專利名稱：：元寶楓葉提取物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及元寶楓葉提取物的一種新用途。
背景技術(shù)：
：元寶楓又名五角楓"cerZr朋catwz5w;^e)，為槭樹科"ceraceae)槭樹屬"c"h'/7/7)的一個(gè)落葉喬木。元寶楓樹冠蔭濃，樹姿優(yōu)美，葉形秀麗，嫩葉紅色，入秋后，葉片變色，紅綠相映，甚為美觀，是營(yíng)造風(fēng)景林的主要樹種。自90年代以來，元寶楓被開發(fā)為集油料、藥用、化工、生態(tài)、水保、風(fēng)景觀賞等多用途、多效益于一體的經(jīng)濟(jì)樹種。元寶楓是高效的經(jīng)濟(jì)樹種。元寶楓種子顆粒大，種仁含油率達(dá)48%，高于油菜籽出油率32%，油橙黃色，其物理、化學(xué)性質(zhì)可與食用植物油媲美。試驗(yàn)證明，在荒坡、荒溝、退耕還林地上發(fā)展元寶楓，用良種嫁接苗造林3-5年后，可畝產(chǎn)元寶楓翅果800公斤-1000公斤，榨油150公斤左右，是種植油葵的5.5倍。元寶楓種子除榨油外，種皮中單寧含量高達(dá)60%，3年-5年生樹，畝產(chǎn)單寧120公斤。元寶楓單寧是優(yōu)質(zhì)的鞣料原料。元寶楓葉含7.26%的黃酮，高于銀杏葉黃酮含量，葉子中還含有類胡蘿卜素、多種維生素等12種與人體健康有關(guān)的礦物質(zhì)元素，可生產(chǎn)系列保健茶和保健品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供元寶楓葉提取物的一種新用途。本發(fā)明所提供的元寶楓葉提取物的用途是元寶楓葉提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用；所述元寶楓葉提取物按照如下方法制備以元寶楓葉為原料，用丙酮-水或乙醇-水混合溶劑浸取得到的。其中，所述丙酮-水混合溶劑中丙酮的體積百分?jǐn)?shù)可為50-70%;所述乙醇-水混合溶劑中乙醇的體積百分?jǐn)?shù)可為50-70%;所述混合溶劑與元寶楓干葉的重量份數(shù)比可為(8-50):1。其中，所述丙酮-水混合溶劑中丙酮與水的體積份數(shù)比具體可為50:50，或60:40，或70:30;乙醇-水混合溶劑中乙醇與水的體積份數(shù)比具體可為50:50，或60:40，或70:30。所述浸取的方法可為在15-30"C下攪拌，或40-IO(TC下回流；所述在15-30°C下攪拌浸取的時(shí)間可為3-24小時(shí)；所述40-10(TC下回流的時(shí)間可為1-6小時(shí)。為了提高所述提取物的純度，所述浸取后還進(jìn)行過濾和濃縮；所述濃縮的方法為除去所述過濾得到的濾液中的丙酮或乙醇，然后用乙酸乙酯從水相中萃取，收集乙酸乙酯提取液，再減壓蒸發(fā)除去所述乙酸乙酯提取液中的乙酸乙酯，得到經(jīng)濃縮的元寶楓葉提取物浸膏?？蓪⑺鼋噙M(jìn)一步(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物。為了進(jìn)一步提高所述提取物的純度，在用所述乙酸乙酯進(jìn)行萃取之前可用石油醚萃取所述水相，除去其中的脂類物質(zhì)，再收集水相，然后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取。所述抗菌藥物的活性成分是上述方法得到的元寶楓葉提取物。需要的時(shí)候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等，必要時(shí)還可以加入香味劑、甜味劑、和著色劑等。用元寶楓葉提取物制備的抗菌藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。實(shí)驗(yàn)證明，用元寶楓葉提取物制備的抗菌藥物對(duì)細(xì)菌(包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)和真菌具有抑菌作用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、元寶楓葉提取物的制備將在北京11月份采集的元寶楓葉洗凈，在45"C烘干后將其粉碎,用下述方法提取有效物用丙酮-水混合溶劑(丙酮的體積百分?jǐn)?shù)為50%)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為20:1混合，7(TC回流3小時(shí)，過濾；在同樣條件下再回流2小時(shí)，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去丙酮，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進(jìn)行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物A。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的元寶楓葉提取物A的提取率(提取率=元寶楓葉提取物A的質(zhì)4量/干葉的質(zhì)量)為70士2g/kg干葉。