專利名稱：：博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到從含節(jié)基異喹啉類生物堿U柳^/^^/wo/f"e^汰a/oW)的植物博落回(Mflc/e《戸coWa似(W//《兄5a:)得到的提取物在促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率的飼料藥物添加劑和獸藥方面的應(yīng)用。提取物中主要含芐基異喹啉總生物堿，其中包含血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿、二氫血根堿、二氫別隱品堿等。
背景技術(shù)：
：長期以來，由于動物飼料和獸藥中廣泛的使用抗生素、化學(xué)合成藥物、激素等促生長保健劑，這類添加劑在促進(jìn)畜牧業(yè)發(fā)展的同時(shí)，也帶給了人類很多危害?？股氐臑E用的弊端越來越突出。主要表現(xiàn)在內(nèi)源性感染和二重感染、微生物產(chǎn)生抗藥性、機(jī)體的免疫力下降、殘留毒副作用和環(huán)境污染。在這種形勢下，世界各國都紛紛制定了與飼料藥物添加劑相關(guān)的法律、法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范和監(jiān)管藥物飼料添加劑的使用，從而維護(hù)國家和消費(fèi)者的利益。歐盟各成員國執(zhí)行最為嚴(yán)格的飼料藥物使用制度。歐盟2003年公布了最新的《飼料添加劑準(zhǔn)則》，迫于消費(fèi)者和醫(yī)學(xué)方面的壓力，該準(zhǔn)則規(guī)定，除了球蟲抑制劑和滴蟲抑制劑以外的藥物于2006年1月1日起全部停止使用。當(dāng)今，人類迫切希望回歸自然，返璞歸真，順應(yīng)這一世界潮流，圍繞"健康動物、安全食品、健康人類"這一主題，世界各國紛紛開始研究抗生素安全替代品。天然植物源藥物結(jié)構(gòu)獨(dú)特，不易產(chǎn)生耐藥性，在環(huán)境中可自行降解，不至于在農(nóng)產(chǎn)品、畜產(chǎn)品中長期殘留或通過食物鏈富集，不引起對環(huán)境的不可逆破壞，對人畜相對低毒，符合綠色生態(tài)畜牧業(yè)對藥品的要求，是未來獸藥的重要發(fā)展方向。我國有極其豐富的植物及天然產(chǎn)物資源，從天然產(chǎn)物資源中尋找新的抗生素替代物質(zhì)，確定其活性骨架，發(fā)掘先導(dǎo)化合物，篩選其更有效的化合物，具有極其廣闊的發(fā)展前景和十分重要的意義。博落回(Macleayacordata(Willd.)R.Br.)，又名號筒草、號筒桿、泡桐桿、勃勒回是罌粟科博落回屬多年生高大草本，最早記載博落回的本草文獻(xiàn)為《本草拾遺》?，F(xiàn)統(tǒng)一命名為博落回。博落回提取物，主要分布在罌粟科、蕓香科、小檗科等天然植物中，落回總生物堿中主要含有血根堿(S""gm'"fln'"e)、白屈菜紅堿(C/w/eo^""e)、博落回堿(5occo"/"e)、博落回寧堿(Boccow//"e)、甲氧基白屈菜紅堿(C7eWw""e)、二氫血根堿(D/Zj;^myfl"g"f朋n77e)、二氫白屈菜紅堿(Z)/Zz;^rac/^/eo^W"e)等苯并菲啶型生物堿及原阿片堿(iVoto;!'恥)、a-別隱品堿(a-J//oco^o;!'"e)、J3-別隱品堿(y9-J//oco^ojw'we)等原托品型生物堿和iVorsflwgw'mjrme、CbQ^a"gM/"ar/"e、/^0附0仁/^//60附>^、Co/rt>e、5e/"6en.we、C/^/Wom'恥、C/^/n/6/"e等原生物堿?，F(xiàn)代藥理研究表明博落回具有明顯的抗菌、殺蟲、改善肝功能、提高免疫力及抗腫瘤等作用。在博落回的應(yīng)用方面，農(nóng)業(yè)部獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收錄的博落回注射液是由博落回果經(jīng)提取、分離制成的生物堿硫酸鹽的滅菌水溶液，其具有抗菌消炎的功能，主治仔豬的白痢、黃??；郁建生(2007)將博落回果莢和根中經(jīng)提取的有效成份總生物堿制成注射液、口服液用以治療仔豬白痢、禽霍亂疾病取得較好效果；郁建生等將博落回與穿心蓮配合制成復(fù)方博落回注射液已申請專利(專利號ZL200510020409.0)，其具有廣譜清熱解毒消腫、抗菌抗病毒消炎功效，主要用于治療畜禽患流行性感冒、腹瀉痢疾、仔豬白痢和黃痢等。