專(zhuān)利名稱(chēng)：治療神經(jīng)退化之方法
治療神經(jīng)退化之方法背景技術(shù)
神經(jīng)壓迫綜合征(Nerve compressive syndrome)，也稱(chēng)為絞扼性神經(jīng)病 (entrapment neuropathy)，是一種由直接壓迫、神經(jīng)或鄰近組織的結(jié)構(gòu)性改變或單一神經(jīng)的機(jī)械性損傷引起的醫(yī)學(xué)狀況。其癥狀包括疼痛、刺痛、麻木及肌肉萎縮。取決于受到影響的神經(jīng)，這些癥狀僅影響機(jī)體的一個(gè)特定部位。盡管公知的實(shí)例是在腕部的正中神經(jīng)的壓迫(腕管綜合癥)，但是其它神經(jīng)，例如腕部或肘部的尺骨神經(jīng)及錐孔的脊神經(jīng)根也非常容易受影響。神經(jīng)壓迫的長(zhǎng)期影響可能導(dǎo)致神經(jīng)元退化及神經(jīng)系統(tǒng)功能的喪失。
減壓手術(shù)是常規(guī)的治療方法，通過(guò)該方法除去壓迫源，例如骨頭或軟骨，從而緩解壓力和減輕神經(jīng)性痛疼。手術(shù)后，癥狀可能完全消除，但是如果壓迫足夠嚴(yán)重或者時(shí)間足夠持久，神經(jīng)可能不會(huì)完全恢復(fù)，某些癥狀可能還會(huì)持續(xù)。而且，手術(shù)后患者將需要較長(zhǎng)的時(shí)間才能實(shí)現(xiàn)功能恢復(fù)。大多情況下，減壓手術(shù)無(wú)法修復(fù)神經(jīng)纖維的退化。
因此，需要開(kāi)發(fā)一種在絞扼性神經(jīng)病的早期或在減壓手術(shù)之后用于使退化的神經(jīng)功能改善或恢復(fù)的方法。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明預(yù)料不到地發(fā)現(xiàn)酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)在神經(jīng)再生中起到重要的作用。當(dāng)對(duì)罹患神經(jīng)壓迫綜合征的對(duì)象施予aFGF時(shí)，觀察到退化或損傷的神經(jīng)的功能性恢復(fù)。與傳統(tǒng)的減壓手術(shù)相比較，注射aFGF是更加有效和安全的治療方法。
因此，本發(fā)明提供一種用于治療由神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病引起的神經(jīng)退化之方法，其包含對(duì)需要治療的對(duì)象施予人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)。
應(yīng)理解到，上述的總體說(shuō)明和下述的詳細(xì)說(shuō)明僅是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。


結(jié)合附圖，將更好地理解本發(fā)明的上述內(nèi)容及下述的詳細(xì)說(shuō)明。
在附圖中
圖1是示出對(duì)通過(guò)枕骨大孔注射生理鹽水或人aFGF施行壓迫手術(shù)的大鼠進(jìn)行的抓力測(cè)試的示意圖。*表示aFGF處理組合對(duì)照組之間具有顯著性差異(ρ < 0. 05)，#表示 aFGF處理前和aFGF處理后具有顯著性差異(ρ < 0. 05)。
具體實(shí)施方式
除非說(shuō)明書(shū)中明確指明所使用的冠詞“一”僅表示單數(shù)之外，本發(fā)明中所使用的冠詞“一”表示一個(gè)或多個(gè)(也就是，至少一個(gè))該冠詞所修飾的對(duì)象。
本發(fā)明提供一種用于治療由神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病引起的神經(jīng)退化之方法，其包含對(duì)需要治療的對(duì)象施予人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)。
本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“神經(jīng)壓迫綜合征”或“絞扼性神經(jīng)病”指由微脈管功能的局部干涉和神經(jīng)或鄰近組織中結(jié)構(gòu)性變化造成的外周神經(jīng)功能性障礙。長(zhǎng)時(shí)間的或反復(fù)的外力可能壓迫神經(jīng)壓迫綜合征，例如將手臂擱在桌椅的后背上(橈神經(jīng))，頻繁地將肘支在桌子上(尺神經(jīng))，或者不合適的投擲或翹腿(腓神經(jīng))。隨著時(shí)間的推移，壓迫會(huì)越來(lái)越嚴(yán)重，發(fā)生病灶性脫髓鞘，隨后將發(fā)生軸突損傷，最后形成創(chuàng)傷。而且，一些情況引起神經(jīng)對(duì)壓迫尤其敏感。這些情況包括糖尿病，這種情況下，供應(yīng)給神經(jīng)的血液已經(jīng)受到壓迫，使得神經(jīng)對(duì)較小的壓迫度變得更加敏感。
