專利名稱：含有全果實Zanthoxylum Bungeanum提取物的營養(yǎng)藥物性組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的營養(yǎng)藥物性組合物或食物添加劑，其中包含Zanthoxylum bimgeanum的全果實(即果實和果皮)提取物作為活性成分，以改善認(rèn)知功能，例如學(xué)習(xí)、記 憶和警覺以及減輕社會心理壓力。
背景技術(shù)：
記憶、學(xué)習(xí)和警覺依賴于中腦(尤其是海馬)的神經(jīng)元溝回，在此處信息被加工， 記憶被鞏固。精神表現(xiàn)和學(xué)習(xí)依賴于突觸塑性，即，通過新受體的募集、新突觸的形成以及 最終新神經(jīng)元連接的產(chǎn)生，加強神經(jīng)元的連接。(長期)記憶的形成和腦的有效功能依賴于新蛋白的合成，用于強化神經(jīng)元之間 的交流強度。有助于突觸強化的新蛋白的產(chǎn)生是神經(jīng)元內(nèi)的化學(xué)和電信號觸發(fā)的。長時程 增強(LTP)是用于描述突觸傳遞的長期增強的術(shù)語(體外數(shù)小時，體內(nèi)數(shù)日或數(shù)周)，其在 短的、條件作用的、突觸前電刺激脈沖(大約100Hz，持續(xù)1秒)之后于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS) 內(nèi)的特定突觸上發(fā)生。這種現(xiàn)象被廣泛認(rèn)為是記憶在腦中形成和貯存的主要機(jī)制之一。已 在體外和活的動物中都觀察到了 LTP。在實驗條件下，向突觸應(yīng)用一系列短的高頻電刺激， 可將化學(xué)突觸的強度加強數(shù)分鐘至數(shù)小時。最重要地，在活的動物中，LTP有助于突觸塑性， 提供高適應(yīng)性的神經(jīng)系統(tǒng)的基礎(chǔ)。LTP過程中主要涉及兩種不同的受體類型，即，N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)受 體復(fù)合物和α -氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(AMPA)受體。LTP期間，主要的興奮 性神經(jīng)遞質(zhì)，谷氨酸鹽，從突觸前神經(jīng)元釋放，結(jié)合并活化突觸后膜上的AMPA受體，導(dǎo)致其 去極化。在靜止膜電位時，NMDA受體通道被鎂離子阻斷，但是突觸后膜的去極化移除這種阻 斷，使得NMDA受體活化以及隨后鈣進(jìn)入細(xì)胞。人們認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)鈣的引入能活化蛋白激酶， 導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄以及強化蛋白的構(gòu)建(Niehoff (2005)，The Language of Life =How Cells Communicate in Health and Disease，210-223)，并且使得 AMPA 受體的敏感性增強，由此 進(jìn)一步協(xié)助LTP的神經(jīng)傳遞和保持。NMDA受體由NRl-亞基和NR2-亞基的裝配構(gòu)成；在這些亞基的連接處形成谷氨酸 鹽結(jié)合結(jié)構(gòu)域。除了谷氨酸鹽之外，NMDA受體需要共激動劑甘氨酸，以調(diào)節(jié)受體功能。甘氨 酸結(jié)合位點被發(fā)現(xiàn)于NRl亞基上，而NR2亞基具有針對多胺的結(jié)合位點，這是調(diào)節(jié)NMDA受 體功能的調(diào)控分子。人們對于開發(fā)可用于在老年和年輕人，在日常工作中尤其需要高度記憶力和注意 力的個體(包括學(xué)生、建筑工人、司機(jī)、飛行員、醫(yī)生、銷售員、經(jīng)理、家庭主婦、“高效能專業(yè) 人士”和處于精神壓力或日常壓力下的人以及傾向于精神病性不穩(wěn)定例如精神分裂癥的 人)中改善學(xué)習(xí)、記憶和警覺的化合物以及營養(yǎng)藥物性組合物的興趣日益增加。因此，增強 NMDA受體功能并且能改善學(xué)習(xí)、記憶和警覺的化合物或營養(yǎng)藥物性組合物將是高度需要 的。W003039570 公開了 Pericarpium zanthoxyli (具體地，Zanthoxylumbungeanum 的干燥果實的外皮)的提取物用于保護(hù)腦細(xì)胞和改善記憶的用途。