綜合文獻(xiàn)可以得出博落回提取物的應(yīng)用現(xiàn)主要是以治療畜禽動物消化道疾病的獸藥，且給藥方式多以注射為主。本發(fā)明的所提到的博落回提取物，是60%以上的總生物堿作為獸藥原料添加在飼料中進(jìn)行日常飼喂，用以促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物的生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率，這種作為獸藥和藥物飼料添加劑的應(yīng)用尚未見相關(guān)報(bào)道。今年來，隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展和集約化水平的提高，養(yǎng)殖密度越來越大，導(dǎo)致了一些疾病的發(fā)生率越來越高。病原微生物對畜禽養(yǎng)殖業(yè)的危害性十分嚴(yán)重，常引起消化道、呼吸道的疾病，使幼畜幼禽生長發(fā)育遲緩，成年畜禽育肥困難。給畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。選擇高效低毒、使用方便的藥劑來防治，成了人們普遍關(guān)心的問題。
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明人從博落回植物中提取出博落回總生物堿對其進(jìn)行生物活性研究發(fā)現(xiàn)具有廣泛的抑菌，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率作用，具體試驗(yàn)見后。本發(fā)明所提到的博落回提取物用于制備促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長獸藥中的藥物飼料添加劑或?qū)π笄莩Ｒ姴≡褪蠗U菌、李氏桿菌和嗜血桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。本發(fā)明是通過將博落回提取物用于制備成獸藥或藥物飼料添加劑。博落回提取物中主要有效成份為天然活性成分芐基異喹啉類生物堿類可用于抑制和殺滅體內(nèi)的病原微生物，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率；或者是作為制備獸藥的原料。所述博落回提取物來源于罌粟科植物博落回植物，將其成熟的果莢或葉或兩者的混合體經(jīng)提取制備而成。因本發(fā)明博落回提取物包含血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿、二氫血根堿、二氫別隱品堿等。本發(fā)明所提到的博落回提取物是從博落回植物中提取分離、精制獲得高純度博落回提取物組分；采用酸水提取，堿水沉淀后，將沉淀后用醇提取，濃縮后用濃酸沉鹽制備總生物堿的在60%以上。其博落回提取物含量是通過HPLC方法檢測，以血根堿和白屈菜紅堿的合計(jì)含量來計(jì)算博落回提取物中總生物堿原堿的含量。博落回提取物主要含芐基異喹啉生物堿，并可以以芐基異喹啉生物原堿、它的鹽酸鹽、硫酸氫鹽或磷酸二氫鹽的形式存在。本發(fā)明是將博落回提取物作為有效成分制成的抑制和殺滅病原微生物，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率作用有良好效果。博落回提取物的應(yīng)用是包括單獨(dú)使用，或者與其他抗菌藥物共同使用。在與其他抗菌獸藥配合使用時(shí)也具有良好抗寄生蟲作用。博落回提取物在獸藥或藥物飼料添加劑中的給藥濃度優(yōu)選為0.1-30ppm。作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計(jì)為較為優(yōu)選的是0.1-5ppm。作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計(jì)最為優(yōu)選的是l-5ppm。本發(fā)明所述的獸藥可以通過混飼、飲水等形式給藥。將博落回提取物加稀釋劑相應(yīng)的輔料可制成的各種劑型-預(yù)混劑或水劑等，應(yīng)用于抑制和殺滅病原微生物，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物豬、雞生長、提高飼料轉(zhuǎn)化率等方面具有良好的市場前景。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進(jìn)一步限定。