實(shí)施例2、元寶楓葉提取物的制備將在北京10月份采集的元寶楓葉洗凈，在4(TC烘干后將其粉碎，用下述方法提取有效物用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為50%)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為35:1混合，室溫25"C下攪拌浸取12小時(shí)，過濾，在同樣條件下再浸取12小時(shí)，過濾，將兩次濾液合并，減壓蒸發(fā)濃縮，除去乙醇，得到含有效物質(zhì)的水相，對(duì)水相中的有效物進(jìn)一步濃縮,具體方法為用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將此浸膏進(jìn)一步(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物B。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的元寶楓葉提取物B的提取率(提取率=元寶楓葉提取物B的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為72土2.1g/kg干葉。實(shí)施例3、元寶楓葉提取物的制備將在北京9月份采集的元寶楓葉洗凈，自然晾干或低溫烘干(<50°C)后將其粉碎，用下述方法提取有效物用丙酮-水混合溶劑(丙酮的體積百分?jǐn)?shù)為70%)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為8:1混合，4(TC回流6小時(shí)，過濾；在同樣條件下再回流2小時(shí)，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去丙酮，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進(jìn)行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物C。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的元寶楓葉提取物C的提取率(提取率二元寶楓葉提取物C的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為68il.8g/kg干葉。實(shí)施例4、元寶楓葉提取物的制備'將在北京8月份采集的元寶楓葉洗凈，自然晾干后將其粉碎，用下述方法提取有效物用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為70%)與上述粉碎的元寶楓干葉按重量份數(shù)比為50:1混合，IOO'C回流I小時(shí)，過濾；在同樣條件下再回流2小時(shí)，過濾，將兩次濾液合并。減壓蒸發(fā)濃縮，除去乙醇，得到含有效物質(zhì)的水相，用等體積的石油醚分3-4次進(jìn)行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑，得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的元寶楓葉提取物，將該固態(tài)元寶楓葉提取物稱為元寶楓葉提取物D。三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的元寶楓葉提取物D的提取率(提取率=元寶楓葉提取物D的質(zhì)量/干葉的質(zhì)量)為70士2.3g/kg干葉。實(shí)施例5、細(xì)菌微量藥敏檢測(cè)試驗(yàn)(1)配置抑菌藥液分別稱取實(shí)施例l、2、3和4中的元寶楓葉提取物lmg，用二甲基亞砜lOpl溶解后加蒸餾水至lml(濃度為lmg/ml)。(2)細(xì)菌菌液制備菌種金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、綠膿桿菌ATCC27853、表皮葡萄球菌、溶黃嘌呤厄菌、產(chǎn)堿假單胞菌、粘膜炎布蘭漢氏球菌、鮑氏不動(dòng)桿菌。將上述菌種分別轉(zhuǎn)種平皿，37。C孵育24小時(shí)。用無菌生理鹽水制備菌懸液，使用麥?zhǔn)媳葷醿x調(diào)制菌液為0.5麥?zhǔn)蠁挝?，吸?.2ml加生理鹽水40ml，此時(shí)菌液濃度為106CFU/ml。(3)元寶楓葉提取物對(duì)細(xì)菌抑菌作用檢測(cè)采用倍比稀釋法，接種96孔板第1-2列孔每孔lOOplMH肉湯+100pl藥液一混勻后吸取10(^1分別加入到第3-4列中的相應(yīng)孔；第3-4列孔每孔100^1MH肉湯+100W藥液(為第1-2列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取100^1分別加入到第5-6列中的相應(yīng)孔；第5-6列孔每孔100nlMH肉湯+100pl藥液(為第3-4列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取10(^1分別加入到第7-8列中的相應(yīng)孔；第7-8列孔每孔lOOplMH肉湯+100pl藥液(為第5-6列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取ioow丟棄。