專(zhuān)利名稱(chēng)：用于腦部健康的單位劑量的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防記憶功能障礙、認(rèn)知功能障礙、阿爾茨海默病和癡呆， 以及癡呆前相關(guān)病癥和/或癥狀或此類(lèi)病癥的特征的組合物和方法。本發(fā)明具體涉及本文 所用的小體積給藥形式。
背景技術(shù)：
失憶、癡呆和腦功能降低是成年人的問(wèn)題(major problem)，尤其是在老年人中。 在與神經(jīng)功能受損相關(guān)的這些疾病的治療和/或預(yù)防上進(jìn)行了很大努力。年紀(jì)大于50歲的人因衰老和非最佳營(yíng)養(yǎng)而特別易于患上此類(lèi)疾病。通常被稱(chēng)為 癡呆和阿爾茨海默病(AD)的這些綜合征的特征為腦中神經(jīng)變性和斑塊沉積。這些斑塊由 β-淀粉狀蛋白(abeta)被視為關(guān)鍵組分的大量成分所組成。Abeta產(chǎn)生自位于膜中的前 體蛋白，且被認(rèn)為促進(jìn)前炎癥反應(yīng)和激活神經(jīng)毒性通路，引起以導(dǎo)致神經(jīng)元死亡的脊突和 軸突損失為特征的神經(jīng)元功能障礙。WO 2007/008586 A2(Martek Biosciences Corp.)和 EP 1800675A1(Nutricia N. V.)描述了用于治療和/或預(yù)防癡呆的組合物，其中所述組合物包括含多不飽和脂肪酸 (PU-FA)如二十二碳六烯酸(DHA)或二十二碳五烯酸(DPA)的脂質(zhì)部分。WO 2006/031683 A2 (MIT)中還顯示施用尿苷或其來(lái)源以改進(jìn)受試者的神經(jīng)學(xué)功 能。已知尿苷，特別是尿苷一磷酸(UMP)形式，是增加磷脂生成從而改變膜組成的營(yíng)養(yǎng)物。 然而，目前尚未報(bào)道UMP對(duì)abeta斑塊負(fù)荷的影響。含尿苷核苷/核苷酸和脂肪酸，特別是EPA和/或DHA的組合物已經(jīng)公開(kāi)在EP 1666092 A2 (Trommsdorff GmbH)中，用于治療各種神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病，并公開(kāi) 在TO 2006/127620 A2 (MIT)中，用于治療記憶障礙。

發(fā)明內(nèi)容
基于前述，希望用營(yíng)養(yǎng)物如DHA和UMP的混合物干預(yù)，以產(chǎn)生降低神經(jīng)變性的有效 策略。然而，本發(fā)明人已經(jīng)認(rèn)識(shí)到本領(lǐng)域所教導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)和藥物組合物中包含活性成分UMP 和DHA會(huì)導(dǎo)致這些活性成分的不充分?jǐn)z取。不充分?jǐn)z取由高體積營(yíng)養(yǎng)品以及(老年)患者 食欲受限共同引起，結(jié)果是無(wú)法吸收推薦劑量的活性成分(通常包含在100-500ml營(yíng)養(yǎng)物 中)。因此，營(yíng)養(yǎng)組合物中包含活性成分會(huì)在食欲降低或飲食行為異?；蚓芙^食物的患者中 產(chǎn)生亞最佳的效果?；蛘?，希望直接通過(guò)將活性成分加入小體積劑型如丸劑、片劑或膠囊中來(lái)減少劑 量體積。然而，由于體積小，本領(lǐng)域中教導(dǎo)的組合物中的一些成分必須被省去。然而，本發(fā) 明人發(fā)現(xiàn)從營(yíng)養(yǎng)組合物(如EP 1800675 Al實(shí)施例1所述)中除去(營(yíng)養(yǎng))成分和僅給藥 UMP和DHA可導(dǎo)致小體積劑型，但不幸的是，這是以神經(jīng)變性效果(β_淀粉狀蛋白)為代價(jià) 的。事實(shí)上，如所附實(shí)施例所示，這甚至?xí)?duì)神經(jīng)變性具有不良影響。因此，以小體積劑型 簡(jiǎn)單加入和給藥UMP和DHA并非最佳。
