專利名稱：卡貝縮宮素鼻用制劑和治療孤獨癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療神經(jīng)性和精神性病癥的方法和組合物。在具體實施方案中，本發(fā)明涉及使用卡貝縮宮素(carbetocin)和相關(guān)催產(chǎn)素類似物治療神經(jīng)性和精神性病癥。

背景技術(shù)：
孤獨癥譜系病癥為一組以交流技能、人際互動的不同程度的損害，和限制性的、重復(fù)性的和刻板的行為模式為特征的疾病。這些疾病的區(qū)別在于發(fā)病時間、癥狀發(fā)展的速率、癥狀的嚴重度和癥狀的準確性質(zhì)。這些病癥從輕度到重度損害，包括這樣的疾病例如孤獨癥、阿斯伯格綜合征、PDD-NOS、雷特病癥、兒童崩解癥、語言交往障礙、非語言學(xué)習障礙、高功能自閉癥、超讀癥和一些方面的注意力不足多動障礙。雖然患有孤獨癥譜系病癥的兒童的準確數(shù)字還不清楚，但在美國局部地區(qū)的比例為3.4名/千兒童至6.7名/千兒童。進一步，最新研究估計，在美國15,000名三至五歲的兒童，和78,000名六至二十一歲的兒童和青年患有孤獨癥。在歐洲和亞洲的比例相當，每一千名兒童中六名患有至少一種孤獨癥譜系病癥。另外，存在大量的顯示出與孤獨癥譜系病癥表現(xiàn)出的癥狀類似的癥狀的相關(guān)病癥，包括焦慮癥、強迫癥、社交困難病癥(social deficit disorders)、重復(fù)性病癥(repetitive disorders)和認知缺陷病癥，這些極大地增加了患病人群的數(shù)量。
孤獨癥譜系病癥的特征包括社會退縮和不能進行目光接觸的移開凝視(averted gaze)、重復(fù)性行為和強迫行為、刻板動作、焦慮、注意力不足、多動、抑郁、隱遁人格和感情理解不能。受孤獨癥譜系病癥煩擾的患者可以具有對身體情感或接觸的厭惡、忽視與其他人的交往，或者如果從事社交，表現(xiàn)出明顯地不能交往或與其他人聯(lián)系。交往困難可以表現(xiàn)為單調(diào)的聲音，不能控制他們的音量、模仿言語或根本不能交談。患有孤獨癥譜系病癥的個體也可患有視覺困難、理解困難、聲音敏感和光敏感及智力遲鈍。
患有孤獨癥譜系病癥的兒童沒有遵循典型的兒童發(fā)育模式。在一些兒童中，未來問題的跡象可能從出生就很明顯。在大多數(shù)情況下，交往和社會技能的問題變得更值得注意，因為這些兒童落在同齡的其他兒童的后面。一些兒童最初發(fā)育正常，之后開始在他們對人或其他異常行為的反應(yīng)方面出現(xiàn)發(fā)育差異。一些父母報告變化是突然的，他們的孩子開始排斥人，行為怪異，并且喪失了他們以前獲得的語言和社會技能。在其它情況下，在變得逐漸值得注意的發(fā)展中，存在平臺期。
孤獨癥譜系和相關(guān)病癥的根本原因不清楚。尸檢和MRI研究推斷在許多重要腦結(jié)構(gòu)中存在異常，所述腦結(jié)構(gòu)包括小腦、大腦皮層、邊緣系統(tǒng)、胼胝體、基底神經(jīng)節(jié)和腦干。其它研究檢查了神經(jīng)遞質(zhì)比如5-羥色胺、多巴胺和腎上腺素的作用。
目前，使用應(yīng)用的行為分析或其它行為改變技術(shù)治療孤獨癥譜系病癥；飲食調(diào)節(jié)(diet modification)，比如不含谷蛋白或酪蛋白的飲食，或大劑量的維生素B6與鎂的組合。對于孤獨癥所開處方的藥物針對的是具體癥狀比如焦慮和抑郁，其包括藥物比如氟西汀、氟伏沙明、舍曲林和氯米帕明?？咕癫∷幈热缏缺骸⒘蚶_嗪和氟哌啶醇被用于治療行為問題?？贵@厥藥比如卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯和丙戊酸被用于預(yù)防發(fā)作。
報道的研究結(jié)果(Hollander等人，American College ofNeuropsychopharmacology Annual Meeting，2006年12月)表明向孤獨癥成年人施用靜脈內(nèi)劑量的催產(chǎn)素統(tǒng)計學(xué)上顯著地減少與孤獨癥相關(guān)的重復(fù)性行為。
令人遺憾的是，目前對于孤獨癥譜系和相關(guān)病癥的治療主要是針對癥狀，并且已經(jīng)證實其在使這樣的兒童和成年人無癥狀或病癥方面沒有成功。因此，本領(lǐng)域存在對其他用于治療孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病理的治療法的未被滿足的需要。
發(fā)明簡述 本發(fā)明的一個目的是提供用于治療神經(jīng)性和精神性病癥的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療孤獨癥譜系病癥和包括相關(guān)癥狀的病癥的方法和組合物，所述包括相關(guān)癥狀的病癥比如發(fā)育障礙、焦慮病癥、重復(fù)性病癥和認知缺陷病癥。
本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的催產(chǎn)素和包括卡貝縮宮素在內(nèi)的相關(guān)類似物的新制劑。
本發(fā)明的一個進一步的目的是提供用于治療和預(yù)防孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的癥狀的組合物和方法，所述癥狀包括但不限于社會退縮(socialwithdrawal)、目光接觸回避(eye contact avoidance)、重復(fù)性動作(repetitivebehaviors)、焦慮(anxiety)、注意力不足(attention deficit)、多動(hyperactivity)、抑郁(depression)、失語(loss of speech)、言語交流困難(verbal communicationdifficulties)、厭惡碰觸(aversion to touch)、視覺困難(visual difficulties)、理解困難(comprehension difficulties)和聲音敏感及光敏感(sound and lightsensitivity)。
本發(fā)明通過提供使用催產(chǎn)素和催產(chǎn)素類似物的新的且令人驚奇地有效的方法和組合物實現(xiàn)了這些目的和滿足了另外的目的和優(yōu)點，所述方法和組合物用于治療和/或預(yù)防孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和這些病癥的癥狀。