第1-8列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每行孔中加入一種細(xì)菌菌液100^1(106CFU/ml)。另做a.菌液對(duì)照孔第9-10列孔每孔100nlMH肉湯+100pl細(xì)菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每行孔中加入一種細(xì)菌菌液；b.MH肉湯對(duì)照孔第11-12列孔第11-12列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每孔100|ilMH肉湯。實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)。將該96孔板放入濕盒37。C孵育，24小時(shí)觀察。如果有細(xì)菌生長(zhǎng)，在小孔中呈彌散狀混濁，或小孔底部有圓形或網(wǎng)狀沉淀，反之為無細(xì)菌生長(zhǎng)，在無細(xì)菌生長(zhǎng)的小孔內(nèi)所含最低藥物濃度稱為最小抑菌濃度MIC。結(jié)果見表1-4。表1-4中的結(jié)果為三次實(shí)驗(yàn)的平均值。由表1-4可知，實(shí)施例l、2、3和4中的元寶楓葉提取物對(duì)細(xì)菌均有明顯的抑菌作用。表1實(shí)施例1的元寶楓葉提取物對(duì)細(xì)菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)菌種金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌大腸桿菌綠膿桿菌溶黃嘌呤厄菌產(chǎn)堿假單胞菌粘膜炎布蘭汗氏球菌鮑氏不動(dòng)桿菌MIC0.25mg/ml0.125mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.125mg/ml0.25mg/ml表2實(shí)施例2的元寶;諷葉提取物對(duì)細(xì)菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)菌種金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌大腸桿菌綠膿桿菌溶黃嘌呤厄菌產(chǎn)堿假單胞菌粘膜炎布蘭汗氏球菌鮑氏不動(dòng)桿菌MIC0.25mg/ml0.125mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.25mg/ml0.125mg/ml0.25mg/ml表3實(shí)施例3的元寶楓葉提取物對(duì)細(xì)菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)金黃色表皮溶黃粘膜炎鮑氏菌大腸綠膿產(chǎn)堿假葡萄球葡萄嘌呤布蘭汗不動(dòng)種桿菌桿菌單胞菌菌球菌厄菌氏球菌桿菌0.250.1250.250.250.250.250.1250.25MICmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/ml7表4實(shí)施例4的元寶風(fēng)葉提取物對(duì)細(xì)菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)金黃色表皮溶黃粘膜炎鮑氏菌大腸綠膿產(chǎn)堿假葡萄球葡萄嘌呤布蘭汗不動(dòng)種桿菌桿菌單胞菌菌球菌厄菌氏球菌桿菌0.250.1250.250.250.250.250.1250.25MICmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/mlmg/ml實(shí)施例7、真菌微量藥敏檢測(cè)試驗(yàn)(1)配置抑菌藥液分別稱取實(shí)施例l、2、3和4中的元寶楓葉提取物2mg，用二甲基亞砜10pl溶解后加蒸餾水至lml(濃度為2mg/ml)。(2)真菌菌液制備菌種鐮刀菌、克柔念珠菌、青霉菌、交鏈孢霉菌。菌種轉(zhuǎn)種PDA平皿，2纊C孵育72小時(shí)。用無菌鹽水沖洗平皿菌落，制備菌懸液，使用麥?zhǔn)媳葷醿x調(diào)制菌液濁度為0.5麥?zhǔn)蠁挝?，吸?.2ml菌液用40ml生理鹽水稀釋，此時(shí)菌液濃度為106CFU/ml。(3)元寶楓葉提取物對(duì)真菌抑菌作用檢測(cè)采用倍比稀釋法，接種96孔板第1-2列孔每孔100plMH肉湯+100pl藥液一混勻后吸取100^1分別加入到第3—4列中的相應(yīng)孔；第3-4列孔每孔10(^1MH肉湯+100pl藥液(為第1-2列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取lO(Hll分別加入到第5-6列中的相應(yīng)孔；第5-6列孔每孔100^1MH肉湯+100pl藥液(為第3-4列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取100^1分別加入到第7-8列中的相應(yīng)孔；第7-8列孔每孔lOOplMH肉湯+100pl藥液(為第5-6列孔混勻后的藥液)—混勻后吸取100pl丟棄。第1-8列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每?jī)尚锌字屑尤胍环N真菌菌液100^1(106CFU/ml)。