專利名稱：甲狀旁腺素類似物的制作方法
甲狀旁腺素類似物此案是1996年7月3日提交的、中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?00610100113. 4、題目為“甲狀旁 腺素類似物”的發(fā)明申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
甲狀旁腺素(“PTH”)是甲狀旁腺產(chǎn)生的一種多肽。這種激素成熟的循環(huán)形式包 含84個(gè)氨基酸殘基。PTH的生物學(xué)活性可以由它的N末端肽片段(例如氨基酸殘基1到 34)重現(xiàn)。甲狀旁腺素相關(guān)蛋白(“PTHrP”)是一種N末端與PTH同源的139到173個(gè)氨 基酸的蛋白。PTHrP具有許多與PTH相同的生物學(xué)效應(yīng)，包括與一種共有的PTH/PTHrP受體 結(jié)合。Tregear等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinol.), 93 =1349(1983) 0已經(jīng)特征性描述了來(lái)自例如 人，牛，大鼠，雞等多種不同來(lái)源的PTH肽。Nissenson等，受體(Receptor), 3 193 (1993) 已表明PTH能改進(jìn)骨重量和質(zhì)量。Dempster等，內(nèi)分泌綜述(EndocrineRev.)， 14 =690(1993)；以及 Riggs，美國(guó)醫(yī)學(xué)雜志(Amer. J. Med.), 91 (Suppl. 5B) :37S(1991)。已觀 察到在同時(shí)進(jìn)行或不進(jìn)行抗再吸收治療的情況下對(duì)骨質(zhì)疏松的男性或女性周期性施用PTH 具有合成代謝效應(yīng)。Slovik 等，J. BoneMiner. Res，1 377(1986) ；Reeve 等，Br. Med. J.，301 314(1990)；以及 Hesch，R-D 等，Colcif. Tissue Int' 1,44:176(1989)。發(fā)明簡(jiǎn)述一方面，發(fā)明涉及具有下列通式的PTH(1_34)的肽變體
A,- Val-A3-GIu-Aj-G]n-A7-A8-His-Asn-An-A,2-Lys-His-A15-/ A,6-Al7-A,g-A,9-Arg-A2rGJu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A38-01n-R2 Ajo-AjrAjz-Au-A^-Rj,其中A!是 Ser，Ala，或 Dap ；A3 是 Ser，Thr，或 Aib ；A^Leu，Nle, lie, Cha, 3_Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一種鹵 素，或CH3 ；八7是1^11，見6，lie,Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一種鹵 素，或CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha，或 Nle ；An 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一種鹵 素，或CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib;A15 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal, Trp, Pal, Phe,或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一種鹵 素，或CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ；A17 是 S er，Thr，或 Aib ；
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A18 是 Met，Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha，或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val，Cha，或 Met ;A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin,或 Cha ；A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val, Nle, Cha，或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Asn 或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib,或缺失；每一個(gè)禮和R2獨(dú)立地是H，Ch2烷基，C2_C12鏈烯基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基 (napthylalkyl)，羥烷基，C2_12羥鏈烯基，C7_20羥苯烷基，或Cn_2(1羥萘烷基；或禮和R2 中的一個(gè)且只有一個(gè)是COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12鏈烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基， (V12羥烷基，C2_12羥鏈烯基，C7_20羥-苯烷基，或Cn_2(l羥萘烷基；以及R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一種烴部分并且Z是H， OH, C02H,或 C0NH2 ；條件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A21，A23, A24, A27, A28，和 A31 中至少一個(gè)是 Cha，或 A3，A12，A16，A17，A18，A19 和 A34 中至少一個(gè)是 Aib ；或(ii)至少 k,是 Dap, A7 是 3 -Nal，Trp, Pal，Phe，或 p-X-Phe, A15 是旦-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe, A27 是 h Arg,或 A31 是 N1 e。由上述通式包括的化合物的一個(gè)亞組是那些其中的A5，A7，An，A15，A18，A21，A23，A24， A27，A28，禾P A31中至少一個(gè)是Cha的化合物，例如，A3是Ser ;A5是lie ;A7是Leu或Cha ;A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ；A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；^ 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；條 件是 A5，A7，A8，An A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，禾口 A31 中至少"~~■個(gè)是 Cha，或 A3，A12，A16，A17， A18,A19和A34中至少一個(gè)是Aib。如果需要，A7和An中至少一個(gè)可以是Cha ；或A15，A23，A24， A27，A28，和A31中至少一個(gè)是Cha。在另一個(gè)亞組中，A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個(gè)是Aib。