專(zhuān)利名稱(chēng)：改善梗死區(qū)灌注的組合物以及血管損傷修復(fù)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及改善梗死區(qū)灌注的組合物，其包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以及其在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中修復(fù)梗死區(qū)損傷的使用方法。
背景技術(shù)：
心動(dòng)周期術(shù)語(yǔ)“舒張期”是指心腔的正常收縮后擴(kuò)張，在此期間心腔充滿血液。術(shù)語(yǔ)“收縮期”是指心臟、尤其是心室的收縮，通過(guò)此收縮將血液分別通過(guò)主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈驅(qū)動(dòng)穿過(guò)體循環(huán)和肺循環(huán)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“心動(dòng)周期”是指與冠脈血流或血液相關(guān)的全部或任何力學(xué)事件，其從一次心搏開(kāi)始至下一次心搏開(kāi)始。在心動(dòng)周期中，血壓升高和下降。心動(dòng)周期的頻率是心率。心臟的每一次“搏動(dòng)”包括5個(gè)主要的階段(1) “舒張晚期”，其是當(dāng)半月瓣關(guān)閉，房室(AV)瓣打開(kāi)，并且整個(gè)心臟舒張；(2) “心房收縮”，其是當(dāng)左右心房的心肌收縮，AV 瓣關(guān)閉，且血從心房流到血管；(3) “等容心室收縮”，其是當(dāng)心室開(kāi)始收縮，AV和半月瓣關(guān)閉，并且體積沒(méi)有變化；(4) “心室噴血”，其是當(dāng)心室是空的，但仍然收縮并且半月瓣打開(kāi)； (5) “等容心室舒張”，當(dāng)壓力降低，沒(méi)有血液進(jìn)入心室，心室停止收縮并開(kāi)始舒張，并且半月瓣關(guān)閉，這是由于主動(dòng)脈的血液推動(dòng)它們關(guān)閉。心動(dòng)周期由一系列電沖擊來(lái)協(xié)調(diào)，這些電沖擊由存在于竇房結(jié)和房室結(jié)中的特定心臟細(xì)胞產(chǎn)生。冠脈血流通過(guò)冠狀動(dòng)脈的血流是搏動(dòng)的，具有特征性的時(shí)相的收縮和舒張流成分。收縮流與心臟周期的收縮或泵送期相關(guān)，具有快速、短暫、逆行反應(yīng)。舒張流與心臟周期的舒張或填充期相關(guān)，在心肌收縮后的舒張期發(fā)生，具有超過(guò)收縮水平的突然升高和與主動(dòng)脈舒張壓平行的逐漸下降。壁內(nèi)冠狀血體積在每一心跳期間發(fā)生改變，由心肌來(lái)容納由肌肉收縮造成的體積變化。冠狀靜脈流與冠狀動(dòng)脈流不協(xié)調(diào)，冠狀靜脈流主要發(fā)生在收縮期并且在舒張期幾乎不存在。對(duì)于每一次心跳，血液在收縮和舒張壓之間變化。術(shù)語(yǔ)“收縮壓”是指動(dòng)脈中的峰壓，其在心動(dòng)周期即將結(jié)束當(dāng)心室收縮時(shí)發(fā)生。術(shù)語(yǔ)“舒張壓”是指動(dòng)脈中的最小壓力，其在心動(dòng)周期接近開(kāi)始的時(shí)間當(dāng)心室充滿血液時(shí)發(fā)生。 冠脈血流不僅是時(shí)相的，而且還隨著血管類(lèi)型和在心肌中的位置而不同。冠狀小動(dòng)脈似乎沿著它們的長(zhǎng)度具有特定的調(diào)節(jié)元件，其以集成的方式“串聯(lián)”運(yùn)作。由多個(gè)功能性“瓣”組成的系統(tǒng)允許冠狀循環(huán)的精細(xì)控制。最小的小動(dòng)脈在代謝性應(yīng)激期間擴(kuò)大，導(dǎo)致減小的微血管阻力和升高的心肌灌注。狹窄即血管的變窄產(chǎn)生對(duì)血流的阻力，這與狹窄的形態(tài)特征直接相關(guān)。當(dāng)上游小動(dòng)脈壓下降(這是由于穿過(guò)狹窄的擴(kuò)張壓下降所導(dǎo)致的)時(shí)， 上游稍大的小動(dòng)脈發(fā)生肌源性擴(kuò)張，并且導(dǎo)致阻力的進(jìn)一步下降。最大小動(dòng)脈中升高的血流增加剪切應(yīng)力并且引發(fā)血流介導(dǎo)的擴(kuò)張，進(jìn)一步減少這一網(wǎng)絡(luò)的阻力。心臟動(dòng)脈和靜脈搏動(dòng)流特征取決于心肌的柔度。術(shù)語(yǔ)“柔度”是指中空器官在移除擴(kuò)張或壓縮力之后抗彈回其原始大小的傾向性的程度。柔度越高，材料越有彈性。應(yīng)用以下等式計(jì)算柔度，其中△ V是體積變化，以及△ P是壓力變化
C=AV
ΔΡ心臟作為儲(chǔ)存器的能力受控于小動(dòng)脈對(duì)冠狀血管入流的阻力。出口阻力與壁內(nèi)心靜脈相關(guān)。心肌毛細(xì)血管阻力影響動(dòng)脈和靜脈反應(yīng)，但主要與出口阻力協(xié)同作用。約75%的總冠狀阻力發(fā)生在動(dòng)脈系統(tǒng)中，其包括傳導(dǎo)(Rl)、前小動(dòng)脈(R2)和小動(dòng)脈及心肌內(nèi)毛細(xì)血管(舊)。人正常的心外膜冠狀動(dòng)脈的直徑通常為0.3至5mm，并且對(duì)血流沒(méi)有可評(píng)估的阻力。通常，大心外膜血管阻力(Rl)是不重要的，直到動(dòng)脈粥樣硬化梗阻累及管腔。大小為100至500 μ m的前毛細(xì)血管小動(dòng)脈(似)是連接心外膜的與心肌毛細(xì)血管的阻力血管，并且是冠脈血流的主要控制者。它們貢獻(xiàn)了約25%至35%的總冠狀阻力。 末梢前毛細(xì)血管小動(dòng)脈(直徑< ΙΟΟμπι)是冠脈血流代謝調(diào)節(jié)的主要部位，其負(fù)責(zé)40-50% 的冠脈血流阻力。每平方毫米約4000毛細(xì)血管的密集網(wǎng)絡(luò)保證了每一肌細(xì)胞與毛細(xì)血管相鄰。毛細(xì)血管不是一致開(kāi)放的(意思是打開(kāi)，允許自由通過(guò))，因?yàn)榍懊?xì)血管括約肌根據(jù)心肌的需要調(diào)節(jié)血流。多種病癥，諸如左心室肥大、心肌缺血或糖尿病，會(huì)損害微循環(huán)阻力(R3)，使得在需氧量增加時(shí)冠狀流的最大絕對(duì)增長(zhǎng)減弱。局部缺血心肌幾乎完全依賴(lài)于需氧代謝，因?yàn)樾呐K中氧氣儲(chǔ)存是不足的。心肌氧氣供應(yīng)隨著心肌的氧氣(能量)需求而升高或降低。術(shù)語(yǔ)“自體調(diào)節(jié)”是指面對(duì)驅(qū)動(dòng)力改變將心肌灌注維持在恒定水平的能力。自體調(diào)節(jié)在很寬的平均主動(dòng)脈壓范圍內(nèi)維持冠狀灌注在相對(duì)恒定水平。當(dāng)主動(dòng)脈壓超過(guò)其上限或下限時(shí)，冠脈血流成比例地突然下降或上升。心臟需要供應(yīng)足量的氧量以避免灌注不足。當(dāng)狹窄遠(yuǎn)端的降低的灌注壓不能被阻力血管的自體調(diào)節(jié)擴(kuò)張補(bǔ)償?shù)脑?，則發(fā)生局部缺血，即缺乏血液供應(yīng)和氧。由于最少供應(yīng)的區(qū)域通常是最遠(yuǎn)處，局部缺血通常在距離血液供應(yīng)最遠(yuǎn)區(qū)域出現(xiàn)。在冠狀動(dòng)脈完全或幾乎完全閉合后，心肌灌注通過(guò)側(cè)支的方式發(fā)生，即心外膜動(dòng)脈間相互連接的血管通道。側(cè)支通道可急性形成或可能在出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈疾病之前以未發(fā)育的狀態(tài)預(yù)先存在。預(yù)先存在的側(cè)支是直徑為20 μ m至200 μ m的薄壁結(jié)構(gòu)，在不同的物種中有不同的密度。預(yù)先存在的側(cè)支通常是閉合的且沒(méi)有功能，因?yàn)椴淮嬖趬毫μ荻纫则?qū)動(dòng)在它們連接的動(dòng)脈之間的血流。在冠狀動(dòng)脈閉塞后，遠(yuǎn)端壓力突降，并且預(yù)先存在的側(cè)支幾乎在一瞬間打開(kāi)。術(shù)語(yǔ)“心肌缺血”是指對(duì)心肌細(xì)胞的血液供應(yīng)和氧的減少。心肌缺血的發(fā)生已被歸因于兩種機(jī)制(1)升高的心肌氧需求；以及O)降低的心肌灌注和氧遞送(Willerson， J. Τ.等，JACC 8(1) :245-50(1986))。心肌缺血首先出現(xiàn)在心內(nèi)膜下區(qū)域以及在這里更廣泛，因?yàn)檫@些更深的心肌層離血液供應(yīng)最遠(yuǎn)，需要更多的氧。短暫性局部缺血、冬眠心肌以及心肌梗死是臨床上不同的病癥。短暫性局部缺血。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“短暫性局部缺血”是指在休息時(shí)或運(yùn)動(dòng)中冠狀動(dòng)脈的可逆(即心肌細(xì)胞在發(fā)作之后仍存活)狹窄，其中沒(méi)有血栓或血小板破裂，但是其中不能滿足血液供應(yīng)。每次心臟需氧量升高時(shí)，產(chǎn)生了需氧量和供應(yīng)之間的不平衡。短暫性局部缺血產(chǎn)生了事件級(jí)聯(lián)，首先是代謝和生物化學(xué)改變，導(dǎo)致受損的心室放松和舒張紊亂、受損的心臟收縮功能以及具有ST段改變的心電圖異常，隨后是左心室不同步性的升高的舒張期末壓、運(yùn)動(dòng)機(jī)能減退、運(yùn)動(dòng)不能以及運(yùn)動(dòng)障礙，并且最后是心絞痛的疼痛癥狀。 盡管缺血肌細(xì)胞在冠脈血流停止后數(shù)秒內(nèi)經(jīng)歷生理和代謝改變，導(dǎo)致T波以及有時(shí)ST段異常(但沒(méi)有血清酶升高)，但是沒(méi)有細(xì)胞由于缺血死亡。Kloner，R. Α.和Jennings，RB, Circulation 104:2981-89 0001)。一旦重新建立血流，則肌細(xì)胞收縮功能完全恢復(fù)。盡管心絞痛(胸痛)可能是短暫性局部缺血的癥狀，但基本上在79%的受治療者中短暫性局部缺血是無(wú)癥狀的(即存在ST-段的至少I(mǎi)mm的降低，但是沒(méi)有相關(guān)的癥狀，例如胸痛)。例如，在患有穩(wěn)定型心絞痛的多數(shù)患者中，用力或情緒，及其導(dǎo)致的心率、血壓或收縮狀態(tài)增加或其任意組合，增加了心肌需氧量，而在通過(guò)緊緊變窄的(狹窄)冠狀動(dòng)脈的氧氣遞送沒(méi)有充足的遞送。超過(guò)40%的應(yīng)用一種或多種抗心絞痛藥物治療的穩(wěn)定型心絞痛患者具有無(wú)癥狀缺血的頻繁發(fā)作，其已被證實(shí)預(yù)兆著更高的冠狀動(dòng)脈事件和心臟死亡的風(fēng)險(xiǎn)。Deedwania，PC，Carbajal, EV, Arch. Intern. Med. 150 :2373-2382 (1991)。慢性心肌缺血。本文使用的術(shù)語(yǔ)“慢性心肌缺血”是指由于冠狀血管狹窄導(dǎo)致的心肌缺血的延續(xù)急性或慢性狀態(tài)，其中心肌“冬眠”，意思是心肌下調(diào)或減少其收縮性，并且因此減少其需氧量，以匹配減少的灌注，由此保持細(xì)胞活力和逃避凋亡。心肌如此的基礎(chǔ)機(jī)制為人知之甚少。在恢復(fù)足夠的血液供應(yīng)后，這一冬眠的心肌能夠恢復(fù)正?；驇缀跽５墓δ?。然而，一旦冠脈血流恢復(fù)至正?；蚪咏?，并且局部缺血解除，冬眠心肌仍然不收縮。這一在局部缺血解除后導(dǎo)致心功能緩慢恢復(fù)的血流-功能錯(cuò)配稱(chēng)為頓抑(stunning)。 功能恢復(fù)的時(shí)長(zhǎng)是很不相同的，從幾天到數(shù)月，并且取決于多個(gè)參數(shù)，包括最初局部缺血發(fā)作的持續(xù)時(shí)間、最初發(fā)作期間缺血的嚴(yán)重程度、以及動(dòng)脈血流恢復(fù)的充分性。許多研究提供了冬眠心肌中炎癥的證據(jù)。Heusch, G.等人，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 984-99000 。在心肌冬眠的豬模型(其中將平均靜止LAD冠脈血流降低至基線值的約 60%，持續(xù)M小時(shí)至4周的時(shí)間)中進(jìn)行的研究中，在所有試驗(yàn)豬的由狹窄LAD提供的動(dòng)脈區(qū)域中檢測(cè)到凋亡肌細(xì)胞，意味著在冬眠心肌中功能下調(diào)可能不足以阻止逐步的、正在進(jìn)行的通過(guò)細(xì)胞凋亡的肌細(xì)胞死亡。Chen，C，等，J.Am. Coll. Cardiol. 30 1407-12 (1997)。對(duì)進(jìn)行冠狀動(dòng)脈分流術(shù)的人類(lèi)患者的活組織檢查同樣地將肌細(xì)胞凋亡認(rèn)定為冬眠心肌的重要現(xiàn)象，其不利地影響左心室功能的恢復(fù)。Angelini，A.，等，Eur. J. Heart Failure 9(4) 377-83(2006)。急性心肌梗死(AMI)。另一類(lèi)型的發(fā)作在AMI期間發(fā)生。AMI是冠狀血管腔的突然改變，其導(dǎo)致缺血性梗死，意思是其一直持續(xù)直到心肌死亡。按肉眼檢查，可將心肌梗死分為兩類(lèi)透壁性梗死，其中心肌壞死涉及心室壁的全部或幾乎全部厚度；以及心內(nèi)膜下(非透壁性)梗死，其中心肌壞死涉及心內(nèi)膜下、壁內(nèi)心肌，或兩者，而沒(méi)有擴(kuò)展到穿過(guò)心室壁到心外膜的所有部分。通常有血管的完全閉塞，伴有ST段的升高，因?yàn)檠“迤屏讯鴮?dǎo)致在官腔內(nèi)形成血栓。延長(zhǎng)的局部缺血導(dǎo)致凋亡和壞死的心肌細(xì)胞死亡。參見(jiàn)Kaj stura, J.，等，Lab Invest. 74 :86-107(1996)。壞死累及肌纖維膜和細(xì)胞內(nèi)大分子的完整性，由此釋放血清心臟標(biāo)志物，諸如心臟特異性肌鈣蛋白和酶，諸如血清肌酸激酶(CK)。此外，由于對(duì)肌肉的全厚損傷，患者可能具有心電圖改變(ECG)。ST升高的心肌梗死(STEMI)是比沒(méi)有ST升高的心肌梗死更大的損傷。ECG的ST段升高和Q波是兩個(gè)高度指示心肌梗死的的特征，其僅在約一半的所展示的心肌梗死病例中看到。急性心肌梗死仍然很普遍，僅在美國(guó)就每年報(bào)道有110萬(wàn)病例發(fā)生(Antman， Ε. Μ. , Braunwald, Ε. , Acute Myocardial Infarction, in Principles of Internal Medicine，第 15 版，Braunwald，E.等，編輯，New York :McGraw_Hi 11 (2001))。臨床前和臨床數(shù)據(jù)證實(shí)，心肌梗死后，心肌肌細(xì)胞的急劇喪失和伴隨的梗死區(qū)周?chē)嘧⒉蛔銓?dǎo)致事件的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引起心功能的立即減少，具有長(zhǎng)期持續(xù)的可能。心肌細(xì)胞喪失的程度取決于冠狀動(dòng)脈阻塞的持續(xù)時(shí)間、現(xiàn)存的側(cè)支冠狀循環(huán)以及心臟微血管系統(tǒng)的狀況。Paul等人，Am. Heart J. 131 :710-15(1996) ；Pfeffer, Μ. Α. ， Braunwald, Ε. ， Circulation 81 1161-72(1990) ；Sheilban, I.等人，J. Am. Coll. Cardiol. 38 :464-71 (2001) ；Braunwald Ε. ， Bristow, Μ. R. ， Circulation 102 :IV-14-23 (2000) ；Rich 等,Am. J. Med. 92 7-13(1992) ;Ren 等 K, J. Histochem. Cytochem. 49 :71-79(2002) ；Hirai, Τ.等人， Circulation 79 :791-96 (1989) ;Ejiri，Μ·等，J. Cardiology 20:31-37(1990)。由于心肌細(xì)胞事實(shí)上沒(méi)有再生功能，因此心肌梗死導(dǎo)致永久的心臟機(jī)能障礙，這是由于收縮肌細(xì)胞喪失并替代以沒(méi)有功能的纖維疤痕。Frangogiannis，N. G.，等人，Cardiovascular Res. 53(1) :31-47 000 。此外，有活力的心臟肌肉的代償性肥大導(dǎo)致微血管不足，其通過(guò)引起梗死區(qū)周?chē)蚀蠹〖?xì)胞的心肌肌肉冬眠和凋亡而進(jìn)一步損害心功能。在心肌梗死的幸存者中，殘留的心功能受到心室重建(意思是心臟受損后大小、 形狀以及功能的改變，通常是功能的逐漸下降)程度的影響。心肌梗死后，心室地形圖 (意思是心室形狀、構(gòu)造、或形態(tài))的改變發(fā)生在梗死和健康心臟組織中。Pfeffer，Μ. Α., Braunwald, Ε.，Circulation 81 :1161-72 (1990)。心室擴(kuò)張(意思是超過(guò)該心室的延伸、變大或擴(kuò)展)造成總體心功能的下降，并且受到梗死大小、梗死愈合以及心室壁應(yīng)力的影響。 近期最小化重建的努力已取得了成功，通過(guò)應(yīng)用溶血栓試劑以及機(jī)械介入(包括但不限于支架)通過(guò)快速再灌注(意思是血流的恢復(fù))限制梗死大小，以及通過(guò)適當(dāng)?shù)貞?yīng)用預(yù)加載的治療和合適的加載后處理而降低心室應(yīng)力。見(jiàn)上。不管這些介入，很高百分比的患者在心肌梗死后經(jīng)歷臨床相關(guān)和長(zhǎng)期的心功能不良。Sheiban，I.等人J. Am. Coll. Cardiol. 38 464-71 0001)。盡管有與動(dòng)脈循環(huán)相關(guān)的血運(yùn)重建和適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)管理從而最小化心室壁應(yīng)力，但顯著比例的這些患者經(jīng)歷心室重建、永久的心臟機(jī)能不良以及心功能的逐步退化， 并且保持在升高的經(jīng)歷不良心臟事件(包括死亡)的生命危險(xiǎn)當(dāng)中。Paul等人，Am. Heart J.131 :710-15(1996) ；Pfeffer, Μ. Α. , Braunwald, Ε. , Circulation 81 :1161-72(1990)在細(xì)胞水平，在心肌梗死之后，瞬時(shí)全面的心臟官能不良立即均勻地發(fā)生。在短暫的(即，持續(xù)3分鐘至5分鐘)冠狀動(dòng)脈阻塞的情況下，能量代謝受損，導(dǎo)致顯而易見(jiàn)的心臟肌肉功能不良，盡管立即再灌注其也能持續(xù)達(dá)48小時(shí)。這一所謂的“頓抑心肌現(xiàn)象”在再灌注隨后或之后發(fā)生，并且認(rèn)為是活性氧類(lèi)的結(jié)果。該過(guò)程是瞬時(shí)的，并且不與炎癥反應(yīng)相關(guān)。Frangogiannis, N. G.，等，Cardiovascular Res. 53(1) :31-47 Q002)。在成功的血運(yùn)重建后，在3至4天內(nèi)發(fā)生頓抑的顯著恢復(fù)，盡管完全恢復(fù)可能需要長(zhǎng)得多的時(shí)間。Boli， R. , Prog. Cardiovascular Disease 40(6) :477-515 (1998) ；Sakata, K.等人，Ann. Nucleic Med. 8 :153-57(1994) ；Wollert, K. C.等，Lancet 364 :141-48(2004) 更顯著長(zhǎng)時(shí)間(S卩，持續(xù)超過(guò)5分鐘)的冠狀動(dòng)脈阻塞導(dǎo)致心肌缺血并且與顯著的炎癥反應(yīng)相關(guān)，所述炎癥反應(yīng)在再灌注后馬上開(kāi)始并可持續(xù)數(shù)周。Frangogiannis,N. G.， 等人，Cardiovascular Res. 53 (1) :31-47(2002) ；Frangogiannis, N. G.等，Circulation 98 :687-798(1998)。再灌注后的炎癥過(guò)程是復(fù)雜的。最初其導(dǎo)致心肌損傷，但后來(lái)導(dǎo)致愈合及疤痕形成。這一復(fù)雜的過(guò)程似乎以?xún)蓚€(gè)階段發(fā)生。在第一個(gè)所謂的“熱”階段(在前5天內(nèi)) 中，活性氧簇(在缺血心肌組織中)以及補(bǔ)體激活產(chǎn)生白細(xì)胞的信號(hào)趨化性(趨化性是能動(dòng)的細(xì)胞、有機(jī)體或部分定向向其認(rèn)為有吸引力的環(huán)境中移動(dòng)和/或遠(yuǎn)離其發(fā)現(xiàn)相斥的環(huán)境)以及啟動(dòng)細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)。Lefer, D. J. , Granger, D. N. , Am. J. Med. 4 :315-23 (2000)； Frangogiannis, N. G.，等.，Circulation 7 :699-710 (1998)。肥大細(xì)胞脫粒，腫瘤壞死因子α (TNFa)釋放，以及升高的白介素_6 (IL_6)、細(xì)胞間粘附分子1 ( “ICAM-I”或⑶-54， 其為通常在內(nèi)皮細(xì)胞和免疫系統(tǒng)細(xì)胞上表達(dá)的受體)、選擇蛋白(L、E和P)以及整聯(lián)蛋白((⑶11a、⑶lib和⑶18))的表達(dá)均似乎導(dǎo)致缺血性心肌中嗜中性粒細(xì)胞的積聚以及脫粒。Frangogiannis, N. G.等人，Circulation 7 :699-710 (1998)，Kurrelmeyer ；K. M，等人，Proc. Nat，1 Acad. Sci. 10 :5456-61 (2000) ；Lasky，L. Α.，Science 258:964-69(1992)； Ma, X. L.，等人，Circulation 88(2) :649-58(1993) ；Simpson, P. J.等，J. Clin. Invest. 2 624-29(1998)。嗜中性粒細(xì)胞顯著地導(dǎo)致通過(guò)微血管阻塞的心肌細(xì)胞損傷和死亡以及在配體特異性地與心肌細(xì)胞粘附后嗜中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)通路的活化。Entman，Μ. L.，等人， J. Clin. Invest. 4 :1335-45(1992)。在“熱”階段期間，血管發(fā)生受到抑制，這是由于釋放了血管生成抑制物質(zhì)，包括干擾素Y可誘導(dǎo)蛋白(IP 10) 0 Frangogiannis,N. G.，等人，F(xiàn)ASEB J. 15 :1428-30(2001)。在第二階段，心臟修復(fù)過(guò)程開(kāi)始(約第6天至約14天)，其最終導(dǎo)致疤痕形成(約第14天至約21天)以及隨后的心室重建(約第21天至約90天)。再灌注之后，單核細(xì)胞馬上滲透到梗死的心肌中。受到補(bǔ)體(Cfe)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Bl ( “TGF-B1”)和單核細(xì)胞趨化蛋白1( “MCP-1”)的吸引，單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，其通過(guò)清除死亡組織、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝以及誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖而開(kāi)始愈合過(guò)程。Birdshall，H. H.，等人，Circulation 3 :684-92(1997)。由滲入的淋巴細(xì)胞分泌的白介素10 (IL-IO)也通過(guò)下調(diào)炎癥細(xì)胞因子和影響組織重建而促進(jìn)愈合。Frangogiannis，N. G.等人，J. Immunol. 5 :2798-2808 (2000)。 肥大細(xì)胞似乎還通過(guò)參與纖維疤痕組織的形成而參與到心肌修復(fù)的后期階段。干細(xì)胞因子 (SCF)是肥大細(xì)胞的強(qiáng)吸引物。已顯示SCF mRNA在心肌梗死犬模型的缺血心肌區(qū)域上調(diào)， 并因此可能導(dǎo)致肥大細(xì)胞在缺血心肌部位積聚。Franigogiannis，N. G.等人，Circulation 98:687-798(1998)。肥大細(xì)胞產(chǎn)物(包括TGF-B、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和明膠酶A及B)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖、影響細(xì)胞外基質(zhì)代謝、以及誘導(dǎo)血管發(fā)生。Fang, K. C，等人，J. Immunol. 162 :5528-35(1999) ；Takeshi, S.，等人， Cardiology 93 :168-74(2000)。心肌梗死后，新血管發(fā)生在炎癥過(guò)程的“熱”階段消退(約第5天)后發(fā)生，這與VEGF升高的水平相一致(VEGF在約第7天達(dá)到峰值，并約第14天至21天逐步下降至基線水平)。在愈合過(guò)程的這一階段，內(nèi)皮前體細(xì)胞(EPC)被動(dòng)員并募集至梗死部位。Siinitani， S.，等人，Circulation 103 :2776-79 (2001)。不受理論限制，已有人提出趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 (SDF-1，其為⑶34+細(xì)胞上表達(dá)的CXCR-4趨化因子受體的配體)在將細(xì)胞歸巢至缺血損傷區(qū)域中也起作用。Ceredini，D. J.，等人，Nature Medicine 10:858-63(2004)； Askari, Α., 等，Lancet 362 :697-703(2003) ；Yamaguchi, J.等，Circulation 107 1322-34 (2003)。盡管已知SDF-I在血細(xì)胞發(fā)生中起作用，并且參與造血祖細(xì)胞的遷移、歸巢和存活，以及盡管已顯示SDF-I涉及通過(guò)增加EPC募集至缺血部位而參與體內(nèi)缺血新血管形成(Yamaguchi 等，Circulation 107 1322-1328 (2003)), {0 SDF-1 在新血管發(fā)生中的作用并不確定。存在涉及SDF-I的提示性證據(jù)。例如，在缺氧(組織中的氧缺乏)期間， SDF-I基因的表達(dá)通過(guò)缺氧誘導(dǎo)性因子-I(HIF-I)而上調(diào)。此外，⑶34+細(xì)胞還能夠歸巢至缺血、富SDF-I區(qū)域，包括缺血性心肌。Askari等人，Lancet 362 :697-703 (2003)。此外，幾乎所有表達(dá)VEGF-2的細(xì)胞均共表達(dá)⑶34和CXCR-4，但是僅有約1 %至2%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞共表達(dá)VEGF-2。梗死周?chē)吔鐓^(qū)由冠狀動(dòng)脈阻塞產(chǎn)生的功能不良心肌區(qū)域擴(kuò)展至梗死區(qū)域以外，以包括相鄰的看起來(lái)正常的組織的可變邊界(Hu, Q.，等人，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 291 H648-657(2006))o這一缺血但有活力的梗死周?chē)鷧^(qū)組織將逐漸壞死的區(qū)域與周?chē)Ｐ募》蛛x開(kāi)來(lái)。梗死周?chē)鷧^(qū)不與梗死大小的酶參數(shù)相關(guān)，并且基本上在小梗死中更大。Stork, A.，等人，European Radiol. 16(10) :2350-57 Q006)。邊界區(qū)域中由浮腫和血管壓縮導(dǎo)致的局部缺血對(duì)結(jié)果可能非常重要。例如，已知 AMI后，在邊界區(qū)域發(fā)生短暫性局部缺血，也知打開(kāi)了梗死相關(guān)動(dòng)脈的經(jīng)皮冠狀介入能不利地影響梗死周?chē)吔鐓^(qū)域的健康。已有人提出平均血流的中間水平可以在梗死邊界處作為缺血組織半島與正常灌注心肌區(qū)域交錯(cuò)混合的結(jié)果而存在。(Hu，Q.，等人，Am. J. Physiol. Heart Circ Physiol. 291 :H648-657 (2006)) 然而，在狗中不超過(guò)3mm寬的混合冠狀微血管不能解釋梗死周?chē)δ懿涣夹募〉南鄬?duì)寬的區(qū)域。Murdock, RH, Jr.，等，Cir. Res. 52 451-59(1983) ；Buda，AJ，等人，J. Am. Coll. Cariol. 8 150-58 (1986)。這一梗死周?chē)鷧^(qū)心肌隨時(shí)間進(jìn)行性的功能不良可能在AMI之后將代償性重建轉(zhuǎn)變?yōu)檫M(jìn)行性的心臟衰竭。目前，沒(méi)有理想的治療用于預(yù)防血管功能不全，尤其是心肌梗死后顯著血管功能不全的長(zhǎng)期不利結(jié)果。盡管大血管血運(yùn)重建(即成功地放置支架)看起來(lái)是有希望的，但是目前的研究顯示此類(lèi)應(yīng)用在解決由代償性心肌肥大所引起的升高的需求是不夠的。結(jié)果， 梗死擴(kuò)大以及纖維替換普遍發(fā)生，而不管大血管再通、心室壁應(yīng)力的合適醫(yī)學(xué)管理、以及可能的天然(盡管是次理想的)CD34+細(xì)胞介導(dǎo)的新血管發(fā)生(涉及引起心肌梗死基礎(chǔ)原因的理論之一是動(dòng)員這些細(xì)胞的能力可能是在生物學(xué)上受限的)。人們對(duì)于評(píng)估內(nèi)皮和心肌前體細(xì)胞限制梗死后對(duì)心肌的損傷以及限制或預(yù)防心室重建的能力已經(jīng)產(chǎn)生了極大的興趣。顯著的臨床前數(shù)據(jù)和一些臨床數(shù)據(jù)表明細(xì)胞治療的安全性和可能性，所述細(xì)胞治療應(yīng)用各種細(xì)胞前體(尤其是造血細(xì)胞)以幫助新血管發(fā)生、有限的心臟肌生成(主要通過(guò)融合)、以及在心肌梗死區(qū)肌肉保存。例如，參見(jiàn)，Jackson,等人，J.Clin· Invest. 107 :1395-1402(2001) ；Edelberg, J. Μ.，等人，Cir.Res. 90 :e89-e93(2002) ；Schichinger, V.等人，New Engl. J. Med. 355(12) :1210-21 (2006) (應(yīng)用骨髓衍生的祖細(xì)胞)；Assmus, B.等人，New Engl. J. Med. 355 (12) 1222-32 (2006)(應(yīng)用骨髓衍生的祖細(xì)胞)，但參見(jiàn) Lunde，K.等人，New Eng. J. Med. 355(12) =1199-209(2006) (應(yīng)用骨髓衍生的祖細(xì)胞)。不知道在什么情況下心室重建能夠逆轉(zhuǎn)或逆轉(zhuǎn)達(dá)到何種程度。骨髓由各種前體和成熟細(xì)胞類(lèi)型組成，包括造血細(xì)胞(成熟血細(xì)胞前體)和基質(zhì)細(xì)胞(廣譜結(jié)締組織細(xì)胞的前體)，這兩者均表現(xiàn)出能分化為其他細(xì)胞類(lèi)型。Wang，J.S.等人’ J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 122 :699-705 (2001) ；Tomita, S.等人’ Circulation 100(Suppl. II) :247-256(1999) ；Saito, Τ.等，Tissue Eng. 1 :327-43 (1995)。已將未修飾(S卩，未分級(jí))的骨髓或血液衍生的細(xì)胞用于多種臨床研究，例如，Hamano, K.等人， Japan Cir. J. 65 :845-47(2001) ；Strauer，B. Ε·，等人，Circulation 106 :1913-18(2002)； Assmus, φ A, Circulation 106 :3009-3017(2002) ；Dobert, N.等)κ, Eur. J. Nue 1. Med. MoI. Imaging, 8 :1146-51(2004) ；ffollert,K. C.等人，Lancet 364:141-48 0004)。由于骨髓的單核細(xì)胞級(jí)份含有基質(zhì)細(xì)胞、造血前體和內(nèi)皮前體，這些群體中的每一種對(duì)所觀察到的效果的相關(guān)貢獻(xiàn)(如果有的話)仍然是未知的。⑶34是在衍生自人骨髓、血液和胎兒肝臟中的造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞上選擇性表達(dá)的造血干細(xì)胞抗原。Yin 等人，Blood 90:5002-5012(1997) ；Miaglia, S.等人，Blood 90: 5013-21 (1997)。表達(dá)0)34的細(xì)胞稱(chēng)為0)34+?；|(zhì)細(xì)胞不表達(dá)0)34，并且被稱(chēng)為0)34-。從人血液中分離的CD34+細(xì)胞能夠在體內(nèi)分化為心肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞。參見(jiàn)ke Yeh，等人，Circulation 108 =2070-73(2003) CD34+細(xì)胞占骨髓衍生的有核細(xì)胞約1% ； ⑶34抗原也由未成熟內(nèi)皮細(xì)胞前體表達(dá)，而成熟的內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)⑶34。