另做a.菌液對(duì)照孔第9-IO列孔每孔100^1MH肉湯+100nl真菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每?jī)尚锌字屑尤胍环N真菌菌液；b.MH肉湯對(duì)照孔第11-12列孔第11-12列孔對(duì)應(yīng)的第1-8行孔中，每孔100^1MH肉湯。8實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)。將該96孔板放入濕盒28。C孵育，48小時(shí)觀察。如果有真菌生長(zhǎng)，在小孔中呈彌散狀混濁，或小孔底部有圓形或網(wǎng)狀沉淀，反之為無真菌生長(zhǎng)，在無真菌生長(zhǎng)的小孔內(nèi)所含最低藥物濃度稱為最小抑菌濃度MIC。結(jié)果見表5-8。表5-8中的結(jié)果為三次實(shí)驗(yàn)的平均值。由表5-8可知，實(shí)施例l、2、3和4中的元寶楓葉提取物對(duì)真菌均有明顯的抑菌作用。表5實(shí)施例1的元寶楓葉提取物對(duì)真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表6實(shí)施例2的元寶楓葉提取物對(duì)真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表7實(shí)施例3的元寶楓葉提取物對(duì)真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表8實(shí)施例4的元寶楓葉提取物對(duì)真菌最小抑菌濃度MIC(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1、元寶楓葉提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用；所述元寶楓葉提取物按照如下方法制備以元寶楓葉為原料，用丙酮-水或乙醇-水混合溶劑浸取得到的。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述丙酮-水混合溶劑中丙酮的體積百分?jǐn)?shù)為50-70%。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述乙醇-水混合溶劑中乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為50-70°/0。4、根據(jù)權(quán)利要求l、2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述混合溶劑與元寶楓干葉的重量份數(shù)比為(8-50):1。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述浸取的方法為在15-3(TC下攪拌或40-100。C下回流。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述在15-3(TC下攪拌浸取的時(shí)間為3-24小時(shí)；所述40-100。C下回流的時(shí)間為1-6小時(shí)。7、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述浸取后還進(jìn)行過濾和濃縮。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述濃縮的方法為除去所述過濾得到的濾液中的丙酮或乙醇，然后用乙酸乙酯從水相中萃取，收集乙酸乙酯提取液，再除去所述乙酸乙酯提取液中的乙酸乙酯，得到元寶楓葉提取物。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于在用所述乙酸乙酯進(jìn)行萃取之前用石油醚對(duì)所述水相萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，再收集水相，然后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取。10、根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗菌藥物為抗真菌藥物或抗細(xì)菌藥物。全文摘要本發(fā)明公開了元寶楓葉提取物的一種新用途。該新用途是元寶楓葉提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用；所述元寶楓葉提取物按照如下方法制備以元寶楓葉為原料，用丙酮-水或乙醇-水混合溶劑浸取得到。該元寶楓葉提取物對(duì)細(xì)菌(包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)和真菌均具有抑菌作用。文檔編號(hào)A61K36/20GK101480417SQ20081005609公開日2009年7月15日申請(qǐng)日期2008年1月11日優(yōu)先權(quán)日2008年1月11日發(fā)明者葉燕彬,孫旭光,楓張,張英俠,然李,王智群,羅時(shí)運(yùn),趙文華申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)