例如，A3是Ser 或 Aib ;A5 是 lie ;A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ； A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ；隊(duì) 是 H ;R2 是 H ；以及 R3 是 NH2 ；條件是 A5，A7，A8，An，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和 A31 中至少 有一個(gè)是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個(gè)是Aib。如果需要，中至 少一個(gè)可以是Cha ；或A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個(gè)是Cha。在另一個(gè)亞組中，A5,A7, A8, An, A15，A18，A21，A23，A24, A27，A28，和 A31 中至少一個(gè)是 Cha,或 A3，A12，A16，A17，A18，A19，和 A34 中至少一個(gè)是 Aib。例如，A3 是 Ser 或 Aib ;A5 是 lie ; A7 是 Leu 或 Cha ;A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ；A31 是 Val，Nle，或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe，Tye，Amp，或 Aib ；隊(duì)是 H ;R2 是 H ；以及 民是冊(cè)2。如果需要，中至少一個(gè)是Cha并且A16，A19，和A34中至少一個(gè)是Aib ；或 者A24，A28，和A31中至少一個(gè)是Cha并且A16和A17中至少一個(gè)是Aib。在另一個(gè)亞組中，至少一個(gè)Ai 是 Dap，~是 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，A13 是旦-恥1，11卬，卩31，卩116，或？-1-卩116。如果，々1是5吐，617，或Dap ；八3是361~或Aib ；A8是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, bArg,或 Cha ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp，或Aib ；禮是11;1 2是11;以及民是順2。下面是上面通式包括的本發(fā)明肽的例子[Cha7] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7,11] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha23]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24] hPTH(l-34) NH2 ； [Nle8'18, Cha27]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha27] hPTH (1_34) NH2 ； [Cha27'29] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28] bPTH (1-34) NH2 ； [Cha28] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha24’28’31] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib19] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib16’19] hPTH(l-34)NH2 ； [Aib16’19’34]bPTH(l_34)NH2 ； [Aib16’34]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib19’34]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib16'19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18'31, Aib16'19, Tyr34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha11, Aib16] hPTH (1-34) 2 ； [Cha7, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha11, Aib34] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib16] hPTH(1—34) NH2 ； [Cha27, Aib34] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha28, Aib16] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha28, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Nle31] hPTH(l-34)NH2 ； [hArg27]hPTH(1-34)NH2 ； [Dap1, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Nle31] bPTH(l-34)NH2 ； [Nle31]rPTH(l_34)NH2 ； [hArg27] bPTH (1-34) NH2 ； [hArg27] rPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19, Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib12]hPTH(l_34)NH2 ； [Cha24’28’31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28,31] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34] hPTH (1-34) NH2 ； [Aib3] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha8]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha15]hPTH(l_34) NH2 ； [Cha7'11, Aib19]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7’ n, Aib16]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha5] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Tyr34] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib19, Lys30, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'n'15]hPTH(l-34)NH2 ； [Aib17]hPTH(1-34)NH2 ； [Cha7'11, Leu27] hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15, Leu27] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha7ai'27]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15'27] hPTH(l-34)NH2 ； [Trp15]hPTH(l-34)NH2 ； [Nal15]hPTH(l_34)NH2 ； [Trp15, Cha23] hPTH (1-34) NH2 ； [Cha15'23]hPTH(1-34) NH2 ； [Phe7'11] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'n]hPTH(l-34) NH2 ； [Trp7' n]hPTH(l-34)NH2 ； [Phe7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Nal7'11'15] hPTH (1-34) NH2 ； [Trp7'11'15] hPTH(l-34)NH2 ；和[Tyr7'lia5]hPTH(l-34)NH2。