Peichev，Μ.等人，Blood 95 :952-58(2000)。在體外，從成年人骨髓衍生得到的CD34+細(xì)胞產(chǎn)生大多數(shù)粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞祖細(xì)胞(CFU-GM)、一些集落生成單位混合物(CFU-Mix)以及小群前紅細(xì)胞祖細(xì)胞(爆發(fā)集落形成單位、紅細(xì)胞或BFU-E) jeh，等人，Circulation 108 :2070-73 (2003)。 CD34+細(xì)胞還可能具有分化為新心肌或?qū)π滦募〉陌l(fā)育作出貢獻(xiàn)的潛力，盡管不頻繁。已開(kāi)發(fā)了應(yīng)用免疫磁珠分離的技術(shù)，從而從骨髓單核細(xì)胞中分離高純度且有活力的 CD34.細(xì)胞群。參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào) 5，536，475,5, 035，994,5, 130，144,4, 965，205，其每一份文獻(xiàn)的內(nèi)容均在此通過(guò)引用并入本文。兩個(gè)臨床研究均支持了骨髓衍生的CD34+細(xì)胞在心肌梗死后的臨床應(yīng)用。參見(jiàn) C. Mamm，等，Lancet 361 =45-46(2003) ；Herenstein,B.等， Blood Supplement,Abs.2696(2004)。動(dòng)物模型優(yōu)選的AMI后的治療將能在康復(fù)期間阻止細(xì)胞死亡，其導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)重建和衰竭，或用心肌細(xì)胞替換垂死細(xì)胞。已在小鼠中描述了允許控制VEG-F表達(dá)時(shí)間的條件轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)。May，D等人， Proc. Nat' 1 Acad. Sci. 105(1) =282-87(2008) 應(yīng)用這一系統(tǒng)來(lái)產(chǎn)生心室灌注不足和心肌局部缺血的可調(diào)狀態(tài)。在將大量心肌細(xì)胞驅(qū)動(dòng)進(jìn)入仍沒(méi)有可檢測(cè)的細(xì)胞死亡的冬眠模型中的條件下，發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞功能不良(冬眠)與微血管密度的減少程度線性相關(guān)。這沒(méi)有模擬AMI-誘導(dǎo)的心室重建，后者是梗死擴(kuò)展、炎癥、疤痕形成和肌細(xì)胞肥大過(guò)程的并發(fā)。周?chē)鷦?dòng)脈疾病(PAD)也稱(chēng)為周?chē)芗膊?PVD)，其由局部缺血的后肢模型來(lái)作為模型，其中將小鼠的股動(dòng)脈結(jié)扎以模擬周?chē)鷦?dòng)脈疾病。PAD通常影響影響供應(yīng)大腿的動(dòng)脈并且包括手臂和大腿大動(dòng)脈梗阻所導(dǎo)致的所有疾病，其可由動(dòng)脈粥樣硬化、導(dǎo)致狹窄的炎癥過(guò)程、栓塞或血栓形成所導(dǎo)致。由于動(dòng)脈狹窄或梗死所導(dǎo)致的血流的限制通常導(dǎo)致患者抱怨行走時(shí)肌肉痛(間歇性跛行)。血流任意的進(jìn)一步減少導(dǎo)致靜止時(shí)引起局部缺血疼痛。這一病癥稱(chēng)為慢性肢局部缺血，意思是靜止時(shí)對(duì)氧的需求不能持續(xù)。隨后可能在最遠(yuǎn)離血液供應(yīng)的趾中發(fā)生潰瘍和壞疽，并且如果不治療的話可能導(dǎo)致所涉肢的喪失。對(duì)于肢體局部缺血的治療具有側(cè)支發(fā)育和血液供應(yīng)補(bǔ)充的目的。已在此類(lèi)后肢局部缺血模型中測(cè)試了骨髓衍生的CD34+單核細(xì)胞，但該后肢局部缺血模型不能模擬心臟中發(fā)生的事情。最接近的動(dòng)物模型即豬模型不是人類(lèi)疾病的良好模型，因?yàn)?i)所有實(shí)驗(yàn)均一般地在非動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物中完成，(ii)沒(méi)有用血管成形術(shù)治療該動(dòng)物，(iii)正常豬不會(huì)栓塞血管，(iv)豬的循環(huán)不與人精確相同；以及(ν)梗死周?chē)吔鐓^(qū)域可能不相同。最近報(bào)道，當(dāng)用GCSF動(dòng)員⑶34+細(xì)胞、5天后分離并然后基于Noga作圖注射至心臟的缺血區(qū)域時(shí)，心絞痛癥狀有微小的改善。本發(fā)明描述了用于改善心肌梗死后梗死區(qū)域灌注的治療。來(lái)自階段I試驗(yàn)的數(shù)據(jù)提供的這樣的證據(jù)，即用至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞(含有至少0. IO6 個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的有效⑶34+細(xì)胞的亞群)治療的受治療者與接受500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞和對(duì)照的受治療者相比，在6個(gè)月的靜止期灌注率顯著得到改善，如通過(guò) SPECT 總嚴(yán)重性得分(Total Severity Score)測(cè)得的那樣(-256 對(duì) +13，ρ = 0. 01)發(fā)明_既述本發(fā)明提供了用于治療梗死區(qū)損傷的藥物組合物以及在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中治療或修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法，該方法通過(guò)導(dǎo)管腸胃外地施用一種無(wú)菌藥物組合物至該受治療者，該組合物含有作為第一治療劑的治療有效量未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以及任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑。該改善梗死量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體CD34+細(xì)胞富集群，該富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞的亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞。根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中治療或修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過(guò)導(dǎo)管腸胃外地施用無(wú)菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體CD34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能CD34+細(xì)胞；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ ν)，以及(iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；以及(b)在至少一個(gè)梗死區(qū)相對(duì)于對(duì)照改善灌注，其中，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在含有表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群中至少70%的細(xì)胞是 CD34+細(xì)胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群后至少約M小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4 介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持該CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；以及其中施用步驟(a) 發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)灌注日期，以及其中第一灌注日期包含由第一時(shí)間和第二時(shí)間定義的特定時(shí)間間隔，其中該第一時(shí)間是在梗死區(qū)中峰值炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)發(fā)生之后，以及第二時(shí)間是在梗死區(qū)中形成心肌疤痕之前。根據(jù)該方法的一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有 0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進(jìn)行性下降。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括至少一個(gè)缺血的心肌組織梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注過(guò)少。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法進(jìn)一步包括步驟在第二灌注日期施用冷凍并解凍的第二無(wú)菌藥物組合物的第二等分試樣，該冷凍并解凍的第二等分試樣包含(i)冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有至少0. IO6 個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清， 其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)；其中，在從解凍該第二等分試樣后至少約對(duì)小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該第二等分試樣冷凍并解凍的含有表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群，(1)保持CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；( 含有至少70%⑶34+細(xì)胞；C3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法進(jìn)一步包括步驟任選地在第三灌注日期施用冷凍并解凍的無(wú)菌藥物組合物的第三等分試樣，該第三等分試樣包含冷凍并解凍的分離的自體 ⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能CD34+細(xì)胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ ν)；其中，在從解凍該第三等分試樣后至少約M小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該第三等分試樣冷凍并解凍的含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的⑶；34+細(xì)胞富集群，(1)保持CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)含有至少70%⑶34+細(xì)胞；C3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該第二灌注日期是第一灌注日期后約30天。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該第三灌注日期是第一灌注日期后約60天。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)C)(CR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a) 中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4 介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少M(fèi)小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法進(jìn)一步包括將該組合物血管內(nèi)遞送至梗死相關(guān)動(dòng)脈的步驟。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法進(jìn)一步包括通過(guò)導(dǎo)管將該組合物遞送至心肌的步驟。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該導(dǎo)管是流量控制導(dǎo)管。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該導(dǎo)管是球囊擴(kuò)張心導(dǎo)管。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該導(dǎo)管具有至少約0. 36mm的內(nèi)直徑。根據(jù)另一種實(shí)施方案，第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第一時(shí)間是梗死后至少約5天。根據(jù)另一種實(shí)施方案，第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第二時(shí)間是梗死后少于約14天。根據(jù)另一種實(shí)施方案，第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第一時(shí)間是梗死后至少約5天，以及第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第二時(shí)間是梗死后少于約14天。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該任選的第二治療劑是至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該任選的第二治療劑選自如下所述地構(gòu)成的組，即，所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包含酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。 根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法比成分(i)加上(ii)或單獨(dú)的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法改善梗死區(qū)中的微血管血流。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法減少梗死損傷的面積。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法減少梗死量。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)中冬眠心肌的灌注。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胎盤(pán)生長(zhǎng)因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括兒茶酚胺。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該兒茶酚胺是去甲腎上腺素。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括內(nèi)皮素-1。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括前列腺素F2a。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑是血管緊張素 II。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括佛波酯。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括神經(jīng)肽Y。根據(jù)另一種實(shí)施方案， 該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括活性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1。根據(jù)另一種實(shí)施方案， 該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括Gtl蛋白。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括甘油二酯。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括salusin-a。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括salusin-β。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胰島素樣生長(zhǎng)因子-1。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括肌抑素。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括粒細(xì)胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括巨噬細(xì)胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括噻唑烷二酮。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該噻唑烷二酮是羅西格列酮。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種治療由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的組合物，其包含(a)梗死損傷改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群，從而使得所述分離的自體CD34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞；(b)穩(wěn)定量的血清， 其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑；其中，通過(guò)導(dǎo)管將該組合物腸胃外地施用至受治療者；其中，當(dāng)通過(guò)導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群中至少70%的細(xì)胞是CD34+細(xì)胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群后至少約M小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+ 細(xì)胞富集群(1)保持該CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落。根據(jù)一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該組合物比成分(i)加上(ii)或單獨(dú)的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進(jìn)行性下降。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括至少一個(gè)缺血的心肌組織梗死周?chē)鷧^(qū)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)另一種實(shí)施方案，含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從自該受治療者獲得的骨髓抽吸物的細(xì)胞成分純化得到。根據(jù)另一種實(shí)施方案，含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從周?chē)兓玫?。根?jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案， 該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群 (a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的 ⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少M(fèi)小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案， 通過(guò)導(dǎo)管將該組合物血管內(nèi)遞送至梗死相關(guān)動(dòng)脈。根據(jù)另一種實(shí)施方案，通過(guò)導(dǎo)管將該組合物遞送至心肌。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該組合物改善梗死區(qū)中的微血管血流。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該組合物增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該組合物增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)中冬眠心肌的灌注。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該組合物減少梗死損傷的面積。根據(jù)另一種實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該組合物減少梗死量。根據(jù)另一種實(shí)施方案， 該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑選自如下所述地構(gòu)成的組，即，所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和 VEGF-D組成的組的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胎盤(pán)生長(zhǎng)因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括兒茶酚胺。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該兒茶酚胺是去甲腎上腺素。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括內(nèi)皮素-1。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括前列腺素F2a。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑是血管緊張素II。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括佛波酯。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括神經(jīng)肽Y。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括活性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括Gtl 蛋白。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括甘油二酯(DAG)。 根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括salusin-a。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括salusin-β。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胰島素樣生長(zhǎng)因子-1。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括肌抑素。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括粒細(xì)胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括巨噬細(xì)胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括噻唑烷二酮。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該噻唑烷二酮是羅西格列酮。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物在72小時(shí)的功能生存力與48小時(shí)的相當(dāng)。圖2顯示了本發(fā)明配制的包含⑶34+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的遷移效率。圖3顯示了在人血清中配制的⑶34+細(xì)胞的改善的穩(wěn)定性。圖4㈧顯示了灌注缺損(RTSS)的改變對(duì)產(chǎn)物(⑶34+劑量乘以在SDF梯度中移動(dòng)的CD34+的百分比)。圖4(B)顯示了作為L(zhǎng)V質(zhì)量百分比的梗死大小的改變對(duì)產(chǎn)物(CD34+ 劑量乘以在SDF梯度中移動(dòng)的⑶34+的百分比)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了改善梗死區(qū)灌注的組合物，其包含未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以及其在血運(yùn)重建受治療者中對(duì)自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的心肌梗死后果治療梗死區(qū)損傷和改善心功能的用途方法。術(shù)語(yǔ)表術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1” (TGF-β 1)是指在許多細(xì)胞類(lèi)型中控制增殖、分化和其他功能的多功能蛋白。許多細(xì)胞合成TGF-β 1并且具有特定的針對(duì)它的受體。其正向或負(fù)向調(diào)控許多其他生長(zhǎng)因子，并且作為成骨細(xì)胞骨形成的有效刺激劑，在定型成骨細(xì)胞中引起趨化性、增殖和分化，在骨重建中具有重要的作用。(Schluter，K. D.，和Piper，H. Μ. FASEBJ. 13 :S17-S-22(1999))。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“施用”以其各種語(yǔ)法形式表示給予或應(yīng)用。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“施用”包括體內(nèi)施用，以及體外直接施用至組織。一般地，可以以劑量單位制劑腸胃外地或局部地全身性施用組合物，所述制劑含有如所需要的常規(guī)無(wú)毒藥學(xué)上可接受的載體、 佐劑和運(yùn)載體，或可通過(guò)諸如以下的方式局部地施用組合物注射、植入、移植、局部施用或腸胃外地施用，但不限于此。施用細(xì)胞的方法可包括但不限于灌注。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“后果”是指由事件引起的或由其得出的后果或結(jié)果。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“血管發(fā)生”是指血管形成與發(fā)育的過(guò)程。術(shù)語(yǔ)“血管緊張素II”是指通過(guò)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(或ACE)的作用從血管緊張素 I形成的多肽激素。術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞凋亡”或“程序性細(xì)胞死亡”是指有助于生物體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的高度調(diào)控且活躍的過(guò)程，其包括一系列導(dǎo)致各種形態(tài)學(xué)改變的生物化學(xué)事件，包括起泡、細(xì)胞膜改變(諸如膜不對(duì)稱(chēng)性和附著的喪失)、細(xì)胞收縮、細(xì)胞核片段化、染色質(zhì)濃縮、以及染色體DNA片段化，不會(huì)對(duì)生物體造成損害。細(xì)胞凋亡死亡可由許多不同的因素誘導(dǎo)，并且包括多個(gè)信號(hào)通路，有些依賴(lài)于半胱天冬酶(一類(lèi)半胱氨酸蛋白酶)以及其他是不依賴(lài)半胱天冬酶的。其可由許多不同的細(xì)胞刺激引發(fā)，包括細(xì)胞表面受體、線粒體對(duì)脅迫的反應(yīng)、以及細(xì)胞毒T細(xì)胞、導(dǎo)致細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的活化。參與細(xì)胞凋亡的半胱天冬酶在蛋白水解級(jí)聯(lián)中傳遞細(xì)胞凋亡信號(hào)，其中半胱天冬酶切割并或活化其他半胱天冬酶，后者然后降解其他導(dǎo)致細(xì)胞死亡的細(xì)胞靶。在該級(jí)聯(lián)上端的半胱天冬酶包括半胱天冬酶-8和半胱天冬酶_9。半胱天冬酶-8是涉及對(duì)死亡結(jié)構(gòu)域 (DD)(如i^as)受體的反應(yīng)的起始半胱天冬酶。TNF受體家族中的受體與細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)、以及炎癥信號(hào)相關(guān)。Fas受體(⑶95) 通過(guò)其他細(xì)胞表面表達(dá)的i^as-配體介導(dǎo)凋亡信號(hào)。Fas-FasL相互作用在免疫系統(tǒng)中起著重要作用，并且這一系統(tǒng)的缺乏導(dǎo)致自體免疫，表明I^as-介導(dǎo)的凋亡移除自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞。Fas信號(hào)還參與免疫監(jiān)視，以移除轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞。Fas與另一細(xì)胞上的寡聚體化i^asL的結(jié)合通過(guò)稱(chēng)為死亡結(jié)構(gòu)域(DD)的胞漿結(jié)構(gòu)域活化凋亡信號(hào)，所述死亡結(jié)構(gòu)域與包括FAF、FADD和DAX在內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)換器相互作用，從而活化半胱天冬酶蛋白水解級(jí)聯(lián)。半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-10被首先活化以隨后切割和活化下游半胱天冬酶以及各種導(dǎo)致細(xì)胞死亡的細(xì)胞底物。線粒體通過(guò)釋放線粒體蛋白至細(xì)胞質(zhì)從而參與細(xì)胞凋亡信號(hào)通路。細(xì)胞色素c 是電子傳遞的重要蛋白，其被從線粒體釋放作為對(duì)細(xì)胞凋亡信號(hào)的響應(yīng)，并活化從線粒體釋放的蛋白酶Apaf-Ι。經(jīng)活化的Apaf-I激活半胱天冬酶-9以及剩余的半胱天冬酶通路。 Smac/DIABLO從線粒體釋放以抑制LAP蛋白，所述LAP蛋白正常情況下與半胱天冬酶_9相互作用以抑制細(xì)胞凋亡。當(dāng)Bcl-2家族成員形成進(jìn)入線粒體膜的復(fù)合物時(shí)，發(fā)生由Bcl-2 家族蛋白調(diào)節(jié)的細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c和其它蛋白質(zhì)的釋放。引起細(xì)胞凋亡的TNF家族受體直接活化半胱天冬酶級(jí)聯(lián)，但還可活化Bcl-2家族成員Bid，其活化線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族的另一成員Bax由這一通路活化，從而定位至線粒體膜上，并增加其滲透性，釋放細(xì)胞色素c和其它線粒體蛋白。Bcl-2和Bcl-xL防止孔形成，阻斷細(xì)胞凋亡。如細(xì)胞色素c 一樣，AIF(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子)是在線粒體中發(fā)現(xiàn)的、通過(guò)細(xì)胞凋亡刺激而從線粒體釋放的蛋白。盡管細(xì)胞色素C與半胱天冬酶依賴(lài)性細(xì)胞凋亡信號(hào)連接，但AIF釋放刺激了半胱天冬酶不依賴(lài)性細(xì)胞凋亡，移入細(xì)胞核中，在此處其與DNA結(jié)合。由AIF結(jié)合的 DNA刺激染色質(zhì)濃縮，以及DNA片段化，可能是通過(guò)募集核酸酶。線粒體應(yīng)激通路以細(xì)胞色素c從線粒體的釋放開(kāi)始，其然后與Apaf-I相互作用， 引起自我切割并活化半胱天冬酶-9。半胱天冬酶_3、-6、和-7是由該上游蛋白酶活化的下游半胱天冬酶，并且它們自身作用以切割細(xì)胞靶。