專利名稱：5′-amp用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5’ -AMP用于治療疾病的新用途，具體地說是涉及5’ -AMP用于治療痛 風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的用途。
背景技術(shù)：
痛風(fēng)是長期嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性、代謝性疾病。痛 風(fēng)的臨床特點(diǎn)為高尿酸血癥、反復(fù)發(fā)作的急性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石沉積、痛風(fēng)石性慢性關(guān)節(jié)炎和 關(guān)節(jié)畸形，累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和腎結(jié)石等，常并發(fā)心腦血管疾病而危及生命，好 發(fā)男性、絕經(jīng)期女性。痛風(fēng)分原發(fā)性(遺傳、酶缺陷等)和繼發(fā)性(慢性溶血性貧血、甲狀 旁腺功能亢進(jìn)、各種腎病等)兩種，其發(fā)病的先決條件是高尿酸血癥，高尿酸血癥是指37°C 時(shí)血清中尿酸含量男性超過416 μ mol/L(70mg/L)、女性超過357 μ mol/L (60mg/L)，超過此 濃度時(shí)尿酸鹽可沉積在組織中，造成組織學(xué)改變。5% 12%的高尿酸血癥患者最終發(fā)展成 為痛風(fēng)，高尿酸血癥患者只有出現(xiàn)尿酸鹽結(jié)晶沉積、關(guān)節(jié)炎、腎病、腎結(jié)石等才稱為痛風(fēng)。因 此，痛風(fēng)主要是尿酸鹽沉積而引起的炎性反應(yīng)。血液或滑囊液中的尿酸鹽濃度達(dá)到飽和后， 即會出現(xiàn)結(jié)晶沉淀，這是痛風(fēng)形成的基礎(chǔ)。尿酸鹽晶體在關(guān)節(jié)腔內(nèi)會被單核細(xì)胞吞噬，激活 NALP3復(fù)合體，隨之NALP3與ASC蛋白結(jié)合激活capasel，capasel是一種IL-1 β轉(zhuǎn)化酶， 可以剪切IL-I β前體使之形成有活性的IL-I β，然后IL-I β與IL-I受體復(fù)合物結(jié)合，通 過MyD88啟動(dòng)NF κ B觸發(fā)繼發(fā)性的炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。大量研究證實(shí)，輕度低溫(Mild hypothermia)又稱為亞低溫，其在腦缺血等疾病 的發(fā)生發(fā)展過程中有明顯的治療作用，主要通過降低代謝反應(yīng)、酶活性以及炎癥反應(yīng)等發(fā) 揮作用。臨床上較為常見的急性腦血管病腦缺血，缺血后造成局部過度的炎癥反應(yīng)是腦缺 血性損傷的主要原因之一。研究顯示，輕度低溫可以通過下調(diào)粘附分子的表達(dá)而降低血管 內(nèi)白細(xì)胞的遷移及浸潤到腦局部缺血部位，最終抑制腦缺血性損傷導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)。同時(shí)， 輕度低溫也可以通過抑制炎癥通路中的NFk B激酶的激活而降低炎癥反應(yīng)。NFK B是炎 癥反應(yīng)中最重要的調(diào)控因子之一，介導(dǎo)多種信號引起的炎癥反應(yīng)，包括炎癥因子、細(xì)菌及病 毒產(chǎn)物、缺氧再充氧以及輻射等，同時(shí)其也是基因誘導(dǎo)性表達(dá)的重要調(diào)控因子之一，包括免 疫、細(xì)胞粘附、細(xì)胞生長、死亡等。NFk B也激活許多基因，參與到缺血性損傷的急性期及其 導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，比如誘生型一氧化氮合酶、IL-I β ,TNF-α、胞間粘附分子(ICAM-I)、環(huán)氧 合酶以及IL-6等。輕度低溫能夠抑制中風(fēng)導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)中NFk B信號通路，降低了 NF κ B的轉(zhuǎn)運(yùn) 及結(jié)合活性，同時(shí)也通過抑制NF κ B抑制蛋白(I κ B- α )及I κ B激酶降低IKK活性來影響 NF κ B調(diào)節(jié)蛋白的水平。另外，低溫能抑制兩種NF κ B靶基因的表達(dá)誘生型一氧化氮合酶 及TNF-α的表達(dá)。5’ -AMP是5’ -腺苷酸的英文別名，其中文別名還有如腺苷_5’ -磷酸(+4°C )、腺 苷5’ -磷酸、5’ -磷酸腺苷、5’ -腺苷-磷酸等，至今并未發(fā)現(xiàn)有關(guān)5’ -AMP用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的用途的報(bào)道。目前臨床上治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的特效藥物秋水仙堿其副作用 較大，易出現(xiàn)胃腸道癥狀、骨髓抑制等不良反應(yīng)，因此，亟需開發(fā)一種特效且副作用相對較 小的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明在于提供5’ -AMP用于治療疾病的一種新用途。其技術(shù)解決方案是5’ -AMP在制備用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。5’ -AMP應(yīng)用在用于能降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔腫脹程度的藥物。5’_AMP應(yīng)用在用于能降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織炎癥細(xì)胞浸潤的藥物。本發(fā)明5’ -AMP在制備用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途，其有益技術(shù)效果 如下證明了 5’ -AMP用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎一是能夠顯著降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔腫脹 程度，二是能夠顯著降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織炎癥細(xì)胞的浸潤。5’-AMP作為注 射用藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，對動(dòng)物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)有不良副作用，是一種安全可靠的能 夠用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物。