因此，在本領(lǐng)域中，對(duì)制備小體積劑型以減輕abeta斑塊負(fù)荷和減少神經(jīng)變性存 在需要，其中活性成分的作用至少類(lèi)似于在全部營(yíng)養(yǎng)藥和藥物制劑中發(fā)現(xiàn)的那些。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供小體積劑型，以用于減輕abeta斑塊負(fù)荷和神經(jīng)變性， 治療與神經(jīng)功能受損相關(guān)的疾病，特別是癡呆或AD或記憶障礙。在本文中，本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)包含生育酚和/或其等同物(即具有維生素E活 性的化合物)可克服與低劑量制劑中DHA和UMP相關(guān)的上述缺點(diǎn)。因此，這些新發(fā)現(xiàn)使得 能夠制備低劑量組合物，所述低劑量組合物可有效地用于治療和/或預(yù)防記憶減退和/或 認(rèn)知功能障礙和/或支持健康腦功能，詳述如下。給藥維生素E來(lái)治療阿爾茨海默病已經(jīng)由Grundman在The AmericanJournal of Clinical Nutrition, 71 (2), 630S-636S (2000)中描述，其中維生素 E 用以降低氧 化應(yīng)激，和所述方法還由Ricciarelli等描述在Molecular Aspectsof Medicine, 28, 591-606(2007)中，用以治療神經(jīng)變性疾病。然而，這些出版物均未提示出本發(fā)明的組合使 用和具體組合物。所附實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)2未顯示出單獨(dú)的α-生育酚的作用。發(fā)明詳述 本發(fā)明涉及組合物，包括⑴核苷堿基、核苷和/或核苷酸形式的尿苷；(ii) 二十二碳六烯酸(DHA)和/或二十碳五烯酸(EPA)；和(iii)生育酚和/或其等同物，其中 所述組合物具有a)每單位劑量200_3000mg的重量；b)每單位劑量小于50kcal的能量含量；和/或c)每單位劑量0. 1至IOml的體積。給藥形式出于上述原因，小體積組合物不同于營(yíng)養(yǎng)和飲食組合物(營(yíng)養(yǎng)藥)和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。 組合物可包括一種或多種常規(guī)載體和/或稀釋劑。組合物為單位劑量形式。單位劑量被定義為物理上可區(qū)分的獨(dú)立單位。含活性成 分的一個(gè)或多個(gè)單位劑量可包含在藥筒、藥包(pack)或分配器中。此類(lèi)藥筒、藥包或分配 器可附帶有用于組合物給藥的說(shuō)明書(shū)。劑量方案可包括每次給藥一個(gè)或多個(gè)單位劑量，通 常每次1-5個(gè)單位劑量。由于其小或減小的體積，所述組合物優(yōu)選為固體形式或半固體劑量單位形式。單 位劑量?jī)?yōu)選為適于口服給藥的片劑、凝膠，包括軟凝膠、糖錠劑、丸劑、膠囊、顆粒劑、小球、 或(粉末)藥袋、擠壓包裝，其中活性成分以治療有效量存在，且與一種或多種稀釋劑、凝膠 劑或賦形劑組合，所述稀釋劑、凝膠劑或賦形劑為非活性成分，用于稀釋或賦予活性成分形 狀或稠度，且有效地將活性成分遞送至醫(yī)生處方所針對(duì)的人。具體地，適合的賦形劑為填料，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制 齊U，如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖 維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。其它適合的藥物載體和它們的制劑描 述在 Remington :TheScience and Practice of Pharmacy 1995, edited by E.W.Martin, MackPublishing Company, 19th edition，Easton，Pa 中。需要時(shí),可加入崩解劑，如交聯(lián)聚 乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。糖錠劑核具有適合的包衣。為此，可使 用濃的糖溶液，其可選地包括阿拉伯樹(shù)膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、Fe的氧化物、漆溶液和適合的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？蓪⑷玖匣蛏丶尤?片劑或糖錠劑包衣以鑒別或表征活性化合物劑量的不同組合。通常使用明膠或增塑劑如甘 油或山梨醇來(lái)獲得膠囊。膠囊殼包含活性成分與以下物質(zhì)的混合物填料如乳糖、粘結(jié)劑如 淀粉，和/或潤(rùn)滑劑如滑石或硬脂酸鎂，和可選地穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，活性化合物可溶解 或懸浮在適合的液體中，如脂肪油、乳化劑如大豆卵磷脂、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外， 可加入穩(wěn)定劑。