專利名稱：：一種含有雷公藤紅素的組合物、制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為一種雷公藤紅素和堿性氨基酸的藥物組合物、制備方法及其在制備抗腫瘤藥物的用途。
背景技術(shù)：
：雷公藤紅素(celastrol、tripterine)，又名南蛇藤素，是衛(wèi)矛科植物雷公藤中一類三萜類成分。結(jié)構(gòu)式如下-早在20世紀(jì)60年代，人們已發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用KojiNaknishi,YoshikazuTakahashi,"a/.Pristimerin.Spectroscopicpropertiesofthedienone-phenol-typerearrangementproductsandotherderivatives./Og.C7^附"1965(30):1729。1998年，我國(guó)學(xué)者證實(shí)雷公藤紅素具有抑制新生血管形成的作用，推測(cè)其抗腫瘤活性是通過(guò)該機(jī)制發(fā)揮作用高勇等.紅素抑制血管生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.腫瘤，1998，18(4):280-281。2006年，中國(guó)科學(xué)院武漢植物園的學(xué)者與美國(guó)科學(xué)家證實(shí)，雷公藤紅素可抑制蛋白酶體活性，從而誘發(fā)癌細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)證明雷公藤紅素可有效的抑制了裸鼠前列腺癌的增生HuanjieYang，DiChen，QiuzhiCindyCuiWa/.Celastrol,aTriterpeneExtractedfromtheChinese"ThunderofGodVine"IsaPotentProteasomeInhibitorandSuppressesHumanProstateCancerGrowthinNudeMice.C纖er紐2006，66(9):4758-4765。雷公藤紅素屬脂溶性三萜成分，在有機(jī)溶劑如三氯甲烷、乙醇、甲醇中溶解度較好，在水溶液中幾乎不溶。文獻(xiàn)中給藥方式一般使用二甲基亞砜(DMSO)3作為助溶劑，但DMSO毒性較大，不能用于人體注射。雖然有機(jī)酸可以與堿性物質(zhì)在水溶液反應(yīng)，從而增加水溶性是公知技術(shù)，但雷公藤紅素由于空間位阻的原因，雖然具有羧基結(jié)構(gòu)但酸性較弱，試驗(yàn)表明不能在水溶液中直接與無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉或有機(jī)堿如葡甲胺、精氨酸等直接反應(yīng)。因此需要通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)尋找一種特殊的方法來(lái)制備可水溶性的雷公藤紅素組合物。這也是為何在已知的文獻(xiàn)中均使用毒性較大的DMSO作為助溶劑的原因。另外，雷公藤紅素具有類醌式結(jié)構(gòu)，且羰基a位具一活潑羥基，穩(wěn)定性較差，因此解決雷公藤紅素的穩(wěn)定性問(wèn)題也是雷公藤紅素是否能制備臨床上可接受的藥物的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種含有雷公藤紅素和堿性氨基酸的藥物組合物，該組合物與雷公藤紅相比具有較好的水溶性和穩(wěn)定性，能夠制備用于抗腫瘤的藥物。該藥物組合物含有雷公藤紅素和堿性氨基酸，摩爾比例為1:1一10，其中堿性氨基酸選自精氨酸、賴氨酸或組氨酸，其中精氨酸可以是L一精氨酸、D—精氨酸或D、L一精氨酸中的一種或幾種。雷公藤紅素和堿性氨基酸的摩爾比優(yōu)選為1:2—3。所述的藥物組合物，其還可以含有藥學(xué)上可接受的載體或輔料。所述的藥物組合物，其可以以口服給藥劑型或注射給藥劑型存在。本發(fā)明還提供了含有雷公藤紅素和堿性氨基酸的藥物組合物的制備方法。本發(fā)明還提供了含有雷公藤紅素和堿性氨基酸的藥物組合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。經(jīng)試驗(yàn)表明，雷公藤紅素與無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉、氫氧化鉀或堿性氨基酸物理混合物不能提高雷公藤紅素的水溶性。由于雷公藤紅素在水溶液中的溶解度很差，無(wú)法直接在水溶液中與堿性氨基酸反應(yīng)，而堿性氨基酸不溶于無(wú)水乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮及四氫呋喃，也無(wú)法在該溶液體系中與雷公藤紅素反應(yīng)。因此本發(fā)明提供的含有雷公藤紅素和堿性氨基酸的藥物組合物的制備方法，包括如下關(guān)鍵步驟(1)將雷公藤紅素溶解于可與水相混溶的溶劑中，將堿性氨基酸溶解于少量水中，加至溶劑中，30-50'C下攪拌至溶液澄清；(2)常規(guī)減壓回收或冷凍干燥除去溶劑，即得。其中步驟(1)中所述的可與水相混溶的溶劑選自無(wú)水乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮及四氫呋喃中的一種或幾種，考慮到工業(yè)生產(chǎn)的可行性及溶劑的毒性，優(yōu)選為無(wú)水乙醇。