下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步說明圖1、圖2為開展本發(fā)明試驗(yàn)過程中所需人工尿酸鹽晶體生成狀態(tài)圖，其中圖1為 在非偏振光下所觀察到的尿酸鹽晶體形態(tài)，圖2為偏振光下所觀察到的尿酸鹽晶體形態(tài)。圖3為開展本發(fā)明實(shí)驗(yàn)過程中大鼠腹腔在注射5’ -AMP后，體溫隨時(shí)間變化柱狀 圖。圖4為開展本發(fā)明實(shí)驗(yàn)過程中痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型經(jīng)低溫干預(yù)后關(guān)節(jié)腔腫脹 程度變化狀態(tài)圖。圖5、圖6、圖7示出了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型組經(jīng)低溫干預(yù)后關(guān)節(jié)腔內(nèi)締結(jié)組織 病理變化狀態(tài)圖，其中圖5示出了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型組之情形，圖6示出了低溫干預(yù)組之情 形，圖7示出了空白對照組之情形。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明應(yīng)用5’ -AMP誘導(dǎo)低溫治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，通過觀察關(guān)節(jié)腔的腫脹程度以 及炎癥細(xì)胞的浸潤，為臨床上針對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎新藥研發(fā)提供可能的理論指導(dǎo)和依據(jù)。內(nèi)容與要求應(yīng)用大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型、病理切片H&E染色等技術(shù)方法首次將低溫應(yīng)用 于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究，測量關(guān)節(jié)腔的腫脹程度，關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織進(jìn)行常規(guī)病理分析。技術(shù)指標(biāo)1、利用尿酸及氫氧化鈉制備尿酸鹽晶體，偏振光顯微鏡鏡檢，確定有晶體生成，參 見圖1與圖2。2、大鼠腹腔注射5’ -AMP后，1.5h大鼠體溫即達(dá)到16度左右，注射后18h后恢復(fù) 到正常體溫，表明大鼠低溫模型構(gòu)建成功，參見圖3。
3、將痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型經(jīng)低溫干預(yù)，測定關(guān)節(jié)腔腫脹程度，與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎 模型組相比，低溫干預(yù)組能明顯降低關(guān)節(jié)腔的腫脹程度，參見圖4。4、將痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型經(jīng)低溫干預(yù)，取關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織進(jìn)行常規(guī)病理分 析，結(jié)果證實(shí)低溫干預(yù)組能明顯抑制炎癥細(xì)胞的浸潤，參見圖5、圖6與圖7。具體試驗(yàn)步驟為1)尿酸鹽晶體的制備194ml蒸餾水加入6ml IM NaOH，煮沸，調(diào)節(jié)pH值至7. 2，冷 卻至室溫，置4°C冰箱中過夜，濾紙濾出沉淀，干燥，過250um網(wǎng)篩，偏振光顯微鏡下鑒定。2)選取雄性wistar大鼠，體重200g左右，剃毛機(jī)去毛。3)腹腔注射5’ -AMP，劑量按每千克體重選用0. 5克5’ -AMP的比例計(jì)算，將大鼠 置于已達(dá)到4度的人工氣候箱內(nèi)。4)每隔Ih檢測一次大鼠肛溫，測量一次關(guān)節(jié)腔周徑，待其體溫達(dá)到16度左右(大 約注射5’ -AMP兩個(gè)小時(shí)后)，調(diào)節(jié)人工氣候箱，使其溫度達(dá)到16度，同時(shí)將制備好的尿酸 鹽晶體溶于0.9%的生理鹽水中，加入Tween 80，使其達(dá)到10%，混勻后注射入大鼠關(guān)節(jié)腔 內(nèi)。5)注射5’ -AMP IOh后，將大鼠處死，取關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織于福爾馬林溶液中固定。6)標(biāo)本固定后進(jìn)行脫水處理，分別經(jīng)過80%、90%、95%、100%等濃度的乙醇兩 小時(shí)。7)標(biāo)本脫水后，利用石蠟進(jìn)行包埋，使液體石蠟浸入組織中，石蠟?zāi)毯螅M織即 被包在其中。8)將切片機(jī)厚度調(diào)節(jié)器4-6um，將包埋好的蠟塊進(jìn)行切片。9)鋪片用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40_45°C的水面上，借水的張力和水的 溫度，將略皺的蠟帶自然展平。10)貼片、烘片待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處， 置于60-65°C恒溫箱內(nèi)烤片15-30分鐘，脫去融化組織間隙的石蠟。11)將處理好的標(biāo)本用蘇木素_伊紅染色。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，應(yīng)用5’ -AMP治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎在輕度低溫即亞低溫條件下注射給 藥，治療效果較為顯著。
權(quán)利要求
5’ AMP在制備用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述5’-AMP應(yīng)用在用于能降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔腫脹 程度的藥物。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述5’-AMP應(yīng)用在用于能降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié) 締組織炎癥細(xì)胞浸潤的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種5′-AMP在制備用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。有關(guān)試驗(yàn)證明了5′-AMP用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎一是能夠顯著降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔腫脹程度，二是能夠顯著降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)結(jié)締組織炎癥細(xì)胞的浸潤。5′-AMP作為注射用藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，對動(dòng)物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)有不良副作用，是一種安全可靠的能夠用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物。
文檔編號A61K31/7076GK101947230SQ201010261859
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月25日
發(fā)明者李長貴, 王云龍, 苗志敏 申請人:苗志敏;李長貴;王云龍