每日劑量將根據(jù)每個(gè)具體情況中個(gè)體需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。其可包括每天給藥1-20單 位劑量，優(yōu)選2-10單位劑量。治療本文所述疾病領(lǐng)域的任何普通技術(shù)人員無(wú)需過(guò)多實(shí)驗(yàn)， 依賴(lài)個(gè)人知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)和本申請(qǐng)的公開(kāi)，就能夠確定本發(fā)明化合物對(duì)特定疾病和患者的治療 有效量?；诖?，技術(shù)人員可確定每次和每天將要給藥的單位劑量 的量。然而，在下文中， 定義每日劑量，這會(huì)有助于確定將要給藥的單位劑量的數(shù)量。根據(jù)本發(fā)明的較小或小體積組合物可表征為全部與組合物較小尺寸有關(guān)的以下 特征中的一種或多種。在一個(gè)實(shí)施方式(a)中，組合物優(yōu)選具有每單位劑量200-3000mg的重量，更優(yōu)選 每單位劑量300-2000mg，最優(yōu)選小于每單位劑量lOOOmg。在一個(gè)實(shí)施方式(b)中，本發(fā)明組合物的熱量體積(caloric volume)優(yōu)選小于 每單位劑量50kcal，更優(yōu)選小于每單位劑量40kcal，最優(yōu)選小于每單位劑量30kcal。另 外或任選地，特別優(yōu)選組合物的能量含量小于lOkcal/g，更優(yōu)選小于5kcal/g，最優(yōu)選小于 3kcal/go這些數(shù)字適用于在液體中的任何任選重構(gòu)之前的組合物的固體重量。在實(shí)施方式(C)中，本發(fā)明的小或減小體積的組合物具有每單位劑量0.1至 10ml (cm3)的體積，更優(yōu)選0. 2_8ml，最優(yōu)選至少0. 5ml，具體是l_5ml。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，小體積組合物通過(guò)上述特征(a)重量、(b)能量含量和(c) 體積中的兩種，更優(yōu)選全部三種來(lái)表征。DHA，EPA本發(fā)明包括二十二碳六烯酸(22:6 ω-3 ；DHA)和二十碳五烯酸(20:5 ω-3 ；EPA) 的用途。優(yōu)選地，本組合物至少包含DHA，更優(yōu)選包含DHA和EPA。在另一方面，本組合物優(yōu)選包含大量EPA。EPA被轉(zhuǎn)化為DPA(ω-3)，這增加腦中 二十二碳五烯酸(22:5ω-3 ;DPA)向DHA的后續(xù)轉(zhuǎn)化。因此，本組合物優(yōu)選包含大量EPA， 以進(jìn)一步刺激體內(nèi)DHA形成。DHA和/或EPA優(yōu)選作為甘油三酯、甘油二酯、甘油單酯、游離脂肪酸或它們的鹽或 酯、磷脂、溶血磷脂、甘油醚、脂蛋白、神經(jīng)酰胺、糖脂或它們的組合提供。優(yōu)選地，本組合物 至少包含甘油三酯形式的DHA。在每日劑量方面，本方法優(yōu)選包括每天給藥50-5000mg(DHA+EPA)，更優(yōu)選每天 100-3000mg，最優(yōu)選每天200-1000mg。DHA優(yōu)選以每天50_4000mg的量給藥，更優(yōu)選每天 100-2500mg，最優(yōu)選每天200_1000mg。如果可能，EPA優(yōu)選以每天50_4000mg的量給藥，更 優(yōu)選每天100-2500mg，最優(yōu)選每天200-1000mg。這些量的EPA適合單獨(dú)使用或與DHA組合使用。在單位劑量方面，總脂肪酸中(DHA+EPA)的比例優(yōu)選為5_95重量％，更優(yōu)選為 10-80重量％，最優(yōu)選為15-70重量％。本組合物優(yōu)選包含以總脂肪酸計(jì)5-95重量％的DHA，優(yōu)選以總脂肪酸計(jì)10-75重量％的0撤，更優(yōu)選以總脂肪酸計(jì)10-60重量％的0撤。本 組合物優(yōu)選包含以總脂肪酸計(jì)5-95重量％的EPA，優(yōu)選以總脂肪酸計(jì)10-75重量％的EPA， 更優(yōu)選以總脂肪酸計(jì)15-60重量％的EPA。DHA與EPA的重量比優(yōu)選大于1. 0，更優(yōu)選為1. 2-10,更優(yōu)選為2_8。上述比例和 量對(duì)若干方面進(jìn)行了考慮和優(yōu)化，包括味道(過(guò)高的LCP水平降低味道，導(dǎo)致減低順從性)、 DHA和其前體間的平衡以確保與最大劑量有關(guān)的最佳效率，和本發(fā)明的小體積產(chǎn)物制劑方面。本方法優(yōu)選包括給藥DHA，優(yōu)選每單位劑量組合物中含50-1000mgDHA，更優(yōu)選每 單位劑量含100-500mg DHA,最優(yōu)選每單位劑量含100-400mg，至少每單位劑量含200mg DHA。以單位劑量的總干重計(jì)，根據(jù)本方法的劑量單位優(yōu)選包含5-95重量％ DHA,更優(yōu)選 10-75重量％ DHA，更優(yōu)選20-60重量％，最優(yōu)選25-50重量％。如果存在，此處提及的用于 DHA的每單位劑量的優(yōu)選范圍也適用于EPA。