實(shí)施例l博落回提取物的制備方法取博落回果莢，用20倍量的0.5%硫酸水溶液提取，然后用堿調(diào)pH到8-10，分離沉淀后，再用90%乙醇提取，部分濃縮提取液過濾后，加濃硫酸析出大量桔紅色沉淀物，干燥后得到博落回提取物，經(jīng)過HPLC測定總生物含量約為66.4。/。(以原血根堿和白屈菜紅堿的含量合計(jì)，以下同)，其中血根堿約為46.4%，白屈菜紅堿約為20%。實(shí)施例2博落回提取物預(yù)混劑的制備實(shí)施例1方法制得的博落回提取物稱取100g,，使用藥物粉碎機(jī)粉碎，過120目篩，備用；再稱取藥用淀粉3900g。將博落回提取物與藥用淀粉使用小型混合機(jī)充分混合15分鐘，檢查變異系數(shù)<0.5，得到博落回提取物預(yù)混劑4000克。實(shí)施例3博落回提取物對畜禽常見病原菌體外抑制試驗(yàn)選用博落回提取物，并測定其含量為進(jìn)行試驗(yàn)研究,將實(shí)施例l制得博落回提取物配制的溶液分別對嗜血桿菌、李氏桿菌、巴氏桿菌、鏈球菌等畜禽常見的動物致病菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。按無菌操作規(guī)程，在無菌條件下，傾倒相應(yīng)的菌種對應(yīng)的培養(yǎng)基平板，上面涂布相應(yīng)的菌種接種物，待平板凝固后，貼加藥敏試紙片，用無菌鑷子使紙片和平板結(jié)合緊密。同時(shí)用浸有金霉素的濾紙片做對照。每份樣品做3份，結(jié)果取平均值。37'C倒置培養(yǎng)，并于24hH察抑菌效果，測定抑菌圈的直徑，判斷敏感度。判斷標(biāo)準(zhǔn)抑菌環(huán)直徑大于7mm者判斷為有抑菌作用，抑菌環(huán)直徑小于或等于7mm無抑菌作用，抑菌直徑越大說明抑菌效果越好。結(jié)果檢測表明博落回提取物和金霉素的濃度均為100ug/ml條件下，嗜血桿菌、李氏桿菌、及巴氏桿菌和鏈球菌4種畜禽常見病原菌的抑菌直徑均大于7mm，顯示出很好的的抑菌作用表(1)。表l博落回提取物對抑菌直徑的影響(單位mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>采用試管稀釋法，以金霉素作對照，測定有抑菌活性的藥液的最低抑菌濃度(MIC)。博落回提取物為試驗(yàn)組，每組取無菌試管13支，排成一排，除第l管加入1.8mlMH用肉湯稀釋1000倍的菌液，其余每管加入MH肉湯lml,在第l管加入由實(shí)例l所得博落回提取物配制的溶液原液0.21111混勻，然后吸取lml至第2管，混勻后再吸取lml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第12管，并從第12管中吸取lml棄去，第13管為不含藥物的生長對照。37'C培養(yǎng)24h，以無細(xì)菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。最小抑菌濃度的檢測結(jié)果表明博落回提取物對嗜血桿菌、李氏桿菌、巴氏桿菌、鏈球菌4種畜禽常見病原菌菌株的均有良好的抑菌效果，對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌均有良好的抑菌效果?？梢姴┞浠靥崛∥锞哂袕V譜的抑菌作用。試驗(yàn)結(jié)果表明雖然博落回提取物的最小抑菌效果濃度高于金霉素組(表2)，作為替代抗生素的藥物，其來源天然、降解快、殘留低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，良好的市場前景。表2博落回提取物對最小抑菌濃度MIC(單位ug/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例4博落回提取物對斷奶仔豬生長性能的影響試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)本試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)。選取28土2日齡體重相近(8.3±0.26kg)斷奶長白x大約克二元雜交健康仔豬120頭。試驗(yàn)開始前先用基礎(chǔ)日糧飼喂3天，然后按初始重、公母各半原則分為12欄，分為3個處理，每個處理4欄，每欄10頭豬。處理一空白對照組；處理二添加100mg/kg的金霉素；處理三添加45mg/kg的實(shí)施例2制備的博落回提取物預(yù)混劑產(chǎn)品。