由細(xì)胞毒T細(xì)胞釋放的粒酶B和穿孔素蛋白誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，形成跨膜孔，并誘發(fā)細(xì)胞凋亡，可能是通過(guò)半胱天冬酶的切割，盡管也有人提出過(guò)粒酶B誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的半胱天冬酶非依賴(lài)性機(jī)制。通過(guò)多個(gè)核酸酶的細(xì)胞核基因組片段化是凋亡的細(xì)胞反應(yīng)特征，所述核酸酶通過(guò)凋亡信號(hào)通路活化以產(chǎn)生核小體梯狀物(ladder)。參與細(xì)胞凋亡的一個(gè)核酸酶是DNA片段化因子(DFF)，其為半胱天冬酶活化的DNA酶(CAD)。DFF/CAD通過(guò)在凋亡期間的半胱天冬酶蛋白酶切割其相關(guān)抑制劑ICAD而得以活化。DFF/CAD與染色質(zhì)成分(諸如拓?fù)洚悩?gòu)酶II和組蛋白Hl)相互作用，以濃縮染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，并可能募集CAD至染色質(zhì)。另一細(xì)胞凋亡活化的蛋白酶是核酸內(nèi)切酶G(EndoG)。在正常細(xì)胞中，EndoG在細(xì)胞核基因組中編碼，但定位于線粒體中。EndoG可能在線粒體基因組的復(fù)制中、以及在凋亡中起作用。凋亡信號(hào)引起EndoG從線粒體釋放。EndoG和DFF/CAD通路是獨(dú)立的，因?yàn)樵谌狈FF的細(xì)胞中EndoG 通路仍然發(fā)生。缺氧以及復(fù)氧后的缺氧能誘發(fā)細(xì)胞色素c釋放和凋亡。糖原合成酶激酶(GSK-3) 是在多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型中遍在表達(dá)的絲氨酸-蘇氨酸激酶，其似乎介導(dǎo)或加強(qiáng)由許多刺激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，活化線粒體細(xì)胞死亡通路。Loberg，RD，等，J. Biol. Chem. 277(44) 41667-673(2002)。已證明其誘導(dǎo)半胱天冬酶3的活化，以及活化促凋亡腫瘤抑制基因p53。 還有人提出GSK-3促進(jìn)原凋亡Bcl-2家族成員Bax的活化和運(yùn)輸，所述Bax通過(guò)聚合及線粒體定位，從而誘導(dǎo)細(xì)胞色素c釋放。Akt是GSK-3的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子，并且GSK-3的磷酸化和失活可能介導(dǎo)Akt的某些抗凋亡作用。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“生物標(biāo)志物”是指客觀測(cè)得的疾病風(fēng)險(xiǎn)、基礎(chǔ)病理過(guò)程、診斷和疾病狀態(tài)、預(yù)后、治療反應(yīng)、復(fù)發(fā)和臨床結(jié)果的指示物。生物標(biāo)志物可以是基因、遺傳變體、RNA、蛋白和代謝物的形式。能可靠地反映或預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展或改善的生物標(biāo)志物可幫助疾病診斷以及評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度、發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)、以及進(jìn)展。術(shù)語(yǔ)“c-kit”是指在一些細(xì)胞表面的、與干細(xì)胞因子(引起某些類(lèi)型的細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì))結(jié)合的蛋白。這一受體的變形可能與一些類(lèi)型的癌癥相關(guān)。術(shù)語(yǔ)“心臟生物標(biāo)志物”是指與心功能、損傷或衰竭相關(guān)的、用于診斷和預(yù)后目的的酶、蛋白和激素。不同的心臟標(biāo)記在體內(nèi)的水平升高、峰值和下降的時(shí)間不同，使得它們不僅可用于跟蹤心臟病發(fā)作的進(jìn)展，還能用于估計(jì)其何時(shí)開(kāi)始以及用于監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)。有些測(cè)試對(duì)心臟是特異的，而其他則還隨著骨骼肌的損傷而升高。當(dāng)前的心臟生物標(biāo)志物包括但不限于CK(磷酸肌酸激酶或肌酸激酶)和CK-MB (肌酸激酶-肌紅蛋白水平(以幫助區(qū)分骨骼肌和心肌))、肌鈣蛋白(肌鈣蛋白I和T的血液水平將在心臟病發(fā)作后1-2周保持高水平，肌鈣蛋白通常不受其它肌肉損傷的影響)、肌紅蛋白(以確定是否有肌肉，尤其是心肌受損)、以及BNP (腦利納肽)或NT-原BNP (N端前激素腦利納肽(以幫助診斷心臟衰竭和定級(jí)心臟衰竭的嚴(yán)重程度))。術(shù)語(yǔ)“心導(dǎo)管插入術(shù)”是指使導(dǎo)管通過(guò)通往心臟動(dòng)脈并到達(dá)冠狀動(dòng)脈的方法。這一方法產(chǎn)生冠狀動(dòng)脈和左心室(心臟的主要泵送室)的血管造影片(即，X射線圖像)，其可用于測(cè)量肺動(dòng)脈的壓力，以及監(jiān)測(cè)心功能。術(shù)語(yǔ)“兒茶酚胺”是指任意類(lèi)型的擁有兒茶酚(C6H4(OH2))環(huán)的胺。兒茶酚胺的非限制性例子包括多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素(降腎上腺素)。分化抗原簇(命名簇(cluster of designation))(通常簡(jiǎn)寫(xiě)為CD)是用于鑒定和研究白細(xì)胞表面存在的細(xì)胞表面分子的方案。CD分離可以以各種方式起作用，通常作為對(duì)細(xì)胞很重要的受體或配體(意思是活化受體的分子)起作用。信號(hào)級(jí)聯(lián)通常被啟始，改變細(xì)胞的行為。一些CD蛋白不在細(xì)胞信號(hào)中起作用，但具有其他功能，諸如細(xì)胞粘附。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞表面標(biāo)志物”是指在特定類(lèi)型的細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的抗原決定簇或表位。細(xì)胞表面標(biāo)志物可促進(jìn)表征細(xì)胞類(lèi)型、其鑒定以及最后促進(jìn)其分離。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“CD34+細(xì)胞”是指衍生自人骨髓的造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞，其對(duì)造血干細(xì)胞抗原是“陽(yáng)性的”，即“表達(dá)”該抗原，至少其的亞群表達(dá)CXCR4，并且其能遷移至受損區(qū)域。術(shù)語(yǔ)“CD38”是指在巨噬細(xì)胞、樹(shù)狀突細(xì)胞、以及活化的B和NK細(xì)胞上的蛋白質(zhì)標(biāo)志物，其可介導(dǎo)淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附。術(shù)語(yǔ)“⑶45”和“白細(xì)胞共同抗原”是指位于除紅細(xì)胞和血小板之外的造血細(xì)胞上的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(PTP)。術(shù)語(yǔ)“CD59”是指糖基化磷脂酰肌醇(GPI)連接的膜糖蛋白，其保護(hù)人細(xì)胞不被補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解所裂解。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“CXCR-4”是指G蛋白連接的趨化因子受體。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”是指由細(xì)胞分泌的小的可溶蛋白物質(zhì)，其對(duì)其他細(xì)胞具有各種作用。細(xì)胞因子介導(dǎo)許多重要的生理功能，包括生長(zhǎng)、發(fā)育、損傷愈合以及免疫反應(yīng)。它們通過(guò)與其位于細(xì)胞膜上細(xì)胞特異性受體結(jié)合而起作用，這允許不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)在細(xì)胞中開(kāi)始，其最終將導(dǎo)致靶細(xì)胞的生物化學(xué)和表型改變。一般地，細(xì)胞因子局部地作用。它們包括1型細(xì)胞因子，包括許多白介素、以及多種造血生長(zhǎng)因子；II型細(xì)胞因子， 包括干擾素和白介素-10 ；腫瘤壞死因子(“TNF”)相關(guān)分子，包括TNFa和淋巴毒素；免疫球蛋白超家族成員，包括白介素1(“IL_1”)；以及趨化因子，即在許多免疫和炎癥功能中起著關(guān)鍵作用的分子的家族。取決于細(xì)胞狀態(tài)，相同的細(xì)胞因子可能對(duì)細(xì)胞具有不同的作用。 細(xì)胞因子通常調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子的表達(dá)，以及引發(fā)其他細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)。術(shù)語(yǔ)“集落刺激因子”是指負(fù)責(zé)控制白細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。類(lèi)型包括粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、以及粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (GM-CSF)。術(shù)語(yǔ)“甘油二酯”(DAG)是指由兩條脂肪鏈組成的甘油酯，所述脂肪鏈通過(guò)酯鍵共價(jià)地與甘油分子結(jié)合。甘油二酯還可具有許多不同組合的與Cl和C2位置結(jié)合的脂肪酸。術(shù)語(yǔ)“內(nèi)皮素”是指血管收縮肽，其由血管內(nèi)皮合成并釋放，并且其為內(nèi)皮功能的標(biāo)志物。
術(shù)語(yǔ)“制劑”和“組合物”在本文中可互換，表示本發(fā)明的包含所有活性和惰性組分的產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)“活性”是指本發(fā)明組合物中負(fù)責(zé)預(yù)期治療效果的要素、成分或組分。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“藥物制劑”或“藥物組合物”是指被應(yīng)用以預(yù)防、減少其強(qiáng)度、治愈或以其他方式治療靶病癥或疾病的制劑或組合物。術(shù)語(yǔ)“G/，蛋白是指異源三聚體G蛋白亞單位，其活化磷脂酶C并且參與多種細(xì)胞信號(hào)通路。術(shù)語(yǔ)“造血干細(xì)胞”是指從血液或從骨髓分離的細(xì)胞，其可更新其本身、分化為各種特異的細(xì)胞、從骨髓移出至循環(huán)血液中、以及發(fā)生程序性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，從人受治療者中衍生得到的造血干細(xì)胞表達(dá)至少一種的細(xì)胞表面標(biāo)志物，包括但不限于CD34、CD38、HLA-DR、c_kit、CD59、Sca-U Thy-I 和 / 或 CXCR-4，或其組合?！癏LA-DR”是指人II類(lèi)組織相容性抗原，其存在于多種細(xì)胞類(lèi)型中，包括抗原遞呈細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及活化的T細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“胰島素樣生長(zhǎng)因子1” (IGF-I)是指在功能和結(jié)構(gòu)上與胰島素類(lèi)似的蛋白質(zhì)，其為參與介導(dǎo)生長(zhǎng)和發(fā)育的蛋白家族的成員。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“分離”及其各種語(yǔ)法形式是指以基本上沒(méi)有污染物或其他的通常與下述物質(zhì)聯(lián)系的材料的形式放置、分離出、獲得蛋白、分子、物質(zhì)、核酸、肽、細(xì)胞或粒子。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“白介素”是指由白細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，作為與其他白細(xì)胞通信的方式。術(shù)語(yǔ)“VDGF”、“VEGF_1”或“血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子”在本文中可互換使用，表示介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞多種功能的細(xì)胞因子，包括增殖、遷移、侵襲、存活以及滲透性。術(shù)語(yǔ)“VEGF-2”是指血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)子。VEGF-2刺激人血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，但抑制由血小板衍生生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“趨化因子”是指一類(lèi)趨化性細(xì)胞因子，其提供白細(xì)胞以特定方向移動(dòng)的信號(hào)。術(shù)語(yǔ)“化學(xué)向性”或“趨化性”是指能動(dòng)的細(xì)胞或部分沿著化學(xué)濃度梯度向其認(rèn)為有吸引力的環(huán)境條件移動(dòng)和/或遠(yuǎn)離其發(fā)現(xiàn)排斥的環(huán)境的定向移動(dòng)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的潛能⑶34+CXCR-4+能夠移動(dòng)，意思是它們可從一個(gè)地方、位置或區(qū)域移動(dòng)至另一個(gè)。在一種實(shí)施方案中，它們的遷移由趨化性驅(qū)動(dòng)。術(shù)語(yǔ)“全血細(xì)胞計(jì)數(shù)”(CBC)是指提供了每一種血細(xì)胞類(lèi)型的數(shù)量及質(zhì)量詳細(xì)信息的實(shí)驗(yàn)測(cè)試。其通常包括測(cè)量3種主要血細(xì)胞(紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板)的每一種，以及測(cè)量血紅蛋白和紅細(xì)胞比容?！把t蛋白”(HGB)是指每分升血液中的血紅蛋白克數(shù)(g/ dL)。在健康成年受治療者中正常的血紅蛋白水平是男性為約14g/dL至約18g/dL，以及女性為約12g/dL至約16g/dL。作為大體的指引，血紅蛋白通常應(yīng)當(dāng)是紅細(xì)胞比容的三分之一?！凹t細(xì)胞比容” (HCT)是指作為總血體積百分比的紅細(xì)胞比重。人受治療者的正常紅細(xì)胞比容是男性為約40%至約55%，以及女性為35%至45%?！凹t細(xì)胞計(jì)數(shù)”(RBC)是指在一定量的血液中紅細(xì)胞的總量。人受治療者中的正常范圍是男性為約450萬(wàn)細(xì)胞/mm3至約 600萬(wàn)細(xì)胞/mm3，以及女性為約400萬(wàn)細(xì)胞/mm3至約550萬(wàn)細(xì)胞/mm3?！鞍准?xì)胞計(jì)數(shù)”(WBC)是指在一定量的血液中白細(xì)胞或白血球的總量。人受治療者中的正常范圍是約4. 3x10s細(xì)胞 /mm3 至約 10. 8x IO3 細(xì)胞 /mm3。本文所用的術(shù)語(yǔ)“疾病”或“障礙”指健康的惡化或異常執(zhí)行功能的狀況。本文所用的術(shù)語(yǔ)“綜合征”是指表現(xiàn)出某種疾病或狀況的癥狀的型式。本文所用的術(shù)語(yǔ)“狀況”是指各種健康狀態(tài)，并意在包括由任何潛在的機(jī)理或紊亂、損傷以及對(duì)健康組織和器官的促進(jìn)作用引發(fā)的障礙或疾病。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“炎癥”是指對(duì)感染和損傷的反應(yīng)，其中參與解毒和修復(fù)的細(xì)胞通過(guò)炎癥介質(zhì)遷移到受損部位。無(wú)論引發(fā)動(dòng)因如何，伴隨急性炎癥的生理變化包括4個(gè)主要特征(1)血管舒張是對(duì)急性組織損傷的一種早期身體反應(yīng)，它導(dǎo)致血流量的凈增加；(2)響應(yīng)于炎性刺激，內(nèi)襯小靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞收縮，擴(kuò)展細(xì)胞內(nèi)連接以形成間隙，導(dǎo)致血管通透性增加，而這可使血漿蛋白質(zhì)和血細(xì)胞泄漏出血管；C3)炎癥通常以在炎癥部位白細(xì)胞的強(qiáng)烈浸潤(rùn)為特征，特別是嗜中性粒細(xì)胞(多形核細(xì)胞)。這些細(xì)胞通過(guò)在血管壁或者未損傷的組織內(nèi)釋放有毒物質(zhì)而促進(jìn)組織損害；以及(4)發(fā)熱，作為對(duì)特異性刺激的反應(yīng)，由從白細(xì)胞釋放的熱原引起。在炎癥過(guò)程中，炎癥反應(yīng)的可溶炎癥介質(zhì)與細(xì)胞成分以全身方式一起起作用，以試圖遏制并消除引起身體不適的動(dòng)因。在本文中關(guān)于介質(zhì)使用術(shù)語(yǔ)“炎癥”或“免疫炎癥” 時(shí)，是指炎癥過(guò)程的分子介質(zhì)。這些可溶的、可擴(kuò)散的分子在組織損傷和感染的部位局部起作用，以及在更遠(yuǎn)的部位起作用。一些炎癥介質(zhì)由炎癥過(guò)程激活，而其他的炎性介質(zhì)響應(yīng)于急性炎癥或因另外的可溶性炎性介質(zhì)而從細(xì)胞源合成和/或釋放。炎癥反應(yīng)的炎癥介質(zhì)的例子包括但不限于血漿蛋白酶、補(bǔ)體、激肽、血凝固和纖維蛋白溶解性蛋白、脂質(zhì)性介體、 前列腺素、白三烯、血小板活化因子(PAF)、肽和胺(包括但不限于組胺、血清素和神經(jīng)肽) 以及促炎因子(包括但不限于白介素-1、白介素_4、白介素-6、白介素-8、腫瘤壞死因子 (TNF)、干擾素-γ以及白介素12)。術(shù)語(yǔ)“入時(shí)”(in-date)是指從完成在無(wú)菌條件下從受治療者獲得包含潛能⑶34+ 細(xì)胞富集群的制備物至開(kāi)始從該制備物無(wú)菌純化潛能CD34+細(xì)胞之間的時(shí)間間隔。術(shù)語(yǔ)“出時(shí)”(out-date)是指從完成在無(wú)菌條件下從受治療者獲得包含潛能CD34+細(xì)胞富集群的制備物至將該配制的包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的藥物組合物輸注給該受治療者之間的時(shí)間間隔。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“輸注，，或“輸液”是指將除血液之外的其他流體弓I入包括人在內(nèi)的受治療者的血管之中，用于治療目的。本發(fā)明的無(wú)血清“輸注溶液”含有補(bǔ)充有25USP單位/ml肝素和人血清白蛋白 (HSA)的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在一種實(shí)施方案中，該輸注溶液補(bǔ)充有血清。在一些實(shí)施方案中，該血清是自體的。術(shù)語(yǔ)“損傷”是指由物或力對(duì)受治療者身體結(jié)構(gòu)或功能引起的損壞或傷害，它可以是物理或化學(xué)的。術(shù)語(yǔ)“脈管損傷”是指對(duì)脈管系統(tǒng)(即，脈管網(wǎng)絡(luò)，意思是血管或運(yùn)輸流體(諸如但不限于血液或淋巴液)的導(dǎo)管的網(wǎng)絡(luò))的損傷。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“限制”是指限制或限定范圍、程度或量。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“巨噬細(xì)胞”是指從骨髓的單核干細(xì)胞產(chǎn)生的單核、活躍的吞噬細(xì)胞。這些細(xì)胞廣泛地分布于身體中，并且形態(tài)和運(yùn)動(dòng)性不同。吞噬作用活性通常由包括某些免疫球蛋白和補(bǔ)體系統(tǒng)成分在內(nèi)的血清識(shí)別因子介導(dǎo)，但也可以是非特異性的。巨噬細(xì)胞還參與抗體的產(chǎn)生和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，尤其是參與將抗原遞呈給淋巴細(xì)胞。它們分泌各種免疫調(diào)節(jié)分子。術(shù)語(yǔ)“微菌”和“微生物”在本文中可互換使用，指小到無(wú)法用肉眼清楚看到的生物，包括但不限于微小的細(xì)菌、真菌(霉菌)、藻類(lèi)、原生動(dòng)物和病毒。本文所使用的各種語(yǔ)法形式的術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”的意思是調(diào)控、改變、調(diào)適、操縱或調(diào)整某一量或比例。此類(lèi)調(diào)節(jié)可以是任何改變，包括不能檢測(cè)到的改變。術(shù)語(yǔ)“心肌梗死”是指對(duì)心肌的死亡或永久損傷。多數(shù)心臟病發(fā)作是由冠狀動(dòng)脈的阻塞所引起的，所述阻塞阻斷了對(duì)心肌的血流和氧氣，導(dǎo)致這些區(qū)域中心臟細(xì)胞的死亡。 受損心肌喪失其收縮的能力，使得剩下的心肌補(bǔ)償弱化的區(qū)域。本發(fā)明包括了涉及評(píng)估受治療者對(duì)根據(jù)本發(fā)明治療的適合性的步驟，通過(guò)應(yīng)用測(cè)試以查看心臟在跳動(dòng)時(shí)的大小、形狀和功能，檢測(cè)對(duì)心臟節(jié)律的改變，以及檢測(cè)和評(píng)估受損的組織和阻斷的動(dòng)脈。此類(lèi)測(cè)試的實(shí)例包括但不限于心電圖、超聲心動(dòng)圖顯像、冠狀動(dòng)脈血管造影術(shù)、以及核心室造影術(shù)。心臟生物標(biāo)志物也被用于評(píng)估受治療者對(duì)根據(jù)本發(fā)明的治療的適合性。術(shù)語(yǔ)“肌抑素”(MSTN)是指屬于骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)家族和TGF-β超家族成員的蛋白。這一蛋白組由多元蛋白水解處理部位所表征，其被切割以產(chǎn)生含有7個(gè)保守半胱氨酸殘基的成熟蛋白。這一家族的成員是胚胎組織和成人組織中細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的調(diào)節(jié)子。術(shù)語(yǔ)“神經(jīng)肽Y”是指在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達(dá)且影響許多生理過(guò)程的神經(jīng)肽， 所述生理過(guò)程包括皮層興奮性、應(yīng)激反應(yīng)、攝食、晝夜節(jié)律以及心血管功能。其通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體起作用，以抑制腺苷酸環(huán)化酶、抑制活化的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣水平、以及活化鉀通道。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“灌注”是指動(dòng)脈血液向生物組織中毛細(xì)血管床的營(yíng)養(yǎng)遞送過(guò)程。灌注(“F”)可用公式F= ( (Pa-Pv)/R)計(jì)算，其中Pa是平均動(dòng)脈壓，Pv是平均靜脈壓， 以及R是血管阻力?？稍隗w內(nèi)測(cè)量組織灌注，例如通過(guò)，但不限于磁共振成像(MRI)技術(shù)。 該技術(shù)包括應(yīng)用注射的造影劑和動(dòng)脈自旋標(biāo)記(ASL)(其中在其進(jìn)入目標(biāo)組織前磁性地標(biāo)記動(dòng)脈血，以及測(cè)量標(biāo)記量并與對(duì)照記錄相比較)。術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)生長(zhǎng)因子”(PIGF)是指一種屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族成員的細(xì)胞因子。術(shù)語(yǔ)“佛波酯”是指天然的、植物衍生的有機(jī)化合物，其為二萜的惕各烷家族的成員。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“潛能的”或“潛能”是指本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物必需的生物活性，即本發(fā)明的潛能⑶34+CXCR-4+細(xì)胞保持有生存力，能夠有CXCR-4-介導(dǎo)的趨化活性，以及能夠生長(zhǎng)，即在體外CFU測(cè)試法中形成造血干細(xì)胞集落。本文使用的術(shù)語(yǔ)“前列腺素”是指一組為前列腺烷酸衍生物的生理活性物質(zhì)中的任一個(gè)，所述前列腺烷酸是20碳結(jié)構(gòu)，其為含有五元環(huán)戊烷環(huán)的脂肪酸。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“祖細(xì)胞”是指骨髓中的未成熟細(xì)胞，其可通過(guò)將骨髓懸浮液培養(yǎng)于添加有生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)皿中而分離。祖細(xì)胞成熟為前體細(xì)胞，前體細(xì)胞成熟為血細(xì)胞。祖細(xì)胞稱(chēng)為集落形成單位(CFU)或集落生成細(xì)胞(CFC)。祖細(xì)胞的具體世系由后綴表明，諸如但不限于CFU-E(紅細(xì)胞)、CFU-GM(粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞)以及CFU-GEMM(多能造血干細(xì)胞)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“減少”及其各種語(yǔ)法形式是指變小、變窄或降至更小的范圍、
大小、量、程度或強(qiáng)度。本文所使用的作為名詞的術(shù)語(yǔ)“修復(fù)”是指任何恢復(fù)功能的修正、強(qiáng)化、更新、補(bǔ)救、彌補(bǔ)、修補(bǔ)、復(fù)原、修復(fù)、修補(bǔ)等等。當(dāng)用作動(dòng)詞時(shí)，其意思是修正、強(qiáng)化、修整、補(bǔ)救、彌補(bǔ)、使完好、更新、愈合、修補(bǔ)或以其他方式恢復(fù)功能。在一些實(shí)施方案中，“修復(fù)”包括完全修復(fù)和部分修復(fù)。術(shù)語(yǔ)“salusin”是指28個(gè)氨基酸(salusin-α )或20個(gè)氨基酸(salusin-β )的生物活性肽，其從T0R2A的可變剪接mRNA翻譯得到，所述T0R2A是編碼一個(gè)扭轉(zhuǎn)張力障礙家族蛋白的基因。Salusin增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+，上調(diào)各種基因以及誘導(dǎo)細(xì)胞有絲分裂。術(shù)語(yǔ)“Sca-I，，或“干細(xì)胞抗原_1，，是指影響間充質(zhì)干細(xì)胞自我更新能力的信號(hào)通路中的表面蛋白成分。術(shù)語(yǔ)“干細(xì)胞”是指具有自我更新能力的高增值潛能未分化細(xì)胞，其能產(chǎn)生子細(xì)胞，所述子細(xì)胞能末端分化為超過(guò)一種不同的細(xì)胞表型。術(shù)語(yǔ)“支架”是指用于撐開(kāi)動(dòng)脈的小管。使支架塌縮為小直徑，放置在球囊導(dǎo)管之上，通過(guò)腹股溝(股動(dòng)脈)或手臂(肱動(dòng)脈)的主動(dòng)脈插入，并穿達(dá)動(dòng)脈的狹窄/阻滯區(qū)域。 當(dāng)其到達(dá)正確的位置，球囊輕微膨脹以推開(kāi)任何斑塊，并擴(kuò)展血管(球囊血管成形術(shù))。當(dāng)球囊膨脹后，支架張開(kāi)，在適當(dāng)?shù)牡胤焦潭?，并形成支架以維持動(dòng)脈張開(kāi)。支架永久地停放在血管中。在某些受治療者中，支架減少球囊血管成形術(shù)或其他應(yīng)用了導(dǎo)管的方法之后發(fā)生的再狹窄。支架還可能有助于恢復(fù)正常血流，以及保持動(dòng)脈張開(kāi)，如果其被球囊導(dǎo)管撕裂或損傷的話。再閉合(再狹窄)可能是支架方法的問(wèn)題。藥物洗脫支架是包被有緩慢釋放的藥物的支架。這些藥物可能幫助保持血管不再閉合。術(shù)語(yǔ)“受治療者”和“患者”在本文中可互換使用，并且包括哺乳動(dòng)物起源的動(dòng)物物種，包括人類(lèi)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“易感受治療者”是指有風(fēng)險(xiǎn)的人群的成員。術(shù)語(yǔ)“噻唑烷二酮類(lèi)”(TZD)是指一類(lèi)與過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)結(jié)合的化合物，所述PPAR是一組在細(xì)胞核內(nèi)部的的分子受體。這一類(lèi)化合物的成員是母體化合物噻唑烷二酮的衍生物，并且包括羅西格列酮、匹格列酮和曲格列酮。術(shù)語(yǔ)“Thy-1”是指Ig超家族細(xì)胞表面糖蛋白Thy_l，其在嚙齒類(lèi)動(dòng)物和人類(lèi)的免疫細(xì)胞和神經(jīng)元上表達(dá)，推測(cè)其在細(xì)胞粘附，以及T細(xì)胞分化、增殖和凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療”或“處理”可互換使用，包括消除(廢除、清除)、基本上抑制、減緩或逆轉(zhuǎn)病癥的進(jìn)程，基本上改善(改良)病癥的臨床或?qū)徝腊Y狀，基本上阻止臨床或?qū)徝腊Y狀的出現(xiàn)，保護(hù)免受有害刺激，以及實(shí)現(xiàn)以下一種或多種(a)降低障礙、疾病或病癥的嚴(yán)重性；(b)限制治療中的障礙、疾病或病癥的特征性癥狀的發(fā)展；(C)限制治療中的障礙、疾病或病癥的特征性癥狀的惡化；(d)限制患者曾患的障礙、疾病或病癥的復(fù)發(fā)；以及(e)限制患者先前曾有的障礙、疾病或病癥癥狀的復(fù)發(fā)。