該提取物是通過用有機(jī)溶 劑/水混合物進(jìn)行提取來制備的，優(yōu)選通過用低級醇(1-4個碳原子)、丙酮、氯仿、二氯甲 烷、醚、乙酸乙酯或其混合物進(jìn)行提取。本發(fā)明的提取物不同于W003039570中所公開的，因 為本發(fā)明利用從全果實制備的水提取物，然后再用醇/醚混合物進(jìn)行再次提取。US 6, 419, 950 (Bombardelli et al.)還描述了使用 Zanthoxylumbungeanum 的果 皮提取物用于多種止痛和化妝品用途的用途。本發(fā)明的提取物不同于Bombardelli et al 公開的，因為本發(fā)明利用從全果實制備的水提取物，然后再用醇/醚混合物進(jìn)行再次提取。 此外，本發(fā)明提取物的用途也不同于Bombardelli et al提取物。發(fā)明詳述已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明，Zanthoxylum bungeanum的全果實(即果皮和果實)提 取物具有誘導(dǎo)LTP的能力，LTP在記憶形成和記憶鞏固中是重要的。由此，Zanthoxylum bungeanum全果實提取物可用于增強認(rèn)知功能。因此，本發(fā)明的一個方面是包含Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的新穎的 營養(yǎng)藥物性組合物，其用于增強認(rèn)知功能。Zanthoxylum bungeanum的全果實提取物也是本發(fā)明的一個方面。附圖
簡述圖Ia圖示了下臺(stepdown)測試中的錯誤率；a 在沖失(washout)期間與介載 體處理的年齡匹配的同窩產(chǎn)仔有顯著區(qū)別。圖Ib圖示了下臺行為測試，避免電擊的潛伏期持續(xù)時間；a 在沖失期間與介載體 處理的年齡匹配的同窩產(chǎn)仔有顯著區(qū)別；b 在沖失期間與銀杏處理的陽性對照有顯著區(qū) 別。圖2圖示了在訓(xùn)練日期間找到Morris水迷宮的隱藏平臺的潛伏期時間。Zanthoxylum bunReanum 才是耳又奪勿Zanthoxylum屬(也被稱為四川花椒)的多種物種的果皮被廣泛用于調(diào)味烹飪， 例如在中國四川，此外還有西藏、不丹、尼泊爾、日本和其它亞洲國家。最廣泛使用的這些 物禾中包括:Zanthoxylum bungeanum Max.(中 HI ) ；Ζ. piperitum DC = Ζ. sansho (中 Hl 中 部 / 東部、日本、韓國)、Z. simulans Hance = Z. bungei (中國，臺灣)和 Z. schinifolium Sieb. et Zucc.(中國、韓國)。相關(guān)物種還包括Z. nitidum Roxb. (DC)(中國、東南亞半 島)、Z. rhetsa Pierre var. budranga Pier. = Ζ· Iimonella(印度東；!匕、東南亞半島)、 Ζ. armatum DC = Z. alatum Roxb.(喜馬拉雅地區(qū)、東南亞半島、東亞)、Z. avicennae (Lamk) DC = Ζ. tidorense (中國、東南亞半島、印尼)和Z. acanthopodium DC(東喜馬拉雅地區(qū)、 中國、東南亞半島、蘇門答臘、印尼)(見http://www. uni-graz. at/ katzer/engl/Zant_ pip. html)。如在說明書和權(quán)利要求書中通篇使用的，術(shù)語“Zanthoxylumbungeanum全果實提 取物”表示提取物既包含果皮也包括整個果實。Zanthoxylum bungeanum全果實提取物應(yīng)當(dāng)是用于人或動物消耗的營養(yǎng)藥物性組 合物可接受的。因此，在再次提取過程期間使用的溶劑應(yīng)當(dāng)是所期望目的的若干管理機(jī)構(gòu) 許可的。通過溶劑提取方法制備的典型的Zanthoxylum bungeanum全果實提取物將含有，例如，β-菔烯、1，8_松油烯、順-薄荷醇乙酸酯、油酸、棕櫚酸、4-松油醇、α-山椒素、 Y “山椒素、羥基_ α “山椒素、羥基_山椒素、羥基_ Y _山椒素、α “菔烯、檜烯、香葉 烯、β -水芹烯、芳樟醇、異胡薄荷醇、松油烯-4-醇、α -松油醇、胡椒酮、α -羥基-4，6_ 二 甲氧基苯乙酮、香草木堿、茵芋堿、單葉蕓香品堿、甲氧基香豆素(herniarin)、正二十九烷、 鄰傘花烴、花椒油素、金絲桃甙、槲皮苷、槲皮素、isiquercitrin、蘆丁、myrecitin、楊梅苷、 山萘酚、木犀草素。