本試驗(yàn)在湖南新五豐股份有限公司永安分公司豬場進(jìn)行。飼養(yǎng)管理所有試驗(yàn)仔豬于封閉式畜舍進(jìn)行飼養(yǎng)，保育欄為高床金屬漏縫地板鐵籠，乳頭式飲水器，自由飲水。消毒、免疫等其他管理照常規(guī)進(jìn)行。人工添料，每天于7:00、11:00、15:00和19:00伺喂，在保證沒有消化不良的前提下自由采食，出現(xiàn)重度腹瀉或者疾病及時(shí)治療或淘汰。記錄指標(biāo)平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。腹瀉率=腹瀉仔豬頭次/仔豬總頭次><100%表3博落回提取物對仔豬生長性能的影響項(xiàng)目_空白對照組陽性對照組博落回提取物始重(kg)8.26±0.208.29±0.238.33±0.18末重(kg)20.45±0.73a21.49±0.85ab22.59±0.58b平均采食量(g/d)656.90±20.59a706.15±39.05ab737.78±14.87b平均日增重(g/d)406.25±17.54a440.25±23.33b475.25±14.43c料肉比1.62±0.02a1.60±0.01a1.55±0.02b注標(biāo)中同行字母完全不相同者表示差異顯著(尸<0.05)。下同。如表3所示，3個處理組的平均日采食量和平均日增重由高到低依次為博落回提取物組、陽性對照組(金霉素)，空白對照組。與空白對照組相比，日糧中添加博落回提取物提高了平均采食量12.3%;平均日增重16.9%;料肉比下降了4.32%(p<0.05)。結(jié)果表明日糧中添加博落回提取物顯著的提高了仔豬的采食量和日增重，料肉比的降低有效的改善了仔豬的生長性能。與抗生素金霉素的對照組相比較效果相當(dāng)。表4博落回提取物對仔豬腹瀉情況的影響指標(biāo)空白對照組陽性對照組博落回提取物腹瀉率(％)謹(jǐn)±0.72a3.01±0.26b2.64±0.80b如表4所示，陽性對照組、博落回提取物與對照組相比顯著降低了腹瀉率(P0.05)。本試驗(yàn)顯示在仔豬日糧中添加博落回提取物具有促進(jìn)生長和預(yù)防腹瀉的作用，具有與金霉素相當(dāng)效果。實(shí)施例5博落回提取物對肉豬生長性能的影響試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)本試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)。選取長白x大約克二元雜交健康仔豬60頭。試驗(yàn)開始前先用基礎(chǔ)日糧飼喂3天，然后按初始重、公母各半原則分為6欄，分為2個處理，每個處理3欄，每欄10頭豬。處理一空白對照組；處理二添加5ppm的實(shí)施例1制備的博落回提取物預(yù)混劑產(chǎn)品。表5博落回提取物對肉豬腹瀉情況的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表5中可知，實(shí)驗(yàn)表明，為與空白對照組相比較，博落回提取物組平均采食量提高了2.2%，日增重提高了9.3%((p<0.05)差異顯著，料肉比降低了6.6%(戶<0.05)差異顯著。可見在日糧重添加5ppm的博落回提取物對肉豬日增重和飼料利用率等生長性能指標(biāo)改善有良好的效果。實(shí)施例6博落回提取物對肉雞生長性能的影響試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用450只1日齡黃雞。供試雞生長良好，健康無病。體重基本一致。將試雞隨機(jī)分為3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)25只雞。試驗(yàn)期為49天。實(shí)驗(yàn)分為3個組組l為對照組(不添加抗生素和博落回提取物)；組2添加30mg/kg金霉素；組3添加100mg/kg實(shí)施例2制備的博落回預(yù)混劑。飼養(yǎng)管理試驗(yàn)雞舍為開放式，自然通風(fēng)，光照為14L:10D。每天記錄雞舍內(nèi)的溫、濕度。試雞采用高床平養(yǎng)，計(jì)量不限量飼喂；自由飲水，飼喂量按推薦營養(yǎng)需要量結(jié)合實(shí)際采食量而定。按常規(guī)方法進(jìn)行衛(wèi)生清理和消毒。試驗(yàn)期保持食槽、水槽清潔衛(wèi)生。