術(shù)語(yǔ)“腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑”(TWEAK)是指TNF-α生長(zhǎng)因子家族的成員，其作為II型跨膜蛋白產(chǎn)生并且被加工為156個(gè)氨基酸的可溶細(xì)胞因子。 (Chicheportiche, Y.等，J Biol. Chem. 272 :32401-410 (1997))。TWEAK 具有多種生物學(xué)活性，包括刺激細(xì)胞生長(zhǎng)和血管發(fā)生、誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子，以及在某些實(shí)驗(yàn)條件下刺激細(xì)胞凋亡(Wiley, S. R.，等，Cytokine Growth Factor Rev. 14(3-4) :241_9，2003)，并且是心肌細(xì)胞增殖的正向調(diào)節(jié)子(Novoyatieva，Τ.，等，Cardiovacs. Res. 2009 年 11 月 26，PMID 19887380)。TWEAK通過(guò)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子可誘導(dǎo)的分子14 (FN14)受體介導(dǎo)這些過(guò)程 (Harada, N.等，Biochem. Biophys. Res. Commun. 299 :488-93 (2002) ；Nakayama, M 等， Biochem. Biophys. Res. Communic.，306 :819-825 000；3))，所述受體是嚴(yán)緊調(diào)控的且可誘導(dǎo)的受體，已有人提出其通過(guò)各種下游信號(hào)級(jí)聯(lián)傳遞信號(hào)。(Ando，T.，等，Arthritis Res. Ther. 8 :R146(2006) ；Brown, S. Α.，等，Biochem. J. 371 :395-403(2003) ；Saitoh, Τ.等， J. Biol. Chem. 278 :36005-36012 (2003) ；Dogra, C.等，F(xiàn)ASEB J. 21 1857-69 (2007)，其每一個(gè)均在此通過(guò)引用并入本文)。術(shù)語(yǔ)“血管功能不全”是指不充分的血流。本發(fā)明提供了梗死區(qū)灌注改善組合物，以及其在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后治療和修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了治療由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的組合物，其包含(a)梗死區(qū)改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+細(xì)胞富集群，其含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群；(b)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑；其中通過(guò)導(dǎo)管將該組合物腸胃外地施用于受治療者；其中，當(dāng)通過(guò)導(dǎo)管和在體外測(cè)試時(shí)，在含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群中至少70%的細(xì)胞是CD34+細(xì)胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群后至少約 24小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持該CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及C3)能在體外形成造血集落。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，所述促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑選自如下所述地構(gòu)成的組，即，所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑和降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑是酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。其他促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括但不限于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C和VEGF-D、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PIGF)、兒茶酚胺(諸如但不限于去甲腎上腺素)、內(nèi)皮素-1、前列腺素F2a、血管緊張素II、佛波酯、神經(jīng)肽 Y、活性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β 1(TGF-1 β)、Gq 蛋白、甘油二酯(DAG)、salusin-a ,salusin-β、 胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-I)、肌抑素、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)、噻唑烷二酮，諸如但不限于羅西格列酮，及其變體或重組衍生物。根據(jù)一種實(shí)施方案，該組合物比成分(i)加上(ii)、或單獨(dú)的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該組合物改善梗死區(qū)的微血管血流。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該梗死區(qū)損傷包括心室重建，如通過(guò)LVEF下降或LVESV升高所測(cè)得的那樣。在一些實(shí)施方案中，該梗死區(qū)損傷包括由AMI導(dǎo)致的心肌功能的進(jìn)行性下降。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于對(duì)照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的灌注不足。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的心肌冬眠。在一種實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該組合物增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該組合物增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織梗死周?chē)鷧^(qū)中冬眠心肌的灌注。 在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該組合物減少梗死損傷的面積。在一些實(shí)施方案中，與對(duì)照相比較，該組合物減少梗死量。根據(jù)另一種實(shí)施方案，含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從自該受治療者獲得的骨髓抽出物的細(xì)胞成分純化得到。根據(jù)另一種實(shí)施方案，含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從周?chē)兓玫健８鶕?jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4 且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群 (a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。 根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的 ⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少M(fèi)小時(shí)。根據(jù)一種實(shí)施方案，通過(guò)從自該受治療者獲得的骨髓中分離或純化該含有表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群，從而制備趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物。根據(jù)一種實(shí)施方案，通過(guò)從周?chē)蟹蛛x或純化該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群，從而制備趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少70%的純⑶34+細(xì)胞。 在一些實(shí)施方案中，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少75%的純⑶34+細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少80%的純⑶34+細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少85%的純⑶34+細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少90%的純⑶34+細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，該富集⑶34+細(xì)胞的造血干細(xì)胞產(chǎn)物含有至少95%的純⑶34+細(xì)胞。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，至少約70% 的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少M(fèi) 小時(shí)，至少約75%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，至少約80%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，至少約85%的⑶34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，至少約90%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，至少約95%的⑶34+ 細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少48小時(shí)，至少約70% 的CD34+細(xì)胞是是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少48 小時(shí)，至少約75%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細(xì)胞群后至少48小時(shí)，至少約80%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細(xì)胞群后至少48小時(shí)，至少約85%的⑶34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少48小時(shí)，至少約90%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少48小時(shí)，至少約95%的⑶34+ 細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少72小時(shí)，至少約70% 的CD34+細(xì)胞是是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少72 小時(shí)，至少約75%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細(xì)胞群后至少72小時(shí)，至少約80%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細(xì)胞群后至少72小時(shí)，至少約85%的⑶34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少72小時(shí)，至少約90%的CD34+細(xì)胞是有活力的。在一些實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少72小時(shí)，至少約95%的⑶34+ 細(xì)胞是有活力的。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少M(fèi)小時(shí)，該⑶34+細(xì)胞能形成造血集落。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的CD34+細(xì)胞群后至少48小時(shí)，該 ⑶34+細(xì)胞能形成造血集落。在另一種實(shí)施方案中，在獲得該富集的⑶34+細(xì)胞群后至少72 小時(shí)，該⑶34+細(xì)胞能形成造血集落。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物包含至少約1000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+ 細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1100萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1200萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1300萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1400萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1500萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1600萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1700萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1800萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1900萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約2000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。 根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約2500萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約3000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、 并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約3500萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約4000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約4500萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約5000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約陽(yáng)00萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約6000萬(wàn)個(gè)從受治療者獲得的、并且含有表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞。⑶34+細(xì)胞可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何方法富集/選擇。例如，在一些實(shí)施方案中，通過(guò)熒光激活細(xì)胞選擇術(shù)(FACQ針對(duì)表達(dá)CD34細(xì)胞抗原和CXCR4細(xì)胞抗原的細(xì)胞富集包含CD34+細(xì)胞的骨髓細(xì)胞群。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)正向或負(fù)向免疫分離技術(shù)富集/選擇骨髓中的CD34+細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，基于細(xì)胞分級(jí)方法從骨髓分離和/或純化造血干細(xì)胞，所述細(xì)胞分級(jí)方法基于大小和細(xì)胞密度、代謝染料的流出、或?qū)?xì)胞毒劑的耐性。在一種實(shí)施方案中，例如，應(yīng)用單克隆抗CD34+抗體和免疫磁性分離技術(shù)富集/選擇骨髓中的⑶；34+細(xì)胞。可通過(guò)本領(lǐng)域公知的技術(shù)鑒定、量化和表征選擇的⑶34+細(xì)胞。例如，在一些實(shí)施方案中，可通過(guò)FACS分析確定CD34+細(xì)胞在骨髓和在趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物中的百分比。 在另一種實(shí)施方案中，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印記(Western blot)方法量化CD34蛋白質(zhì)表達(dá)。術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)免疫印記”是指在復(fù)雜混合物中鑒定蛋白質(zhì)的方法；在凝膠介質(zhì)中電泳分離蛋白質(zhì)；從凝膠轉(zhuǎn)移至蛋白結(jié)合片或膜上；將含有分離的蛋白質(zhì)的片或膜暴露于抗體，所述抗體結(jié)合、定位以及使得可顯現(xiàn)目的蛋白質(zhì)。例如，可應(yīng)用單克隆抗CD34抗體檢測(cè)原位附著在膜上的⑶34蛋白。在另一種實(shí)施方案中，分離的⑶34+細(xì)胞中⑶；MmRNA和DNA的表達(dá)可以被量化。 本文所使用的術(shù)語(yǔ)“RNA印記”(Northern blot)是指這樣的技術(shù)，其中通過(guò)電泳將來(lái)自標(biāo)本的RNA在凝膠上分離為其組成部分，并轉(zhuǎn)移至特異修飾的紙支持物上，以把mRNA固定在其電泳位置上。應(yīng)用包含報(bào)告分子(諸如，但不限于放射性標(biāo)記)的探針鑒定CD34相關(guān)序列。在另一種實(shí)施方案中，⑶34和/或CXCR4的表達(dá)水平通過(guò)定量或半定量PCR或?qū)崟r(shí)PCR( “RT-PCR”)技術(shù)得以確定。縮寫(xiě)“PCR”是指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其是用于擴(kuò)張DNA 數(shù)量，從而使得DNA更易于分離、克隆和測(cè)序的技術(shù)。例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，656，493、 5，333，675,5, 234，824和5，187，083，其每一個(gè)均在此通過(guò)引用并入本文。實(shí)時(shí)PCR是同時(shí)進(jìn)行DNA定量和擴(kuò)增的方法，其中通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)特異性地?cái)U(kuò)增DNA，并且在擴(kuò)增的每一個(gè)循環(huán)之后，量化DNA。 本發(fā)明趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的選擇的⑶34+造血干細(xì)胞含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的CD34+細(xì)胞亞群。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含最小量的分離的⑶34+造血干細(xì)胞，使得存在至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的CD34+細(xì)胞的亞群。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+ 細(xì)胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約3%的CD34+CXCR-4+細(xì)胞的 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+ 細(xì)胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約5%的CD34+CXCR-4+細(xì)胞的 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+ 細(xì)胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約7%的CD34+CXCR-4+細(xì)胞的 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+ 細(xì)胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約9%的CD34+CXCR-4+細(xì)胞的 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+ 細(xì)胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約11%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 M小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 M小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 M小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 M小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約21%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約31%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少24小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。 在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約3%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約5%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約7%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約9%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約11 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約21 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約沈％的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約31 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。 在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約3%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約5%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約7%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約9%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約11 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約21 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約31 %的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細(xì)胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少 72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+ 細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的至少平均約17%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少M(fèi)小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的⑶34+細(xì)胞群后，⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的至少平均約17%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少48小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，在獲得富集的CD34+細(xì)胞群后，CD34+CXCR-4+細(xì)胞的至少平均約17%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性得以保持至少72小時(shí)。在另一種實(shí)施方案中，趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物中的⑶34+CXCR-4+細(xì)胞維持至少約2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。本發(fā)明的藥物組合物還包含濃度為梗死區(qū)灌注改善組合物體積至少10%的血清。 在一種實(shí)施方案中，血清是自體的。在另一種實(shí)施方案中，血清是合成的或重組血清。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的至少約10%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約15%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約20%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約21%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約 22%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約23%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約25%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約沈％。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約27%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是， 作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約觀％。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約四％。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的至少約30%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約31%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約32%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約33%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約 34%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約35%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約36%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約37%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約38%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約39%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是， 作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約40%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約45%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約50%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約55%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約60%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約65%。在另一種實(shí)施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約70%。在另一種實(shí)施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約75%。在另一種實(shí)施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的至少約80%。在另一種實(shí)施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約85%。在另一種實(shí)施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約 90%。在另一種實(shí)施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的至少約95%。 在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約100%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約95%。 在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約90%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約85%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的約80%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約75%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約70%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約65%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約60%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約55%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約50%。 在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/100cc組合物終體積表達(dá)的約45%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約40%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的約39%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約38%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約37%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約36%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約35%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約34%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約33%。 在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約32%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約31%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的約30%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約四％。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約觀％。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約27%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約沈％。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約25%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約對(duì)％。 在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約23%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約22%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達(dá)的約21%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約20%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約15%。在另一種實(shí)施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達(dá)的約10%。在一些實(shí)施方案中，可用賦形劑、載體或運(yùn)載體(包括但不限于溶劑)配制梗死區(qū)灌注改善組合物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“賦形劑”、“載體”或“運(yùn)載體”是指適于本文描述的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的配制和施用的載體材料。