專(zhuān)利名稱(chēng)：：大棗降血脂有效部位及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及了一種從大棗提取制備降血脂有效部位，同時(shí)還涉及該有效部位的提取方法和該有效部位在制備降血脂及抗氧化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：大棗是鼠李科植物棗(ziziphusJujubeMill)的成熟果實(shí)，性溫，味甘，無(wú)毒。主治心腹邪氣，安中，養(yǎng)脾氣，平胃氣，通九竅，助十二經(jīng)，補(bǔ)少氣，少津液，身中不足，大驚四肢重，和百藥，久服輕身延身。大棗味美甘甜，其含糖量居各類(lèi)果品之首，鮮棗含糖量20%以上，干棗含糖60%—80%。大棗中含有多種生物活性物質(zhì)，如大棗多糖、黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)、三萜類(lèi)、生物堿類(lèi)、環(huán)磷酸腺苷等；大棗中的可溶性糖包括果糖，葡萄糖，鼠里糖，山梨糖醇，蔗糖，其中果糖和葡萄糖是大棗糖中主要的糖，而山梨糖醇的量很少。大棗多糖多為水溶性的中性多糖(JDP-N)和酸性多糖(JDP-A)，它是由多種單糖組成的。與蛋白質(zhì)和核酸相比，大棗多糖分子結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，其分子量為63000263000。大棗多糖能有效清除人體內(nèi)的氧自由基、減輕衰老模型小鼠免疫器官的萎縮及腦的老化、抑制腫瘤細(xì)胞深入。進(jìn)一步的藥理研究表明，大棗多糖具有明顯的止咳、祛痰、行血、止血和通經(jīng)活絡(luò)之功效，同時(shí)具有明顯的抗補(bǔ)體活性和促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的作用，并且能有效增強(qiáng)機(jī)體免疫力。目前，對(duì)多糖的提取方法有索氏提取法、超聲提取法、酶法提取等，這些方法都在不同程度上存在工藝復(fù)雜、操作周期長(zhǎng)以及生產(chǎn)成本高等缺點(diǎn)。高脂血癥(Hyperlipaemia，HLP)主要是指血清總膽固醇(TC)或甘油三酯(TG)水平過(guò)高和/或血清高密度脂蛋白一膽固醇(HDL-C)水平過(guò)低。高脂血癥是中老年的常見(jiàn)病和多發(fā)病，隨著人們生活水平的提高和生活習(xí)慣的改變，該病的發(fā)病率明顯增加，發(fā)病的年齡也有所提前。高脂血癥所引起3的動(dòng)脈粥樣硬化是造成冠心病、高血壓和腦血管疾病的主要原因，嚴(yán)重危害到了人類(lèi)生命健康。目前，西藥調(diào)節(jié)血脂雖有肯定的療效，但有不同程度的副作用，且作用靶點(diǎn)單一。西藥他汀類(lèi)是目前公認(rèn)為調(diào)脂最有效并廣泛應(yīng)用的藥物，但具有肝臟和肌肉毒性等副作用。近年來(lái)，中藥調(diào)血脂以其療效好、副作用小的優(yōu)勢(shì)而成為研究的熱點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種從大棗中提取大棗降血脂有效部位。同時(shí)，本發(fā)明的目的還在于提供一種該大棗降血脂有效部分的提取方法。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的還在于提供一種該有效部分在制備降血脂活性藥物方面的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種大棗降血脂有效部位，該有效部位為去核大棗經(jīng)提取所獲得的大棗多糖；其中，大棗多糖的提取方法可以為將去核大棗經(jīng)過(guò)乙醇浸泡后，風(fēng)干殘?jiān)?，再用水?—4次，合并濃縮液所得到的大棗多糖。大棗多糖的提取也可以采用其它方法。同時(shí)，本發(fā)明的技術(shù)方案還采用了一種大棗降血脂有效部位的提取方法，將90%食用乙醇浸泡過(guò)的去核大棗風(fēng)干，水煎煮15min，合并濃縮液，采用三氯乙酸法脫蛋白，得到大棗多糖。進(jìn)一步，本發(fā)明的提取方法具體包括以下歩驟將去核大棗用90%食用乙醇按體積與大棗質(zhì)量比5:1，重復(fù)冷浸2—4次，每次6—8天，過(guò)濾，將濾渣風(fēng)干，風(fēng)干后的濾渣用水煮2—4次，每次10—20min,所得的提取液合并濃縮，烘干得干品；將所得干品溶解于水，以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以堿液調(diào)pH二7，減壓濃縮，濃縮液對(duì)水透析，透析后的濃縮液加入無(wú)水乙醇使其含醇量為70%，靜置，離心，收集沉淀物，即得大棗多糖。