常見(jiàn)的神經(jīng)壓迫綜合征包括椎間盤(pán)突出(herniated intervertebral disc)、頸神經(jīng)壓迫綜合征(cervical nerve compression syndrome)、胸廓出口綜合征(thoracic outlet syndrome)及腕管綜合癥(carpal tunnel syndrome)。其它的神經(jīng)壓迫綜合征可以包括但不限于骨間前神經(jīng)綜合征(anterior interosseous syndrome)、旋前圓肌綜合癥(pronator teres syndrome)、韋刃帶斯特拉瑟斯綜合征(ligament of Struthers syndrome)、月寸管綜合征(cubital tunnel syndrome)、腕尺管綜合(Guyon ‘ s canal syndrome)、|^神經(jīng)Bi迫癥(radial nerve compression)、骨間后神經(jīng)卡Bi癥(posterior interosseous nerve entrapment)、Wartenberg 氏綜合征(ffartenberg ‘ s syndrome) > 肩月甲上神經(jīng)卡壓癥(suprascapular nerve entrapment)、]]非神經(jīng)壓迫癥(peroneal nerve compression)、踝管綜合征(tarsal tunnel syndrome)、感覺(jué)異常性股痛(meralgia paraesthetica)、骨客腹下神經(jīng)卡壓癥(iliohypogastric nerve entrapment)、閉孑L神經(jīng)卡壓癥(obturator nerve entrapment)、陰部神經(jīng)卡壓癥(pudendal nerve entrapment)及腹部皮神經(jīng)卡壓綜合征(abdominal cutaneous nerve entrapment syndrome)。
本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)“人aFGF，，指天然的人aFGF或任何由天然的人aFGF修飾的肽。 修飾的肽可以例如通過(guò)在天然的人aFGF中刪除、插入或取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸或這些方式的組合而得到。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，修飾的人aFGF是這樣一種肽，其包含從天然的人aFGF的N端刪除20個(gè)氨基酸、并且在截短后的天然的aFGF的前端添加丙氨酸的天然的人aFGF。例如，人aFGF可以是具有SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列的肽，其公開(kāi)于美國(guó)第12/482,041號(hào)申請(qǐng)中，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式合并于此。
根據(jù)本發(fā)明，人aFGF可以制備成任何適于所選擇的施予模式的形式。優(yōu)選地，通過(guò)局部給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥或肌肉內(nèi)給藥施予人aFGF。根據(jù)本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)他的經(jīng)驗(yàn)或罹患神經(jīng)壓迫綜合征的患者的生理狀況，即年齡、體重、嚴(yán)重性或服用量而能夠容易地確定施予途徑和劑量。在本發(fā)明的一實(shí)施例中，將0. lmg/ml的人aFGF注射到左拇收肌。
已知的是多肽或蛋白質(zhì)在體外容易降解。為了延長(zhǎng)人aFGF在對(duì)象中的作用，可以將人aFGF包含于能夠持續(xù)釋放的任何載體或組合物中。例如，纖維蛋白膠已經(jīng)成功地廣泛應(yīng)用于外科手術(shù)領(lǐng)域，例如皮膚移植固定、神經(jīng)修復(fù)、軟骨重附著及微脈管愈合。研究還顯示活性劑能夠從纖維蛋白膠中較長(zhǎng)的時(shí)間地釋放。
因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將人aFGF包含于纖維蛋白膠混合物中并將其施予給罹患神經(jīng)壓迫癥或絞扼性神經(jīng)病的對(duì)象。aFGF在纖維蛋白膠混合物中的濃度最好在大約0. 0lmg/ml到100mg/ml。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)拇收肌注射施予時(shí)纖維蛋白膠包含0. lmg/ml的aFGF。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，通過(guò)枕骨大孔注射施予時(shí)纖維蛋白膠包含0. 04mg/ml的aFGF。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，基于本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容，根據(jù)他的知識(shí)及常規(guī)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法能夠容易地確定治療的有效量及劑量和施予頻率。
本發(fā)明的纖維蛋白膠混合物是指一能夠提供生物適應(yīng)性和持續(xù)釋放性能的藥學(xué)組合物，其包含人aFGF、纖維蛋白原、抑肽酶及二價(jià)鈣離子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，二價(jià)鈣離子可以是任何的鈣離子來(lái)源，例如可以通過(guò)添加氯化鈣或碳酸鈣提供的鈣離子。