在本文中有用的載體和運(yùn)載體包括本領(lǐng)域公知的、無(wú)毒且不與其他成分相互作用的任何此類(lèi)材料。本文所使用的短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”是指對(duì)本發(fā)明組合物的配制和施用有用的任何基本上無(wú)毒的載體，本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物在其中將保持穩(wěn)定和生物可利用。藥學(xué)上可接受的載體必須具有足夠高的純度和足夠低的毒性，以使其適合施用到所治療的哺乳動(dòng)物。其還應(yīng)當(dāng)保持有效物質(zhì)的穩(wěn)定性和生物利用度。藥學(xué)上可接受的載體可以是液體或固體，并且根據(jù)頭腦計(jì)劃的施用方式進(jìn)行選擇，從而當(dāng)與活性劑和給定組合物的其他成分結(jié)合時(shí)，提供期望的體積和一致性等。例如，藥學(xué)上可接受的載體可以是，但不限于粘結(jié)劑(例如，預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素，等)、填充劑(例如，乳糖及其他糖、微晶纖維素、果膠、明膠、硫酸鈣、乙基纖維素、聚丙烯酸酯、磷酸氫鈣，等)、潤(rùn)滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石、硅石、膠態(tài)二氧化硅、硬脂酸、硬脂酸金屬鹽、氫化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸鈉、醋酸鈉，等)、崩解劑(例如，淀粉、淀粉羥基乙酸鈉，等)，或潤(rùn)濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉，等)。其他可用于本發(fā)明組合物的合適藥學(xué)上可接受的載體包括，但不限于水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、直鏈淀粉、硬脂酸鎂、滑石、 硅酸、粘性石蠟、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等。此類(lèi)載體溶液還可含有緩沖劑、稀釋劑和其他合適的添加劑。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“緩沖劑”是指這樣的溶液或液體，其化學(xué)組成中和酸或堿，使得沒(méi)有PH的顯著改變。本發(fā)明設(shè)想的緩沖劑的實(shí)例包括但不限于杜伯科氏磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、林格氏溶液、5%葡萄糖水溶液(D5W)、和正常/生理鹽水(0.9% NaCl) ο在一些實(shí)施方案中，輸注溶液與受治療者組織等滲。在一些實(shí)施方案中，輸注溶液與受治療者組織相比是高滲的。用于腸胃外施用的本發(fā)明組合物可包括諸如以下的藥學(xué)上可接受的載體無(wú)菌水溶液、在一般溶劑諸如乙醇中的非水溶液、或在液體油基中的溶液。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善組合物的載體可包括釋放劑，諸如持續(xù)釋放或延遲釋放載體。在此類(lèi)實(shí)施方案中，載體可以是能夠持續(xù)或延緩釋放有效物質(zhì)的任何材料，以提供更有效的施用，例如，導(dǎo)致組合物的更低頻率和/或降低的劑量、改進(jìn)處理的方便性、以及擴(kuò)展或延遲對(duì)正在接受治療、預(yù)防或促進(jìn)的疾病、障礙、病癥、綜合征等的效果。此類(lèi)載體的非限制性例子包括天然及合成的聚合物的脂質(zhì)體、微海綿體、微球體或微膠囊等。脂質(zhì)體可由各種磷脂如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿形成?？勺鳛闊o(wú)菌可注射水或油混懸液的形式腸胃外地施用本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善組合物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“腸胃外”或“腸胃外地”是指通過(guò)注射的方式引入體內(nèi)(例如， 通過(guò)注射施用)，包括但不限于輸注技術(shù)。通過(guò)適于將流體組合物(即，能夠流動(dòng)的組合物) 遞送至所選擇的解剖結(jié)構(gòu)的球囊導(dǎo)管方式將本發(fā)明的包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的梗死區(qū)灌注改善組合物遞送至受治療者。本發(fā)明的無(wú)菌梗死區(qū)灌注改善組合物可以是在無(wú)毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌溶液或混懸劑。通常認(rèn)為溶液是兩種或多種物質(zhì)的均質(zhì)混合物；它通常是液體， 盡管并非是必要的。在溶液中，溶質(zhì)(或所溶解的物質(zhì))的分子均勻地分散于溶劑分子之間?；鞈覄┦欠稚Ⅲw(混合物)，其中被精細(xì)分離的物質(zhì)與另一種物質(zhì)結(jié)合，前者被如此精細(xì)地分離和混合以至于它不會(huì)迅速沉淀出來(lái)。在日常生活中，最常見(jiàn)的混懸劑是固體分散在液體水中的那些。在可以采用、可接受的的運(yùn)載體和溶劑中包括水、林格液、以及等滲氯化鈉(鹽)溶液。在一些實(shí)施方案中，應(yīng)用高滲溶液。此外，通常應(yīng)用無(wú)菌不揮發(fā)油作為溶劑或混懸介質(zhì)。對(duì)于腸胃外應(yīng)用，尤其合適的運(yùn)載體由溶液(優(yōu)選油或水溶液)、以及混懸液、乳劑或埋植劑組成。水混懸劑可含有增加該混懸劑粘度的物質(zhì)，例如包括羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。本發(fā)明的其他梗死區(qū)灌注改善組合物可容易地應(yīng)用本領(lǐng)域公知的技術(shù)制備，諸如描述于 Remington' s Pharmaceutical Sciences,第 18 或 19 版，由賓夕法尼亞州 Easton 市Mack Publishing Company出版，其在此通過(guò)引用并入本文。在本文中使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效”、“梗死區(qū)改善量”、“灌注改善量”或“藥學(xué)有效量”是指在其施用于患者后產(chǎn)生治療或有益效果的本發(fā)明組合物的量。梗死區(qū)改善、灌注改善、治療、或藥學(xué)有效可以是治愈、最小化、預(yù)防或改善疾病或病癥，或可以具有任何其他的梗死區(qū)改善、灌注改善、治療或藥學(xué)有益效果。選擇物質(zhì)的濃度，從而使其發(fā)揮梗死區(qū)改善、 灌注改善、治療或藥學(xué)效果，但是在醫(yī)生范圍和合理的判斷內(nèi)足夠低以避免顯著的副作用。 組合物的有效量可隨著所治療的生物受治療者的年齡和生理狀況，病癥的嚴(yán)重程度，治療的持續(xù)時(shí)間，并行治療的性質(zhì)，輸注的時(shí)間，所應(yīng)用的特定化合物、組合物或其他有效成分， 所使用的具體載體等多種因素而不同。通過(guò)確定誘發(fā)給定強(qiáng)度的劑量單位(意思是使用單位)中的劑量(下文稱(chēng)為“單位劑量”)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定本發(fā)明組合物的藥學(xué)有效量。術(shù)語(yǔ)“劑量-強(qiáng)度關(guān)系”是指?jìng)€(gè)體接受者中的作用強(qiáng)度與劑量相關(guān)的方式。作用強(qiáng)度通常指定為最大強(qiáng)度的50%。相應(yīng)的劑量稱(chēng)為50%有效劑量或個(gè)體ED5tlt5術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”的使用是將本文所使用的基于作用強(qiáng)度的ED5tl區(qū)別于從群體反應(yīng)數(shù)據(jù)的頻率確定的半數(shù)有效劑量，也縮稱(chēng)ED5tlt5本文所使用的“功效”是指本發(fā)明組合物達(dá)到期望反應(yīng)的性質(zhì)，以及“最大效果”是指可達(dá)到的最大效果。對(duì)治療特定障礙或病癥有效的本發(fā)明藥物組合物中的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的用量將取決于障礙或病癥的本性，并可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的臨床技術(shù)確定(例如，參見(jiàn)，Goodman和Gilman 的 THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Joel G. Harman, Lee E.Limbird，編輯；McGraw Hill,紐約，2001 ;THE PHYSICIAN' S DESK REFERENCE, Medical Economics Company，he.，新澤西州 Oradell 市，1995 ；以及 DRUG FACTS AND COMPARISONS, FACTS AND COMPARISONS, INC.，密蘇里州圣路易斯市，1993)。在本發(fā)明制劑中應(yīng)用的精確劑量還取決于施用途徑以及疾病或障礙的嚴(yán)重性，并且應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)師的判斷和每個(gè)受治療者的情況確定。預(yù)期受治療者可從本發(fā)明藥物組合物的多次施用中收益。在另一種實(shí)施方案中，以醫(yī)生的判斷腸胃外施用的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物每劑量單位含有至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)⑶34+造血干細(xì)胞，其含有至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的⑶34+細(xì)胞的亞群。在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善藥物組合物還進(jìn)一步可包含一種或多種相容有效成分，其在由本發(fā)明分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物提供的藥物效果之外，還給該梗死區(qū)灌注改善藥物組合物提供另一藥物效果。本文所使用的“相容”的意思是此組合物的有效成分能夠以此種方式彼此結(jié)合，從而使得在正常使用條件下沒(méi)有會(huì)實(shí)質(zhì)性地減少每種有效成分或該組合物的功效的相互作用。在一些實(shí)施方案中，聯(lián)合治療包括給有需要的受治療者施用梗死區(qū)灌注改善藥物組合物，其包含與選自以下組的相容劑相結(jié)合的本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑或肌力藥、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。在一些實(shí)施方案中，酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白 1 (NRGl)是表皮生長(zhǎng)因子受體家族的酪氨酸激酶受體的激動(dòng)劑，由ErbBl、2、3和4組成。 (Fuller，SJ，等，J. MoL Cell Cariol. 44 :831-54 (2008)) NRGl 與 Erb4 的結(jié)合升高其激酶活性，并且導(dǎo)致與erbB2的異質(zhì)二聚化或與Erb4的同源二聚化，以及刺激細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。同上。NFRGl受體亞單位ErbB2和ErbB4也在分化的心肌細(xì)胞中表達(dá)。同上。最近顯示在小鼠中，NRGl通過(guò)誘導(dǎo)分化的心肌細(xì)胞離開(kāi)增殖靜止期，從而誘導(dǎo)分化的單核心肌細(xì)胞增殖。Bersell，等(Bersell，K.等，Cell 138:257-70(2009))。未分化的干細(xì)胞和祖細(xì)胞對(duì)這一增殖沒(méi)有貢獻(xiàn)。(同上)。應(yīng)用小鼠模型，其中永久結(jié)扎兩個(gè)月大小鼠的冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)，并在一周后每天一次施用NRGl共施用12周，顯示施用NRGl 12周導(dǎo)致心肌功能的持續(xù)改善，通過(guò)射血分?jǐn)?shù)、縮小的梗死疤痕大小以及心肌細(xì)胞肥大的減弱來(lái)確定。 (同上)。在急性心肌梗死后，除了作為缺血結(jié)果的壞死細(xì)胞死亡之外，進(jìn)行性凋亡細(xì)胞死亡和心肌細(xì)胞冬眠共同導(dǎo)致心功能的減弱，其可能隨時(shí)間惡化并且最終引起重大的不利心臟事件。一旦喪失，心肌細(xì)胞不能顯著地再生以恢復(fù)心功能。心肌細(xì)胞的碳14年齡測(cè)定顯示心肌的再生能力低于每年 1% (Bergman 0. Science. 2009 ；324 :98-101)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物還包含約0.5%至約5%的白蛋白。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約0. 5%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約0. 75%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.0%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.25%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.5%。在一些實(shí)施方案中， 白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.75%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約2.0%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約2.5%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為1111/100(^組合物體積表達(dá)的約2.75(%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3.0%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3.5%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約4.0%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約4.5%。在一些實(shí)施方案中，白蛋白的最小量是作為 ml/100cc組合物體積表達(dá)的約5. 0%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約5.0%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc 組合物體積表達(dá)的約4. 75%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為 ml/100cc組合物體積表達(dá)的約4. 5%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約4. 25%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約4. 0%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3. 75%。在一些實(shí)施方案中， 本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3. 5%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3. 25%。 本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約3. 0%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約2. 75%。 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約2.0%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.75%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc 組合物體積表達(dá)的約1.5%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為 ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1.25%。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達(dá)的約1 %。在一些實(shí)施方案中，該白蛋白是人白蛋白。 在一些實(shí)施方案中，白蛋白是重組人白蛋白。本發(fā)明的方法在另一方面中，本發(fā)明提供了制備包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的用于治療有需要的受治療者的梗死區(qū)灌注改善藥物組合物的方法。該方法包含步驟(1)在無(wú)菌條件下通過(guò)趨化性細(xì)胞獲得方法從受治療者體內(nèi)獲得包含潛能⑶34+ 細(xì)胞富集群的制備物；(2)從該制備物無(wú)菌純化含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的潛能⑶34+細(xì)胞；(3)無(wú)菌配制該純化的潛能⑶34+細(xì)胞，以形成趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物；(4)無(wú)菌配制該含有具有趨化活性的潛能⑶34+CXCR-4+細(xì)胞亞群的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以形成藥物組合物；(5)評(píng)估該藥物組合物的無(wú)菌度；
(6)釋放合格的無(wú)菌藥物組合物，用于輸注至受治療者；(7)將治療有效量的藥物組合物載入遞送裝置；以及(8)任選地將該含有治療有效量的包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的無(wú)菌藥物組合物的遞送裝置運(yùn)輸至心導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所，用于輸注至受治療者。在一種實(shí)施方案中，在完成獲得步驟(1)后約12至約M小時(shí)開(kāi)始步驟O)。在另一種實(shí)施方案中，只有在完成獲得步驟(1)后約48至約72小時(shí)將無(wú)菌配制的細(xì)胞產(chǎn)物輸注給受治療者，才要進(jìn)行釋放步驟(7)。在另一種實(shí)施方案中，在完成獲得步驟(1)后約12 至約M小時(shí)內(nèi)開(kāi)始步驟O)，并且只有在完成獲得步驟(1)后約48至約72小時(shí)內(nèi)將無(wú)菌配制的細(xì)胞產(chǎn)物輸注給受治療者，才要進(jìn)行釋放步驟(6)。在一種實(shí)施方案中，步驟( ，即評(píng)估該藥物組合物的無(wú)菌度的步驟，還包含步驟 (i)離心包含有效⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以形成細(xì)胞沉淀和上清液， 該細(xì)胞沉淀包含有效CD34+CXCR-4+細(xì)胞；(ii)在不擾動(dòng)細(xì)胞沉淀的情況下無(wú)菌移除上清液，以及(iii)分析該上清液是否被微生物污染，從此確定細(xì)胞沉淀的無(wú)菌度，而不會(huì)耗費(fèi)其細(xì)胞含量。在一種實(shí)施方案中，在步驟(a)中，該趨化性細(xì)胞采集方法是小量骨髓采集技術(shù)， 用于在無(wú)菌條件下從受治療者的骨髓獲得包含潛能CD34+細(xì)胞富集群的制備物。對(duì)于骨髓收集技術(shù)，步驟(a)的方法進(jìn)一步包括步驟(i)在從受治療者收集骨髓之前，用肝素預(yù)加載收集注射器；(ii)應(yīng)用該收集注射器和小量骨髓采集技術(shù)從受治療者左后髂嵴和右后髂嵴抽出骨髓，從而形成收集的骨髓；以及(iii)將該收集的骨髓注入收集袋中。在一種實(shí)施方案中，步驟(i)中的收集注射器以及步驟(iii)中的收集袋含有無(wú)防腐劑的肝素化溶液，其包含0. 9%生理鹽水。在肝素化鹽水溶液中肝素的終濃度為約20單位/ml至約25單位 /ml ο任選地，在該方法的一種實(shí)施方案中，將收集的骨髓運(yùn)輸至加工場(chǎng)所，該加工場(chǎng)所不同于在其中收集骨髓的場(chǎng)所。在一種實(shí)施方案中，將該收集的骨髓運(yùn)輸至加工場(chǎng)所的方法包括步驟(a)將收集的骨髓置于收集袋中；(b)將該收集袋置于第二袋中；(c)將該含有收集袋的第二袋置于運(yùn)輸容器中，所述運(yùn)輸容器包含含有冷凍濕冰的內(nèi)部腔室，以及至少一層包裝紙(bubble wrap) ； (d)將溫度標(biāo)簽監(jiān)測(cè)器固定在該運(yùn)輸容器中的內(nèi)部腔室； (e)密封該運(yùn)輸容器；以及(f)將該運(yùn)輸容器運(yùn)送至加工場(chǎng)所。在另一方面中，本發(fā)明提供了一種在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中治療或修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過(guò)導(dǎo)管腸胃外地施用無(wú)菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能CD34+細(xì)胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)，以及(iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；其中，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在含有表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群中至少 70%的細(xì)胞是CD34+細(xì)胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的 CD34+細(xì)胞富集群后至少約M小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持該CXCR-4 介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；以及(b)在一個(gè)梗死區(qū)相對(duì)于對(duì)照改善灌注，其中施用步驟(a)發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)輸注日期，以及所述第一輸注日期包含由第一時(shí)間和第二時(shí)間定義的特定時(shí)間間隔，其中該第一時(shí)間是梗死區(qū)中峰值炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)產(chǎn)生之后，以及第二時(shí)間是在梗死區(qū)中形成心肌疤痕之前。根據(jù)一種實(shí)施方案，該治療有效量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少15x IO6個(gè)分離的自體⑶；34+造血干細(xì)胞富集群，其含有至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4 介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4 介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b) 在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2% 的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該含有表達(dá)CXCR-4且具有 CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落， 以及(b)在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群，在從受治療者體內(nèi)獲得該含有在(a)中表達(dá) CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少24小時(shí)。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述任選的第二治療劑選自由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β 阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、 纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成的組。根據(jù)一些實(shí)施方案，酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述梗死區(qū)損傷是急性心肌梗死后心肌功能的進(jìn)行性下降。根據(jù)另一種實(shí)施方案，該方法比成分⑴加上(ii)或單獨(dú)的成分(iii)更能減少至少一種梗死區(qū)損傷。根據(jù)一些實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。根據(jù)一些實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)一些實(shí)施方案，該梗死區(qū)損傷包括由急性心肌梗死導(dǎo)致的心肌功能的進(jìn)行性下降。根據(jù)一些實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。根據(jù)一些實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)中冬眠心肌的灌注。 根據(jù)一些實(shí)施方案，相對(duì)于對(duì)照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注不足。根據(jù)一些實(shí)施方案，相對(duì)于對(duì)照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)鷧^(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)一些實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法改善梗死區(qū)微血管血流。根據(jù)一些實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法減少梗死面積。根據(jù)一些實(shí)施方案，與對(duì)照相比較，該方法減少梗死量。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方案，有需要的受治療者是血運(yùn)重建的心肌梗死患者。在這一實(shí)施方案中使用的“血運(yùn)重建”是指成功地放置了支架。應(yīng)用非實(shí)驗(yàn)室測(cè)試、心導(dǎo)管插入術(shù)、炎癥細(xì)胞因子測(cè)量、以及心臟生物標(biāo)志物測(cè)量對(duì)例如冠狀動(dòng)脈功能不全的臨床評(píng)估可用于確定根據(jù)本發(fā)明的方法施用藥物組合物的合適時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，檢測(cè)峰值炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)產(chǎn)生使得能夠?qū)⑹┯弥贫ㄔ趯?duì)具體患者最重要的窗口。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)測(cè)量血漿和/或尿液中的合適細(xì)胞因子的水平從而確定峰值炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)產(chǎn)生。在其他實(shí)施方案中，免疫化學(xué)地測(cè)量合適細(xì)胞因子的水平，例如通過(guò)夾層酶免疫測(cè)試法(sandwich enzyme immunoassay)、通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試法(ELISA)或通過(guò)多珠試劑盒。根據(jù)一種實(shí)施方案，在炎癥細(xì)胞基因劑量產(chǎn)物峰值之后的第一輸注日期將組合物施用受治療者。在一些實(shí)施方案中，在梗死后約5天至約14天的第一輸注日期將組合物施用于血運(yùn)重建的心肌梗死患者。在第一輸注日期將組合物施用于血運(yùn)重建的心肌梗死患者的最小時(shí)間是約5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。在第一輸注日期施用組合物的最大時(shí)間是約 14、12、11、10、9、8、7、6 或 5 天。根據(jù)一些實(shí)施方案，在含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能 ⑶34+細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群中⑶34+細(xì)胞的最小數(shù)量是提供足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4 且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能CD34+細(xì)胞以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果的細(xì)胞數(shù)量。因此，在其中例如可通過(guò)選擇和富集CXCR-4+運(yùn)動(dòng)細(xì)胞從而增加CXCR-4的表達(dá)和CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)期可需要更少數(shù)量的CD34+細(xì)胞以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少I(mǎi)x IO5個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞的富集群提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少切IO5個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少9x IO5個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞的提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少I(mǎi)x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少& IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少3x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少4x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少切IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少6x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少7x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少8x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，至少9x IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞提供了足夠數(shù)量的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)性的潛能⑶34+細(xì)胞，以產(chǎn)生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些實(shí)施方案，在第二輸注日期施用梗死區(qū)灌注改善量的含有至少0. 