本發(fā)明的技術(shù)方案還在于采用了該大棗降血脂有效部位在制備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應(yīng)用。經(jīng)體外抗氧化篩選發(fā)現(xiàn)，大棗降血脂有效部位大棗多糖具有抗氧化活性，并且還具有良好的體內(nèi)外降血脂作用。本發(fā)明中大棗降血脂有效部位即大棗多糖具有較好的抗氧化活性，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明大棗多糖能降低高脂血癥小鼠的血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇，且可通過(guò)氧化途徑(升高超氧化物岐化酶SOD、降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物一丙二醛MDA)來(lái)降低血脂水平。對(duì)大棗多糖有效部位進(jìn)行進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，發(fā)揮其多靶點(diǎn)協(xié)同預(yù)防和治療高血脂等疾病的作用。另外，本發(fā)明中大棗多糖的提取方法工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，操作周期短，生產(chǎn)成本大大降低，具有很好的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，應(yīng)用前景十分廣闊。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明的大棗降血脂有效部位為將去核大棗經(jīng)過(guò)乙醇浸泡后，風(fēng)干殘?jiān)?，再用水?次，合并濃縮液所得到的大棗多糖。實(shí)施例2本發(fā)明的大棗降血脂有效部位的提取方法具體包括以下步驟將去核大棗用90%食用乙醇按體積比5:l重復(fù)冷浸3次，每次7天，過(guò)濾，將濾渣風(fēng)干，風(fēng)干后的濾渣用水煮3次，每次15min,所得的提取液合并濃縮，烘干得干品；將所得干品溶解于水，以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以堿液調(diào)pl^7，減壓濃縮，濃縮液對(duì)水透析，透析后的濃縮液加入無(wú)水乙醇使其含醇量為70%，靜置，離心，收集沉淀物，即得大棗多糖。實(shí)施例3本實(shí)施例對(duì)大棗降血脂有效部位——大棗多糖進(jìn)行體外抗氧化實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)降血脂抗氧化試驗(yàn)，具體如下體外抗氧化實(shí)驗(yàn)對(duì)大棗多糖部位進(jìn)行研究如下材料與試劑大棗多糖由實(shí)驗(yàn)室制備提供。二苯代苦味肼基自由基DPPH(日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社)；？63+_三吡啶三啞嗪TPTZ(Acrosorganics);Trolox(Aldrich);ABTS[2，2'_連氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽](Fluka);BHT(Acrosorganics);甲醇，醋酸鈉，F(xiàn)eCl:,6H20，冰醋酸，過(guò)二硫酸鉀均為分析純。主要儀器MultiskanMK3酶標(biāo)儀(美國(guó)thermoElectron公司)，UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(尤尼可上海儀器有限公司)，電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理化)，電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)，超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。試驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)采用清除二苯代苦味肼基自由基(DPPH，)、鐵離子還原/抗氧化力測(cè)定法(ferricreducing/antioxidantpowerassay,FRAP)禾口清除ABTS自由基三種方法，并以BHT作為陽(yáng)性對(duì)照，來(lái)研究大棗多糖抗氧化活性。