根據(jù)本發(fā)明，纖維蛋白膠混合物包含0. 01-100mg/ml的人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以及含10-1000mg/ml的纖維蛋白原、10_500KIU/ml的抑肽酶及0. I-IOmM的二價(jià)鈣離子的纖維蛋白膠。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，為了提供更好的凝結(jié)效果，纖維蛋白膠混合物可進(jìn)一步包含10-100IU/ml的凝血酶。
本發(fā)明的纖維蛋白膠混合物可以制備成任何適于所選擇的施予模式的形式。優(yōu)選地，通過(guò)局部給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥或肌肉內(nèi)給藥施予纖維蛋白膠混合物。根據(jù)本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)他的經(jīng)驗(yàn)或罹患神經(jīng)壓迫綜合征的患者的生理狀況，即年齡、體重、嚴(yán)重性或服用量而能夠容易地確定施予途徑。
根據(jù)本發(fā)明，神經(jīng)病變動(dòng)物模型設(shè)計(jì)成顯示在促進(jìn)神經(jīng)纖維突觸生長(zhǎng)和功能性恢復(fù)中的效果。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，用8-0尼龍縫合線(xiàn)結(jié)扎左頸椎背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)。結(jié)扎損傷一周后，將6 μ 1含0. 6 μ g aFGF的生理鹽水全部注入左拇收肌。
在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，結(jié)扎損傷一周后，將含0. 04mg/ml的aFGF (5 μ 1生理鹽水中含0. 2 μ g aFGF)、10mg/ml的纖維蛋白原及200KIU/ml的抑肽酶的51纖維蛋白膠混合物直接注射到施行手術(shù)的大鼠的枕骨大孔中。第一次注射后5分鐘，將含0.45mM氯化鈣及 10IU/ml凝血酶的10 μ 1補(bǔ)充組合物用同一注射器注射到枕骨大孔中。
通過(guò)抓力測(cè)試測(cè)定功能改善。處理后2周和3周進(jìn)行測(cè)試從而獲取結(jié)果，施予aFGF 的組根據(jù)顯著高抓力比率(損傷側(cè)-L/正常側(cè)-R)比對(duì)照組(僅施予生理鹽水)在恢復(fù)神經(jīng)功能方面具有更好的效果。鑒于這種結(jié)果，本發(fā)明提供了用于恢復(fù)神經(jīng)功能的預(yù)料不到的治療方法。
因?yàn)樯窠?jīng)再生需要很長(zhǎng)時(shí)間，因此需要持續(xù)施予，以修復(fù)神經(jīng)退化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，建議每月一次向?qū)ο笫┯璋薬FGF的纖維蛋白膠混合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法和公知常識(shí)及施予對(duì)象的表現(xiàn)確定劑量。
通過(guò)下述的實(shí)施例能夠更詳細(xì)地解釋本發(fā)明。但是應(yīng)當(dāng)注意的是，本發(fā)明并不以任何形式限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例aFGF修復(fù)壓迫性神經(jīng)病大鼠模型中的神經(jīng)功能
動(dòng)物
使用年齡在8至10周、體重250_300g的共20只成熟雌性Sprague-Dawley大鼠。 將這些動(dòng)物置于加熱墊上用氟烷全身麻醉(1. Oliter/min,以保持大約60/分鐘的呼吸頻率)施行手術(shù)。在手術(shù)中監(jiān)測(cè)并保持直腸溫度。使用雙極電烙術(shù)使出血減少到最小。手術(shù)之前皮下注射抗生素，之后每天一次持續(xù)一周。手術(shù)后，將動(dòng)物保持在通風(fēng)、濕度和溫度可控的室內(nèi)12個(gè)晝夜。
大鼠的壓迫性手術(shù)
臥姿放置大鼠，并暴露它們的C4-C8椎骨。切除左C4至C7的半椎板。在顯微鏡下，確定頸根，移走重疊的小面后，在這些部位中輕輕地在側(cè)向鉆孔。然后小心地打開(kāi)腦膜，拉緊動(dòng)C5至C7神經(jīng)根，暴露左頸椎背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)的C5、C6及 C7部位并用8-0尼龍縫合線(xiàn)與末梢部位結(jié)扎。手術(shù)后，將這些大鼠分成兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組。
在A組，將大鼠分成對(duì)照組(用生理鹽水處理，η = 6)及aFGF組(用6 μ 1生理鹽水中的0.6yg aFGF處理，η =。。壓迫手術(shù)后一周，用異氟烷麻醉大鼠并將它們保持在溫暖的墊上以維持它們的體溫，在aFGF處理組將6 μ 1生理鹽水中的共0. 6 μ g aFGF緩慢地肌肉注射到拇收肌(從第1至第4趾肉，1.5μ1/趾肉)，對(duì)照組注射生理鹽水。通過(guò)抓力測(cè)試評(píng)估神經(jīng)能恢復(fù)(表1)。