在一種優(yōu)選的提取物中，果實和果皮被碾碎，對其進(jìn)行熱水提取，隨后通過蒸發(fā)或 通過噴霧干燥進(jìn)行干燥。然后使用醇，例如甲醇對得到的提取物進(jìn)行再次提取。通過該方 法制造的該提取物也是本發(fā)明的一個方面。通過本發(fā)明改善的狀況在本發(fā)明上下文中，“治療”還包括輔助治療以及預(yù)防、減少癥狀、延緩發(fā)作時間以 及減緩嚴(yán)重性。預(yù)防還表示保持健康狀態(tài)。在本說明書和權(quán)利要求書通篇中，術(shù)語“改善得 認(rèn)知功能”表示支持和保持認(rèn)知良好性和平衡，例如 增強的學(xué)習(xí)，包括今語言處理令問題解決今智力功能 解決社會心理負(fù)擔(dān)的能力 增強的注意力和集中力 增強的記憶力和記憶容量，尤其是短期記憶 增強的精神警覺和精神警惕，降低精神疲勞 對精神狀態(tài)的穩(wěn)定，包括令減輕產(chǎn)后狀況令減輕由于伴侶、兒童分離，所愛的人死亡或婚姻問題導(dǎo)致的心理負(fù)擔(dān)今減輕與住所、工作的改變或相似事件相關(guān)的問題令減輕交通事故或其它負(fù)面社會壓力后的緊張狀況 減輕壓力，包括今治療、預(yù)防和緩和與工作負(fù)擔(dān)、疲乏和/或精疲力盡相關(guān)的癥狀
令對壓力的增加的抗性或耐受性令在正常健康個體中，傾向于和協(xié)助放松 “狀況改善”，包括今降低激惹性和疲倦今降低、預(yù)防或緩和身體和精神疲勞今促進(jìn)高質(zhì)量睡眠，即抵擋失眠和睡眠紊亂，以及在更一般性的方面，在患病或正 常健康個體中增加能量。在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，組合物可用作為營養(yǎng)補充劑，特別是用于可能感受到 對增強的認(rèn)知功能和/或心理支持的特別需求的人?？赡軓脑鰪姷恼J(rèn)知功能獲益的人的非 窮盡列表包括老人，
學(xué)生或正在準(zhǔn)備考試的人，正處于大量學(xué)習(xí)期的兒童，S卩，嬰兒、學(xué)步兒童、學(xué)齡前兒童和學(xué)校兒童，建筑工人或者操作潛在危險機(jī)械的人士，卡車司機(jī)、飛行員、貨車駕駛員或者其他交通專業(yè)人士，空管，銷售員、經(jīng)理和其它“高效能專業(yè)人士”，警察和武裝人士，家庭主婦，或者其日常工作暴露給大量壓力的任何人或者日日常工作中尤其需要高注意力/ 集中力/高度精神和心理表現(xiàn)得任何人，例如參與體育運動的人、國際象棋運動員、高爾夫 球員、職業(yè)表演者(演員、音樂家等等)。為實現(xiàn)這樣的改善，推薦在數(shù)日內(nèi)施用(例如至少六天或十天)，每日施用堅持?jǐn)?shù) 周通常是優(yōu)選的。除了針對人的應(yīng)用之外，本發(fā)明的組合物可具有獸用領(lǐng)域的其它用途?？蓮脑鰪?的認(rèn)知功能獲益的動物包括經(jīng)受壓力條件的那些動物。此類條件發(fā)生于例如，捕獲或運輸 后，或者可能是養(yǎng)殖條件導(dǎo)致的(例如改變了住所或所有人)，當(dāng)動物發(fā)展出相似病癥或者 哀傷或好斗，或者展現(xiàn)刻板行為，或者焦慮和強迫行為時。經(jīng)受壓力的動物還將包括競賽動 物(例如狗、馬、駱駝)或用于多種運動中的動物、表演動物(例如馬戲團(tuán)動物和在舞臺、電 視上或電影中表演的那些)和表演馬術(shù)和其它高度紀(jì)律性舞步的馬。優(yōu)選的“動物”是寵物或伴侶動物以及農(nóng)場動物。寵物的例子是狗、貓、鳥、觀賞魚、 豚鼠、(北美野)兔、野兔和雪貂。農(nóng)場動物的例子是水產(chǎn)魚、豬、馬、反芻動物(牛、綿羊和 山羊)和禽類。營養(yǎng)藥物件用涂/制劑/劑量術(shù)語“營養(yǎng)藥物性”(nutraceutical)在本文中使用時表示在營養(yǎng)和藥物領(lǐng)域的應(yīng) 用中都表現(xiàn)出有用性。因此，新穎的營養(yǎng)藥物性組合物可用作為食物和飲料的補充劑，以及 用作為腸道或非腸道應(yīng)用的藥物制劑，其可以是固體制劑，例如膠囊或片劑，或者是液體制 劑，例如溶液或懸浮液。