在本發(fā)明的制劑和方法內(nèi)的有用的催產(chǎn)素和催產(chǎn)素類似物包括但不限于4-蘇氨酸-1-羥基-脫氨基催產(chǎn)素、9-脫氨基催產(chǎn)素，包含代替甘氨酰胺殘基的甘氨酸殘基的催產(chǎn)素類似物；7-D-脯氨酸-催產(chǎn)素及其脫氨基類似物；(2，4-二異亮氨酸)-催產(chǎn)素，具有促尿鈉排泄和利尿活性的催產(chǎn)素類似物；脫氨基催產(chǎn)素類似物；長效催產(chǎn)素(OT)類似物，1-脫氨基-1-單卡巴-E12-[Tyr(OMe)]-OT(dCOMOT)；卡貝縮宮素(carbetocin)，(1-丁酸-2-(O-甲基-L-酪氨酸)-1-卡貝催產(chǎn)素(1-butanoic acid-2-(O-methyl-L-tyrosine)-1-carbaoxytocin)，或者，脫氨基-1單卡巴-(2-O-甲基酪氨酸)-催產(chǎn)素(deamino-1monocarba-(2-O-methyltyrosine)-oxytocin)[d(COMOT)])；[Thr4-Gly7]-催產(chǎn)素(TG-OT)；催產(chǎn)加壓素；Ile-conopressin；阿托西班；脫氨基-6-卡巴-催產(chǎn)素(dC60)，d[Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、d[Thr(4)，Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Thr(4)，Lys(8)(5/6C熒光素)]VT、d[Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、d[Thr(4)，Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Thr(4)，Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、去氨加壓素和1-脫氨基-催產(chǎn)素，其中殘基1和6之間的二硫鍵被硫醚替代。用于本發(fā)明中的其它有用形式的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物包括所述化合物的其它藥學(xué)可接受的活性鹽、以及所述化合物的活性異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物、水合物和/或前藥。
在一個示例性的實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法應(yīng)用催產(chǎn)素和/或催產(chǎn)素類似物治療和/或預(yù)防孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀。
使用本發(fā)明的組合物和方法可治療的哺乳動物受試者包括但不限于患有精神性病癥或神經(jīng)性病癥的人和其他哺乳動物受試者，所述精神性病癥或神經(jīng)性病癥包括孤獨癥譜系病癥。例如孤獨癥(autism)、阿斯伯格綜合征(Asperger’s syndrome)、其他未明確的廣泛性發(fā)育障礙、雷特病癥、兒童崩解癥、語義語用交流障礙(semantic pragmatic communication disorder)、非語言學(xué)習障礙、高功能自閉癥、超讀癥和注意力不足多動障礙(ADHD)。使用本發(fā)明的組合物和方法可治療的哺乳動物受試者還包括但不限于患有相關(guān)病癥的人和其他哺乳動物受試者，所述相關(guān)病癥包括Landau-Kleffner綜合征；多系統(tǒng)紊亂(multi-systems disorder)；焦慮癥，包括但不限于社交恐怖癥、一般性焦慮癥、驚恐障礙、創(chuàng)傷后應(yīng)激病癥、恐怖癥、廣場恐怖癥、強迫癥；社交困難病癥，包括但不限于偏執(zhí)型人格障礙、分裂型人格障礙、精神分裂樣人格障礙、回避型人格障礙、品行障礙、邊緣型人格障礙、表演型人格障礙；重復(fù)性病癥，包括但不限于沖動控制障礙和成癮病癥，和進食障礙比如食欲過盛、神經(jīng)性食欲缺乏、暴食癥；認知缺陷病癥，包括但不限于癡呆、阿爾茨海默氏病、Creutzfeld-Jakob疾病、注意力不足障礙、注意力不足多動障礙、輕度認知衰退和其他未明確的認知障礙。
通過向所述受試者施用有效量的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物化合物可有效地預(yù)防性和/或治療性地治療這些及其它受試者，所述有效量足夠預(yù)防或減少孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的發(fā)生或癥狀。本發(fā)明的治療有用的方法和制劑將有效地使用如上所述的多種形式的催產(chǎn)素和催產(chǎn)素類似物，包括所述化合物的任何活性藥學(xué)可接受的鹽、以及其活性異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物、水合物、前藥和/或其組合。卡貝縮宮素用作本發(fā)明在下面本文實施例中的一個示例性的實施方案。
在本發(fā)明的另一個方面中，提供組合制劑和方法，其包括有效量的催產(chǎn)素或包括卡貝縮宮素在內(nèi)的催產(chǎn)素類似物與一種或多種第二輔助劑的組合，所述第二輔助劑與所述催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物組合配制或共同給藥以在患有孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的個體中獲得有效反應(yīng)。在該情況下，示例性的組合制劑和共同治療方法應(yīng)用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與一種或多種另外的第二種或輔助治療劑的組合。在這些實施方案中，與例如卡貝縮宮素組合的第二或輔助治療劑可以單獨或與例如卡貝縮宮素的組合具有直接或間接的抗焦慮活性。在這些實施方案中，與例如卡貝縮宮素組合的第二或輔助治療劑可以單獨或與例如卡貝縮宮素的組合具有直接或間接的抗精神病活性。在這些實施方案中，與例如卡貝縮宮素組合的第二或輔助治療劑可以單獨或與例如卡貝縮宮素的組合具有直接或間接的抗驚厥活性。在這些實施方案中，與例如卡貝縮宮素組合的第二或輔助治療劑可以單獨或與例如卡貝縮宮素的組合具有直接或間接的抗病毒活性。在這些組合制劑和共同治療方法中有用的輔助治療劑包括，例如5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，其包括但不限于氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、氯米帕明；抗精神病藥，包括但不限于氟哌啶醇、硫利達嗪、氟非那嗪、氯丙嗪、利培酮、奧氮平、齊拉西酮；抗驚厥劑，包括但不限于卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯、丙戊酸，興奮藥物(stimulant medication)包括但不限于哌甲酯、α2-腎上腺素能激動劑、金剛烷胺和可樂寧；抗抑郁藥，包括但不限于納屈酮、鋰和苯二氮

