為6%和8%。相反，拉坦前列素乳狀液具有85%的創(chuàng)傷閉合％。這通過增殖標(biāo)志物Ki67的免疫組織學(xué)數(shù)據(jù)(見圖10)證實(shí)。在用本發(fā)明的拉坦前列素乳狀液處理的平板中，在刮傷創(chuàng)傷邊緣附近出現(xiàn)更多的Ki67陽性細(xì)胞(即分裂細(xì)胞)。這表明了本發(fā)明的組合物對(duì)角膜細(xì)胞的愈合特性。實(shí)施例3 :前列腺素F2 α的組合物組合物I
權(quán)利要求
1.一種用于治療眼睛表面疾病，包括角膜和結(jié)膜損害的組合物，其中所述組合物包含治療量的前列腺素F2 α或類似物，所述組合物為適宜在眼睛表面局部應(yīng)用的形式。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的組合物，所述組合物無有害防腐劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或者權(quán)利要求2的組合物，其中所述組合物是水溶液、粘稠或半粘稠凝膠、懸浮液、固體插入物或者陰離子或陽離子乳狀液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是滴眼劑、人工淚液、凝膠劑或軟膏劑形式。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或權(quán)利要求4任一項(xiàng)的組合物，其是無菌的。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5任一項(xiàng)的組合物，其是等滲的或者低滲的。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6任一項(xiàng)的組合物，還包含滲透保護(hù)劑或者其它愈合劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7任一項(xiàng)的組合物，其中所述前列腺素F2ci類似物選自由拉坦前列素(IatanopiOst)、拉坦前列素游離酸、15-酮-拉坦前列素、拉坦前列素氮氧化物、烏諾前列酮(unoprostone)、比馬前列素(bimatoprost)、曲伏前列素(travoprost)、他氟前列素(tafIuprost)組成的群組。
9.根據(jù)權(quán)利要求I至8任一項(xiàng)的組合物，其中所述治療量是以重量計(jì)占組合物總重量的O. 0001 %至O. 005%，優(yōu)選從O. 0001 %至小于O. 005 %，更優(yōu)選從0. 0001 %至0. 002 %范圍的前列腺素類似物濃度。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至9任一項(xiàng)的組合物，其是未經(jīng)防腐的、無防腐劑的、自身防腐的或者用溫和防腐劑防腐。
11.根據(jù)權(quán)利要求I至10任一項(xiàng)的組合物，還包含抗青光眼劑、抗炎劑、抗生素、抗病毒劑或者抗真菌劑和其它促分泌化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求I至11任一項(xiàng)的組合物，包含緩沖液、增稠劑、增濕劑和抗氧化劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求I至12任一項(xiàng)的組合物，用于治療需要治療的患者中的眼睛表面疾病，包括角膜和結(jié)膜損害，包含每天至少一次施用所述組合物，每天最多4滴，并且所述組合物中前列腺素F2a類似物的治療量范圍以重量計(jì)占組合物總重量的0.0001%至0.005%。
14.根據(jù)權(quán)利要求I至12任一項(xiàng)或者根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，用于治療需要治療的患者中的眼睛表面疾病，包括角膜和結(jié)膜損害，其中所述患者患有青光眼并且前列腺素F2a類似物的治療量為以重量計(jì)占組合物總重量的0. 004%至0. 005%。
15.根據(jù)權(quán)利要求I至12任一項(xiàng)或者根據(jù)權(quán)利要求13或14的組合物，用于治療需要治療的患者中的眼睛表面疾病，包括角膜和結(jié)膜損害，其中所述患者未患有青光眼并且前列腺素F2 a類似物的治療量為以重量計(jì)占組合物總重量的0. 0001 %至0. 004%,并且所述組合物在3至5天時(shí)間內(nèi)施用。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療角膜和結(jié)膜損害的組合物，其中組合物包含治療量的前列腺素F2α或類似物，所述組合物為適宜在眼睛表面局部應(yīng)用的形式并且無有害的防腐劑；本發(fā)明還涉及用于治療需要治療的患者中眼睛表面疾病的方法，包含施用本發(fā)明的組合物。
文檔編號(hào)A61K31/5575GK102639136SQ201080052635
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月19日
發(fā)明者克里斯托夫·博杜安, 弗里德里克·拉倫曼德, 菲利普·道爾, 讓-塞巴斯蒂安·加里格 申請(qǐng)人:諾瓦加利制藥公司