0063]根據(jù)本發(fā)明的營養(yǎng)藥物性組合物還可含有保護(hù)性膠體(例如膠、蛋白、改性淀 粉)、粘合劑、膜形成劑/材料、壁/殼材料、基質(zhì)化合物、涂層、乳化劑、表面活性劑、增溶劑 (油、脂肪、蠟、卵磷脂等等)、吸附劑、載體、填料、共化合物、分散劑、潤濕劑、加工助劑(溶 劑)、流動劑、味道遮蔽劑、增重劑、膠凍劑(jellyfying agents)、凝膠形成劑、抗氧化劑和 抗微生物劑。此外，可向本發(fā)明的營養(yǎng)藥物性組合物中加入復(fù)合維生素和礦物質(zhì)補充劑，以獲 得足夠量的在一些膳食中缺乏的必需營養(yǎng)物。復(fù)合維生素和礦物質(zhì)補充劑還可用于疾病預(yù) 防和保護(hù)，以抵擋由于生物習(xí)慣方式造成的營養(yǎng)損失和缺陷。根據(jù)本發(fā)明的營養(yǎng)藥物性組合物還可以是適于施用至身體 的蓋侖形式的，尤其是 傳統(tǒng)用于口服施用的任何形式，例如，固體形式，例如食物或飼料(的添加劑/補充劑)、食 物或飼料預(yù)混合物、強化食物或飼料、片劑、丸劑、顆粒、糖衣丸、膠囊和泡騰制劑，例如粉末 和片劑，或者是液體形式，例如溶液、乳液或懸浮液，例如作為飲料、糊狀物或油狀懸浮液。糊狀物可被摻入進(jìn)硬殼或軟殼膠囊，其中膠囊具有例如(魚、豬、禽類、牛)明膠、植物蛋白 或木質(zhì)素磺酸鹽。其它應(yīng)用形式的例子是經(jīng)皮、非腸道或可注射施用。膳食和藥物組合物 可以是受控(延遲)釋放制劑。食物的例子是乳制品，其包括例如人造黃油、涂抹醬、黃油和奶酪。強化食物的例子是谷物條、烘焙品(例如蛋糕和曲奇餅)以及馬鈴薯片或脆片。飲料包括非酒精和酒精飲品，以及待加入飲用水的液體制劑和液體食物。非酒精 飲品是例如軟飲、運動飲料、果汁、檸檬水、茶和基于奶的飲品。液體食物是例如湯和奶制 品。含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的營養(yǎng)藥物性組合物可加入到軟飲、能量 條或糖中，使得成年人消耗每份優(yōu)選10至3000mg，更優(yōu)選50至2000mg以及最優(yōu)選100至 IOOOmg的全果實提取物。如果營養(yǎng)藥物性組合物是藥物制劑，所述組合物還含有可藥用賦形劑、稀釋劑或 佐劑?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于其配制，例如，Remington' sPharmaceutical Sciences, 20th edition Williams & Wilkins，PA，USA中公開的技術(shù)。對于口服施用，優(yōu)選使用片劑和 膠囊，其中含有合適的粘合劑(例如明膠或聚乙烯吡咯烷酮)、合適的填料(例如乳糖或 淀粉)、合適的潤滑劑(例如硬脂酸鎂)以及任選其它添加劑。優(yōu)選的是每施用單位(例 如每片劑或膠囊)含有2. 5至lOOOmg，更優(yōu)選12. 5至750mg以及最優(yōu)選25至500mg的 Zanthoxylum bungeanum全果實提取物衍生物的制劑。下述非限制性實施例是為了更好地 闡述本發(fā)明。實施例1制備Zanthoxylum bunReanum全果實提取物原始水提取物購自陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司(Shaanxi JiahePhytochem Co.，Ltd.，西安，中國710075)。然后通過蒸發(fā)或噴霧干燥(粗材料和提取物之間的比例為 10 1)對Z. bungeanum的全果實水提取物進(jìn)行干燥，并用醇/醚混合物(例如甲醇和甲基 叔丁基醚(MTBE))進(jìn)行再次提取，以獲得用于本發(fā)明的特定提取物。實施例2海馬切片培養(yǎng)物使用環(huán)狀刀對7天齡的Wistar大鼠斬首。在少于1分鐘內(nèi)開顱，分離腦半球并轉(zhuǎn) 移，剖開海馬，將其轉(zhuǎn)移到含有 137mM NaCl、5mM KC1、0. 85mM Na2HPO4U. 5mM CaCl2、0. 66mM KH2P04、0. 28mM MgSO4、ImMMgCl2、2. 7mM NaHCO3、ImM犬尿喹啉酸和 0. 6% D-葡萄糖的冰冷緩 沖液中。在相同緩沖液中，使用振動刀片顯微切片機(jī)(VT1200S; LeicaMicrosystems (Schweiz) AG, Heerbrugg, Switzerland)制備海馬橫切片(400 μ m)。海 馬切片被各自放到膜插入物(Millicell Culture Plate Inserts, 0. 4 μ m)上，在含有BME 和MEM(均來自Invitrogen)的1 1混合物，并含有25%熱滅活的馬血清、Ix GlutaMAX, Ix青霉素/鏈霉素、0.6%葡萄糖和ImM犬尿喹啉酸的培養(yǎng)基中，于35°C、5% C02、95%濕度 下進(jìn)行培養(yǎng)(Stoppini，Buchs and Muller (1991)，J. Neurosci. Methods，37 (2)，173-82)。