5x IO6 個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞，其包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有0. IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少5天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少6天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少7天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少8天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少9天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案， 該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少10天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少11天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少12天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少13天。 根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少14天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少15天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少16天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少17天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少18天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少19天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少20天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少21天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少22天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少23天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少M(fèi) 天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少25天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少26天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少27天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少觀天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少四天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少30天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少31天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少32天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少33天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少34天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少 35天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少36天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少37天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案， 該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少38天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少39天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少40天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少45天。 根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少50天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少陽(yáng)天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少60天。 根據(jù)一些實(shí)施方案，在第三輸注日期施用梗死區(qū)灌注改善量的趨化造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有0. IO6 個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案， 該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少30天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少31天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少32天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少33天。 根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少34天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少35天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少36天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少37天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少38天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少39天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少40天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少45天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少50天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少55天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少60 天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少61天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少62天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少63天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少64天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少65天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少66天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少67天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少68天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少69天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少70天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少 75天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少80天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少85天。根據(jù)一些此類(lèi)實(shí)施方案， 該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少90天。在一些實(shí)施方案中，用于將本發(fā)明的藥物組合物遞送至有需要的受治療者體內(nèi)的遞送裝置包含輸注注射器、沖洗注射器、四通旋塞閥、以及球囊導(dǎo)管。在一種實(shí)施方案中， 該遞送裝置包含(a)與無(wú)菌四通旋塞閥連接的輸注設(shè)備，其含有包含趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的藥物組合物；(b)與該無(wú)菌四通旋塞閥連接的沖洗設(shè)備，該沖洗設(shè)備含有沖洗溶液；以及(c)通過(guò)該無(wú)菌四通旋塞閥與該遞送裝置連接的導(dǎo)管。根據(jù)一種實(shí)施方案，該輸注設(shè)備是由任何合適材料制得的注射器。合適四通旋塞閥的本體和把手可由相同或不同的材料制得。合適的四通旋塞閥的實(shí)例包括但不限于具有聚碳酸酯本體/聚碳酸酯把手的旋塞閥， 具有聚乙烯本體/聚乙烯把手的旋塞閥，具有聚碳酸酯本體/聚乙烯把手的旋塞閥，或一次性旋塞閥。在另一種實(shí)施方案中，還有一設(shè)備與該旋塞閥連接以調(diào)節(jié)施加于遞送溶液上的壓力。在一些實(shí)施方案中，將集成的沖洗裝置或注射器與該旋塞閥連接。在一種實(shí)施方案中，該導(dǎo)管是球囊導(dǎo)管。術(shù)語(yǔ)“球囊導(dǎo)管”是指一類(lèi)“軟”的薄的可彎曲管，其在其頂部具有可膨脹的“球囊”，所述球囊在導(dǎo)管插入術(shù)期間用于擴(kuò)大體內(nèi)狹窄的開(kāi)口或通道。放置泄氣的球囊導(dǎo)管，使其膨脹以完成需要的步驟，然后再次泄氣以便移出。本發(fā)明的包含潛能⑶34+CXCR-4+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的生存力和潛在功效取決于當(dāng)細(xì)胞通過(guò)導(dǎo)管時(shí)維持它們的潛能。在本發(fā)明方法中使用的導(dǎo)管具有至少 0. 36mm的內(nèi)直徑。具有至少0. 36mm內(nèi)直徑的任何類(lèi)型的導(dǎo)管在遞送本發(fā)明的藥物組合物中均可能是有效的。
例如，使得通過(guò)冠狀動(dòng)脈系統(tǒng)的血流排放變慢的流量控制導(dǎo)管可以給細(xì)胞時(shí)間以通過(guò)血管壁并進(jìn)入組織。在一些實(shí)施方案中，該導(dǎo)管是球囊導(dǎo)管。例如，但不限于，已驗(yàn)證了以下導(dǎo)管可從 Cordis、Boston Scientific、Medtronic 和 Guidant 獲得的、具有約 0. 36mm 內(nèi)直徑的球囊擴(kuò)張導(dǎo)管(參見(jiàn)表1)。表1 已證實(shí)可用于通過(guò)IRA輸灃所詵擇的⑶3驢細(xì)胞的球囊導(dǎo)管
生產(chǎn)商名稱(chēng)和型號(hào)球嚢直徑腔內(nèi)直徑CordisRaptor OTW 579-13015 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)Boston ScientificOTW Maverick 20620-153015 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)MedtronicOTW Sprinter SPR3015W15 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)GuidantVoyager OTW 1009443-1515 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)此外，還描述了這樣的導(dǎo)管，其具有與球囊相鄰的液體遞送出口，從而使得該球囊可抗血管壁而膨脹，從而從與球囊相反的血流動(dòng)力學(xué)將遞送位點(diǎn)與該出口分離，其可能位于球囊遠(yuǎn)端。此外，已公開(kāi)了這樣的球囊導(dǎo)管，其具有在位于球囊導(dǎo)管近側(cè)的側(cè)孔中終結(jié)的腔，這些球囊導(dǎo)管可一般地稱(chēng)為“球囊/遞送”導(dǎo)管，盡管具體的文獻(xiàn)可能使用不同的描述語(yǔ)。參見(jiàn)，例如firman的美國(guó)專(zhuān)利5，415，636號(hào)，其在此通過(guò)引用并入本文。在一些實(shí)施方案中，治療或修復(fù)在由天然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后的梗死區(qū)損傷的方法包括通過(guò)球囊導(dǎo)管血管內(nèi)地(意思是在血管內(nèi))將梗死區(qū)灌注改善藥物組合物遞送至梗死的動(dòng)脈中。在一些實(shí)施方案中，在血管修復(fù)術(shù)之后，將遞送球囊導(dǎo)管通過(guò)股動(dòng)脈插入需要的冠狀動(dòng)脈中，諸如冠狀動(dòng)脈左前降支。一些醫(yī)學(xué)病癥可能不僅需要球囊導(dǎo)管而且也需要流體遞送導(dǎo)管兩者以幫助治療。在一些實(shí)施方案中，使用導(dǎo)管將細(xì)胞直接注射至心肌。在提供數(shù)值范圍的情況下，除非文中另外明確指明，應(yīng)當(dāng)理解為在該范圍及任一其他所描述范圍的上限和下限之間的每一個(gè)中間值，到下限單位的十分之一，或在所描述范圍內(nèi)的中間值均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。被獨(dú)立地包括在這些較小范圍內(nèi)的這些范圍的上限和下限也都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在所描述的范圍內(nèi)可以有任何明確排除的界限。 當(dāng)所描述的范圍包括一個(gè)或者兩個(gè)界限時(shí)，排除這些所包括的界限的兩者中任一個(gè)的范圍也包括在本發(fā)明中。除非另有說(shuō)明，在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的那樣，具有相同的含義。盡管任何與本文中所述的那些類(lèi)似或等同的方法和材料也可用在本發(fā)明的實(shí)施和試驗(yàn)中，但現(xiàn)在對(duì)優(yōu)選的方法和材料進(jìn)行描述。在本文中所提及的所有公開(kāi)出版物通過(guò)引用的方式并入本文，以結(jié)合引用的公開(kāi)出版物披露和描述這些方法和/或材料。在本文和所附權(quán)利要求書(shū)中使用的單數(shù)形式“一”以及“該”包括復(fù)數(shù)個(gè)指示對(duì)象， 除非上下文明確地以其他方式指出。在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有相同的含義。在本文中引用的每一個(gè)參考文獻(xiàn)均通過(guò)引用以其全文并入本文。本文中討論的公開(kāi)出版物的提供僅是因?yàn)樗鼈児_(kāi)于本發(fā)明的申請(qǐng)日之前。本文中并沒(méi)有內(nèi)容可理解為承認(rèn)本發(fā)明由于在先發(fā)明而不能早于這樣的出版物。此外，所提供的
公開(kāi)日也可能不同于需要獨(dú)立核實(shí)的實(shí)際
公開(kāi)日。
實(shí)施例提出以下實(shí)施例，以便給本領(lǐng)域技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明的完全的公開(kāi)和描述，并且不旨在限制發(fā)明人所認(rèn)為的其發(fā)明的范圍，而且它們也不代表以下實(shí)驗(yàn)為所實(shí)施的全部或唯一的實(shí)驗(yàn)。已努力地保證所使用的數(shù)值(例如，量、溫度等)的精確，但需要計(jì)及一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另外指出，份數(shù)是按重量計(jì)的份數(shù)，分子量是重均分子量，溫度是攝氏度，以及壓力是或近似大氣壓。I期臨床試驗(yàn)方案實(shí)施例1.合適受治療者的選擇具有暗示患心肌梗死的癥狀和臨床發(fā)現(xiàn)的受治療者/患者根據(jù)機(jī)構(gòu)指南接受急診診斷和臨床管理。如果確認(rèn)透壁(意思是穿過(guò)壁)性心肌梗死，則記錄首個(gè)癥狀的時(shí)間， 以及成功放置支架的時(shí)間。血運(yùn)重建的受治療者根據(jù)機(jī)構(gòu)指南接受恰當(dāng)?shù)尼t(yī)療管理，以降低心室壁應(yīng)力。在這一實(shí)施方案中使用的術(shù)語(yǔ)“血運(yùn)重建”是指成功地放置支架。包括藥物洗脫支架(例如，紫杉醇或西羅莫司)在內(nèi)的所有類(lèi)型的支架均可用于梗死相關(guān)動(dòng)脈的血運(yùn)重建。應(yīng)用球囊導(dǎo)管以輸注細(xì)胞產(chǎn)物的之前的研究稱(chēng)，對(duì)于用于放置支架的參考血管直徑?jīng)]有限制。由于這一研究是用來(lái)將細(xì)胞產(chǎn)物分散至IRA循環(huán)中，并且試圖限制損傷非常小的血管的可能性，因此本發(fā)明要求在輸注本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物之前放置支架。與支架相關(guān)的藥物作用主要在該支架與血管壁接觸的部位發(fā)生。隨著球囊擴(kuò)張， 有限的血液在細(xì)胞輸注期間流過(guò)支架，并且因此預(yù)期對(duì)趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物中的CD34+ 細(xì)胞沒(méi)有顯著不利的藥物介導(dǎo)作用。此外，先前的臨床研究表明，在放置藥物洗脫支架后過(guò) 96小時(shí)，紫杉醇或西羅莫司的全血水平也低于檢測(cè)極限。因此，可以預(yù)料到，在所輸注的表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的⑶34+細(xì)胞將要遷移至此的心肌部位的組織水平是無(wú)關(guān)緊要的。參見(jiàn)，Sousa，J.等人，Circulation 107 :2274-79,2383-89(2003) 在血運(yùn)重建期間，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法評(píng)估受治療者的心功能和灌注。心肌梗死后心功能的相關(guān)測(cè)量包括評(píng)估總體射血分?jǐn)?shù)、心室容積、靜止灌注以及梗死面積。術(shù)語(yǔ)“射血分?jǐn)?shù)”(“EF”)是指在收縮期間從心室排空的血液的百分?jǐn)?shù)。更具體地說(shuō)，其為每一次搏動(dòng)射出的舒張期末容積的百分?jǐn)?shù)，即，其為每搏量(SV)除以舒張期末容積(EDV)。在緊位于收縮之前的心室中的血液容量被稱(chēng)為舒張期末容積，而在收縮結(jié)束時(shí)心室中剩余的血液容量被稱(chēng)為收縮期末容積。舒張期末容積和收縮期末容積之間的差是每搏量，即每一次搏動(dòng)射出的血液容量。在健康的70kg (IMlb)男性中，SV大約為70ml，并且左心室EDV是120ml，給出的射血分?jǐn)?shù)是70/120，或0. 58(58% )。認(rèn)為EF在55-60%的范圍內(nèi)是正常的。在有限的限度內(nèi)，右心室的射血分?jǐn)?shù)(“RVEF”)通常等于左心室的射血分?jǐn)?shù)(“LVEF，，)。心回波描記術(shù)、放射性核素掃描[例如，多門(mén)控采集掃描，其為評(píng)定心室、心腔的泵血功能和心臟收縮如何的核掃描]以及左心室造影術(shù)是左心室射血分?jǐn)?shù)(“LVEF”)的容易利用且精確的測(cè)量手段。已利用心回波描記術(shù)，通過(guò)采用雙平面面積長(zhǎng)度法確定收縮期末和舒張期末容積。在梗死后期間心功能的其他度量方法包括評(píng)估每搏量指數(shù)和周徑纖維縮短的速率。Strauer，等人，Circulation 106 :1913-18(2002) 每搏量(SV)是每次搏動(dòng)左心室射出的血量，以每搏毫升數(shù)(ml/搏)計(jì)量。通過(guò)將SV除以體表面積以產(chǎn)生心搏指數(shù)(Si)，可根據(jù)患者的身體大小為SV加索引。對(duì)梗死心肌的修復(fù)的評(píng)估還包括應(yīng)用鉈閃爍造影法評(píng)定梗死周?chē)鷧^(qū)域灌注。同上。磁共振成像(MRI)是這一設(shè)定當(dāng)中評(píng)估心功能和活力(梗死面積)的一種有用工具。參見(jiàn) Yin，A，等人，Blood 90:5002-5012(1997)。在成功放置支架后的第二天，對(duì)受治療者進(jìn)行研究合格性評(píng)估，在合適的情況下， 使其知情同意參與到研究中。出院前，對(duì)在成功放置支架前表現(xiàn)出癥狀不超過(guò)三C3)天的受治療者進(jìn)行研究合格性的評(píng)估。對(duì)于發(fā)現(xiàn)符合合格標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)后)的受治療者，使其知情同意參與。同意的受治療者在放置支架后不早于96小時(shí)進(jìn)行研究進(jìn)入心回波描記術(shù)。受治療者如果滿足以下條件則有資格繼續(xù)進(jìn)行研究(i)根據(jù)心回波描記術(shù)，LVEF小于或等于 50%，以及(ii)在IRA中觀察到節(jié)段性心室壁異常。合格的受治療者立即完成基線心功能和灌注評(píng)定。具體地說(shuō)，基線心功能包括在靜止時(shí)以及在低劑量多巴酚丁胺的情況下的經(jīng)胸廓心回波描記術(shù)，以評(píng)估心功能，包括射血分?jǐn)?shù)、收縮期末和舒張期末容積、以及壁運(yùn)動(dòng)評(píng)分指數(shù)和活力。心回波描記術(shù)。在放置支架后4天，采用心肌對(duì)比心回波描記術(shù)進(jìn)行研究篩查，以識(shí)別具有左心室功能不良的患者 (心回波描記的射血分?jǐn)?shù)< 50% )。心臟灌灃。在基線時(shí)及6個(gè)月后，在靜止?fàn)顟B(tài)且在靜脈內(nèi)注射腺苷之后，采用常規(guī)的锝(Tc-99m)塞斯米比(kstamibi)放射性核素掃描評(píng)估灌注。采用靜態(tài)單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)化斷層成像(SPECT)作為靜態(tài)總嚴(yán)重性得分(RTSS)來(lái)判斷灌注缺損大小。應(yīng)用Emory Cardiac Toolbox來(lái)進(jìn)行圖像量化；評(píng)估使用17-段模型。核心審查實(shí)驗(yàn)室通過(guò)對(duì)研究隊(duì)列不知情的解釋者來(lái)評(píng)估該灌注研究。以半定量的用語(yǔ)(是/否)來(lái)表達(dá)灌注的改善。將觀察到具有灌注改善的受治療者的百分比在劑量隊(duì)列中進(jìn)行比較。MSI。在基線、3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，對(duì)所有入選的受治療者進(jìn)行釓增強(qiáng)的心臟磁共振成像(MRI)，以評(píng)定左心室收縮期末和舒張期末容積(LVESV和LVEDV)、左心室射血分?jǐn)?shù) (LVEF)以及梗死面積。受治療者在掃描期間接受釓對(duì)比。MRI掃描采用屏氣技術(shù)。如釓成像那樣進(jìn)行穩(wěn)態(tài)進(jìn)動(dòng)成像，以獲得完全的和部分LV功能。應(yīng)用AHA/A VV17-段模型報(bào)告左心室收縮和舒張期末容積、LVEF、LV舒張期末大小、梗死區(qū)收縮期和舒張期中的壁厚、以及梗死面積大小，其中梗死的透壁程度被報(bào)道為< 25 %、沈％ -50 %、51 % -75 %和> 76 %。核心審查實(shí)驗(yàn)室通過(guò)對(duì)研究隊(duì)列不知情的解釋者來(lái)評(píng)估MRI。選擇用于這一研究的受治療者必須符合所有以下臨床標(biāo)準(zhǔn)(“包涵標(biāo)準(zhǔn)”) 年齡18-75 歲 符合ACC/AHA標(biāo)準(zhǔn)的急性ST段升高心肌梗死，具有在入院前3天內(nèi)胸痛的癥狀。這些標(biāo)準(zhǔn)包括(在肢體導(dǎo)聯(lián)中，ST升高> 1mm，或者在兩個(gè)或多個(gè)心前區(qū)導(dǎo)聯(lián)中，ST升高> 2mm，以及升高的肌鈣蛋白、肌酸激酶MB (CPK MB)或其兩者的水平)，I、II或III級(jí)的紐約心臟病學(xué)會(huì)(NYHA)心臟衰竭分類(lèi)(待記錄的)。 可進(jìn)行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(PCI)； 可進(jìn)行 MRI; 可進(jìn)行單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)成像； 在檢查了入院心回波描記術(shù)后能夠足以評(píng)估心臟參數(shù)的心回波描記術(shù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)論。 研究進(jìn)入心回波描記術(shù)[放置支架后96至144小時(shí){即，約4天至約6天}]， 根據(jù)心回波描記術(shù)LVEF小于或等于50%，以及在再灌注后通過(guò)心回波描記術(shù)在IRA循環(huán)中的節(jié)段性心室壁異常； 受治療者必須能夠提供知情的書(shū)面同意書(shū)，而且必須愿意參與所有要求的研究隨訪評(píng)定； 在骨髓采集的前一天，受治療者必須具有血紅蛋白含量(Hgb) > 10克/dL、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC) > 3500個(gè)細(xì)胞/mm3、血小板計(jì)數(shù)> 100，000個(gè)細(xì)胞/mm3，以及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率(INR，凝血試驗(yàn))< 2.0 ； 在骨髓采集的7天之內(nèi)，受治療者必須具有血清肌酸酐< 2. 5、總膽紅素 < 2. 0 ； 當(dāng)在超過(guò)一個(gè)血管中存在疾病時(shí)，IRA和靶病變必須是已可以清楚辨認(rèn)的； 成功地再灌注和冠狀動(dòng)脈內(nèi)放置支架，并且在血運(yùn)重建后心肌梗死溶栓 (TIMI)2或3級(jí)血流，以及IRA具有< 20%的狹窄； 受治療者必須已經(jīng)被認(rèn)為適宜接受清醒鎮(zhèn)靜、小量骨髓采集以及用于趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物輸注的第二次導(dǎo)管插入術(shù)； 必須記錄了所用支架的類(lèi)型、插入的時(shí)間和日期；藥物洗脫支架僅限于紫杉醇或西羅莫司類(lèi)型； 包括的受治療者必須具有至少一年的預(yù)期存活期，并且在血運(yùn)重建后必須不患有多種血管疾病，或者不預(yù)期在研究進(jìn)入的6個(gè)月內(nèi)需要介入；滿足以下任意一個(gè)條件的受治療者是不合格的，并且從本研究中排除(“排除標(biāo)準(zhǔn)”) 受治療者不是經(jīng)皮介入、清醒鎮(zhèn)靜、MRI、SPECT成像或小量骨髓采集的候選者； 有在血運(yùn)重建前4天或更多天發(fā)生不能通過(guò)硝酸鹽緩解持續(xù)胸痛的病史； 再灌注梗死相關(guān)冠狀動(dòng)脈失敗的受治療者，或放置支架失敗的受治療者； 在入院心回波描記術(shù)檢查后，心回波描記術(shù)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)論是該研究不足以評(píng)估心臟參數(shù)；
表現(xiàn)出心原性休克的受治療者(在采用血管升壓藥或主動(dòng)脈內(nèi)反搏法時(shí)收縮壓< 80)； 具有> 2mm的靶損傷側(cè)支，并且在血運(yùn)重建后具有> 50%直徑狹窄的門(mén)口狹窄的受治療者； 不能接受阿司匹林、氯吡格雷或噻氯匹定的受治療者； 接受丙酮芐羥香豆素的受治療者必須具有小于或等于2的INR[術(shù)語(yǔ)INR是指 INR國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率，其為由世界衛(wèi)生組織(WHO)和國(guó)際血栓形成和止血委員會(huì)建立的系統(tǒng)，用于報(bào)告凝血(凝固)試驗(yàn)的結(jié)果]； 具有嚴(yán)重主動(dòng)脈狹窄的受治療者； 具有嚴(yán)重免疫缺陷狀態(tài)(例如，AIDS)的受治療者； 需要積極的醫(yī)療管理的肝硬化的受治療者； 具有需要積極療法的患惡性腫瘤(基底細(xì)胞皮膚癌除外)的受治療者； 具有有記錄的活潑醇和/或其他物質(zhì)濫用的受治療者； 可能懷孕的女性，除非在小量骨髓采集的7天內(nèi)妊娠試驗(yàn)為陰性； 根據(jù)研究進(jìn)入心回波描記術(shù)，具有超過(guò)50%射血分?jǐn)?shù)的受治療者(放置支架后 96至144小時(shí))； 在加索引程序后經(jīng)歷少于三個(gè)月的計(jì)劃抗血小板療法的受治療者； 在血運(yùn)重建后具有多血管疾病、在接下來(lái)的6個(gè)月期間需要隨后的計(jì)劃介入的受治療者； 參與正在進(jìn)行的研究實(shí)驗(yàn)的受治療者； 具有活性細(xì)菌感染、需要全身性抗生素的受治療者。在所計(jì)劃的小量骨髓采集和趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的輸注的前一天獲得心功能和心臟灌注的初始期評(píng)估(參見(jiàn)下文)。在初始期評(píng)估心功能和心臟灌注后的第二天進(jìn)行小量骨髓采集(“MMH”)。實(shí)施例2.心導(dǎo)管插入術(shù)無(wú)菌準(zhǔn)備和鋪巾在研究者獲得知情同意之后，將每一受治療者帶入心導(dǎo)管插入術(shù)實(shí)驗(yàn)室。受治療者在心導(dǎo)管插入術(shù)實(shí)驗(yàn)室接受無(wú)菌準(zhǔn)備和鋪巾。心導(dǎo)管插入術(shù)應(yīng)用右或左腹股溝通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得脈管通路。將護(hù)套置于股動(dòng)脈或者右或左肱動(dòng)脈。通過(guò)獲得右和左冠狀動(dòng)脈的標(biāo)準(zhǔn)視野進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影檢查。獲得多個(gè)視圖，以識(shí)別之前放置支架的梗死相關(guān)動(dòng)脈。所有受治療者在導(dǎo)管插入術(shù)期間根據(jù)操作規(guī)程接受標(biāo)準(zhǔn)藥物。實(shí)施例3 獲得可富集CD34+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的獲得方法盡管可以想到任何適于獲得包含潛能⑶34+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的獲得方法均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，但是以下實(shí)施例描述了在本文中稱(chēng)為小量骨髓采集技術(shù)的這樣一種方法。采集注射器的準(zhǔn)備在骨髓采集之前，在無(wú)菌條件下準(zhǔn)備40個(gè)IOcc注射器，這些注射器裝載約2ml無(wú)防腐劑的肝素化鹽水溶液(約100單位/ml至約125單位/ml，APP貨號(hào)42592B或等同物)。在從每一個(gè)袋子中移除IOcc至12. 5cc生理鹽水后，通過(guò)無(wú)菌端口將肝素注射到兩個(gè) IOOml袋的無(wú)菌0. 9%生理鹽水溶液(“生理鹽水”，Hospira貨號(hào)7983-09或等同物)的每一個(gè)中，產(chǎn)生約100單位/ml (U/ml)至約125單位/ml (U/ml)的肝素終濃度。在無(wú)菌條件下將2ml無(wú)防腐劑的肝素溶液(約100U/ml至約125U/ml)裝載到這40個(gè)IOcc注射器的每一個(gè)中，然后加蓋并置于無(wú)菌袋中，用于運(yùn)輸至采集場(chǎng)所。在如實(shí)施例1中詳細(xì)描述的那樣獲得書(shū)面知情同意后，受治療者接受骨髓采集準(zhǔn)備。采用標(biāo)準(zhǔn)的機(jī)構(gòu)程序和指南提供清醒鎮(zhèn)靜。在無(wú)菌條件下進(jìn)行骨髓采集。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“無(wú)菌條件”包括適當(dāng)?shù)南礈?，以及采集醫(yī)生和助手穿戴具有無(wú)菌面罩的手術(shù)服和手套。采集過(guò)程可在手術(shù)室外邊進(jìn)行，該過(guò)程如下進(jìn)行在消毒準(zhǔn)備和鋪巾后，用利多卡因溶液，以每一嵴最少I(mǎi)Oml的方式對(duì)每一髂嵴進(jìn)行麻醉。麻醉區(qū)是直徑不超過(guò)IOcm的環(huán)形區(qū)。插入采集針頭，直到穿刺髂嵴。移除蓋帽和管心針，并將2ml骨髓采集至含有aiil 肝素溶液的IOml采集注射器中。然后，將注射器移除并置于無(wú)菌區(qū)域。在重新插入管心針后，輕微地向前推動(dòng)采集針頭并隨后旋轉(zhuǎn)90°。此后，移除管心針，并將2ml附加的骨髓抽吸到從無(wú)菌區(qū)域取回的采集注射器中。這一過(guò)程重復(fù)兩次以上，直到該采集注射器含有8ml 骨髓，此時(shí)肝素化骨髓總共10ml，肝素終濃度為約20U/ml至約25U/ml。最后，將滿的采集注射器遞交給采集助手，并進(jìn)行搖動(dòng)，以及如下所述的那樣輸注到無(wú)菌采集袋中。采集醫(yī)生隨后采用之前用肝素溶液沖洗的其他采集針頭，并重復(fù)這一過(guò)程。如下所述地將滿的采集注射器輸注到無(wú)菌采集袋中。采集助手手持滿的采集注射器，并通過(guò)一個(gè)裝在袋子上的無(wú)菌接頭將該注射器排空至500ml采集袋中。然后，用肝素溶液沖洗采集針頭，并將其放回?zé)o菌區(qū)域。在一個(gè)髂嵴上重復(fù)該采集過(guò)程，直到收集了約19個(gè)注射器并倒入采集袋中。在另一髂嵴上重復(fù)相同的過(guò)程，直到另外大約19個(gè)注射器被充滿。從兩個(gè)髂嵴獲得總共38個(gè) 8ml吸出物(理想的是從每一髂嵴獲得19個(gè))，得到在380ml終體積中采集的302ml骨髓， 肝素濃度為約20U/ml至約25U/ml。通過(guò)結(jié)扎連接管3次并隨后將末端夾緊在結(jié)上來(lái)密封采集袋。將袋子適當(dāng)?shù)貥?biāo)記 “人骨髓采集物”，并在Mayo Clinical Risk Score (MCRS)病歷報(bào)告表上記錄采集過(guò)程的結(jié)果，包括采集的最終體積以及任何手術(shù)相關(guān)的并發(fā)癥。將完整的標(biāo)簽固定在骨髓袋上。隨后，將該袋子置于待運(yùn)送至處理實(shí)驗(yàn)室的無(wú)菌運(yùn)送袋中。實(shí)施例4 用于運(yùn)輸?shù)墓撬璁a(chǎn)物的制備在一個(gè)實(shí)施方案中，如下所述地將采集的骨髓輸送至處理實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)準(zhǔn)備臨床場(chǎng)所以運(yùn)送骨髓制備物時(shí)，給處理實(shí)驗(yàn)室提供M小時(shí)的預(yù)先通告。處理實(shí)驗(yàn)室對(duì)于在當(dāng)天遞送至該處理實(shí)驗(yàn)室、在盡可能最早的時(shí)間對(duì)獲取做好運(yùn)輸安排。在收集骨髓之后，立即將該骨髓產(chǎn)物置于提供的運(yùn)輸容器中。該運(yùn)輸容器包括在底部的兩小塊冷凍濕冰以及在濕冰頂部的一片氣泡包裝膜(bubble wrap) 0將骨髓產(chǎn)物置于第二袋中，并將該第二袋置于氣泡包裝膜的頂部。將溫度特征監(jiān)測(cè)器(用于監(jiān)測(cè)內(nèi)部溫度的傳感器)固定在盒子的內(nèi)部。然后，在密封該運(yùn)輸容器之前，將另一層氣泡包裝膜置于產(chǎn)物的頂部。實(shí)施例5 從采集的骨髓產(chǎn)物中選擇⑶34+細(xì)胞