抗病毒藥，包括但不限于伐昔洛韋；胰泌素；抗焦慮藥，包括但不限于丁螺環(huán)酮；免疫治療劑。另外的輔助治療劑包括維生素，其包括但不限于B族維生素(B6、B12、硫胺素)、維生素A和必需脂肪酸。輔助治療劑也可包括行為調(diào)節(jié)(behavioral modification)和飲食改變比如不含谷蛋白、酪蛋白的飲食。
根據(jù)下述詳細說明，本發(fā)明的前述目的和另外的目的、特征、方面和優(yōu)點將變得清楚。



圖1顯示藥代動力學(xué)研究1的體外-體內(nèi)相互關(guān)系的圖。
圖2代表在50℃，卡貝縮宮素鼻噴霧劑在不同緩沖劑(檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽和精氨酸)和3.0至10.0的不同pH下隨時間所有肽相關(guān)雜質(zhì)的柱狀圖。
圖3為代表在參與第一人臨床研究的受試者中檢測的卡貝縮宮素血漿水平的圖。
圖4為代表從兔研究3獲得的卡貝縮宮素PK結(jié)果的圖。
發(fā)明詳述 本發(fā)明提供用于預(yù)防和/或治療哺乳動物受試者中精神性病癥和神經(jīng)性病癥的新的方法和組合物，所述精神性病癥和神經(jīng)性病癥包括孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀。在多個實施方案中，本發(fā)明使用催產(chǎn)素和包括卡貝縮宮素在內(nèi)的催產(chǎn)素類似物治療此類精神性病癥和神經(jīng)性病癥。如本文使用的術(shù)語“類似物”或“激動劑”指表現(xiàn)出類似于母體分子活性的活性的任何分子。所述分子可以是能夠具有與母體化合物類似活性的合成類似物、片段、藥學(xué)可接受的鹽或內(nèi)源性生物分子。
除非另有說明，如本文使用的任何濃度范圍、百分數(shù)范圍、比例范圍或整數(shù)范圍都應(yīng)當理解為包括所述范圍內(nèi)的任何整數(shù)值，當合適時，包括其分數(shù)(比如整數(shù)的十分之一和百分之一)。而且，除非另有說明，本文描述的關(guān)于任何物理特征，比如聚合物亞基、大小或厚度的任何數(shù)量范圍應(yīng)理解為包括所述范圍內(nèi)的任何整數(shù)。除非另有說明，如本文使用的“約”或“基本上由...組成”指所指范圍、值或結(jié)構(gòu)的±20％。如本文使用的術(shù)語“包括”和“包含”作為同義詞使用。應(yīng)當理解術(shù)語“一個(種)”指所列舉組分的“一個或多個(一種或多種)”。使用可選擇詞(例如“或”)應(yīng)當理解為指所述可選擇的一個、兩個或其任意組合。
另外，應(yīng)當理解本申請公開了來源于本文描述的結(jié)構(gòu)和取代基的不同組合的個體化合物或化合物組，其公開程度如同單個列出每個化合物或化合物組。因此，特定結(jié)構(gòu)或特定取代基的選擇在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
用于治療和預(yù)防孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀的制劑采用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物，比如卡貝縮宮素，其包括本說明書中的所有活性藥學(xué)可接受的化合物，以及各種可預(yù)見的和容易提供的這些化合物的復(fù)合物、衍生物、鹽、溶劑化物、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、多晶型物和前藥，及其組合。作為示例性的實施方案，用于本發(fā)明中的示例性的類似物包括4-蘇氨酸-1-羥基-脫氨基催產(chǎn)素、9-脫氨基催產(chǎn)素、包含替代甘氨酰胺殘基的甘氨酸殘基的催產(chǎn)素類似物；7-D-脯氨酸-催產(chǎn)素及其脫氨基類似物；(2，4-二異亮氨酸)-催產(chǎn)素，具有促尿鈉排泄和利尿活性的催產(chǎn)素類似物；脫氨基催產(chǎn)素類似物；長效催產(chǎn)素(OT)類似物，1-脫氨基-1-單卡巴-E12-[Tyr(OMe)]-OT(dCOMOT)；卡貝縮宮素，1-丁酸-2-(O-甲基-L-酪氨酸)-1-卡貝催產(chǎn)素，或者，脫氨基-1單卡巴-(2-O-甲基酪氨酸)-催產(chǎn)素[d(COMOT)])；[Thr4-Gly7]-催產(chǎn)素(TG-OT)；催產(chǎn)加壓素；Ile-conopressin；阿托西班；脫氨基-6-卡巴-催產(chǎn)素(dC60)、d[Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、d[Thr(4)，Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Lys(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Thr(4)，Lys(8)(5/6C熒光素)]VT、d[Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、d[Thr(4)，Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、[HO(1)][Thr(4)，Om(8)(5/6C-熒光素)]VT、去氨加壓素和1-脫氨基-催產(chǎn)素，其中殘基1和6之間的二硫鍵被硫醚代替。