結(jié)果見(jiàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注ICs。為半數(shù)抑制率，指清除率為50%時(shí)所需抗氧化劑的濃度(ug/ml)。a為陽(yáng)性對(duì)照品b濃度為2mg/ml的百分抑制率，因?yàn)闃悠窛舛冗_(dá)到最大時(shí)，而抑制率小于50%，所以無(wú)法計(jì)算其IQo;c表示每克樣品的自由基清除能力相當(dāng)于Trolox的自由基清除能力的微摩爾數(shù)(單位為Mmol/g)，艮卩抗氧化當(dāng)量(TroloxEquivalentAntioxidantCapacity-Trolox)。(Trolox為參照物)，b值越大說(shuō)明其抗氧化能力越強(qiáng)。結(jié)果大棗多糖的抗氧化活性低于陽(yáng)性對(duì)照品BHT，但是在一定濃度時(shí)仍可清除ABTS和FRAP自由基。原因可能是多糖含有還原性的半羧醛羥基，可與氧化劑-活性氧發(fā)生氧化還原反應(yīng)。體內(nèi)降血脂抗氧化試驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠，空腹體重為23士2g，全部雄性。由河南省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。材料與試劑大棗多糖為市售或?qū)嶒?yàn)室制備。決明子降脂片，吉林吉春制藥有限公司批號(hào)070501。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供?？偰懝檀?TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)定試劑盒，北京中生生物工程高技術(shù)公司提供。試驗(yàn)方法高脂乳劑的配制豬油20%、膽固醇10%、丙硫氧嘧啶1%、膽鹽2%(配成10%溶液)、丙二醇2%和吐溫801%。動(dòng)物分組與處理取40只小鼠，平均體重23士2g，按實(shí)驗(yàn)要求分為正常對(duì)照組，高脂模型組，大棗多糖給藥組，陽(yáng)性對(duì)照組。正常對(duì)照組動(dòng)物上午ig(灌胃)給于蒸餾水，下午ig0.5%CMC-Na，高脂模型組均于每天上午ig給于高脂乳劑(0.2ml/10g.d)，下午ig0.5%CMC-Na，給藥組分別于每天上午ig給于高脂乳劑(0.2ml/10g，d)，下午ig給藥，給藥量見(jiàn)表2。IO天后，各組小鼠均禁食12h，眼球取血，離心分離血清用于血脂水平和SOD、MDA的測(cè)定。_表2動(dòng)物分組與處理_動(dòng)物數(shù)上午下午給藥量(只)(0.2ml/10g)(0.2ml/10g)(mg/kg)正常對(duì)照組10高脂模型組10陽(yáng)性對(duì)照組10DW(給藥組)10蒸餾水0.5%CMC-Na-—-高脂乳劑0.5%CMC-Na——高脂乳劑決明子降脂片120高脂乳劑大棗多糖200200810140578.1指標(biāo)測(cè)定方法TC，TG，LDL-C，HDL-C，MDA，SOD的測(cè)定按試劑盒說(shuō)明方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)X士S表示，實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果(1)大棗多糖對(duì)高脂血癥小鼠血脂的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。大棗多糖、陽(yáng)性給藥組的血清中TC，TG，LDL-C水平均明顯的低于高脂模型組，HDL-C水平均明顯高于高脂血癥組，數(shù)據(jù)差異有顯著意義。(2)大棗多糖對(duì)高脂血癥小鼠抗氧化能力的影響，由表3數(shù)據(jù)可知，高脂血癥組的SOD水平明顯低于正常對(duì)照組，且大棗多糖組的SOD水平明顯高于高脂血癥組；MDA水平明顯低于高脂血癥組。表明大棗多糖可能通過(guò)氧化途徑(升高S0D、降低MDA)來(lái)降低血脂水平。表3大棗多糖對(duì)營(yíng)養(yǎng)性高脂血癥小鼠血脂及抗氧化能力的影響(x±s)TCTGLDL-CHDL-CSODMDA高脂7.3840±1.5344±5.1862±0.7263±131.8230±7.7567模型2.0192"40.51782.8385A"0.2351A32.0695"±1.1397正常3.3135±1.4947±0.8626±1.3579±184.72229.0184對(duì)照0.72370.40300.35350.2564±29.9488±1.2372陽(yáng)性3.0333±0.8326±1.5316±2.0283±152.0000±9.4048±對(duì)照1.00640.3306*0.75291.032536.03101.4225大棗3.7921±0.8027±2.6462±1.6481±169.9444±6.6964多糖1.41850.292rl扁50.582626.7222'±1.7768s注與正常對(duì)照組比較A代表顯著性差異，AA代表非常顯著性差異，AAA代表極顯著性差異；與高脂模型組比較*代表顯著性差異，**代表非常顯著性差異，***代表極顯著性差異。