從采集的骨髓產(chǎn)物中分離CD34+細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，如在美國(guó)專(zhuān)利 5，536，475,5，035，994,5，130，144,4，965，204,5，968，753,6，017，719,6，251，295, 5，980，887,6, 676，937、美國(guó)公開(kāi)申請(qǐng) No. 2003/0232050 和 Isolex 300 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(以上的每一篇文件均在此通過(guò)引用并入本文)中所描述的那樣，應(yīng)用Isolex 300i磁細(xì)胞選擇系統(tǒng)(Baxter Healthcare Corp.貨號(hào) 4R9734)的抗 CD34 單克隆抗體(Mab)、Dynabeads M-450羊抗小鼠IgG、以及冊(cè)34+( )干細(xì)胞釋放劑成分分離⑶34+細(xì)胞。這一操作系統(tǒng)適于從根據(jù)本發(fā)明的骨髓分離CD34+細(xì)胞。在到達(dá)處理實(shí)驗(yàn)室后，立即檢查收集的骨髓產(chǎn)物(在收集袋中)，并檢查袋子是否有任何泄漏。采集物應(yīng)當(dāng)可以自由流動(dòng)，沒(méi)有視在團(tuán)塊，并且應(yīng)當(dāng)沒(méi)有發(fā)生溶血。如果袋子的完整性以任何方式受到破壞，則不使用該采集物。在檢查后約12小時(shí)至約M小時(shí)內(nèi)處理骨髓產(chǎn)物。獲得300ml或400ml轉(zhuǎn)移包裝容器，并將血漿轉(zhuǎn)移設(shè)備與該容器的取樣端口連接。將骨髓產(chǎn)物從收集袋中轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移包裝容器。通過(guò)顛倒該容器二十00)次，徹底地混合匯集的骨髓采集產(chǎn)物。然后，取樣該匯集的骨髓采集產(chǎn)物，以用于分析。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，總共移除 2. Oml體積的產(chǎn)物，并且按如下所述地分樣0. 3ml用于一式兩份地應(yīng)用血液分析儀進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC) ；0. 2ml被分配至75x100mm玻璃試管中，以用于通過(guò)革蘭氏染劑檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌(革蘭氏染劑盒，VWR，貨號(hào)BB231401)；作為無(wú)菌檢查，將0. 6ml 分配至胰蛋白酶豆胨培養(yǎng)液(Tryptic Soy Broth(TSB)) (VWR，貨號(hào)四446_184)瓶中，用于需氧細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定；將0. 6ml分配至液態(tài)巰基乙酸培養(yǎng)基(FTM) (VWR貨號(hào)四446_138)瓶中，用于厭氧細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定；以及將0. 3ml用于流式分析CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞生存力。在電子秤上稱(chēng)重收集物，并且記錄收集袋的適當(dāng)?shù)钠ぶ?。骨髓產(chǎn)物的體積與產(chǎn)物重量之間的關(guān)系可表達(dá)為體積(ml)=[產(chǎn)物重量(gm)-袋子皮重(gm)] +1. 06 (gm/ml)(式 I)應(yīng)用從CBC獲得的白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)，根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算骨髓產(chǎn)物中總有核細(xì)胞 (TNC)的數(shù)量TNC = WBC/ μ 1 χ IOOOx 產(chǎn)物體積(ml) (式 2)根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算骨髓產(chǎn)物中⑶34+細(xì)胞的個(gè)數(shù)骨髓產(chǎn)物中總的⑶34+細(xì)胞=⑶34+細(xì)胞數(shù)/ μ 1 χ 1，OOOx產(chǎn)物體積(ml) (式3)根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算骨髓收集產(chǎn)物的紅細(xì)胞(RBC)體積RBC體積(ml)=產(chǎn)物體積(ml) χ紅細(xì)胞比容(% )/100 (式4)在最初計(jì)算RBC體積后，包裝骨髓產(chǎn)物并在20°C以IOOg離心20分鐘，制動(dòng)設(shè)定為“關(guān)”。離心后，從離心機(jī)中小心地移出骨髓容器，并懸掛在具有朝下的取樣端口的100級(jí)生物安全櫥柜中。小心地將血漿轉(zhuǎn)移設(shè)備置于袋子的中間取樣端口中，并將RBC級(jí)分抽吸到注射器中。用其他新的注射器重復(fù)這一過(guò)程，直到將剩余的RBC從MMH中移除。從洗滌程序中制備MMH，該程序首先是在20°C以1，OOOg離心10分鐘，其中制動(dòng)為“關(guān)”，隨后是血漿擠壓，所有均為在PBS基洗滌緩沖溶液[在PBS (無(wú)Ca++和Mg++)中1 %的HSA和0. 41 % 的檸檬酸鈉(w/v)](其在這一過(guò)程的早些時(shí)候制備)中的洗滌做準(zhǔn)備。在添加洗滌緩沖液后，再次使細(xì)胞在20°C以1，OOOg離心10分鐘，其中制動(dòng)處于“關(guān)”位置。在這次(最后)離心之后，應(yīng)用血漿擠壓器擠壓細(xì)胞，移除上清液，并使用60ml注射器將150ml PBS洗滌溶液轉(zhuǎn)移至該產(chǎn)物袋中。通過(guò)人工按壓使壓緊的細(xì)胞重懸浮。在這一洗滌過(guò)程之后，如下所述地計(jì)算RBC減損和有核細(xì)胞(NC)回收。根據(jù)以下關(guān)系確定消耗了 RBC的骨髓產(chǎn)物中的 TNC 消耗了 RBC的產(chǎn)物中的總TNC =消耗了 RBC的產(chǎn)物中的WBC/μ 1 χ IOOOx RBC 消耗掉的MMH體積(ml)(式5)根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算消耗了 RBC的產(chǎn)物的TNC回收率，其必須至少是初始產(chǎn)物計(jì)數(shù)的 80% TNC回收率=消耗了 RBC的產(chǎn)物的TNC+未經(jīng)處理產(chǎn)物的TNC χ 100 % (式6)如上所述地計(jì)算總RBC ；在消耗了 RBC的產(chǎn)物中RBC體積應(yīng)當(dāng)< 20ml。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，根據(jù)以下處理步驟，應(yīng)用Isolex 300 系統(tǒng)處理消耗了 RBC的產(chǎn)物或骨髓產(chǎn)物，其RBC體積< 20ml (i)自動(dòng)地洗滌骨髓，以移除血小板；(ii)特異性地標(biāo)記CD34陽(yáng)性_4+)細(xì)胞，以通過(guò)與Isolex 300i CD34單克隆抗體(Mab)溫育而進(jìn)行選擇；(iii)通過(guò)用緩沖溶液洗滌細(xì)胞懸液而移除未結(jié)合的試劑；(iv)通過(guò)Dynabeads M-450羊抗小鼠IgG捕獲致敏的CD34+細(xì)胞(意思是用 CD34Mab標(biāo)記的CDiM+細(xì)胞)；(ν)采用選擇柱將已捕獲⑶34+細(xì)胞的磁標(biāo)記Dynabeads與不想要的細(xì)胞分開(kāi)，所述不想要的細(xì)胞被從選擇柱中洗脫并被收集在陰性級(jí)分袋中；以及(vi)PR34+干細(xì)胞釋放劑將⑶34+細(xì)胞從所述柱上釋放，并將該⑶34+細(xì)胞收集于終產(chǎn)物袋中。該系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)次洗滌步驟，將多數(shù)液體處置在緩沖液廢物袋中。如下地分析Isolex 選擇的⑶34+細(xì)胞級(jí)分，以確定WBC和⑶34+細(xì)胞產(chǎn)量。通過(guò)在終產(chǎn)物袋中混合細(xì)胞而確定⑶34陽(yáng)性級(jí)分的體積；用手輕柔地按壓袋子，以確保細(xì)胞均勻地分布。將轉(zhuǎn)移設(shè)備插入終產(chǎn)物袋的取樣端口，并連接一個(gè)60ml注射器。將細(xì)胞懸液抽入注射器中(一次最多50ml)，以便測(cè)量總體積。使用3ml或5ml注射器，以通過(guò)轉(zhuǎn)移設(shè)備從終產(chǎn)物袋中移出2. Oml樣本，用于質(zhì)量控制測(cè)試。樣本的等分體積以及對(duì)這些樣本進(jìn)行的分析如之前所述，即CBC 0. 3ml ；革蘭氏染色0. 3ml ；CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞生存力0. 2mL·根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算⑶34陽(yáng)性級(jí)分的總TNC陽(yáng)性級(jí)分的總TNC = WBC/ μ 1陽(yáng)性級(jí)分χ IOOOx陽(yáng)性級(jí)分體積(式7)根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算陽(yáng)性級(jí)分的TNC回收率，其必須少于初始產(chǎn)物計(jì)數(shù)的5% TNC回收率=陽(yáng)性級(jí)分的總TNC+未經(jīng)處理產(chǎn)物的總TNC xlOO % (式8)根據(jù)以下關(guān)系確定陽(yáng)性級(jí)分中有活力的CD34+細(xì)胞的總數(shù)陽(yáng)性級(jí)分中的總⑶34+細(xì)胞=終產(chǎn)物的⑶34+細(xì)胞數(shù)/ μ 1 χ 1，OOOx終產(chǎn)物體積 (ml) (式 9)根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算陽(yáng)性級(jí)分的CD34+細(xì)胞回收率
⑶34+細(xì)胞回收率=陽(yáng)性級(jí)分中的總⑶34+細(xì)胞+未經(jīng)處理產(chǎn)物的總⑶34+細(xì)胞 χ 100% (式 10)實(shí)施例6 制備選擇的⑶34+細(xì)胞用于輸入移出趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物的樣本，以通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法(用于⑶34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和生存力)、革蘭氏染色和無(wú)菌度而進(jìn)行用于測(cè)試WBC計(jì)數(shù)。CD34+細(xì)胞通過(guò)用抗 CD34 和抗 CD45 抗體(Beckman Coulter，PNIM3630)進(jìn)行雙標(biāo)記來(lái)表征⑶34 和⑶45 熒光性的流式細(xì)胞檢測(cè)分析來(lái)表征。通過(guò)排除那些攝取嵌入的DNA染料7-氨基放線菌素D(7AAD)的垂死細(xì)胞，可確定⑶34+細(xì)胞和⑶45+細(xì)胞的生存力。參見(jiàn) Brocklebank AM, Sparrow RL. Cytometry. 2001 ；46 :254-261 (2001) ；Barnett D 等 A, Br. J Haematol. 106 :1059-1062(1999) ；Sutherland,等人，J Hematotherapy 5 :213-226(1996)，以及美國(guó)專(zhuān)利 No. 4，520，110,4, 859，582,5, 055，556 ；歐洲專(zhuān)利 No. 76. 695 ；加拿大專(zhuān)利 No. 1，179，942 (ΡΕ, APC)；美國(guó)專(zhuān)利 No. 4，876，190PerCP)；美國(guó)專(zhuān)利 No. 5，268，486、5，486，616、5，569，587、5，569，766、5，627，027(Cy)；美國(guó)專(zhuān)利 No. 4，714，680,4, 965，204,5, 035，994 (CD34)；美國(guó)專(zhuān)利 No. 5，776，709 (溶解 / 無(wú)洗滌方法)；美國(guó)專(zhuān)利No. 5，723，218和5，187，288 (TruCOUNTTubes)，這些文獻(xiàn)中的每一個(gè)的的全部?jī)?nèi)容均在此通過(guò)弓I用并入本文。任何流式細(xì)胞儀或等同設(shè)備均可用于進(jìn)行CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和生存力的分析。在一種實(shí)施方案中，處理實(shí)驗(yàn)室使用BDFACSCalibur(TM)流式細(xì)胞儀，并且采用BD FACSComp(TM)軟件來(lái)用于儀器設(shè)定和監(jiān)測(cè)。預(yù)先安裝模板和一組圖例標(biāo)記，以用于采樣和分析。在使用前，使試劑，即CD45FITC/CD;34PE、Stem-Count Fluorospheres、濃縮的氯化銨裂解液以及7AAD活力染料處于室溫。運(yùn)用CD34+細(xì)胞對(duì)照作為陽(yáng)性對(duì)照，以確認(rèn)該儀器被調(diào)定用于分析CD34+細(xì)胞，并將結(jié)果與生產(chǎn)商預(yù)先確定的CD34百分比范圍進(jìn)行比較。未處理的骨髓產(chǎn)物和經(jīng)Isolex 處理的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物可通過(guò)許多不同的方法進(jìn)行分析。在一種實(shí)施方案中，例如，如果樣本的WBC計(jì)數(shù)大于& IO7個(gè)細(xì)胞/ml， 則在獲得該樣本之后立即用鞘液稀釋該樣本，以達(dá)到約h IO7個(gè)WBC/ml的細(xì)胞計(jì)數(shù)。將 100 μ 1稀釋產(chǎn)物等分至兩個(gè)15x 100mm管中。應(yīng)用微量移液管，將20 μ 1⑶45FITC/⑶34ΡΕ 和7-AAD活力染料試劑加入到每一個(gè)管中，并輕微地渦旋振蕩樣本。用鋁箔覆蓋這些管，并置于室溫下15至20分鐘。通過(guò)往每一管中加入1. 5ml Ix裂解液、輕微渦旋振蕩，從而裂解 RBC0將管在室溫下避光溫育10分鐘。將樣本在約2°C至約8°C (即，在冰浴上)的條件下避光儲(chǔ)存，直到進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。必須在添加裂解緩沖液后1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。在數(shù)據(jù)采集之前，通過(guò)豎轉(zhuǎn)式方寵轉(zhuǎn)(end-over-end rotation) (10 次)使 Stem-Count Fluorospheres 重懸浮。將100 μ 1 Fluorospheres添加到每一管中，并且輕微地渦旋振蕩，小心地不產(chǎn)生氣泡。根據(jù)以下關(guān)系計(jì)算產(chǎn)物中的CD34+細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)每微升產(chǎn)物中有活力的⑶34+細(xì)胞數(shù)=IXD34x FAC(式 11)其中，LCD34是活CD34+/總CD45+事件的平均數(shù)，“FAC”是Fluorospheres測(cè)試的濃度；以及F是Fluorosphere單態(tài)計(jì)數(shù)的平均數(shù)量。計(jì)算CD34+陽(yáng)性級(jí)分的體積，以獲得所需給藥量需要的CD34+細(xì)胞的數(shù)量。需要的陽(yáng)性級(jí)分體積(ml)被定義為
所要求的⑶34+細(xì)胞劑量+(陽(yáng)性級(jí)分中每μ 1的總⑶34+細(xì)胞xl，000) (式⑵將合適數(shù)量的細(xì)胞分配至50ml圓錐管中，并以500g離心10分鐘。采用30ml血清移液管移除上清液并作為廢物處理，而在這一過(guò)程中小心操作以避免使在管底的細(xì)胞沉淀分散。將輸注溶液OOml)添加到CD34+細(xì)胞陽(yáng)性級(jí)分管中，并且利用IOml血清移液管通過(guò)重復(fù)吸移來(lái)分散細(xì)胞。使重懸的細(xì)胞在500g離心10分鐘。使用30ml血清移液管(在避免擾亂細(xì)胞沉淀的情況下)將上清液/輸注溶液轉(zhuǎn)移至帶有“陽(yáng)性部份上清液”標(biāo)簽的 50ml錐形管中。渦旋振蕩含有該上清液的管，以使該溶液均勻。使用IOml血清移液管將 IOml勻化的上清液轉(zhuǎn)移回CD34+細(xì)胞陽(yáng)性級(jí)分管中。上清液管中的剩余的IOml懸浮液用于無(wú)菌度測(cè)試(TSB(胰蛋白酶豆胨培養(yǎng)液)瓶和FTM(液態(tài)巰基乙酸鹽培養(yǎng)基)瓶各加入 5ml)。采取通過(guò)固定在IOml注射器(輸注注射器)上的鈍端針頭緩慢地抽吸數(shù)次的方式， 使CD34+細(xì)胞陽(yáng)性級(jí)分中的細(xì)胞重懸。將細(xì)胞懸液吸入注射器，抽出任何氣泡，并將鈍端針頭取下。將該輸注注射器裝在四通旋塞閥的注射端口上。僅在其滿足以下標(biāo)準(zhǔn)的情況下，才釋放本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物以用于輸注
至少約 70%、75%、80%、85%、90% 或 95% 的 CD34+細(xì)胞純度； 所選擇的陽(yáng)性級(jí)分的革蘭氏染色結(jié)果為陰性；·內(nèi)毒素水平少于約0. 5內(nèi)毒素單位/ml ； 該“趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物”中有活力的CD34+細(xì)胞產(chǎn)量符合按照治療隊(duì)列的需求劑量； 根據(jù) 7-AAD，CD34+細(xì)胞至少約 70%、75%、80%、85%、90%或 95%是有活力的；· “陽(yáng)性級(jí)分上清液”的USP無(wú)菌度結(jié)果陰性(14天后)；以及 在完成骨髓采集后約12至約M小時(shí)內(nèi)開(kāi)始骨髓⑶34+細(xì)胞選擇。在產(chǎn)物釋放以用于輸注之前，對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)物進(jìn)行無(wú)菌度評(píng)估，包括革蘭氏染色和內(nèi)毒素。進(jìn)行USP無(wú)菌度(細(xì)菌和真菌)培養(yǎng)，并將結(jié)果報(bào)告給首席研究員。在陽(yáng)性USP 無(wú)菌度結(jié)果的情況下，立即通知受治療者和待命主治醫(yī)師，當(dāng)可得到時(shí)提供該生物的鑒定和敏感性，并且由研究場(chǎng)所和發(fā)起人記錄適當(dāng)?shù)目刮⑸镏委煹奈募约爸委熃Y(jié)果。在符合這些釋放標(biāo)準(zhǔn)后，釋放趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物用于輸注，并進(jìn)行包裝以便運(yùn)輸至導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所。還將一份樣本送去進(jìn)行試管內(nèi)測(cè)試。只有在完成骨髓采集后12 至約M小時(shí)內(nèi)開(kāi)始選擇CD34+細(xì)胞，以及只有在完成骨髓采集后約48小時(shí)至72小時(shí)內(nèi)輸注的情況下，才釋放產(chǎn)品。實(shí)施例7 配制包含⑶34+細(xì)胞的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物將趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物配制在IOml補(bǔ)充有1 % HAS(人白蛋白US P，Alpha, 貨號(hào)521303)( “灌注溶液”)和至少20%自體血清的鹽水(0.9%氯化鈉，注射液，USP, Hospira，貨號(hào)7983-09)中。此外，在趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物中可能存在痕量的在產(chǎn)物處理過(guò)程中使用并殘留的物質(zhì)(未確定量)。這些物質(zhì)包括=Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水-不含 Ca++、Mg++(D-PBS) (Baxter，貨號(hào) EDR9865)、檸檬酸鈉(Baxter/Fenwal，貨號(hào) 4B7867)、羥乙基淀粉(Abbott Laboratories，貨號(hào) 0074-7248-03)、IVIg(Gammagard 靜脈內(nèi)免疫球蛋白， Baxter，貨號(hào)060384)，以及Isolex 300i干細(xì)胞試劑盒(Baxter，貨號(hào)4R9734)中的試劑，包括抗CD34單克隆抗體、干細(xì)胞釋放劑和羊抗小鼠磁珠。實(shí)施例8.將趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物運(yùn)送至導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所在位于控制無(wú)菌環(huán)境(例如，最少為100，000級(jí)細(xì)胞處理場(chǎng)所；優(yōu)選10，000級(jí)，但這不是必須的)的100級(jí)生物安全櫥中將符合釋放標(biāo)準(zhǔn)的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物裝載入無(wú)菌IOcc注射器中。將該趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物懸浮于補(bǔ)充有HAS的IOml PBS中，并根據(jù)釋放標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記該容器。將該臨床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為具有四個(gè)劑量隊(duì)列，每一個(gè)隊(duì)列由5個(gè)受治療者組成。第一組接受約切IO6個(gè)⑶；34+細(xì)胞、第二組約IOx IO6個(gè)⑶；34+細(xì)胞、第三組約20x IO6個(gè)⑶34+細(xì)胞以及第四組約30x IO6個(gè)⑶34+細(xì)胞。將隊(duì)列2_4中沒(méi)有足夠的⑶34+細(xì)胞量以滿足所指定的隊(duì)列劑量的受治療者以其最大可能的CD34+細(xì)胞劑量添加到前一個(gè)隊(duì)列當(dāng)中。將已裝載的灌注注射器及沖洗注射器與四通旋塞閥連接，并蓋上；施加安全罩以防止泄露。將該遞送裝置密封在雙層無(wú)菌袋中，并置于安全運(yùn)輸盒中，用于運(yùn)輸至心臟導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所。在釋放趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物以及分配隊(duì)列后，將該趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物運(yùn)送至導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所。在一些實(shí)施方案中，血管內(nèi)施用趨化性造血干細(xì)胞，即，通過(guò)直接的梗死相關(guān)動(dòng)脈灌注。在一些實(shí)施方案中，腸胃外地將趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物施用到心肌中。實(shí)施例9 冠脈內(nèi)灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物在從細(xì)胞處理場(chǎng)所獲得已釋放趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物用于灌注的通知后(參見(jiàn)上文)，安排受治療者/患者在與該趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物到達(dá)相符的時(shí)間到達(dá)導(dǎo)管插入術(shù)場(chǎng)所。在即將灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物之前，進(jìn)行心肌酶(腦利鈉肽(BNP)、肌鈣蛋白和CPK MB)、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、全化學(xué)檢查(腎和肝功能測(cè)試)以及EKG。記錄根據(jù)紐約心臟病學(xué)會(huì)(NYHA)功能分類(lèi)系統(tǒng)的心臟衰竭期的臨床評(píng)估。在接收趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物和用于灌注的最終質(zhì)量保證釋放(通過(guò)傳真)后， 受治療者進(jìn)行如上詳述的心臟導(dǎo)管插入術(shù)。實(shí)施冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，以評(píng)估梗死相關(guān)動(dòng)脈的開(kāi)放性(意思是開(kāi)放，沒(méi)有阻塞)以及在心肌梗死(TIMI)血管造影流中的血栓溶解。將在導(dǎo)線之上的球囊導(dǎo)管放置于梗死相關(guān)動(dòng)脈的支架部分?？墒褂镁哂兄辽偌s0. 36mm的內(nèi)直徑、與趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物相容的任何合適的球囊導(dǎo)管。在放置后，移除球囊導(dǎo)線。從運(yùn)輸盒中移出趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物遞送裝置。遞送裝置在無(wú)菌袋中，并且具有與灌注注射器(含有趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物)和沖洗注射器相連的安全保護(hù)部件。該裝備由灌注注射器(含有IOml趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物)和沖洗注射器(含有6ml沖洗溶液)組成，其中兩者均與無(wú)菌四通旋塞閥相連。輕微地振蕩整個(gè)遞送裝置，以將CD34+細(xì)胞重懸于灌注溶液中。沖洗注射器用于消除該裝置中的所有氣泡(以預(yù)防空氣栓塞)，并隨后通過(guò)旋塞閥將該遞送裝置與球囊擴(kuò)張導(dǎo)管相連。通過(guò)如下進(jìn)行的灌注將趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物遞送至受治療者。首先，在沖洗注射器(6ml溶液)和球囊導(dǎo)管中央腔室之間的旋塞閥打開(kāi)的狀態(tài)下，在15秒內(nèi)將Iml沖洗溶液灌注(在移除防護(hù)之后)至導(dǎo)管的中央腔室。然后，在兩個(gè)大氣壓下使球囊在支架內(nèi)膨脹，以避免對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮的損傷，然后調(diào)節(jié)旋塞閥以允許趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物灌注至膨脹的球囊遠(yuǎn)端(在移除防護(hù)之后)。在球囊膨脹后，用手在約30秒至約45秒的時(shí)間內(nèi)(計(jì)時(shí)并記錄)從灌注注射器灌注約3cc至約kc。使球囊保持膨脹總共約2分鐘至約 3分鐘(包括灌注時(shí)間)，以允許CD34+細(xì)胞粘附以及避免回流。在灌注之間，使球囊保持收縮3分鐘，以允許恢復(fù)血流(再灌注)。一般地，需要3次灌注以清空灌注注射器。第三， 在完成灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物以及球囊縮小后，調(diào)節(jié)旋塞閥上的閥以允許從沖洗注射器填充灌注注射器。最后，使球囊膨脹(約2分鐘至約3分鐘)，在約30秒至約45秒的時(shí)間內(nèi)灌注現(xiàn)在在灌注注射器中的細(xì)1沖洗溶液，以將任何殘留CD34+細(xì)胞從注射器和導(dǎo)管沖洗至IRA循環(huán)。然后移除導(dǎo)管。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后第一個(gè)M小時(shí)期間進(jìn)行灌注相關(guān)的缺血(血流不足)評(píng)估。獲得在約12小時(shí)和約M小時(shí)的EKG，約M小時(shí)中約每8小時(shí)的心肌酶(BNP、 肌鈣蛋白和CPK iffi)分析化學(xué)。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后，立即進(jìn)行心律失常評(píng)估 (24小時(shí)Holter監(jiān)測(cè)儀)。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后，受治療者出院前，進(jìn)行常規(guī)經(jīng)胸廓心回波描記術(shù)以評(píng)估全部和部分的左心室功能。其他的安全性評(píng)估隨訪包括在施用產(chǎn)物后1周和2周的訪問(wèn)。