本組合物優(yōu)選包含極低量的花生四烯酸(AA ；22:4ω-6)。認(rèn)為花生四烯酸會(huì)抵消 本組合物的效果。受試者通常攝取充足的AA的(前體)，且過(guò)量的每日劑量會(huì)刺激炎癥反 應(yīng)，抑制每日活性。優(yōu)選本組合物中DHA/AA的重量比至少為5，優(yōu)選至少為10，更優(yōu)選至少 為15。本方法優(yōu)選包括給藥組合物，以總脂肪酸計(jì)，所述組合物包含小于5重量％，更優(yōu)選 小于2.5重量％的花生四烯酸。在本產(chǎn)品中，Ω-6/Ω-3脂肪酸的比例優(yōu)選小于0.5，更優(yōu) 選小于0. 2。本組合物優(yōu)選包含選自魚(yú)油、藻類(lèi)油、遺傳修飾的含DHA的植物和蛋脂(egg lipids)中的至少一種油。優(yōu)選地，本組合物包含含DHA和EPA的魚(yú)油。核苷酸本組合物優(yōu)選包含尿苷和/或其等同物，優(yōu)選為選自由尿苷(即核糖基尿嘧啶)、 脫氧尿苷(脫氧核糖基尿嘧啶)、尿苷磷酸鹽(UMP、dUMP、UDP、UTP)、核苷堿基尿嘧啶和酰 化的尿苷衍生物組成的組中的至少一種尿苷和/或其等同物。優(yōu)選地，本組合物包括選自 由尿苷一磷酸(UMP)、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷三磷酸(UTP)組成的組中的尿苷磷酸鹽。最 優(yōu)選地，本組合物包括UMP，因?yàn)閁MP可最有效地被身體吸收。優(yōu)選地，本組合物中至少50 重量％的尿苷，更優(yōu)選至少75重量％，最優(yōu)選至少95重量％由UMP提供。本方法優(yōu)選包括每天給藥0. 01-6g的尿苷(尿苷、脫氧尿苷、尿苷磷酸鹽、核苷堿 基尿嘧啶和?；哪蜍昭苌锏目偭?、優(yōu)選每天0. l_2g，最優(yōu)選每天0. 2-lg。優(yōu)選地，本組合物包含尿苷磷酸鹽，優(yōu)選尿苷一磷酸(UMP)。UMP可非常有效地被 身體吸收。因此，本組合物中包含UMP使得能夠在以最低劑量下具有高有效性和/或以小 體積給藥至受試者。本方法優(yōu)選包括給藥組合物，以單位劑量的干重計(jì)，所述組合物包含每單位劑量 lO-lOOOmg，優(yōu)選每單位劑量20-600mg，更優(yōu)選每單位劑量50-400mg的尿苷，具體是每單位 劑量為至少I(mǎi)OOmg的尿苷。以單位劑量的總干重計(jì)。尿苷和其等同物的相對(duì)量?jī)?yōu)選為1-50 重量％，更優(yōu)選為2-40重量％，最優(yōu)選為5-25重量％。等同物的基于重量的所需單位劑量和每日劑量可利用所述等同物和尿苷的分子 量通過(guò)采用等摩爾量從尿苷的劑量計(jì)算出。本方法優(yōu)選包括每天給藥0. 01-3g的尿苷一磷酸(UMP)，優(yōu)選每天0. l_2g，更優(yōu)選每天0.2-lg。優(yōu)選地，每公斤體重每天給藥1-37. 5mg UMP。等同物的基于重量的所需單位 劑量和每日劑量可通過(guò)利用所述等同物和UMP的分子量采用等摩爾量從UMP的劑量計(jì)算 出，UMP的分子量是324道爾頓。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，本組合物優(yōu)選不包含高含量的其它核苷酸。因此，優(yōu)選本 組合物中腺苷/尿苷的重量比小于0. 1，更優(yōu)選小于0.01，最優(yōu)選為0。優(yōu)選本組合物中鳥(niǎo) 苷/尿苷的重量比小于0. 1，更優(yōu)選小于0. 01，最優(yōu)選為0。優(yōu)選本組合物中肌苷/尿苷的 重量比小于0. 1，更優(yōu)選小于0. 01，最優(yōu)選為0。在組合物中，優(yōu)選DHA和/或EPA與尿苷和其等同物(以等摩爾量的UMP重新計(jì) 算)的重量比至少為1，更優(yōu)選至少為1. 5。更優(yōu)選地，在重量方面，相比于尿苷和其等同物， DHA在組合物中占優(yōu)勢(shì)。組合物可進(jìn)一步包含胞苷。