另一方面，本發(fā)明涉及由下式包括的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽； 其中是 Ala, Ser 或 Dap ；△3是561~，或八讓；八5是圯8，lie，或Cha ；八7是1^11，0^，肌6，日-恥1，11印，卩&1，卩116，或？-父-卩116，其中1是011，一種鹵素，或 CH3 ；A8 是 Leu, Met,或 Cha ；A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe，或 & -Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His;A15 是 lie，或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Hi s，Aib，或 Glu ;A26 是 Hi s，Aib，或 Lys ;A27 是 Leu, Lys,或 Cha ;A28 走 lie, Leu, Lys,或 Cha ;A29 是 Ala，Glu，或 Aib ;A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32 是 His 或缺失；A33 是 Thr 或缺失；A34 是 Ala 或缺失；每一個(gè)禮和R2分別是H，Ch2烷基，C7_C2Q苯烷基，Cn_2(1萘烷基，CH2羥烷基，C2_12 羥鏈烯基，C7_20羥苯烷基，或Cn_2(l羥萘烷基；或禮和R2中一個(gè)且只有一個(gè)是COEi，其中Ei
-12 焼基，C2-i2 焼基，C2-i2
鏈烯基， Cj-20 本焼基，Cn_20 萘烷基，Ci_12羥烷基，c2_12羥鏈烯基， c7_20羥苯烷基，或cn_2(l羥萘烷基；以及
R3是0H，NH2, (V12烷氧基，或NH-Y-CH2_Z，其中Y是一個(gè)烴部分并且Z是H， OH, C02H 或 C0NH2 ；條件是(i)A5，A7,A8, An, A15，A18，A22，A23, A24, A27, A28，A30 和 A31 中至少一個(gè)是 Cha， 或A3， A12，A16，A17，A18，A19，A22，A25，A26，A29，A30， 禾口 A34 中至少一個(gè)是 Aib ；或(ii)A23，A24，A27， A28，或A31中至少一個(gè)是Lys。在一個(gè)實(shí)施例中，中至少一個(gè)是Cha。在另一個(gè)實(shí)施 例中，A16或A19中至少一個(gè)是Aib。剛敘述的式的肽的特殊例子包括，但不限于，[Cha7] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16, Tyr34hPTHrP(l-34)NH2 ； [Aib19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib16'19]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7’ "，Aib16hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha7'"，Aib19]hPTHrP (1-34)NH2 ;[Cha22，Leu23'28'31，Glu25'29，Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Leu23'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23, Glu25’ 29，Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ;[Glu22’25’29，Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Cha30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23' 31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22'23'24'27'28'31, Glu25'29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'28'31, Lys26'27'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Cha23'24'27'31, Lys25'28'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22’25’29，Lys23'26'30, Cha24’27’28’31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'31, Glu25'29, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Lys23'26'30, Glu25'29, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25, Lys26'
30,Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'28'31, Lys26'27'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Lys23'26'30, Leu28'31, Aib29] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25, Leu23'31, Lys26'28'30, Aib29]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'11'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34) NH2;[Cha7'n, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11'22'23, Glu25'29, Leu28'
31,Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'11, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26' 30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15'22' 23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2； [Cha15, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha15, Glu22'25'29, LeU23’28’31，LyS26，Aib30]hPTHrP(l-34)NH2 ;[Cha15，GlU22’28’29，LeU23’31，LyS26’28’30]hPTHrP(l-34) NH2 ;[Cha15'30, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7' 