培養(yǎng)48小時后，通過加入Zanthoxylum bungeanum全果實提取物，來活化突觸 NMDA 受體，在 140mM NaCl、5mM KClU. 3mM CaCl2、25mMHEPES(pH 7. 3)、33mM D_g 葡萄糖和 0. 02mM甲碘荷包牡丹堿中進(jìn)行15分鐘。肌氨酸(100 μ Μ)和ALX5407 (20ηΜ)常規(guī)被用作為 陽性對照。另外的陽性對照包含向姐妹培養(yǎng)物中加入200 μ M甘氨酸。處理之后，洗切片， 固定，用于免疫組織化學(xué)分析。對增強的突觸活性的標(biāo)記加以定量，其通常與長時程增強相關(guān)，其代表學(xué)習(xí)和記憶的離體模型(見下表1)。表1 與用緩沖液處理的姐妹培養(yǎng)物相比，用Zanthoxylum bungeanum全果實提取 物處理之后突觸標(biāo)記的相對活化。在經(jīng)典LTP實驗中觀察任何這些標(biāo)記(或其組合)的活 化。+表示定性活化，而-指示免疫反應(yīng)性降低。在GluRl檢驗中，數(shù)據(jù)作為對照值的百分 比顯不。 用Zanthoxylum bungeanum全果實提取物處理海馬培養(yǎng)物誘導(dǎo)了 LTP典型的生物 化學(xué)標(biāo)記(pCREB :cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白的活化形式；GluRl AMPA受體1的細(xì)胞表面存 在)。Zanthoxylum bungeanum全果實提取物沒有活化pMAPK (有絲分裂原活化的蛋白激酶 的活化形式)。實施例3Zanth0Xylum全果實提取物在兩種傳統(tǒng)嚙齒動物學(xué)習(xí)和記憶模型中的作 用1_下臺測試對小鼠進(jìn)行聯(lián)合的學(xué)習(xí)和記憶范例——下臺測試。反應(yīng)盒底部裝有36V的電網(wǎng)， 小鼠各自放在反應(yīng)盒中。當(dāng)小鼠獲得電擊，其正常反應(yīng)是跳到絕緣平臺上以避免疼痛刺激。 跳回到網(wǎng)上的大多數(shù)動物將在獲得電擊時迅速跳回到平臺上。對動物訓(xùn)練5分鐘，每只小 鼠被電擊或犯錯的數(shù)量被記錄。該數(shù)據(jù)構(gòu)成了學(xué)習(xí)數(shù)據(jù)。在24小時(訓(xùn)練日)和48小時 (測試日)進(jìn)行再次測試，這些試驗用作為記憶測試。每組中被電擊的小鼠的數(shù)量、從平臺 上跳下之前的時間以及在最初3分鐘內(nèi)犯錯的次數(shù)被記錄。訓(xùn)練結(jié)束后5天后，在第8天， 測試記憶衰退(沖失測試)。研究包括3個測試組(每組η = 12)。對所有小鼠都在研究期間每日口服喂飼 (10ml/kg)測試物質(zhì)或介載體。Ginkgo biloba(銀杏)的處理劑量是100mg/kg體重， Zanthoxylum提取物以三種劑量50 (低劑量)、150 (中等劑量)、450 (高劑量)mg/kg體重被 測試。咯利普蘭(Rolipram)通過在測試前30分鐘腹膜內(nèi)注射施用(0. lmg/kg體重)。在測試和記憶階段以及沖失后期間，當(dāng)與介載體處理的同窩幼仔(陰性對照)相 比時，Zanthoxylum處理的動物顯示出顯著更好的學(xué)習(xí)和記憶表現(xiàn)。圖Ia顯示了下臺測試中的錯誤率；a 沖失期間，與經(jīng)介載體處理的年齡匹配的同 窩幼仔有顯著不同。這些結(jié)果表明，所有動物都同樣好地學(xué)習(xí)了任務(wù)，但是經(jīng)Zanthoxylum 處理的小鼠比對照小鼠記憶保持得顯著更長。圖Ib顯示了下臺行為測試期間避免電擊的潛伏期持續(xù)時間；a 在沖失期間與介 載體處理的年齡匹配的同窩產(chǎn)仔有顯著區(qū)別；b 在沖失期間與銀杏處理的陽性對照有顯 著區(qū)別。再次發(fā)現(xiàn)，經(jīng)Zanthoxylum處理的小鼠比其它組保持了顯著更長的記憶。結(jié)論用Zanthoxylum全果實提取物處理的小鼠展示出比其年齡匹配的對照更好 的記憶表現(xiàn)。經(jīng)Zanthoxylum處理的小鼠不僅比年齡匹配的對照表現(xiàn)更好，也比銀杏處理 的陽性對照表現(xiàn)更好。實施例4全果實提取物在兩種傳統(tǒng)B忠齒動物學(xué)習(xí)和記憶樽型中的作用2-M0rriS水誅宮Morris水迷宮是用于測試嚙齒動物空間記憶的最好被接受的范例之一。小鼠必須 在圓形泳池中游泳，并且必須搜尋隱藏平臺。它們使用實驗室中的目視標(biāo)志作為定位幫助。在該實驗中，我們使用了 Morris水迷宮，直徑=1. 