優(yōu)選地，尿苷與胞苷的重量比大于1.0，更優(yōu)選大于 2.0，最優(yōu)選大于5.0。本文所用術(shù)語(yǔ)尿苷涉及尿苷和/或其等同物。本文所用術(shù)語(yǔ)胞苷涉 及胞苷和/或其等同物。雖然胞苷為尿苷的前體，通過(guò)血腦屏障，因此在本組合物中包含尿 苷更有效。牛育酚本組合物進(jìn)一步包含生育酚和/或其等同物，包括從其衍生的甲基化酚。生育酚 含色原烷醇環(huán)，具有可給出氫原子以減少自由基和疏水側(cè)鏈的羥基基團(tuán)。此定義也包括生 育三烯酚，其具有與生育酚類(lèi)似的結(jié)構(gòu)，區(qū)別在于形成烴尾的三個(gè)異戊二烯單元中每個(gè)上 的不飽和鍵。生育酚具有飽和的植基尾。本說(shuō)明書(shū)中所用的術(shù)語(yǔ)“生育酚和/或其衍生物”包括生育酚、生育三烯酚、其藥 學(xué)和/或營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的衍生物和其任意組合。生育酚和生育三烯酚存在α、β、Y和 δ形式，這由色原烷醇環(huán)上甲基基團(tuán)的數(shù)量決定。每種形式具有略微不同的生物活性。藥 學(xué)和/或營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的衍生物的實(shí)例為鹽，如乙酸鹽或琥珀酸鹽。更優(yōu)選地，組合物包含生育酚家族成員，更優(yōu)選為α -生育酚和其營(yíng)養(yǎng)學(xué)和/或藥 學(xué)上可接受的等同物。生育酚的量?jī)?yōu)選為每單位劑量0. l-50mg,更優(yōu)選為每單位劑量l_40mg，最優(yōu)選每 單位劑量小于30mg。這些數(shù)字對(duì)應(yīng)于α-生育酚的量。α-生育酚的等同物的基于重量的 所需單位劑量和每日劑量可使用例如下表計(jì)算。本文中，按照“x”mg α -TE重新計(jì)算1. Omg 生育酚等同物的量。R代表與苯基連接的側(cè)基，根據(jù)所述生育酚，所述側(cè)基可為甲基或氫。
蛋白質(zhì)含量本組合物優(yōu)選具有低蛋白質(zhì)含量，包括游離氨基酸、肽、(非)水解的蛋白質(zhì)和其 鹽。優(yōu)選單位劑量包含的蛋白質(zhì)物質(zhì)小于300mg，更優(yōu)選小于200mg，最優(yōu)選小于lOOmg。最 優(yōu)選地，組合物至少不含肽和蛋白質(zhì)，和其水解產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方式中，以組合物的干重計(jì)，本發(fā)明組合物的蛋白質(zhì)含量小于20重 量％，更優(yōu)選小于10重量％。另外或可選地，蛋白質(zhì)物質(zhì)與DHA、EPA和尿苷及其等同物總和的重量比優(yōu)選小于 1，更優(yōu)選小于0. 5，最優(yōu)選小于0. 25，具體是小于0. 1。其它治療劑可以適當(dāng)?shù)匕捎糜诒Ｗo(hù)個(gè)體抗任何本文所述病癥或疾病的任何治療劑，且可 包含藥物。對(duì)所治療的具體疾病或病癥，此類(lèi)治療性化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。本發(fā)明的活性成分可通過(guò)藥學(xué)上相容的反離子作為鹽來(lái)提供。藥學(xué)上相容的鹽可 通過(guò)多種酸來(lái)形成，包括但不限于鹽酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、丁二酸等。鹽更 易溶于含水溶劑或?yàn)橄鄳?yīng)游離堿形式其它質(zhì)子溶劑中。麗本發(fā)明涉及上述組合物在預(yù)防和/或治療記憶減退和/或認(rèn)知功能障礙、阿爾茨 海默病和/或癡呆中的用途。在本發(fā)明中，將“癡呆”特別理解為“老年癡呆”。認(rèn)為老年癡 呆或癡呆包括阿爾茨海默病(AD)。本發(fā)明還涉及所述組合物在減輕神經(jīng)變性和/或降低腦中(abeta)斑塊沉積，和 /或促進(jìn)或支持健康的腦功能中的用途。在一個(gè)實(shí)施方式中，將本組合物給藥至癡呆前(predromal dementia)患者和/ 或阿爾茨海默病前(predromal Alzheimer)患者?！鞍V呆前患者”是指這樣的人，其未患有 上述的老年癡呆，但具有發(fā)展為老年癡呆的較高可能性。同樣，“阿爾茨海默病前患者”是 指這樣的人，其未患有AD，但具有發(fā)展為AD的較高可能性。用于將患者歸類(lèi)為前期患者(predromal patient)的診斷工具描述如下，且包括腦病變和生化問(wèn)題的精確診斷以及標(biāo) 準(zhǔn)的仔細(xì)建立。