由大棗多糖的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)可知，大棗多糖體外抗氧化能力一般，但是大棗多糖可以明顯的降低高脂血癥小鼠血清中TC、TG、LDL-C和MDA水平，并8且可以明顯的提升高脂血癥小鼠血清中的HDL-C和SOD水平。所以分析大棗多糖降血脂的機(jī)制可能是一是通過(guò)提高身體免疫力來(lái)降低血清中血脂水平；二是通過(guò)提高體內(nèi)抗氧化機(jī)制，從而降低血清中血脂水平。但是其具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。大棗多糖的鑒別鑒別采用Molish反應(yīng)，其具體實(shí)施方式為取1ml濃度為lmg/ml的多糖同業(yè)加入2滴Molish試劑，搖勻，將試管傾斜，沿試管慢慢加入lml濃硫酸，豎直試管，觀察濃硫酸和糖溶液交界面顏色變化，以蒸餾水為陰性對(duì)照，淀粉溶液為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果表明，多糖溶液的Molish反應(yīng)為陽(yáng)性。最后所應(yīng)說(shuō)明的是以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明，而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，盡管參照上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解依然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。權(quán)利要求1、一種大棗降血脂有效部位，其特征在于該有效部位為去核大棗經(jīng)提取所獲得的大棗多糖。2、一種如權(quán)利要求1所述的大棗降血脂有效部位的提取方法，其特征在于將90%食用乙醇浸泡過(guò)的去核大棗風(fēng)干，水煎煮10—20min，合并濃縮液，采用三氯乙酸法脫蛋白，得到大棗多糖。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的大棗降血脂有效部位的提取方法，其特征在于:具體包括以下步驟將去核大棗用90%食用乙醇重復(fù)冷浸2—4次，其中，食用乙醇按體積與大棗質(zhì)量比為5:1，每次6—8天，過(guò)濾，將濾渣風(fēng)干，風(fēng)干后的濾渣用水煮2—4次，每次10—20min,所得的提取液合并濃縮，烘干得干品；將所得干品溶解于水，以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以堿液調(diào)pl^7，減壓濃縮，濃縮液對(duì)水透析，透析后的濃縮液加入無(wú)水乙醇使其含醇量為70%，靜置，離心，收集沉淀物，即得大棗多糖。4、一種如權(quán)利要求1所述的大棗降血脂有效部位在制備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種大棗降血脂有效部位及其提取方法和應(yīng)用，該有效部位為去核大棗經(jīng)提取所獲得的大棗多糖。提取方法為將90％食用乙醇浸泡過(guò)的去核大棗風(fēng)干，水煎煮15min，合并濃縮液，采用三氯乙酸法脫蛋白，得到大棗多糖。經(jīng)體外抗氧化篩選發(fā)現(xiàn)，大棗降血脂有效部位大棗多糖具有抗氧化活性，并且還具有良好的體內(nèi)外降血脂作用。另外，本發(fā)明中大棗多糖的提取方法工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，操作周期短，生產(chǎn)成本大大降低，具有很好的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，應(yīng)用前景十分廣闊。文檔編號(hào)A61K36/185GK101628041SQ200810140578公開(kāi)日2010年1月20日申請(qǐng)日期2008年7月14日優(yōu)先權(quán)日2008年7月14日發(fā)明者姬志強(qiáng),康文藝申請(qǐng)人:河南大學(xué)