在所述制劑和方法中，如本文公開的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物有效地用于治療患有下述病癥的哺乳動物受試者中孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀孤獨癥譜系病癥和/或相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀，其包括社會退縮、目光接觸回避、重復(fù)性行為、焦慮、注意力不足、多動、抑郁、失語、言語交流困難、厭惡碰觸、視覺困難、理解困難和聲音敏感及光敏感。
使用本發(fā)明的制劑和方法可治療寬范圍的哺乳動物受試者，包括人受試者。這些受試者包括但不限于患有精神性病癥或神經(jīng)性病癥的人和其他哺乳動物受試者，所述精神性病癥或神經(jīng)性病癥包括孤獨癥譜系病癥比如孤獨癥、阿斯伯格綜合征、其他未明確的廣泛性發(fā)育障礙、雷特病癥、兒童崩解癥、語義語用交流障礙、非語言學(xué)習障礙、高功能自閉癥、超讀癥和ADHD。使用本發(fā)明的組合物和方法可治療的哺乳動物受試者還包括但不限于患有相關(guān)病癥的人和其他哺乳動物受試者，所述相關(guān)病癥包括Landau-Kleffner綜合征；多系統(tǒng)紊亂；焦慮癥，包括但不限于社交恐怖癥、一般性焦慮癥、驚恐障礙、創(chuàng)傷后應(yīng)激病癥、恐怖癥、廣場恐怖癥、強迫癥；社交困難病癥，包括但不限于偏執(zhí)型人格障礙、分裂型人格障礙、精神分裂樣人格障礙、回避型人格障礙、品行障礙、邊緣型人格障礙、表演型人格障礙；重復(fù)性病癥，包括但不限于沖動控制障礙和成癮病癥，和進食障礙比如食欲過盛、神經(jīng)性食欲缺乏、暴食癥；認知缺陷病癥，包括但不限于癡呆、阿爾茨海默氏病、Creutzfeld-Jakob疾病、注意力不足病癥、注意力不足多動障礙、輕度認知衰退和其他未明確的認知障礙。
在本發(fā)明的方法和組合物內(nèi)，將如本文公開的一種或多種催產(chǎn)素類似物有效地配制成用于治療孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀的精神性或神經(jīng)性治療劑或作為該治療劑形式有效地給藥。在一個示例性的實施方案中，用于示例的目的，單獨使用卡貝縮宮素或?qū)⑵渑c一種或多種輔助治療劑組合使用。本發(fā)明進一步提供天然或合成化合物形式的另外藥學(xué)可接受的催產(chǎn)素類似物，其包括本文公開的化合物的復(fù)合物、衍生物、鹽、溶劑化物、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、多晶型物和前藥，及其組合，其可有效地用作本發(fā)明的方法和組合物內(nèi)的孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥治療劑。
孤獨癥譜系病癥由可以從輕度至重度的特定行為定義。癥狀包括缺乏人際互動、言語和非言語交流和重復(fù)性行為及興趣。在患孤獨癥的人中的損傷的發(fā)展是變化的，并且是特征性不平衡的，導(dǎo)致一些領(lǐng)域的技能良好，而在其它領(lǐng)域的技能差。模仿言語是一種語言損傷的常見特征，當其存在時，可能引起語言技能比他們真實具有的似乎更好。也可存在象征性思維不足、刻板的行為(例如，手和手指的重復(fù)性非生產(chǎn)性活動、搖擺、無意義的發(fā)聲)、自我刺激、自我傷害行為和抽搐。對于孤獨癥的發(fā)展，盡管孿生研究以及在兄弟姐妹間復(fù)發(fā)的發(fā)病率較高提示遺傳來源，，但還沒有鑒定出單個原因。另外，發(fā)現(xiàn)在患有遺傳病癥，比如脆性X綜合征和結(jié)節(jié)性硬化的個體中的孤獨癥的發(fā)病率增加。在孤獨癥的發(fā)展中，可能的影響因素包括感染、代謝失調(diào)、免疫失調(diào)、鉛中毒和胎兒灑精綜合征。本發(fā)明的組合物和方法可有效地治療所有類型的孤獨癥譜系病癥，而不管其病因如何。
催產(chǎn)素是一種由垂體腺分泌的哺乳動物激素，其起神經(jīng)遞質(zhì)作用，已知其刺激子宮收縮和泌乳(milk let-down)。其是具有序列Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly(SEQ ID NO1)的九個氨基酸肽?；趯游镅芯康淖C據(jù)的評價，證實所述九肽物質(zhì)-催產(chǎn)素和加壓素(Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly(SEQ ID NO2))對于種群典型的群居習性、交流和禮節(jié)的正常表達具有獨特的作用，提議催產(chǎn)素或加壓素神經(jīng)傳遞可能負責與孤獨癥相關(guān)的幾個特征。(Insel等人，Biol.Psychiatry 45145-157，1999)。關(guān)于孤獨癥兒童的研究報道這樣的兒童具有比正常兒童顯著低水平的血漿催產(chǎn)素。在非孤獨癥兒童中，提高的催產(chǎn)素水平與社交和發(fā)育試驗的較高得分相關(guān)，但是在孤獨癥兒童中，與較低的得分相關(guān)，表明改變催產(chǎn)素水平可能與兒童孤獨癥有關(guān)(Modahl等人，Biol.Psychiatric 43270-277，1998)。提高的催產(chǎn)素水平還另外涉及某些強迫行為，比如過度擔心、性強迫和/或強迫性洗滌和清洗。(Leckman等人，Psychoneuroendocrinology 19723-749，1994；Leckman等人，Arch Gen Psychiatry 51782-92，1994)。提高的催產(chǎn)素的水平還涉及Prader-Willi綜合征，一種與智力遲鈍、食欲失調(diào)和發(fā)展為強迫癥的危險相關(guān)的遺傳病癥(Martin等人，Biol.Psychiatric 441349-1352，1998)。