5m,隱藏平臺(10 X IOcm)放在 10點鐘方向離邊界IOcm處。在第0天，令小鼠適應(yīng)并訓(xùn)練兩次游到平臺。1-4天，每天對小鼠訓(xùn)練兩次，記錄查找平臺的時間。計算每天兩次測試的平均時 間。此外，還計算平臺跨越的數(shù)量。前3天的分?jǐn)?shù)被用作為訓(xùn)練分?jǐn)?shù)。第四天的兩次測試 被用作為測試分?jǐn)?shù)。在訓(xùn)練期間，僅獲得低和中等Zanthoxylum濃度的組表現(xiàn)顯著更好。第4天，當(dāng)開 始探測試驗時，中等濃度Zanthoxylum的組顯示出較之年齡匹配的對照動物而言的顯著更 短的潛伏期時間，這表明，用Zanthoxylum提取物進(jìn)行處理在動物的學(xué)習(xí)和記憶表現(xiàn)兩方 面都起作用。結(jié)果示于圖2中，其中顯示了在訓(xùn)練日期間為了找到Morris水迷宮中的隱藏平臺 的潛伏期。a:在第一天期間，與介載體處理的年齡匹配的同窩幼仔的顯著區(qū)別，說明用低 劑量Zanthoxylum提取物處理，顯著增強了動物的學(xué)習(xí)表現(xiàn)。在中等劑量下，Zanthoxylum 處理對學(xué)習(xí)能力的改善甚至超過用銀杏處理的動物所觀察到的。在第4天，探測試驗期間， 在Zanthoxylum中等劑量組和介載體處理的年齡匹配的同窩幼仔之間觀察到顯著區(qū)別，再 次表明，Zanthoxylum提取物顯著改善了動物的記憶表現(xiàn)。實施例5制備軟明膠膠囊可制備包含下述成分的軟明膠膠囊(200mg) 可向成年人施用每天兩片膠囊，持續(xù)3個月。觀察到了認(rèn)知功能、警覺、記憶和工 作專注能力的改善。實施例6制備強化非烘焙谷物條 將Zanthoxylum bungeanum全果實提取物與脫脂奶粉預(yù)混合，并放在行星式碗狀 混合儀中。加入玉米片和脆米片，對總混合物進(jìn)行輕柔混合。然后加入干蘋果切片。在一個烹飪罐中，將糖、水和鹽按照上文給出的量混合起來(溶液1)。在第二個烹飪罐中，將葡 萄糖糖漿、轉(zhuǎn)化糖糖漿和山梨糖醇糖漿按照上文給出的量混合起來(溶液2)。脂肪相由烘 焙脂肪、棕仁油脂、卵磷脂和乳化劑構(gòu)成。將溶液1加熱至110°C。將溶液2加熱至113°C， 然后在冷水浴中冷卻。隨后，合并溶液1和溶液2。在水浴中于75°C令脂肪相熔融，然后加 入到溶液1和溶液2的合并混合物中。向液體糖/脂肪混合物中加入蘋果香精和檸檬酸。 向干成分中加入液體物質(zhì)，在行星式碗狀混合儀中良好混合。將物質(zhì)放到大理石板上，滾碾 成想要的厚度。將物質(zhì)冷卻至室溫，并且切成塊。非烘焙谷物條每份(30g)含有大約29mg Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。對于一般性的健康和能量目的而言，可每天吃1-2 條谷物條。棚列7狐絲果餅應(yīng)勿翻白_今■危P將馬鈴薯切得非常薄，噴橄欖油，在烤箱中烘焙(425° F)，直到變棕變脆(大約 30分鐘)?；蛘?，將薄片在植物油中深浸(350-375° F)，直到變脆。隨后，用包含海鹽和 Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的組合物涂覆脆片。實施例8含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的干燥狗飼料用含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物和抗氧化劑的玉米油懸浮液，以足 以向狗施用每kg體重5mg Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的每日劑量的量，對用于 狗的商業(yè)基礎(chǔ)勝食(例如 Mera Dog “Brocken", MERA-Tiemahrung GmbH, Marienstra^ e 80-84，D-47625 Kevelaer-ffetten, Germany)進(jìn)行噴霧，其中所用抗氧化劑例如是維生 素 C(例如 ROVIMIX C-EC,來自 DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)及其衍生物，例如，抗壞血酸單磷酸鈉(例如STAY- C 50，例如DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) 或L-抗壞血酸鈉/鈣的三、二 或單磷酸酯的混合物(例如ROVIMIX STAY-C 35，來自 DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)。