上述方法得到的雷公藤紅素與堿性氨基酸的組合物，其水溶性較雷公藤紅素有很大的提高，在水中的溶解度可達(dá)50mg/ml以上，而雷公藤紅素小于lmg/ml。按國(guó)家藥品食品監(jiān)督管理局公布的《中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求，經(jīng)高溫、高濕、光照實(shí)驗(yàn)表明，雷公藤紅素在高溫、高濕及光照條件下均不穩(wěn)定，以0天為100%計(jì)算，10天時(shí)含量分別下降到67.9%、87.6%、82.6%，而組合物中的雷公藤紅素含量分別下降到91.7%、93.1%、94.5%(以0天為100%計(jì)算)，與雷公藤紅素單體相比，組合物的穩(wěn)定性有非常大的提高。具體實(shí)施方式實(shí)施例1:取雷公藤紅素2.25g溶于200ml無(wú)水乙醇中，取精氨酸1.74g溶于10ml水中，將水溶液加入至乙醇溶液中，室溫下攪拌2小時(shí)，直至澄清，5(TC下以真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑至干，即得，合計(jì)固體粉末3.67g。實(shí)施例2取雷公藤紅素2.25g溶于200ml無(wú)水乙醇中，取精氨酸2.61g溶于20ml水中，將水溶液加入至乙醇溶液中，室溫下攪拌l小時(shí)，直至澄清，4(TC下以真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑至干，即得，合計(jì)固體粉末4.57g。取本實(shí)施例得到的固體粉末4.32g，溶于注射用水中，加入2g甘露醇作為賦形劑，補(bǔ)加注射用水至100ml，以微孔濾膜濾過(guò)除菌，以2ml分裝于10ml西林瓶冷凍干燥，即得凍干粉針，規(guī)格以雷公藤紅素計(jì)40mg/瓶。實(shí)施例3取雷公藤紅素2.25g溶于400ml甲醇中，取賴氨酸0.73g溶于10ml水中，將水溶液加入至甲醇溶液中，30'C攪拌2小時(shí)，直至澄清，一4(TC冷凍干燥24小時(shí)，即得，合計(jì)固體粉末2.84g。實(shí)施例4取雷公藤紅素2.25g溶于400ml四氫呋喃中，取組氨酸7.76g溶于400ml水中，將水溶液加入至四氫呋喃溶液中，2(TC攪拌2小時(shí)，直至澄清，一40'C冷凍干燥24小時(shí)，即得，合計(jì)固體粉末9.82g。取本實(shí)施例得到的固體粉末2g，與80g微晶纖維素用5XPVP—乙醇溶液制粒，干燥后，裝入膠囊。取本實(shí)施例得到的固體粉末2.5g，與120g微晶纖維素用5XPVP—乙醇溶液制粒，干燥后加1%的硬脂酸鎂，壓片。實(shí)施例5取雷公藤紅素2.25g溶于200ml丙酮中，取精氨酸1.74g溶于10ml水中，將水溶液加入至丙酮溶液中，室溫下攪拌2小時(shí)，直至澄清，4(TC下以真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑至干，即得，合計(jì)固體粉末3.43g。試驗(yàn)例1:本試驗(yàn)例考察了雷公藤紅素及雷公藤紅素精氨酸組合物溶解度按中國(guó)藥典(2005版)一部凡例中關(guān)于溶解度的試驗(yàn)法操作。分別稱取研成細(xì)粉的雷公藤紅素和雷公藤紅素精氨酸(稱自實(shí)驗(yàn)例3所得的固體份末)，置于25ml25士2'C的水溶液中，每隔5分鐘強(qiáng)有力振搖30秒鐘，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無(wú)目視可見(jiàn)的溶質(zhì)顆粒時(shí)，即視為完全溶解。測(cè)定結(jié)果6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)論雷公藤紅素在水溶液中的溶解度小于lmg/ml，雷公藤紅素精氮酸在水溶液中的溶解度大于50mg/ml。試驗(yàn)例2:本試驗(yàn)例考察了雷公藤紅素及雷公藤紅素精氨酸組合物穩(wěn)定性1、材料雷公藤紅素(LG):煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，純度98.1%;雷公藤紅素精氨酸組合物(LG—ARG，摩爾比1:2，按)，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供；2、方法(1)高溫試驗(yàn)將LG及LG—ARG原料分別置稱量瓶中，攤成5mm以下的薄層。于60°C下放置10天，于0、IO天取樣檢測(cè)，比較雷公藤紅素含量的變化。(2)高濕試驗(yàn)將LG及LG—ARG原料分別置稱量瓶中，攤成5mm以下的薄層，于25'C，朋92.5%±5%的情況下放置10天，于0、IO天取樣檢測(cè)，比較雷公藤紅素含量的變化。(3)光照試驗(yàn)將LG及LG—ARG原料分別置稱量瓶中，攤成5mm以下的薄層，置穩(wěn)定性考察箱中，設(shè)置照度4500土5001x，放置10天，于0、IO天取樣檢測(cè)，比較雷公藤紅素含量的變化。色譜條件如下，色譜柱DiscoveryCl8(250X4.6mm，5p);流動(dòng)相甲醇水(85:15);柱溫30°C;流速lml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)425nm。