選擇性地，在B組，將大鼠也分為兩組用生理鹽水處理的對(duì)照組(n = 4)及aFGF 處理組(5 μ 1生理鹽水中的0. 2 μ g aFGF, η = 4)。壓迫手術(shù)后一周，將與包含1. 5mg纖維蛋白原(Beriplast P，德國(guó))、抑肽酶溶液(200KIU/ml，20 μ 1)及HBSS(漢克平衡鹽緩沖液，80 μ 1)的5 μ 1的雞尾酒溶液混合的aFGF緩慢注射到aFGF處理組中的枕骨大孔中，對(duì)照組注射與5 μ 1的上述雞尾酒溶液混合的生理鹽水。用含有aFGF或生理鹽水的雞尾酒溶液注射5分鐘后，將10 μ 1的包含0. 45mM氯化鈣和10IU/ml凝血酶的第二溶液注射到枕骨大孔中，幾秒鐘后移走注射器。同樣通過(guò)抓力測(cè)試評(píng)估神經(jīng)功能恢復(fù)(圖1)。
抓力測(cè)試
抓力測(cè)試是Bertelli 和 Mira 的方法(J.A. Bertelli et al.，and J. C. Mira, Neurosci Methods 58 151_5，199 的改進(jìn)。為了評(píng)估抓力強(qiáng)度，將一線(xiàn)棒連接到一普通的電子秤上。測(cè)試兩個(gè)前爪，每次測(cè)試一個(gè)前爪。不測(cè)試的前爪用膠帶纏住以暫時(shí)防止抓動(dòng)，測(cè)試的前爪保持自由。在提起尾巴時(shí)允許大鼠抓棒，逐漸增加力度，直到它們松開(kāi)抓握， 記錄抓握力。抓握力指數(shù)是損失側(cè)/正常側(cè)的比率(損失側(cè)-L/正常側(cè)-R)。數(shù)值越大，說(shuō)明功能恢復(fù)越好。
表1示出肌肉注射到拇收肌中的A組的抓力結(jié)果。觀察到aFGF處理組的大鼠比對(duì)照組的大鼠表現(xiàn)出更好的抓力。
表IA組(肌肉注射)的抓力測(cè)試結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種用于治療由神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病引起的神經(jīng)退化之方法，其特征在于，包含對(duì)需要治療的對(duì)象施予人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病由慢性或急性壓迫或機(jī)械性損傷而引起。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病包含椎間盤(pán)突出、頸神經(jīng)壓迫綜合征、胸廓出口綜合征及腕管綜合癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過(guò)局部給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥或肌肉內(nèi)給藥施予所述人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過(guò)從天然的人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的N端刪除20個(gè)氨基酸且在截短后的天然的人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的前端添加丙氨酸獲得所述人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子進(jìn)一步與纖維蛋白原、抑肽酶及二價(jià)鈣離子混合，形成纖維蛋白膠混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，通過(guò)添加氯化鈣或碳酸鈣提供所述二價(jià)鈣離子。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述纖維蛋白膠混合物包含0.Ol-IOOmg/ ml的人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和含10-1000mg/ml的纖維蛋白原10_500KIU/ml的抑肽酶及0. I-IOmM的二價(jià)鈣離子的纖維蛋白膠。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述纖維蛋白膠混合物包含0.04mg/ml 的人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，10mg/ml的纖維蛋白原，200KIU/ml的抑肽酶及0. 45mM的氯化鈣。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述纖維蛋白膠混合物進(jìn)一步包含 10-100IU/ml 凝血酶。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，通過(guò)局部給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥或肌肉內(nèi)給藥施予所述纖維蛋白膠混合物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療由神經(jīng)壓迫綜合征或絞扼性神經(jīng)病引起的神經(jīng)退化之方法，其包含對(duì)需要治療的對(duì)象施予人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)、纖維蛋白原、抑肽酶及二價(jià)鈣離子。
文檔編號(hào)A61P25/00GK102497876SQ201080028394
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2010年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者劉一強(qiáng), 羅明吉, 鄭宏志 申請(qǐng)人:雅祥生技醫(yī)藥股份有限公司