作為用于誘導(dǎo)哺乳動物患者的子宮收縮和泌乳的可能代替的試劑已經(jīng)評價了大量催產(chǎn)素類似物，目標是使催產(chǎn)素的副作用最小化。一種這樣的類似物，卡貝縮宮素(1-丁酸-2-(O-甲基-L-酪氨酸)-1-卡巴催產(chǎn)素，或者，脫氨基-1-單卡巴-(2-O-甲基酪氨酸)催產(chǎn)素[d(COMOT)])，是一種長效合成催產(chǎn)素類似物，其同時顯示出子宮收縮和泌乳誘導(dǎo)活性(Atke等人，Acta Endocrinol.115155-160，1987；Norstrom等人，Acta Endocrinol.122566-568，1990；Hunter等人，Clin.Pharmacol.Ther.5260-67，1992；Silcox等人，Obstet.Gynecol.82456-459，1993；Vilhardt等人，Pharmacol.Toxicol.81147-150，1997；Boucher等人，J.Perinatology 18202-207，1998)。9個氨基酸的催產(chǎn)素包含在第一位和第六位半胱氨酸之間的二硫鍵，而卡貝縮宮素的環(huán)狀結(jié)構(gòu)衍生自N-末端的丁酸和第五位的半胱氨酸之間的C-S 鍵，丁?；?Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2(SEQ ID NO3)?？ㄘ惪s宮素的結(jié)構(gòu)顯示如下
據(jù)報導(dǎo)卡貝縮宮素的半衰期比催產(chǎn)素的半衰期長4至10倍，其反映在該類似物的子宮收縮和泌乳誘導(dǎo)活性的大大地延長。代謝穩(wěn)定性表現(xiàn)出的增加歸因于卡貝縮宮素中N-末端的脫氨作用和亞甲基取代1-6二硫鍵，這一修飾被認為保護該類似物免于被氨基肽酶和二硫鍵酶(disulfidase)裂解(Hunter等人，Clin.Pharmacol.Ther.5260-67，1992)。因其半衰期增加，認為卡貝縮宮素可能是用于社交障礙比如焦慮癥和孤獨癥譜系病癥的潛在治療劑。本發(fā)明的方法和組合物包括使用在新的制劑中的催產(chǎn)素和催產(chǎn)素類似物來治療神經(jīng)性和精神性病癥，其包括孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥比如強迫癥。
由卡貝縮宮素代表的本發(fā)明的組合物和方法可有效地治療或預(yù)防哺乳動物中的精神性和神經(jīng)性病癥。特別地，本發(fā)明的組合物和方法可以施用于哺乳動物受試者，以可測量地減輕或預(yù)防孤獨癥譜系病癥或相關(guān)病癥的一種或多種癥狀，所述癥狀選自包括但不限于社會退縮、目光接觸回避、重復(fù)性行為、焦慮、注意力不足、多動、抑郁、失語、言語交流困難、厭惡碰觸、視覺困難、理解困難和聲音敏感及光敏感。
用于治療孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀的包含卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的組合物包含一定量的卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物，所述量有效地預(yù)防和/或治療哺乳動物受試者中孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀。典型地，有效量的卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物包含一定量的活性化合物，該活性化合物在單劑型或多劑型中，經(jīng)治療介入的規(guī)定期限內(nèi)，治療有效地、可測定地減輕受試者中孤獨癥譜系病癥和/或相關(guān)病癥的一種或多種癥狀。在示例性的實施方案中，這些組合物在減輕孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的體內(nèi)治療方法中有效。
本發(fā)明的孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥治療組合物典型地包含有效量的或單元劑量的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物，其可以與一種或多種藥學(xué)可接受的載體、輔劑、賦形劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、緩沖劑和/或其它添加劑制劑一起配制，所述其它添加劑可以增強穩(wěn)定性、遞送、吸收、半衰期、功效、藥代動力學(xué)和/或藥效動力學(xué)、減少不良副作用或者提供藥物用途的其它優(yōu)點。示例性的輔劑包括增溶劑、表面活性劑和螯合劑，例如制劑可以包含作為增溶劑的甲基-β-環(huán)糊精(Me-β-CD)、作為螯合劑的依地酸二鈉(EDTA)、精氨酸、山梨糖醇、NaCl、對羥苯甲酸甲酯鈉(MP)、對羥苯甲酸丙酯鈉(PP)、氯代丁醇(CB)、苯甲醇、氯化鋅、乙醇、二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨醇酯、乳糖、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽和/或磷酸鹽。根據(jù)臨床和患者的特殊因素，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易地確定用于治療神經(jīng)性和精神性病癥的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素的有效量(例如，包含有效濃度/量的卡貝縮宮素、或選擇的藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、溶劑化物、多晶型物和/或卡貝縮宮素的前藥的單元劑量)。用于向包括人在內(nèi)的哺乳動物受試者施用的活性化合物的合適的有效單元劑量可以為10至1500μg、20至1000μg、25至750μg、50至500μg、或150至500μg、10至1500mg、20至1000mg、25至750mg、50至500mg或150至500mg。在某些實施方案中，催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的有效劑量可以在如下較窄的范圍內(nèi)選擇，所述范圍例如10至25μg、30-50μg、75至100μg、100至250μg、或250至500μg、10至25mg、30至50mg、75至100mg、100至250mg、或250至500mg。這些及其它有效單元劑量可以以單劑量給藥，或者以每日、每周或每月的多劑量形式給藥，例如以包含1至5、或2-3劑量的給藥方案每日、每周或每月給藥。在一個示例性的實施方案中，每日一次、兩次、三次、四次或五次的給藥劑量10至25mg、30-50mg、75至100mg、100至250mg、或250至500mg。在更詳細的實施方案中，每日一次或兩次的給藥劑量為50-75mg、100-200mg、250-400mg或400-600mg。在可選的實施方案中，劑量根據(jù)體重計算，可以給藥的劑量為，例如約0.5mg/kg至約100mg/kg/天、1mg/kg至約75mg/kg/天、1mg/kg至約50mg/kg/天、2mg/kg至約50mg/kg/天、2mg/kg至約30mg/kg/天、或3mg/kg至約30mg/kg/天。