8,22,23，Glu25'29, Leu28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Lys23'26'30, Leu28'31]hPTHrP(l-34)NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8, Glu22'25'29, Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Cha7'8'30, Glu22' 25,29，Lef，LyS26]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22, Met8, Asn10, His14, Leu23'28' 31，Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34)NH^tSer1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29,Leu23'28'31, Lys26'27'30]hPTHrP(l-34)NH2 ^Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22,25,29， Leu23'31, Lys26'28'30]hPTHrP(l-34)NH2 ；Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Lys23' 26,30，Ley]hpTHrp(1_34)NH2 ;[Serl，Ile cha7,n，Met8，Asn10, His14, Glu22'25, Leu23'28'31, Aib29，LyS26’3°]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7’11，Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28' 31，Lys26, Aib3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Cha7'11'22'23, Met8, Asn10, His14, Glu25'29, Leu28' 31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11'15, Met8, Asn10, His14]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11, His14, Aib16]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Cha22'23, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'11, Met8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, His14, Cha15, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30]hPTHrP(1-34)NH2 ； [Ser1, lie5, Cha7'8, Asn10, His14, Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28'31, Lys24'26'30] hPTHrP (1-34) NH2 ； [Aib22, Leu23'28'31, Glu25'29, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'29, Leu23'28' 31, Aib25, Lys26'30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29，Leu23'28'31, Aib26, Lys30]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Glu22'25'29, Leu23'28, Lys 26'30'31]hPTHrP (1-34) NH2 ； [Ser1, lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Cha22, Glu25'29, LyS26’3。]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'28'31, His14, Glu22'25'29, LyS23,26,3。]PTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25' 29，Lys26,27,30]hpTHrp(1_34)NH2 ； [Seri;工^，臨仏八卯1。，Leu"'23'31, HiS14，G1U22,25,29，LyS26'
28’30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25, Aib29, Lys26' 30]hPTHrP(l-34)NH2 JSer1，lie5, Met8, Asn10, Leu11'23'28'31, His14, Glu22'25'29, Lys26, Aib30] hPTHrP (1-34) NH2 ；or [Ser1, I le5，Met8] hPTHrP (1-34) NH2。除了 N末端氨基酸以外，此公開中所有氨基酸簡(jiǎn)稱(例如六^或。代 表-NH-CHR)-C0-結(jié)構(gòu)，其中，R是氨基酸的側(cè)鏈(例如，013是々13側(cè)鏈)。對(duì)于N末端氨基 酸，簡(jiǎn)稱代表=N-CH(R)-C0-結(jié)構(gòu)，其中R是氨基酸側(cè)鏈。0_Nal，Nle，Dap，Cha，Nva，Amp， Pal，和Aib分別是下列a-氨基酸的簡(jiǎn)稱邛-(2-萘基)丙氨酸，正亮氨酸，a，0 - 二氨 基丙酸，環(huán)己基丙氨酸，正纈氨酸，4-氨基-苯丙氨酸，3-吡啶丙氨酸，和a -氨基異丁酸。 在上式中，羥烷基，羥苯烷基，和羥萘烷基可能含有1-4個(gè)羥基取代基。又及，COEi代表-C =0 E10 -C = 0 Ei的例子包括，但不限于，乙酰基和苯丙?；１景l(fā)明的肽在此處也以另一種形式表示，例如，[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2，具有在第 二對(duì)括號(hào)中的天然序列的取代氨基酸(例如，在pHTH中以Cha7取代Leu7，并以Cha11取代 Leu11)。簡(jiǎn)稱hPTH代表人pTH，hPTHrP代表人PTHrP，rPTH代表大鼠PHT，以及bPTH代表 牛PTH。括號(hào)中的數(shù)字是指肽中存在的氨基酸數(shù)目(例如，hPTH(l-34)是人PTH肽序列的 1 到 34 位氨基酸)。hPTH(l-34), hPTHrP (1-34), bPTH(l_34)，和 rPTH(l_34)的序列列表 于 Nissenson 等，受體(Receptor), 3 =193(1993) PTH(1-34) NH2 中的名稱 “NH2” 表明肽的 C末端是氨化的。與此相反，PTH(l-34)具有游離酸C末端。本發(fā)明的每一種肽都能夠刺激受治療者(換言之，一個(gè)哺乳動(dòng)物例如病人)的骨 生長(zhǎng)。因而，當(dāng)單獨(dú)施用或與抗再吸收治療例如二磷酸鹽和降鈣素等共同使用時(shí)，在治療骨 質(zhì)疏松和骨折中是有效的。本發(fā)明的肽可以藥學(xué)可接受鹽的形式提供。此類鹽的例子包括，但不限于，那些與 有機(jī)酸(例如，乙酸，乳酸，馬來(lái)酸，檸檬酸，蘋果酸，抗壞血酸，琥珀酸，苯甲酸，甲磺酸，甲苯磺酸，或pamoic acid)，無(wú)機(jī)酸(例如，鹽酸，硫酸，或磷酸)，以及聚酸(例如，單寧酸，羧 甲基纖維素，聚乳酸，聚乙二醇酸，或聚乳酸-聚乙二醇酸共聚物)形成的鹽。