對食物組合物加以干燥，至含有的干物質(zhì)按重量計大約 90%。對于IOkg體重每天消耗大約200g干燥飼料的平均水平的狗而言，狗食含有每kg 食物大約250mg的Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。對于更重的狗，相應(yīng)制備飼料 混合物。為降低狗的壓力、恐懼和好斗性，可以有規(guī)律地向動物庇護(hù)農(nóng)場中的狗給予食物。 在獸醫(yī)來訪或在獸醫(yī)診所停留或假日分離之前，壓力事件之前至少一周、期間和之后一周 給予食物。實施例9含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的濕潤貓飼料將商業(yè)基礎(chǔ)貓膳食(例如，HappyCat ‘‘Adult，，，Tierfeinnahrung, Sudliche Hauptstra β e 38, D-86517 ffehringen, Germany)與含有 Zanthoxylumbungeanum 全果實 提取物和抗氧化劑的玉米油懸浮液，以足以向貓施用每日每kg體重IOmg Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的量混合，其中所用抗氧化劑例如是維生素C (例如R0VIMIX C-EC, ^ 自 DSM NutritionalProducts Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)
例如，抗壞血酸單磷酸鈉(例如STAY- C 50，例如DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)或L-抗壞血酸鈉/鈣的三、二或單磷酸酯的混合物(例 如 ROVIMIX STAY-C 35，來自 DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)。對于5kg體重每天消耗大約400g干燥飼料的平均水平的貓而言，貓食含有 每kg食物大約125mg的Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。對食物組合物加以干燥，至含有的干物質(zhì)按重量計大約90%。為降低貓的壓力、恐懼和好斗性，可以有規(guī)律地向動物 庇護(hù)農(nóng)場中的貓給予食物。在獸醫(yī)來訪或在獸醫(yī)診所停留或假日分離之前，壓力事件之前 至少一周、期間和之后一周給予食物。實施例10含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的狗零食用含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物和抗氧化劑的玉米油懸浮液，以足 以提供每g零食0. 5-5mg Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的量，對商業(yè)狗零食(例 如 Mera Tiernahrung GmbH, Marienstra β e 80-84,47625 Kevelaer-ffetten, Germany 提 供的用于狗的Mera Dog "Biscuit")進(jìn)行噴霧，其中所用抗氧化劑例如是維生素C(例如 ROVIMIX C-EC, ^ S DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) 及其衍生物，例如，抗壞血酸單磷酸鈉(例如STAY- C 50，例如DSM Nutritional ProductsLtd, Kaiseraugst, Switzerland)或L-抗壞血酸納/ 丐的三、二或單憐酸酉旨 的混合物(例如ROVIMIX STAY-C 35，來自 DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)。對食物組合物加以干燥，至含有的干物質(zhì)按重量計大約90%。 為降低恐懼和緊張，除了食物之外，平日還給予零食，或者當(dāng)飼喂沒有保證時給予零食，即， 旅行期間，可給予多至每天5次。實施例11含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的貓零食用含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物和抗氧化劑的玉米油懸浮液，以足 以提供每g零食0. 