包含有效量的卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的本發(fā)明的組合物的遞送量、遞送時間和遞送方式通常將基于個體進行調(diào)整，取決于這樣的因子例如個體的體重，年齡，性別和病癥，孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和/或此類病癥的癥狀的嚴重度，給藥是預(yù)防性還是治療性的，并且基于已知影響藥物遞送、吸收、包括半衰期在內(nèi)的藥代動力學(xué)和功效的其它因素。
通常選擇本發(fā)明制劑的有效劑量或多劑量治療方案以與必需且足夠基本上預(yù)防或減輕受試者中孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和/或此類病癥的癥狀的最小劑量方案近似。劑量和給藥方案將通常包括經(jīng)幾天或甚至一周或幾周或幾年的反復(fù)給藥治療。有效的治療方案也可包括持續(xù)數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或者甚至數(shù)年的時期內(nèi)基于每天或多劑量每天施用預(yù)防劑量。
可以容易地采用多種測定和模型系統(tǒng)來確定催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物在治療孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥中的療效?？梢愿鶕?jù)多種方法常規(guī)地證實用于這些和相關(guān)病癥的組合物的功效，所述方法包括，例如通過測定標記物比如在嬰幼兒孤獨癥檢查量表(CHAT)、改良的嬰幼兒孤獨癥檢查量表(M-CHAT)、用于兩歲齡孤獨癥的篩選工具(STAT)、社會交往調(diào)查表(SCQ)、孤獨癥譜系篩選調(diào)查表(ASSQ)、阿斯伯格綜合征的澳大利亞量表、兒童阿斯伯格綜合征試驗(CAST)、孤獨癥診斷訪談量表修訂版(ADI-R)、孤獨癥診斷觀察圖表(ADOS-G)、兒童孤獨癥等級量表(CARS)、聽覺聽力評價、給藥PTSD量表、艾森克人格調(diào)查表、漢密爾頓焦慮量表中，或者各種動物模型中，比如熟知的焦慮(大鼠沖突飲水)試驗、或高架十字迷宮試驗(elevated plus maze test)中測定的那些來進行。催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的化合物的有效量將可測定地預(yù)防一種或多種哺乳動物受試者中前述孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥或此類病癥的癥狀，降低其嚴重度，或延緩其發(fā)病或持續(xù)時間。
給藥有效量的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素至具有一種或多種前述癥狀的受試者將可檢測地減少、消除或預(yù)防受試者的癥狀。在示例性的實施方案中，與安慰劑治療的受試者或其它合適的對照受試者相比，給藥卡貝縮宮素化合物至合適的試驗對象將獲得一種或多種與神經(jīng)性或精神性病癥相關(guān)的目標癥狀減少至少10％、20％、30％、50％或更多，至多75-90％、或95％或更多地減少一種或多種目標癥狀或病癥。對于本文確定的神經(jīng)性和精神性病癥的整個范圍，在使用本發(fā)明的組合物和方法治療或預(yù)防時，可預(yù)期獲得相當?shù)墓π健Ｔ诒景l(fā)明的另一個方面，提供組合制劑和共同給藥方法，其應(yīng)用有效量的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素和一種或多種第二種或輔助試劑，該試劑與催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物組合配制或共同給藥，以獲得聯(lián)合的、多活性試劑或共同治療方法。在這一方面，示例性的組合制劑和共同治療方法應(yīng)用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與一種或多種第二種精神性或神經(jīng)性試劑或者一種或多種輔助治療劑組合，所述第二種精神性或神經(jīng)性試劑或輔助治療劑在選擇的組合制劑或共同治療方案中用于治療或預(yù)防目標疾病、病癥和/或癥狀。對于本發(fā)明的大多數(shù)組合制劑和共同治療方法，配制催產(chǎn)素或相關(guān)類似物，或者與一種或多種第二種或輔助治療劑組合共同給藥，以得到組合制劑或共同治療方法，所述組合制劑或共同治療方法組合對于治療孤獨癥譜系病癥或相關(guān)病癥和/或一種或多種此類病癥的癥狀有效或共同有用。在這一方面，示例性的組合制劑和共同治療方法應(yīng)用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與一種或多種第二種或輔助治療劑的組合，所述第二種或輔助治療劑選自例如5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，包括但不限于氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、氯米帕明；抗精神病藥，包括但不限于氟哌啶醇、硫利達嗪、氟奮乃靜、氯丙嗪、利培酮、奧氮平和齊拉西酮；抗驚厥藥，包括但不限于卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯和丙戊酸；興奮藥物，包括但不限于哌甲酯、α2-腎上腺素能激動劑、金剛烷胺和可樂寧；抗抑郁藥，包括但不限于單胺氧化酶抑制劑包括苯乙肼和異卡波肼，三環(huán)抗抑郁藥包括阿米替林、氯米帕明、地昔帕明和去甲替林，非典型性抗抑郁藥(non-SSRI)包括安非他酮(Wellbutrin)、拉法新(Velafaxine)(Effexor)和SSRI比如西酞普蘭、氟西汀、氟伏沙明、帕羅西汀和舍曲林；抗焦慮藥，包括但不限于苯二氮