治療有效量的本發(fā)明的肽與一種藥學(xué)可接受載體物質(zhì)(例如，碳酸鎂，乳糖，或一 種磷脂，用其使治療組合物能形成微團(tuán))一起形成一種用于對(duì)受治療者給藥(例如，口服， 靜脈內(nèi)給藥，穿皮給藥，經(jīng)肺給藥，陰道給藥，皮下給藥，鼻內(nèi)給藥，離子電滲給藥，或氣管內(nèi) 給藥)的治療組合物(例如，丸劑，片劑，膠囊，或液體)。用于口服的丸劑，片劑，或膠囊可 用一種物質(zhì)包被，以保護(hù)活性成分在胃部一定時(shí)間內(nèi)不被胃酸或腸內(nèi)的酶破壞，足以使它 在進(jìn)入小腸時(shí)未被消化。治療組合物也可以生物可降解或生物不可降解緩釋制劑的形式 用于皮下或肌肉內(nèi)給藥。參看，例如，美國(guó)專利3，773，919和4，767，628和PCT申請(qǐng)No. Wo 94/15587。也可使用可移植的或外接泵(例如，INFUSAID pump)進(jìn)行連續(xù)給藥。也可進(jìn) 行間歇的例如每天注射一次，或低劑量連續(xù)的，例如緩釋劑型給藥。用于治療上述疾病或紊亂的本發(fā)明肽的劑量根據(jù)給藥方式，受治療者的年齡和體 重，以及要治療的受治療者的健康狀況而變化，并且最終由護(hù)理醫(yī)生或獸醫(yī)決定。在本發(fā)明范圍內(nèi)還考慮到把由上述通式包括的肽用于治療與骨生長(zhǎng)缺陷等有關(guān) 的疾病或紊亂，例如骨質(zhì)疏松或骨折。本發(fā)明其它的特征和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)詳細(xì)的描述以及權(quán)利要求說(shuō)明。基于此處的描述，本發(fā)明可得以最充分程度地使用。要理解下面的特定實(shí)施例僅 是為了說(shuō)明，而不在任何意義上限制本公開的其余部分。此外，此處引用的所有出版物都以 參考文獻(xiàn)并入本發(fā)明。結(jié)構(gòu)已報(bào)道PTH(1_34)有兩個(gè)雙嗜性a螺旋結(jié)構(gòu)域。參看，例如，Barden等，生物化 學(xué)(Biochem.)，32 7126 (1992)。第一個(gè)a -螺旋在氨基酸殘基4到13之間形成，而第二 個(gè)a “螺旋在氨基酸殘基21到29之間形成。本發(fā)明的一些肽含有在PTH(1_34)這兩個(gè)區(qū) 域內(nèi)部或附近的一個(gè)或多個(gè)殘基的Cha取代，例如，第一個(gè)a -螺旋內(nèi)的Cha7和Cha11或者 第二個(gè)a -螺旋內(nèi)的Cha27和Cha28。本發(fā)明還包括具有Aib對(duì)鄰近a -螺旋的取代，例如，Aib16，Aib19，和Aib34 ；hArg27 和Nle31，或Dpa對(duì)N-末端殘基取代的PTH(1_34)的變體。合成本發(fā)明的肽可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的固相合成法制備。參看，例如Stewart，J.M.等，固相合 成(Solid Phase Synthesis) (Pierce Chemical Co.，2d ed. 1984)。下面是對(duì)怎樣制備 [Aib34]hPTH(1-34)NH2的描述。本發(fā)明的其它肽可以由本技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過(guò)類似 方式制備。肽在Applied Biosystems (Foster City, CA)的改進(jìn)以加速 Boc-化學(xué)固相肽 合成的430A型肽合成儀上合成。參看Schnoize，等，“國(guó)際肽和蛋白質(zhì)研究雜志”(Int. J. Peptide Protein Res.)，90 :180 (1992)。使用 了具有 0. 93mmol/g 取代基的 4-甲基 二苯甲基胺(MBHA)樹脂(Peninsula，Belmont, CA)。使用具有下面的側(cè)鏈保護(hù)的Boc 氨基酸(Bachem, CA, Torrance, CA ；Nova Biochem.，La Jolla, CA) :Boc_Arg(Tos)_0H， Boc-Asp(0cHxl)-0H, Boc-Asn(Xan)-OH, Boc-Glu(OcHxl)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH,Boc—Val—OH，Boc—Leu—OH，Boc-Ser-0H, Boc-Gly-0H, Boc—Met—OH，Boc—Gln—OH，Boc-Ile-OH, Boc-Lys (2C1Z) -OH, Boc-Ser (Bzl) -OH,和 Boc-Trp (Fm) -OH。合成在 0. 14mmol 的量進(jìn)行。用100% TFA處理2X 1分鐘去除Boc基團(tuán)。Boc氨基酸(2. 5mmol)在4ml DMF 中用HBTU(2. Ommol)和DIEA(1. 0ml)預(yù)活化并在不預(yù)先中和肽-樹脂TFA鹽條件下偶聯(lián)。 偶聯(lián)時(shí)間是5分鐘，但Boc-Aib-OH和下面Boc-Asn (Xan) -0H殘基的情況除外，其偶聯(lián)時(shí)間 是20分鐘。肽鏈裝配結(jié)束之后，在DMF中用20%巰基乙醇/10% D正A溶液處理樹脂2 X 30分 鐘以去除組氨酸側(cè)鏈上的DNP基團(tuán)。然后用100 % TFA處理2 X 2分鐘去除N末端Boc基團(tuán)。 用DMF中的10%DIEA中和肽-樹脂(1X1分鐘)之后，用15%乙醇胺/15%水/70% DMF 溶液處理2 X 30分鐘去除色氨酸側(cè)鏈上的甲?；?。用DMF和DCM洗脫部分去保護(hù)的肽-樹 脂并減壓干燥。最后一步斷裂通過(guò)在含有l(wèi)mL苯甲醚的lOmLHF中于0°C下振蕩肽-樹脂 75分鐘進(jìn)行。用氮?dú)饬鞒F。用乙醚(6X10mL)洗脫殘余物并用4NH0Ac (6X 10mL)提 取。使用反相Vydac C18柱(Nest Group, Southborough, MA)用反相制備高壓液相色 譜(HPLC)方法純化水提物中的肽混合物。以10ml/分鐘的流速采取線性梯度(130分鐘內(nèi) 溶液B從10%到45% )洗脫柱(溶液A = 0. TFA水溶液；溶液B =含0. TFA的乙 腈)。收集級(jí)分并用檢測(cè)HPLC測(cè)定。把含有純產(chǎn)物的級(jí)分合并，并冷凍干燥。獲得62. 3 毫克白色固體。根據(jù)檢測(cè)HPLC測(cè)定的純度>99%。電噴射質(zhì)譜儀檢測(cè)得到的分子量是 4054. 7 (與計(jì)算分子量4054. 7相符)。[Cha7'11] hPTH (1-34) NH2 的合成和純化以與上述[Aib34] hPTH (1-34) NH2 的合成相同 的方式進(jìn)行。被保護(hù)的氨基酸Boc-Cha-OH購(gòu)于Bachem，CA。終產(chǎn)物純度> 98%，電噴射質(zhì) 譜儀得到的分子量是4197. 0 (計(jì)算分子量是4196. 9)。上面所用簡(jiǎn)稱的全名如下Boc代表叔丁氧羰基，HF代表氧化氫，F(xiàn)m代表甲酰基， Xan代表咕噸基，Bzl代表芐基，Tos代表甲苯磺酰基，DNP代表2，4- 二硝基苯基，DMF代表 二甲基甲酰胺，DCM代表二氯甲烷，HBTU代表2-(lH-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲 六氟磷酸，DIEA代表二異丙基乙胺，HOAc代表乙酸，TFA代表三氟乙酸，2C1Z代表2-氯芐 氧羰基以及OcHxl代表鄰-環(huán)己酯。上述通式中的取代基禮和R2可以通過(guò)本技術(shù)領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法連結(jié)到N末端 氨基酸的游離胺。例如，烷基，諸如，。2烷基，可以使用還原烷基化方法連結(jié)。羥烷基，例 如Ci_12羥烷基，也可以在用叔丁酯保護(hù)自由羥基情況下使用還原烷基化方法連結(jié)。