前期患者被定義為這樣的人，其必然具有以下標(biāo)準(zhǔn)中的至少一種，優(yōu)選至少兩種， 更優(yōu)選至少三種-每升腦脊髓液(CSF)中總tau水平大于350ng；-CSF 中 abeta-4 2/ 磷酸 tau-181 的重量比小于 6. 5 ；-存在內(nèi)側(cè)顳葉(MTL)萎縮，存在海馬、內(nèi)嗅皮質(zhì)或杏仁核的體積損失，這由磁共 振成象(MRI)以及使用視覺(jué)評(píng)分(參照具有正常年齡標(biāo)準(zhǔn)的特定人群)的定性評(píng)估或感興 趣區(qū)域的定量容量分析(參照具有正常年齡標(biāo)準(zhǔn)的特定人群)所證實(shí)；-存在額顳葉(FTL)萎縮，這由MRI以及定性評(píng)估或定量容量分析所證實(shí)；-每mL CSF 中 F2_iso-prostane (F2_IsoP，isoprostane8,12-iso-iPF2alpha_VI) 水平大于25pg。CSF 中 T-tau、P_taul81、Abeta42 和 F2_Isoprostane 的濃度對(duì)阿爾茨海默病 今后發(fā)展的意義的進(jìn)一步解釋可參見(jiàn)=Hansson 0，Zetterberg H, Buchhave P, Londos E, Blennow K, Minthon L(2006)Association betweenCSF biomarkers and incipient Alzheimer' s disease in patients 15 with mildcognitive impairment :a follow-up study. Lancet Neurol 5 :228_234 ；和Pratico D，Clark CM,Liun F,Lee VYM,Trojanowski JQ(2002) Increase in brainoxidative stress in mild cognitive impairment -.a possible predictor ofAlzheimer' s disease. Arch Neurol 59:972-976。應(yīng)注意到在涉及事件記憶損傷存在的測(cè)試或適用于判斷神經(jīng)病學(xué)疾病存在的其 它測(cè)試中，這些前期患者的評(píng)分不滿(mǎn)足診斷神經(jīng)病學(xué)疾病如阿爾茨海默病的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明還涉及使用上述組合物治療與年齡相關(guān)的記憶損傷(AAMI)、輕度認(rèn)知損傷 (MCI)、顯著事件記憶損傷，和治療具有記憶和/或認(rèn)知損傷的老年人。本發(fā)明的另一個(gè)目的是通過(guò)向所需受試者如患有上述一種疾病的受試者給藥上 述小或減小體積的組合物來(lái)為其提供支持腦健康和/或減輕斑塊負(fù)荷和/或減輕神經(jīng)變性 的方法。提供所述組合物和一種或多種預(yù)期用途間內(nèi)在聯(lián)系的商標(biāo)也被認(rèn)為落入本發(fā)明 的范圍。
實(shí)施例膠囊組合物制備包括含60mg 二十二碳六烯酸的500mg海洋生物油(marine oil)的混合物的 膠囊。EPA的量為90mg。其包括150mg尿苷一磷酸和6mga-生育酚。全部數(shù)字以膠囊的 干重計(jì)。膠囊的總重量為1. lg。膠囊進(jìn)一步包含甘油、聚山梨酸酯40和海藻酸鈣。推薦每天使用一至四種這些膠囊，優(yōu)選持續(xù)超過(guò)1個(gè)月。實(shí)驗(yàn)1本實(shí)驗(yàn)測(cè)試UMP、DHA, UMP+DHA和UMP+DHA+ α -生育酚是否能減輕阿爾茨海默病 (AD)模型小鼠(APP/PS1小鼠)中的abeta斑塊和神經(jīng)變性。這些小鼠在4_5個(gè)月齡時(shí)在 它們的腦中開(kāi)始顯示出斑塊，且這些小鼠在科學(xué)文獻(xiàn)中被認(rèn)為是AD的良好模型。
在3月齡起(恰好在第一個(gè)斑塊變得明顯前)，對(duì)小鼠喂食富含⑴UMP、(2)DHA, (3)UMP+DHA或(4)UMP+DHA+a-生育酚的食物。喂食3個(gè)月直至6月齡。此后，將小鼠處 死，并對(duì)它們的腦進(jìn)行abeta斑塊分析和神經(jīng)變性分析。使用振動(dòng)切片機(jī)將腦切成薄片，并 將薄片用識(shí)別人abeta的抗體對(duì)abeta染色和用氨基-二價(jià)銅染色對(duì)神經(jīng)變性染色。對(duì)海 馬中斑塊的總數(shù)量計(jì)數(shù)，且確定斑塊覆蓋的總表面積(斑塊負(fù)荷)。確定被神經(jīng)炎斑塊覆蓋 的總表面積(氨基_ 二價(jià)銅染色為陽(yáng)性)，以測(cè)定神經(jīng)變性的水平。結(jié)果斑塊負(fù)荷和神經(jīng)變性的結(jié)果分別顯示在