和丁螺環(huán)酮。另外的輔助治療劑包括維生素，包括但不限于B族維生素(B6、B12、硫胺素)、維生素A和必需脂肪酸。輔助治療可以包括行為調(diào)節(jié)和飲食改變，比如不含谷蛋白-酪蛋白飲食。
在本發(fā)明的另外的方面，提供組合制劑和共同給藥方法，其應(yīng)用有效量的一種或多種催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物化合物、和一種或多種另外的活性劑，所述另外的活性劑與催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物組合配制或共同給藥，以獲得治療哺乳動物受試者中孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀、和/或減輕神經(jīng)性或精神性病癥的一種或多種癥狀的有效制劑或方法。在這一方面，示例性的組合制劑和共同治療方法應(yīng)用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與一種或多種另外的或輔助的下述藥物的組合抗焦慮藥、抗抑郁藥、抗驚厥藥、益智藥、抗精神病藥、興奮藥、抗病毒藥、免疫治療劑、麻醉藥、安眠藥或肌肉松弛劑。在另外的組合制劑和共同治療方法中，將催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與一種或多種第二種治療劑的組合配制或共同給藥，所述第二種治療劑用于治療上列精神性或神經(jīng)性病癥伴有的癥狀。
為了實施本發(fā)明的共同給藥方法，在與一種或多種本文涵蓋的第二種或輔助治療劑的共同治療方案中，同時或順次給藥催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物。所述共同給藥可以以任意順序同時或順次進行，當僅僅一種或兩種(或所有)活性治療劑分別和/或一起發(fā)揮其生物學(xué)活性時，可以在一個時期內(nèi)給藥。所有這樣的共同治療方法的一個區(qū)別方面是催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素發(fā)揮至少一些可檢測的治療活性，和/或引發(fā)有利的臨床反應(yīng)，其可能與或可能不與所述第二種治療劑提供的第二臨床反應(yīng)相關(guān)。通常，共同給藥催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素與如本文涵蓋的第二種治療劑將得到高于單獨的催產(chǎn)素類似物或催產(chǎn)素類似物和第二種治療劑的二者和/或單獨的第二種治療劑引發(fā)的治療反應(yīng)的增強的治療反應(yīng)。
在示例性的實施方案之中，催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物將與一種或多種第二種試劑或其它指出的治療劑共同給藥(同時或順次，在組合的制劑中或分開的制劑中)，所述治療劑例如選自例如5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，包括但不限于氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、氯米帕明；抗精神病藥物，包括但不限于氟哌啶醇、硫利達嗪、氟奮乃靜、氯丙嗪、利培酮、奧氮平、齊拉西酮；抗驚厥藥，包括但不限于卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯、丙戊酸；興奮藥物，包括但不限于哌甲酯、α2-腎上腺素能激動劑、金剛烷胺和可樂寧；抗抑郁藥，包括但不限于納屈酮、鋰和苯二氮

抗病毒藥，包括但不限于伐昔洛韋；胰泌素；抗焦慮藥，包括但不限于丁螺環(huán)酮；免疫治療劑。另外的輔助治療劑包括維生素，包括但不限于B族維生素(B6、B12、硫胺素)、維生素A和必需脂肪酸。輔助治療可以包括行為調(diào)節(jié)和飲食改變，比如不含谷蛋白-酪蛋白飲食。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供組合的神經(jīng)性和精神性治療制劑，其包括催產(chǎn)素和一種或多種輔助試劑，所述輔助試劑對于治療孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥具有有效的活性。在這些組合制劑中，催產(chǎn)素和催產(chǎn)素類似物和輔助試劑將以有效量單獨或組合存在于組合制劑中。在示例性的實施方案中，催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素以有效量存在?？蛇x地，所述組合制劑可以包括亞治療單劑量的一種或兩種活性劑，其中所述組合制劑包括的兩種試劑的特征是兩種試劑一起以組合劑量有效地引發(fā)期望的反應(yīng)。因此，一種或多種催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物和另外的試劑可以存在于所述制劑中，或者以亞治療劑量以共同給藥方案給藥，但是它們在所述制劑或方法中一起引發(fā)受試者中的可檢測反應(yīng)。
如上所述，在本文涵蓋的本發(fā)明的所有各種實施方案中，所述制劑可以使用多種形式中任一種的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物，所述多種形式包括所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、多晶型物、溶劑化物、水合物和/或前藥中的任一種或組合。在本發(fā)明的示例性的實施方案中，用于示例的目的，在治療制劑和方法中應(yīng)用小檗堿。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過獲得其期望的治療或預(yù)防目的的任何方式給藥。合適的給藥途徑包括但不限于口服、含服、經(jīng)鼻、氣霧劑、外用(topical)、透皮、粘膜、注射、緩釋、控釋、離子電滲、超聲促滲、及其它常規(guī)遞送途徑、裝置和方法。還涵蓋可注射的遞送方法，包括但不限于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)、動脈內(nèi)和皮下注射。