酰基，例 如，COEi，可以通過(guò)把全部樹脂與二氯甲烷中3摩爾當(dāng)量的兩種游離酸和二異丙基碳二亞胺 混合1小時(shí)，并以產(chǎn)生的樹脂按上述洗脫程序(a)至⑴步驟循環(huán)，將游離酸例如EfOOH偶 聯(lián)到N末端氨基酸的游離胺實(shí)現(xiàn)結(jié)合。如果游離酸含有自由羥基，例如，對(duì)_羥苯丙酸，則 偶聯(lián)應(yīng)當(dāng)在添加3摩爾當(dāng)量H0BT的情況下進(jìn)行。本發(fā)明的其它肽可以由本技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員按照類似方法制備。功能檢測(cè)A.與PTH受體的結(jié)合測(cè)定了本發(fā)明肽結(jié)合到Sa0S_2(人骨肉瘤細(xì)胞)上PTH受體的能力。Sa0S_2細(xì) 胞(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville,MD ；ATCC # HTB 85)保存于于37°C下空氣中含5%二氧化碳的潮濕空氣中的補(bǔ)充有10%胎牛血清(FBS)和2mM谷氨酸的RPMI 1640培養(yǎng)基中(Sigma，St. Louis，M0)。每三或四天換一次培 養(yǎng)基，每星期通過(guò)胰蛋白酶消化對(duì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)。將SaOS-2細(xì)胞保持四天直到鋪滿為止。用含5 % FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基 替換原培養(yǎng)基，并在10_"M到10_4M之間不同濃度的競(jìng)爭(zhēng)性發(fā)明肽存在下與10X104cpm 單-125I-[Nle8,18，Tyr34 ( 3-125I)]bPTH(l-34)NH2—起室溫培養(yǎng) 2 小時(shí)。使用冰冷 PBS 洗細(xì) 胞四次并用0. 1M氫氧化鈉裂解，細(xì)胞相聯(lián)的放射活性用閃爍計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。單-125I-[Nle8’ 18，Tyr34 (3-125I) ]bPTH(1-34) NH2 按照 Goldman, M. E.等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinol.)，123 1468(1988)所述進(jìn)行合成。對(duì)本發(fā)明的不同肽進(jìn)行了結(jié)合檢測(cè)，并計(jì)算了每種肽的IC5Q值(單-125I-[Nle8’18， Tyr34 ( 3-125I)]bPTH (1-34) NH2 結(jié)合的半最大抑制)。如表I所示，所有檢測(cè)的肽對(duì)SaOS-2細(xì)胞上的PTH受體具有高結(jié)合親合性。B.刺激腺苷酸環(huán)化酶活性檢測(cè)了本發(fā)明肽誘導(dǎo)SaOS-2細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)的能力。更特定地，通過(guò)按 Rodan 等，“臨床研究雜志” (J.Clin. Invest.) 72 1511(1983)和 Goldman 等，“內(nèi)分泌 學(xué)”(Endocrinol.) 123 1468 (1988)所述檢測(cè)cAMP (腺嘌呤核苷3'，5'-單磷酸)的合 成水平測(cè)定了對(duì)腺苷酸環(huán)化酶的刺激。在24孔板上新鮮培養(yǎng)基中鋪滿的SA0S-2細(xì)胞與 0. 5 u Ci [3H]腺嘌呤(26. 9Ci/mmol，New England Nuclear, Boston,MA) 一起 37°C溫育 2 小 時(shí)，并用Hank' s平衡鹽溶液(GibC0，GaitherSburg，MD)洗兩次。細(xì)胞在新鮮培養(yǎng)基中用 ImM IBMX[異丁甲基-黃嘌呤，Sigma，St，Louis，M0]處理15分鐘，并將發(fā)明的肽加到培養(yǎng) 基中溫育5分鐘。加入1.2M三氯乙酸(TCA) (Sigma, St. Louis,M0)終止反應(yīng)，隨后用4N氫 氧化鉀中和樣品。用雙柱色譜方法(Salmon，等，1974，分析生物化學(xué)(Anal. Biochem.) 58， 541)分離cAMP。在閃爍計(jì)數(shù)儀中(液體閃爍計(jì)數(shù)儀2200 CA, PACKARD, Downers Grove, IL) 計(jì)數(shù)放射活性。分別計(jì)算供試肽的EC5(i值(腺苷酸環(huán)化酶半最大刺激)并顯示于表1。所有供試 肽都是對(duì)腺苷酸環(huán)化酶活性的有效刺激物，其表現(xiàn)為作為次于成骨細(xì)胞增殖(例如，骨生 長(zhǎng))的信號(hào)的生化途徑。表 1 注Kd(iiM)解離常數(shù)；EC5Q(nM)半最大刺激濃度。其它實(shí)施方案必須了解當(dāng)與其詳細(xì)描述結(jié)合描述本發(fā)明時(shí)，前面的描述是為了說(shuō)明而不是限制 發(fā)明的范圍，它由附上的權(quán)利要求的范圍確定。其它方面，優(yōu)點(diǎn)以及改進(jìn)都在權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
下式的一種肽或其藥學(xué)上可接受的鹽其中A1是Ser，Ala，或Dap；A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A7是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，或Cha；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一個(gè)R1和R2獨(dú)立地是H，C1-12烷基，C2-C12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中的一個(gè)且只有一個(gè)是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥-苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z其中Y是一個(gè)C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；條件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個(gè)是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一個(gè)是Aib。FSA00000070239800011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一個(gè)是Cha。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中 A3 是 Ser ；A5是lie ；A7 是 Leu ；或 Cha ；A8 :^Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A12 是 Gly ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A17 是 Ser ；A18 是 Met，或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, hArg,或 Cha ； A32 是 His ；A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的肽或其藥學(xué)可接受的鹽，其中A7和An中至少一個(gè)是Cha。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha7ai]hPTH(l-34)NH2， [Cha7'11, Nle8'18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2 ； [Chan]hPTH(l-34)NH2 ； [Cha7'11'15]hPTH(l-34)NH2 ； 或[Cha7] hPTH (1-34) NH2。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個(gè) 是 ChaD