3、結(jié)果雷公藤紅素o天10天高溫100%強(qiáng)光100%高濕100%67.9%82.6%87.6%雷公藤紅素精氨酸組合物o天10天高溫100%強(qiáng)光100%高濕100%91.7%91.5%93.1%4、結(jié)論與雷公藤紅素單體相比，含精氨酸的雷公藤紅素組合物的穩(wěn)定性有非常大的提高試驗(yàn)例3:本試驗(yàn)例考察了藥物組合物對(duì)荷瘤裸鼠的抑瘤作用1、材料與動(dòng)物U、材料受試樣品雷公藤紅素精氨酸(LG—ARG，摩爾比l:2，按實(shí)施例l方法制備)，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，易溶于水。PC3細(xì)胞株引自煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院1.2、動(dòng)物裸鼠，雄性，體重23g25g，購(gòu)自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。2、分組與方法復(fù)蘇人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3原代凍存細(xì)胞,培養(yǎng)至細(xì)胞恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用生理鹽水制備腫瘤細(xì)胞懸液(2X106個(gè)/mL).用1mL注射器吸取細(xì)胞懸液O.8mL，分別注入46周齡裸鼠臀部外上限四分之一和前腋皮下各O.20.4mL,復(fù)制激素非依賴性前列腺癌荷瘤鼠模型,每天測(cè)量體質(zhì)量.待腫瘤塊直徑超過(guò)1cm,無(wú)菌條件下,手術(shù)切除瘤塊，把瘤塊切成1mmX1mm大小的小塊,植入20只裸鼠臀部外上限四分之一皮下，種瘤1周后給藥.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組，分別為雷公藤紅素精氨酸低劑量組(lmg/kg)、中劑量組(2mg/kg)、高劑量組(4mg/kg)及對(duì)照組。定期測(cè)量荷瘤小鼠體質(zhì)量,連續(xù)用藥21d.治療結(jié)束3d后處死動(dòng)物.摘取瘤體，測(cè)量瘤體體積、瘤質(zhì)量;采用免疫組化方法觀察Bcl22在各組間的表達(dá)差異.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每5d測(cè)量裸鼠體質(zhì)量.測(cè)量瘤體相互垂直的長(zhǎng)徑dl(cm)、d2(cm).求出瘤質(zhì)量及瘤體積，并計(jì)算抑瘤率。3、結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1.一種藥物組合物，其特征在于含有雷公藤紅素和堿性氨基酸，摩爾比例為1∶1—10。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中堿性氨基酸選自精氨酸、賴氨酸或組氨酸。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中精氨酸可以是L一精氨酸、D—精氨酸或D、L一精氨酸中的一種或幾種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中雷公藤紅素和堿性氨基酸的摩爾比優(yōu)選為1:2—35.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其還可以含有藥學(xué)上可接受的載體或輔料。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其可以以口服給藥劑型或注射給藥劑型存在。7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟(1)將雷公藤紅素溶解于可與水相混溶的溶劑中，將與雷公藤紅素摩爾比為1:1_10的堿性氨基酸溶解于適量水中，混合兩種溶劑，30-50'C下攪拌至溶液澄清；(2)常規(guī)減壓回收或冷凍干燥除去溶劑，即得。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其步驟(1)所述的可與水相混溶的溶劑選自甲醇、無(wú)水乙醇、異丙醇、丙酮、四氫呋喃中的一種或幾種。9.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其所述的可與水相混溶的溶劑優(yōu)選為無(wú)水乙醇。10.權(quán)利要求l一7中的任一藥物組合物在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種雷公藤紅素與精氨酸鹽的組合物、制備方法及其用途。利用本方法獲得的藥物組合物比雷公藤紅素本身穩(wěn)定性好，水溶性好。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療腫瘤的藥物中的用途。文檔編號(hào)A61K31/417GK101496804SQ20081001451公開(kāi)日2009年8月5日申請(qǐng)日期2008年1月31日優(yōu)先權(quán)日2008年1月31日發(fā)明者傅瑩瑩,珂劉,劉軍鋒,柳全文,翟大偉,萌邵,猛陳申請(qǐng)人:煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司