5-5mg Zanthoxylum bungeanum全果實提取物的量，對用于貓的商業(yè)貓 零食(例如 Whiskas，Masterfoods GmbH, Eitzer Str. 215,27283 Verden/Aller, Germany 提供的用于貓的Whiskas Dentabits)進(jìn)行噴霧，其中所用抗氧化劑例如是維生素C (例如 ROVIMIX C-EC, ^ g DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland) 及其衍生物，例如，抗壞血酸單磷酸鈉(例如STAY- C 50,例如DSM Nutritional ProductsLtd, Kaiseraugst, Switzerland)或L-抗壞血酸鈉/鈣的三、二或單磷酸酯的混合 物(例如ROVIMIX STAY-C 35，來自 DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Switzerland)。對食物組合物加以干燥，至含有的干物質(zhì)按重量計大約90%。為降低恐懼 和緊張，除了食物之外，平日還給予零食，或者當(dāng)飼喂沒有保證時給予零食，即，旅行期間， 可給予多至每天5次。
權(quán)利要求
在動物或人中改善認(rèn)知功能和/或心理健康的方法，所述方法包括施用認(rèn)知功能改善量的Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，包括以能有效誘導(dǎo)長時程增強的量施用Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中，所述認(rèn)知功能和/或心理健康選自保持認(rèn)知良好 和平衡、學(xué)習(xí)、語言處理、問題解決、智力功能、解決社會心理負(fù)擔(dān)的能力、注意力和集中力、 記憶力、記憶容量、精神警覺、精神警惕、精神疲勞、精神狀態(tài)的穩(wěn)定、壓力減輕、工作負(fù)擔(dān)壓 力、壓力相關(guān)的疲勞和/或精疲力盡以及促進(jìn)放松構(gòu)成的組。
4.用于生產(chǎn)用于改善動物或人的認(rèn)知功能的營養(yǎng)藥物或藥物的組合物，所述組合物包 含認(rèn)知功能改善量的Zanthoxylum bungeanum全果實提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述組合物包含能有效誘導(dǎo)長時程增強的量的 Zanthoxylum bungeanum H
6.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述認(rèn)知功能選自保持認(rèn)知良好和平衡、學(xué)習(xí)、語言 處理、問題解決、智力功能、解決社會心理負(fù)擔(dān)的能力、注意力和集中力、記憶力、記憶容量、 精神警覺、精神警揭、精神疲勞、精神狀態(tài)的穩(wěn)定、壓力減輕、工作負(fù)擔(dān)壓力、壓力相關(guān)的疲 勞和/或精疲力盡以及促進(jìn)放松構(gòu)成的組。
7.包含Zanthoxylumbungeanum全果實提取物的營養(yǎng)藥物。
8.通過下述工藝制備的Zanthoxylumbungeanum全果實提取物將果實和果皮暴露給水，獲得水性提取物；除去水，獲得水性提取物殘余物；以及用有機(jī)溶劑對所述水性提取物殘余物進(jìn)行再次提取。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的提取物，其中所述有機(jī)溶劑是甲醇和甲基叔丁基醚。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的營養(yǎng)藥物性組合物，其中含有Zanthoxylum bungeanum全果實提取物作為活性成分。術(shù)語“營養(yǎng)藥物性”在本文中使用時表示在營養(yǎng)、藥物、獸用領(lǐng)域的應(yīng)用中的有用性。所述組合物可用于改善認(rèn)知功能，例如學(xué)習(xí)、記憶和警覺，精神病患者穩(wěn)定性和保持。
文檔編號A61K36/00GK101888847SQ200880119373
公開日2010年11月17日 申請日期2008年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者伯恩德·穆斯勒, 克勞斯·吉爾伯特, 哈?！つ苋? 安·福勒, 安尼斯·奧利維亞·麥尼-莫肯, 瑞吉娜·格拉切克, 艾德里安·維斯 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司