7.根據(jù)權(quán)利要求6的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha23]hPTH(1-34)NH2， [Cha24] hPTH (1-34) NH2, [Nle8'18, Cha27] hPTH (1-34) NH2，[Cha28] hPTH (1-34) NH2，[Cha31] hPTH(l-34)NH2, [Cha24,28,31]hPTH(1—34) NH2 ； [Cha24'28'31，Lys30]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha28'31] hPTH(l-34)NH2 ；或[Cha15] hPTH (1-34) NH2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少 一個(gè)是Aib。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；3八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3，A12，A16，A17，A19，和A34中至少一個(gè) 是 Aib。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Aib16]hPTH(1-34)NH2， [Aib19]hPTH(1-34) NH2, [Aib34]hPTH(1-34) NH2 ； [Aib16’19]hPTH(l_34)NH2 ； [Aib3]hPTH(l_34) NH2 ； [Aib17]hPTH(l-34)NH2 ；或[Aib12]hPTH(1-34) NH2。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7，An，A15，A23，A24，A27，A28，和A31 中至少一個(gè)是Cha并且A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個(gè)是Aib。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中 A3 是 Ser 或 Aib ；八5是lie ； A7 是 Leu 或 Cha ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；An 是 Leu 或 Cha ；A15 是 Leu 或 Cha ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib,或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tye, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ;R2是H ；以及民是^12。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中中至少一個(gè)是Cha并且A16， A19，和A34中至少一個(gè)是Aib。
15.根據(jù)權(quán)利要求14 的肽，其中所述肽是[Cha7'11, Nle8’18，Aib16’19，Tyr34]hPTH(l_34) NH2，[Cha7'1\Nle8'18'31, Aib16,19,Tyr34]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7'n,Aib19]hPTH(l-34)NH2 ;[Cha7' "，Aib16]hPTH(1-34) NH2 ； [Cha7'11, Nle8'18, Aib34]hPTH(1-34) NH2 ；或[Cha7'11, Aib19, Lys30] hPTH(l-34)NH2。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A24，A28，和A31中至少一個(gè)是Cha并 且A16和A17中至少一個(gè)是Aib。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha28，Nle8'18,Aib16’19， Tyr34]hPTH(l-34)NH2，或[Cha28，Aib16’19]PTH(l_34)NH2。
18.下式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 其中八3是361~，1111~，或 Aib ；A5 是 Leu，Nle，lie，Cha，3 -Nal，Trp, Pal, Phe 或 p-X-Phe，其中 X 是 OH, 一種鹵素，或ch3；A^Leu，lie, Nle, Cha, 3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 H，0H，一種鹵素， 或 CH3 ；A8 ^Met, Nva, Leu, Val, lie, Cha,或 Nle ；An 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一種鹵素， 或 CH3 ；A12 是 Gly 或 Aib ；A15 是 Leu，Nle, lie, Cha, ^-Nal, Trp, Pal, Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一種鹵素， 或 CH3 ；A16 是 Ser, Asn, Ala,或 Aib ； A17 是 Ser，Thr，或 Aib ；A18 是 Met, Nva, Leu, Val, lie, Nle, Cha,或 Aib ；A19 是 Glu 或 Aib ；A21 是 Val, Cha,或 Met ；A23 是 Trp 或 Cha ；A24 是 Leu 或 Cha ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg, Gin, Cha ；A1-Val-A3-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Asn-A11A28 是 Leu 或 Cha ；A30 是 Asp 或 Lys ；A31 是 Val，Nle, Cha，或缺失；A32是His或缺失;A33是Asn或缺失；A34 是 Phe，Tyr，Amp, Aib，或缺失；每一個(gè)禮和R2獨(dú)立地是H，Ci_12烷基，C2-C12鏈烯基，C7_20苯烷基，Cn_20萘烷基，Ci_12羥 烷基，C2_12羥鏈烯基，C7_20羥苯烷基，或Cn_2(l羥萘烷基；或禮和R2中的一個(gè)且只有一個(gè)是 COEi，其中Ei是Ci_12烷基，C2_12鏈烯基，C7_2(1苯烷基，Cn_2(1萘烷基，Ci_12羥烷基，C2_12羥鏈烯 基，C7_20羥-苯烷基，或Cn_2(l羥萘烷基；R3是0H，NH2, Ci_12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個(gè)烴部分并且Z是H，0H， C02H,或 C0NH2 ；條件是至少 Ai 是0(1 ，~是 3-妝1，撲？，卩31，卩1^，或？-1-卩116 ；P15 是 0-Nal，Trp，Pal， Phe,或 p-X-Phe, A27 是 hArg,或 A31 是 Nle。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中 是 Ser, Gly,或 Dap ；A3 是 Ser 或 Aib ；A8 是 Met, Nva, Leu, Val, lie,或 Nle ；A16 是 Asn 或 Aib ；A18 是 Met, Aib 或 Nle ；A21 是 Val ；A27 是 Lys, Aib, Leu, hArg,或 Cha ； A31 是 Val, Nle,或 Cha ； A32 是 His ； A33 是 Asn ；A34 是 Phe, Tyr, Amp,或 Aib ； Ri 是 H ; R2是H ；以及R3是NH2。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Nle31]hPTH(1-34)NH2， [hArg27]hPTH(1-34)朋2，或[Dap1，Nle8'18, Tyr34]hPTH(l_34)NH2。