記錄指標(biāo)平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。表6博落回提取物對肉雞生長性能的影響結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表6所示結(jié)果表明3個處理組的平均日采食量和平均日增重由高到低依次為博落回提取物組、陽性對照組(金霉素)，空白對照組。與空白對照組相比，日糧中添加博落回提取物提高了平均采食量0.3%;平均日增重8.12%;料肉比下降了9.52%。在日糧中添加博落回提取物有效降低肉雞死亡數(shù)同時(shí)，能顯著的改善黃雞的生長性能，在日糧中添加博落回提取物有與金霉素相當(dāng)?shù)男Ч?。?shí)施例7博落回提取物對副豬嗜血桿菌病的防治試驗(yàn)?zāi)硨?shí)驗(yàn)豬場12頭2月齡仔豬發(fā)生高熱病，病豬表現(xiàn)有體溫升高(4(TC以上)，精神沉郁，食欲下降，呼吸困難，被毛粗亂，皮膚發(fā)紅甚至發(fā)紫，消瘦，呼吸困難，關(guān)節(jié)腫大，跛行等。經(jīng)染色后均可見到革蘭氏陰性的細(xì)小桿菌，細(xì)菌形態(tài)多樣，以纖細(xì)桿菌者居多，間有長而彎曲絲狀菌體。個別呈兩極濃染的球桿狀，鑒定為副豬嗜血桿菌。所有病豬日常飲用博落回提取物配制成的濃度為30ppm的水劑，連用6天。在治療的同時(shí)，對豬舍和周圍環(huán)境進(jìn)行徹底消毒進(jìn)行噴灑，每天一次，連用7d。2周后豬群逐漸恢復(fù)健康。權(quán)利要求1、博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥中的應(yīng)用，其特征在于博落回提取物用于制備促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率的獸藥中的藥物飼料添加劑或?qū)π笄莩Ｒ姴≡钍蠗U菌、嗜血桿菌和巴氏桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥中的應(yīng)用，其特征在于所述博落回提取物由來源于罌粟科植物博落回，從其成熟的果莢或葉或兩者的混合物中提取制備而成。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥中的應(yīng)用，其特征在于博落回提取物中主要含有芐基異喹啉類生物堿，在提取物中以芐基異喹啉類生物堿原堿或它的鹽酸鹽、硫酸氫鹽或磷酸二氫鹽的任何一種形式存在。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥的應(yīng)用，其特征在于作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計(jì)為0.1-5ppm，作為獸藥添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計(jì)為0.1-30ppm。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥的應(yīng)用，其特征在于作為藥物詞料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計(jì)為l-5ppm。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物飼料中獸藥的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物飼料添加劑或獸藥以飼料拌喂口服的方式給藥。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物飼料添加劑或獸藥是以預(yù)混劑或水劑的使用方式。全文摘要博落回提取物在經(jīng)濟(jì)動物獸藥中的應(yīng)用，博落回提取物用于制備促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率的獸藥中的藥物飼料添加劑或?qū)π笄莩Ｒ姴≡钍蠗U菌、嗜血桿菌和巴氏桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。文檔編號A61P31/00GK101530475SQ20091004314公開日2009年9月16日申請日期2009年4月17日優(yōu)先權(quán)日2009年4月17日發(fā)明者曾建國,鵬蔡,華饒申請人:湖南美可達(dá)生物資源有限公司