訪問(wèn)評(píng)估包括全面的病史以及體格檢查、EKG、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、全化學(xué)檢查(腎和肝功能測(cè)試)、以及血清心臟標(biāo)志物的測(cè)定(BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。在第1周和第2周記錄NYHA功能分級(jí)的臨床評(píng)估。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后第4周，獲得EKG和心肌酶(BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。應(yīng)用MHolter檢測(cè)儀評(píng)估心率失常。記錄NYHA功能分級(jí)的臨床評(píng)估。還進(jìn)行了采用癥狀限制性Bruce方案的平板運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)(Treadmill exercise testing)。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后約3個(gè)月和約6個(gè)月，進(jìn)行M小時(shí)Halter監(jiān)測(cè)。 記錄NYHA功能分級(jí)的臨床評(píng)估。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后約6個(gè)月，記錄采用Bruce 方案的癥狀限制性平板運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)。在灌注趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物后約12個(gè)月的安全性評(píng)估包括全面的病史以及體格檢查、EKG、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、全化學(xué)檢查(腎和肝功能測(cè)試)、以及血清心臟標(biāo)志物的測(cè)定 (BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。進(jìn)行M小時(shí)Halter監(jiān)測(cè)，并記錄NYHA功能分級(jí)的臨床評(píng)估。統(tǒng)計(jì)分析在一些實(shí)施方案中，使用配對(duì)設(shè)計(jì)，其中每一受治療者作為其自身的對(duì)照。分析每一受治療者4個(gè)數(shù)值型心功能(即，心肌收縮力、收縮期末容量、舒張期末容量和灌注)在治療前后的差異。應(yīng)用線性回歸分析評(píng)估增加的劑量水平的顯著性。零假設(shè)是回歸線的斜率(劑量水平作為自變量，以及“之后”減去“之前”的差作為因變量)等于O。對(duì)于劑量和心功能改善之間0. 5的高度相關(guān)，拒絕錯(cuò)誤零假設(shè)的指數(shù)(power)是0. 05 α顯著水平上的 0. 68。應(yīng)用該回歸線斜率的95%置信區(qū)間來(lái)評(píng)估劑量水平升高的醫(yī)學(xué)顯著性。如果回歸線的斜率沒(méi)有顯著地不同于0，但回歸線的截距不同于0，則合并所有的治療組，并進(jìn)行配對(duì) t-測(cè)試，以評(píng)估總治療效果。零假設(shè)是差異的平均值等于0。比較治療組的基線臨床和人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征，對(duì)連續(xù)變量應(yīng)用Mudent t測(cè)試，以及對(duì)分類(lèi)變量應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)比較治療組之間不利事件的發(fā)生率。為測(cè)量療效， 應(yīng)用Mudent t測(cè)試，在治療組和對(duì)照組之間比較心功能和局部心肌灌注的基線及第6月隨訪值的配對(duì)差異。應(yīng)用箱形圖(box plot graph)檢查治療組療效變化的分布。在事后分析(post-hoc analysis)中，通過(guò)結(jié)合對(duì)照和500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞隊(duì)列受治療者，并應(yīng)用Student t測(cè)試將它們與1000萬(wàn)個(gè)及1500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞隊(duì)列受治療者比較，從而檢查劑量閾值對(duì)治療反應(yīng)的影響。另外，檢查細(xì)胞特征對(duì)結(jié)果測(cè)量值的影響。對(duì)于目標(biāo)變量對(duì)中的每一個(gè)，計(jì)算Pearson積矩相關(guān)系數(shù)(r)與相應(yīng)的ρ值。對(duì)于應(yīng)用尾檢驗(yàn)(tailed test)測(cè)試零假設(shè)，將1類(lèi)(α )誤差設(shè)置為0. 05。由于實(shí)際上探究了次級(jí)端點(diǎn)的分析，沒(méi)有將用于多重比較的校正報(bào)告為α誤差。沒(méi)有對(duì)所分析的任何變量中的漏失值歸責(zé)，并且在撤出點(diǎn)對(duì)從研究中撤出的患者進(jìn)行檢查。應(yīng)用SAS版本9. 1 (Carey, North Carolina)執(zhí)行所有的統(tǒng)計(jì)程序和分析。對(duì)符合要求但沒(méi)有接受CD34+細(xì)胞的并行組(未治療對(duì)照)進(jìn)行與治療組相同的評(píng)估，并且評(píng)估心功能/灌注的顯著改善。每一研究點(diǎn)改變治療組和未治療對(duì)照的自然增長(zhǎng)量。應(yīng)用拋硬幣法確定初始(治療或未治療)受治療者在每一位點(diǎn)的順序。比較治療組和未治療組之間的結(jié)果。核心實(shí)驗(yàn)室對(duì)治療或未治療而言是不清楚的。進(jìn)行評(píng)估以確定在臨床結(jié)果與細(xì)胞含量(CD34+)和/或體外集落生長(zhǎng)(CFU-GM、 CFU-GEMM.BFU-E)、CXCR_4運(yùn)動(dòng)性、以及CXCR-4和/或VEGF表面抗原表達(dá)之間是否存在關(guān)聯(lián)。[參見(jiàn)圖4和以下討論]如計(jì)劃的那樣，總共20名受治療者接受本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物。有4個(gè)劑量隊(duì)列(約5x 106、約IOx 106、約20x IO6和約30x IO6個(gè)⑶34+細(xì)胞)。如果任何受治療者的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物對(duì)該指定的隊(duì)列而言是不夠的，則將該受治療者以其最大可能劑量重新分配到在前的隊(duì)列。具有少于切IO6個(gè)可用于灌注的CD34+細(xì)胞的受治療者從該研究中除去，不進(jìn)行重復(fù)導(dǎo)管插入術(shù)并且不計(jì)為該20個(gè)受治療者研究組的一部分。此外，如果本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞不滿足釋放標(biāo)準(zhǔn)，則該受治療者不接受細(xì)胞產(chǎn)物，并且不計(jì)為研究候選者，由下一個(gè)受治療者替換。在任何隊(duì)列劑量組中，如果受治療者經(jīng)歷了認(rèn)為(可能)是細(xì)胞產(chǎn)物灌注所導(dǎo)致的急性(意思是灌注后馬上至約7天)非預(yù)期毒性，劑量遞增停止，并將3名其他受治療者增加至這一劑量水平。如果沒(méi)有觀察到其他非預(yù)期毒性，則恢復(fù)劑量遞增；然而沒(méi)有超出總共20個(gè)受治療者。如果在該劑量水平發(fā)生了另一毒性，則將所有隨后的受治療者均增加至前一個(gè)更低的劑量水平。直到來(lái)自前一個(gè)劑量隊(duì)列的所有受治療者均完成產(chǎn)物施用兩周后的隨訪評(píng)估，才將本發(fā)明的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物施用至更高劑量隊(duì)列的受治療者。實(shí)施例10 初步研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了一系列初步的臨床前研究，以試圖實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)(1)優(yōu)化小量骨髓采集(MMH)的生產(chǎn)過(guò)程；(2)評(píng)估內(nèi)邊界MMH產(chǎn)物和外邊界造血干細(xì)胞產(chǎn)物的穩(wěn)定性；(3)評(píng)估導(dǎo)管的內(nèi)徑容差和安全性；(4)評(píng)估細(xì)胞產(chǎn)物與計(jì)劃在該研究中使用的導(dǎo)管的相容性；(5)評(píng)估用最終造血細(xì)胞產(chǎn)物上清液代表最終造血細(xì)胞產(chǎn)物用于穩(wěn)定性測(cè)試的合適性。研究1 優(yōu)化小量骨髓采集(MMH)的生產(chǎn)過(guò)程評(píng)估了關(guān)鍵生產(chǎn)變量對(duì)于從代表性骨髓產(chǎn)物生產(chǎn)有活力的CD34+細(xì)胞的影響?？偣擦?6)位45歲以上(基于45-67的范圍)的供者志愿供者和三位30歲以下(基于21-28 的范圍)的志愿供者供者同意貢獻(xiàn)平均45ml (基于31ml-5^il)骨髓，并提供了對(duì)于該程序的書(shū)面知情同意書(shū)。所使用的骨髓抽吸技術(shù)與對(duì)于臨床級(jí)MMH(參見(jiàn)上文實(shí)施例3)實(shí)施的技術(shù)是相同的。如表2所示，從志愿供者收集的小量骨髓采集(“MMH”)衍生的細(xì)胞中有核細(xì)胞(NC)和CD34+細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示出與年齡相關(guān)。
表 2 {共飾聽(tīng)MMH捕麵赫白憤口向
權(quán)利要求
1.一種在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中治療或修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過(guò)導(dǎo)管腸胃外地施用無(wú)菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體CD34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+ 細(xì)胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞；( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)，以及 (iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；以及(b)在至少一個(gè)梗死區(qū)相對(duì)于對(duì)照改善灌注，其中，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的⑶34+細(xì)胞富集群中至少70%的細(xì)胞是⑶34+細(xì)胞，以及其中，在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群后至少約24小時(shí)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，該含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持所述CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；其中，施用步驟(a)發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)灌注日期，以及其中，第一灌注日期包含由第一時(shí)間和第二時(shí)間定義的特定時(shí)間間隔，其中，所述第一時(shí)間是在梗死區(qū)中峰值炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)產(chǎn)生之后，以及第二時(shí)間是在梗死區(qū)中心肌疤痕形成之前。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述所述的方法，其中，所述梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有0.5x IO6個(gè)表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進(jìn)行性下降。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括至少一個(gè)缺血的心肌組織梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注過(guò)少。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的心肌冬眠。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，進(jìn)一步包括步驟在第二灌注日期施用冷凍并解凍的無(wú)菌藥物組合物的第二等分試樣，所述冷凍并解凍的第二等分試樣包含(i)冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有至少0.5x IO6個(gè)表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群；以及( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)；其中，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在所述解凍該第二等分試樣后至少約24小時(shí)， 所述第二等分試樣冷凍并解凍的含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)含有至少70%CD34+細(xì)胞;(3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括步驟任選地在第三灌注日期施用冷凍并解凍的無(wú)菌藥物組合物的第三等分試樣，所述的第三等分試樣包含冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群；( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20% (ν/ν)；其中，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在從解凍所述的第三等分試樣后至少約24小時(shí)，所述的第三等分試樣冷凍并解凍的含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群，(1)保持CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)含有至少70%CD34+細(xì)胞;(3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述第二灌注日期是第一灌注日期后約30天。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述第三灌注日期是第一灌注日期后約60天。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的 ⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少24小時(shí)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括將該組合物血管內(nèi)遞送至梗死相關(guān)動(dòng)脈的步驟。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括通過(guò)導(dǎo)管將該組合物遞送至心肌的步驟。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述導(dǎo)管是流量控制導(dǎo)管。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述導(dǎo)管是球囊擴(kuò)張導(dǎo)管。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述導(dǎo)管具有至少約0.36mm的內(nèi)直徑。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第一時(shí)間是梗死后至少約5天。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第二時(shí)間是梗死后少于約14天。
22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第一時(shí)間是梗死后至少約5天，以及第一灌注日期特定時(shí)間間隔的第二時(shí)間是梗死后少于約14天。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述任選的第二治療劑是至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述任選的第二治療劑選自如下所述地構(gòu)成的組，即，所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、 酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。
25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述方法比成分(i)加上(ii)或單獨(dú)的成分 (iii)更能減少梗死區(qū)損傷。
27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述方法改善梗死區(qū)中的微血管血流。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述方法減少梗死損傷的面積。
29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述方法減少梗死量。
30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述方法增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。
31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，與對(duì)照相比較，所述方法增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)中的冬眠心肌的灌注。
32.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。
33.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胎盤(pán)生長(zhǎng)因子。
34.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括兒茶酚胺。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述兒茶酚胺是去甲腎上腺素。
36.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括內(nèi)皮素-1。
37.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括前列腺素 ^α。
38.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑是血管緊張素II。
39.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括佛波酯。
40.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括神經(jīng)肽Y。
41.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括活性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1。
42.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括蛋白。
43.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括甘油二酯。
44.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括 salusin-α 0
45.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括 salusin-β 。
46.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胰島素樣生長(zhǎng)因子-1。
47.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括肌抑素。
48.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括粒細(xì)胞集落刺激因子。
49.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括巨噬細(xì)胞集落刺激因子。
50.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括噻唑烷二酮。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中，所述噻唑烷二酮是羅西格列酮。
52.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑。
53.一種治療由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的藥物組合物，其包含(a)梗死損傷改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體CD34+ 造血干細(xì)胞富集群，所述富集群含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0. 5x IO6個(gè)表達(dá) CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞；(b)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過(guò)20%(ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑；其中，通過(guò)導(dǎo)管將該組合物腸胃外地施用至受治療者；其中，當(dāng)通過(guò)導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，在所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群中至少70%的細(xì)胞是CD34+細(xì)胞，以及其中，在從受治療者獲得含有表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群后至少約M小時(shí)內(nèi)，當(dāng)通過(guò)該導(dǎo)管并在體外測(cè)試時(shí)，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群(1)保持該CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含至少I(mǎi)Ox IO6個(gè)分離的自體⑶34+造血干細(xì)胞富集群，其含有0. IO6個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能⑶34+細(xì)胞亞群。
55.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述組合物比成分(i)加上(ii)或單獨(dú)的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。
56.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括所述梗死區(qū)的凋亡心肌細(xì)胞喪失。
57.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，與對(duì)照相比較，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。
58.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進(jìn)行性下降。
59.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括至少一個(gè)缺血的心肌組織梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注過(guò)少。
60.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括梗死周?chē)吔鐓^(qū)中的心肌冬眠。
61.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從采集自所述受治療者的骨髓抽吸物的細(xì)胞成分純化得到。
62.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的分離的CD34+細(xì)胞富集群從周?chē)兓玫健?br> 63.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少48小時(shí)。
64.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達(dá)CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少72小時(shí)。
65.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞亞群的CD34+細(xì)胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達(dá) CXCR-4的潛能細(xì)胞亞群的⑶34+細(xì)胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性至少24小時(shí)。
66.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中通過(guò)導(dǎo)管將所述組合物血管內(nèi)遞送至梗死相關(guān)動(dòng)脈。
67.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中通過(guò)導(dǎo)管將所述組合物遞送至心肌。
68.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中與對(duì)照相比較，所述組合物改善梗死區(qū)中的微血管血流。
69.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中與對(duì)照相比較，所述組合物增加至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)的灌注。
70.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中與對(duì)照相比較，所述組合物增加對(duì)至少一個(gè)心肌組織缺血梗死周?chē)鷧^(qū)中冬眠心肌的灌注。
71.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中與對(duì)照相比較，所述組合物減少梗死損傷的面積。
72.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中與對(duì)照相比較，所述組合物減少梗死量。
73.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑選自如下所述地構(gòu)成的組，即，所述所述組由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、 抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。
74.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動(dòng)劑神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1。
75.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。
76.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胎盤(pán)生長(zhǎng)因子。
77.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括兒茶酚胺。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的藥物組合物，其中，所述兒茶酚胺是去甲腎上腺素。
79.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括內(nèi)皮素-1。
80.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括前列腺素F2a。
81.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑是血管緊張素II。
82.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括佛波酯。
83.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括神經(jīng)肽Y。
84.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括活性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1。
85.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括蛋白。
86.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括甘油二酯。
87.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括 salusin- α。
88.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括 salusin- β。
89.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括胰島素樣生長(zhǎng)因子-1。
90.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括肌抑素。
91.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括粒細(xì)胞集落刺激因子。
92.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括巨噬細(xì)胞集落刺激因子。
93.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括噻唑烷二酮。
94.根據(jù)權(quán)利要求93的藥物組合物，其中，所述噻唑烷二酮是羅西格列酮。
95.根據(jù)權(quán)利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療梗死區(qū)損傷的藥物組合物以及在由自然疾病過(guò)程導(dǎo)致的急性心肌梗死后血運(yùn)重建的受治療者中治療或修復(fù)梗死區(qū)損傷的方法，通過(guò)導(dǎo)管腸胃外地施用無(wú)菌藥物組合物至該受治療者，其含有作為第一治療劑的治療有效量未擴(kuò)增的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物，以及任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑。該改善梗死量的無(wú)菌分離的趨化性造血干細(xì)胞產(chǎn)物包含分離的自體CD34+細(xì)胞富集群，其含有表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能細(xì)胞的亞群，從而使得所述分離的自體CD34+造血干細(xì)胞富集群提供至少0.5x 106個(gè)表達(dá)CXCR-4且具有CXCR-4介導(dǎo)的趨化活性的潛能CD34+細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K35/16GK102245189SQ200980148759
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月3日
發(fā)明者安德魯·佩科拉, 羅伯特·普雷蒂 申請(qǐng)人:阿莫塞特公司