圖1和圖2中。在每種情況中，圖“A”顯 示本發(fā)明組合物(4)的作用，且圖“B”顯示單獨(dú)的營(yíng)養(yǎng)物的作用?！癕ulti”是指含DHA、UMP 和α -生育酚的組合物(4)。圖IA顯示干預(yù)降低APP/PS1小鼠海馬中的板塊負(fù)荷。當(dāng)喂食UMP或DHA時(shí)，板塊 負(fù)荷不受影響。UMP和DHA的組合導(dǎo)致斑塊負(fù)荷的增加(圖1Β)。與喂食對(duì)照食物的小鼠相比，喂食食物⑷的小鼠顯示出較低的神經(jīng)變性水平(圖2Α)。喂食UMP或DHA的小鼠與對(duì)照無(wú)差別，然而UMP+DHA小鼠顯示出更高水平的神經(jīng) 變性水平(圖2Β)。從此研究可推斷本發(fā)明組合物的干預(yù)可有效減少abeta產(chǎn)生，減少abeta斑塊形 成和減輕神經(jīng)變性。與喂食對(duì)照食物的小鼠相比，單獨(dú)的營(yíng)養(yǎng)物對(duì)這些參數(shù)沒(méi)有作用，或它 們導(dǎo)致進(jìn)一步的惡化。實(shí)驗(yàn) 2阿爾茨海默病特征為認(rèn)知能力的喪失，這可通過(guò)喪失神經(jīng)元細(xì)胞之間的交通導(dǎo)致 神經(jīng)元功能降低和最終神經(jīng)元細(xì)胞死亡(神經(jīng)變性)來(lái)解釋。神經(jīng)元的交通依賴(lài)于神經(jīng)元 間的連接(突觸)，在連接處來(lái)自突觸前神經(jīng)元的神經(jīng)遞質(zhì)被釋放，并與突觸后神經(jīng)元上的 受體結(jié)合。受體功能是神經(jīng)元交通的重要因素。通過(guò)改進(jìn)受體功能，神經(jīng)元細(xì)胞可更有效 地交通，這可從如通過(guò)較低水平的受體激動(dòng)劑來(lái)誘導(dǎo)相同水平的刺激中反應(yīng)出。在下述實(shí)驗(yàn)中，使用神經(jīng)元嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12細(xì)胞)來(lái)研究用營(yíng)養(yǎng)物二十二 碳六烯酸(DHA)、尿苷一磷酸(UMP)、α -生育酚(維生素Ε)或其組合保溫對(duì)受體功能性的 影響。為此，將細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)，并用對(duì)照培養(yǎng)基、對(duì)照培養(yǎng)基+ α -生育酚、對(duì)照培 養(yǎng)基+UMP、對(duì)照培養(yǎng)基+DHA+ α -生育酚，或?qū)φ张囵B(yǎng)基+DHA+UMP+ α -生育酚保溫。單獨(dú)用 DHA保溫導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在保溫1天后，將培養(yǎng)基+添加劑替換為對(duì)照培養(yǎng)基，且將細(xì)胞用 50 μ M氧代震顫素(oxotremorine)(作用于參與學(xué)習(xí)和記憶的毒蕈堿型乙酰膽堿受體的激 動(dòng)劑)刺激。氧代震顫素誘導(dǎo)膜的去極化，這可作為膜電位的變化測(cè)定。在固定劑量的激 動(dòng)劑下，認(rèn)為膜電位的增加反映出受體功能的改進(jìn)。結(jié)果圖3顯示在不同孵育條件下膜電位變化的結(jié)果?！?”代表結(jié)果與DHA+UMP+ α -生 育酚(Vit Ε)顯著不同。將全部數(shù)據(jù)做為與對(duì)照條件相比膜電位的百分比變化作圖。結(jié)果顯示用UMP(第 一條柱)、α _生育酚(第二條柱)和DHA+ α -生育酚(第三條柱)保溫細(xì)胞不影響膜電位 變化。另一方面，用本發(fā)明DHA+UMP+ α -生育酚的組合保溫的細(xì)胞顯示出膜電位改變的增加(F = 19. 9 ;p = 0. 000)。 此結(jié)果 表明用α -生育酚、DHA和UMP的組合保溫協(xié)同增強(qiáng)受體功能。單獨(dú)的維 生素E和UMP，和DHA+α -生育酚的組合對(duì)受體功能沒(méi)有影響。這些結(jié)果提示阿爾茨海默病 患者腦中的神經(jīng)元細(xì)胞可通過(guò)改進(jìn)受體功能和神經(jīng)元交通以支持認(rèn)知能力和減輕神經(jīng)變 性而受益于DHA、UMP和α -生育酚的組合增補(bǔ)。