21.有下面分子式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser，或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，3-Nal，Trp，Pal，Phe，或 p-X-Phe，其中 X 是 0H，一種鹵素，或 CH3 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala缺失；每一個(gè)禮和R2獨(dú)立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羥烷基，C2_12羥鏈 烯基，C7_20羥苯烷基，或Cn_2(1羥萘烷基；或禮和R2中一個(gè)且只有一個(gè)是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 鏈烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羥烷基，c2_12羥鏈烯基，c7_20羥 苯烷基，或cn_2(l羥萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個(gè)烴部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；條件是 A5，A7，A8，An，A15，A 18，A22，A23，A24 A27 A28 A30 或A31中至少一個(gè)是Cha,或A3，A12， A16，A17 A18 A19 A22 A25 A26 A29 A30 或A34中至少一個(gè)是Aib。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Phe或Cha；A23是Phe或Cha ； A25 是 His ；A26 是 His ；A27 是 Leu 或 Cha ；A28 是 lie 或 Cha ；A29 是 Ala ；A30 是 Glu 或 Lys ；A31 是 lie 或 Cha ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和An中至少一個(gè)是Cha。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個(gè)是Aib。
25.根據(jù)權(quán)利要求21的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Glu,Aib或Cha ；A23是Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib 或 Lys ；A31 是 leu, Cha 或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和An中至少一個(gè)是Cha。
27.根據(jù)權(quán)利要求25的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個(gè)是Aib。
28.下式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 其中是 Ala, Ser 或 Dap ； A3 是 Ser 或 Aib ； A5 是 His, lie,或 Cha ；八7是1^11，0^，肌6，旦-恥1，！1印，卩31，卩116，或？-父-卩116，其中乂是011，一種鹵素，或013 ； A8 是 Leu, Met,或 Cha ； A10 是 Asp 或 Asn ；An 是 Lys, Leu, Cha, Phe,或旦 _Nal ；A12 是 Gly 或 Aib ；A14 是 Ser 或 His ；A15 是 lie,或 Cha ；A16 是 Gin 或 Aib ；A17 是 Asp 或 Aib ；A18 是 Leu, Aib,或 Cha ；A19 是 Arg 或 Aib ；A22 是 Phe, Glu, Aib,或 Cha ；A23 是 Phe, Leu, Lys,或 Cha ；A24 是 Leu, Lys,或 Cha ；A25 是 His, Aib,或 Glu ；A26 是 His, Aib,或 Lys ；A27 是 Leu, Lys,或 Cha ；A28 是 lie, Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Ala, Glu,或 Aib ；A30 是 Glu, Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 lie, Leu, Cha, Lys,或缺失；A32是His或缺失;A33是Thr或缺失；A34是Ala或缺失；每一個(gè)禮和R2獨(dú)立地是H，Ci_12烷基，C7_2Q苯烷基，Cn_2Q萘烷基，Ci_12羥烷基，C2_12羥鏈 烯基，C7_20羥苯烷基，或Cn_2(1羥萘烷基；或禮和R2中一個(gè)且只有一個(gè)是COEi，其中Ei是Ci_12 焼基，C2_12焼基，C2_12 鏈烯基， Cj-20 本焼基，Cn_2Q 萘烷基，Ci_12羥烷基，c2_12羥鏈烯基，c7_20羥 苯烷基，或cn_2(l羥萘烷基；以及R3是0H，NH2，(V12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個(gè)烴部分并且Z是H，0H，C02H 或 C0NH2 ；條件是A23' A24 A27j A28或A31中至少一個(gè)是Lys。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Glu，Aib，或Cha；A23是Leu， Lys,或 Cha ；A25 是 Aib 或 Glu ；A26 是 Aib 或 Lys ；A28 是 Leu, Lys,或 Cha ；A29 是 Glu 或 Aib ； A30 是 Cha, Aib,或 Lys ；A31 是 Leu, Cha,或 Lys ；A32 是 His ；A33 是 Thr ；以及 A34 是 Ala。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和An中至少一個(gè)是Cha；或其藥 學(xué)可接受鹽。
31.根據(jù)權(quán)利要求29的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個(gè)是Aib。
全文摘要
甲狀旁腺素片段(1-34)的肽變體，其中在位于7，11，23，24，27，28和31位的氨基酸殘基中至少有一個(gè)是環(huán)己基丙氨酸，或在位于3，16，17，18，19和34位的氨基酸殘基中至少有一個(gè)是α-氨基異丁酸；或者，至少在1位的氨基酸殘基是α，β-二氨基丙酸，27位的氨基酸殘基是高精氨酸，或31位的氨基酸殘基是正亮氨酸。
文檔編號(hào)A61P3/14GK101851288SQ20101015054
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期1996年7月3日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月13日
發(fā)明者董正欣 申請(qǐng)人:益普生藥業(yè)公司