權(quán)利要求
一種組合物，包括(i)核苷堿基、核苷和/或核苷酸形式的尿苷；(ii)二十二碳六烯酸(DHA)和/或二十碳五烯酸(EPA)；和(iii)生育酚和/或其等同物，其中所述組合物具有a)每單位劑量200-3000mg的重量；b)每單位劑量小于50kcal的能量含量；和/或c)每單位劑量0.1至10ml的體積。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述生育酚和/或其等同物為α-生育酚。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述單位劑量為片劑、凝膠劑、糖錠 劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、小球、或藥袋。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，以所述單位劑量的干重計(jì)所述組合物包 含 5-75 重量 ％ 。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，每單位劑量干重包含50-1000mg的DHA。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，每單位劑量干重包含IO-IOOOmg核苷堿 基、核苷和/或核苷酸形式的尿苷。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，以所述單位劑量的干重計(jì)所述組合物包 含1-50重量％的尿苷和其等同物。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述(ii)與(i)的重量比至少為I。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，每單位劑量包含小于300mg的蛋白質(zhì)物質(zhì)。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，以所述組合物的干重計(jì)所述組合物包 含小于20重量％的蛋白質(zhì)物質(zhì)。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述蛋白質(zhì)物質(zhì)與所述(i)和 (ii)的總和的重量比小于1。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，用于治療和/或預(yù)防選自記憶功能障 礙、認(rèn)知功能障礙、阿爾茨海默病和癡呆的組中的疾病。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的組合物，用于減輕神經(jīng)變性。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的組合物，用于減輕腦中的斑塊沉積。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的組合物，用于促進(jìn)、優(yōu)化和/或支持腦功能或 腦健康。
16.包括權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的一種或多種組合物的藥筒、藥包(pack)或分 配器，其附帶有用于所述組合物的給藥的說(shuō)明書(shū)。
全文摘要
本發(fā)明涉及組合物，包括(i)核苷堿基、核苷和/或核苷酸形式的尿苷；(ii)二十二碳六烯酸(DHA)和/或二十碳五烯酸(EPA)；和(iii)生育酚和/或其等同物，其中所述組合物具有a)每單位劑量200-3000 mg的重量；b)每單位劑量小于50 kcal的能量含量；和/或c)每單位劑量0.1至10ml的體積。本發(fā)明還涉及所述組合物在降低abeta斑塊負(fù)荷和神經(jīng)變性，治療與神經(jīng)功能受損相關(guān)的疾病，特別是癡呆、阿爾茨海默病和記憶障礙中的用途。
文檔編號(hào)A61P25/28GK101842103SQ200880114299
公開(kāi)日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2008年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月2日
發(fā)明者E·P·邁耶, M·格勒嫩戴克, P·J·G·H·坎普赫伊斯, R·J·J·哈格曼 申請(qǐng)人:努特里奇亞有限公司