本發(fā)明的催產(chǎn)素類似物的藥物劑型包括藥物復(fù)合領(lǐng)域公知的作為適于制備如上討論的劑量單元的輔劑。這樣的輔劑包括但不限于粘合劑、填充劑、潤滑劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、調(diào)味劑、防腐劑、緩沖劑、潤濕劑、崩解劑、張力調(diào)節(jié)劑(tonicifier)、泡騰劑及其它常規(guī)輔劑和添加劑。
通常使用“緩沖劑”來保持溶液的pH為接近恒定的值。即使當將少量強酸或強堿加入到溶液中時，緩沖劑通過防止或中和氫離子和氫氧離子的濃度的大的改變來保持溶液的pH。緩沖劑通常由弱酸及其合適的鹽(或弱堿及其合適的鹽)組成。弱酸的合適的鹽包含與存在于弱酸中相同的陰離子(參見Lagowski，Macmillan Encyclopedia of Chemistry，Vol.1，Simon & Schuster，NewYork，1997，第273-4頁)。使用亨-哈二氏公式pH＝pka+log10[A-]/[HA]來描述緩沖劑，其基于弱酸解離的標準方程

。通常使用的緩沖劑源的實例包括下述的物質(zhì)谷氨酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、乳酸鹽、甲酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽及其混合物。
“緩沖容量”指在出現(xiàn)顯著的pH改變之前，可以加入到緩沖溶液中的酸或堿的量。如果所述pH存在于弱酸的pK-1和pK+1的范圍內(nèi)，則緩沖容量是可估計的，但是在該范圍之外，其下降至價值不大的程度。因此，給定的系統(tǒng)僅僅具有在弱酸(或弱堿)的pK兩側(cè)的一個pH單位范圍內(nèi)的有用的緩沖作用(參見Dawson，Data for Biochemical Research，Third Edition，OxfordScience Publications，1986，第419頁)。通常，選擇合適的濃度以使溶液的pH接近弱酸(或弱堿)的pKa(參見Lide，CRC Handbook of Chemistry and Physics，86th Edition，Taylor & Francis Group，2005-2006，第2-41頁)。而且，通常不會將強酸或強堿的溶液歸類為緩沖溶液，它們不顯示出在pH值2.4至1.6之間的緩沖容量。
在一個實施方案中，將卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物與增溶劑、表面活性劑、張力調(diào)節(jié)劑、防腐劑、緩沖劑和螯合劑混合。這樣的輔劑包括但不限于甲基-β-環(huán)糊精(Me-β-CD)、依地酸二鈉(EDTA)、精氨酸、山梨糖醇、NaCl、對羥苯甲酸甲酯鈉(MP)、對羥苯甲酸丙酯鈉(PP)、氯代丁醇(CB)、苯甲醇、氯化鋅、乙醇、二癸?；鵏-α磷脂酰膽堿(DDPC)、聚山梨醇酯、乳糖、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽和/或磷酸鹽。示例性的表面活性劑還包括但不限于DMSO、吐溫TM(包括但不限于吐溫80(聚山梨醇酯80)和吐溫20(聚山梨醇酯20)、普流尼克TM及其它普流尼克酸，包括但不限于普流尼克酸F68(泊洛沙姆188)、PEG；基于聚(環(huán)氧乙烷)-聚(環(huán)氧丙烷)-聚(環(huán)氧乙烷)，即(PEO-PPO-PEO)，或聚(環(huán)氧丙烷)-聚(環(huán)氧乙烷)-聚(環(huán)氧丙烷)，即(PPO-PEO-PPO)的聚醚，或其組合。在另一個實施方案中，所述組合物包含增溶劑與卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的組合。在另一個進一步的實施方案中，所述組合物包含表面活性劑與卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的組合。在另一個的實施方案中，所述組合物包含螯合劑與卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的組合。本發(fā)明的組合物可以進一步包含增溶劑、表面活性劑和螯合劑的組合。例如，本發(fā)明的組合物可以包含甲基-β-環(huán)糊精和依地酸二鈉與卡貝縮宮素或其它催產(chǎn)素類似物的組合。
因此，用于治療包括孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥的神經(jīng)性和精神性病癥的本發(fā)明的組合物可以包括任一種下述物質(zhì)或其組合藥學(xué)可接受的載體或輔劑；其它藥用試劑；藥物試劑；助劑；緩沖劑；增溶劑；表面活性劑；螯合劑；防腐劑；稀釋劑；和各種其它藥物添加劑和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的試劑。這些另外的制劑添加劑和試劑通常為生物學(xué)非活性的，可以施用于患者而不引起有害副作用或不引起與活性劑的相互作用。
如果期望，本發(fā)明的催產(chǎn)素類似物可以以利用緩釋載體比如親水性緩釋聚合物的控釋形式給藥。在這一方面，示例性的控釋試劑包括但不限于具有粘度范圍為100cps至約100,000cps的羥丙基甲基纖維素。
增粘劑(viscosity enhancer)或助懸劑可以影響藥物從劑量制劑的釋放速率和吸收速率。可以作為藥學(xué)可接受的增粘劑的物質(zhì)的一些實例為甲基纖維素(MC)；羥丙基甲基纖維素(HPMC)；羧甲基纖維素(CMC)；纖維素；明膠；淀粉；羥乙基淀粉(heta starch)；泊洛沙姆(poloxamer)；普流尼克(pluronic)；羧甲基纖維素鈉；山梨糖醇；阿拉伯膠；聚維酮；卡波普(carbopol)；聚卡波非(polycarbophil)；殼聚糖(chitosan)；殼聚糖微球；海藻酸鹽微球；殼聚糖谷氨酸鹽(chitosan glutamate)；琥石樹脂(amberlite resin)；透明質(zhì)酸(hyaluronan)；乙基纖維素；麥芽糖糊精DE；鼓式干燥玉米淀粉(drum dried way maize starch，DDWM)；可降解的淀粉微球(DSM)；脫氧甘氨膽酸鹽(deoxyglycocholate，GDC)；羥乙基纖維素(HEC)；羥丙基纖維素(HPC)；微晶纖維素(MCC)；聚甲基丙烯酸和聚乙二醇；磺基丁基醚B環(huán)糊精；交聯(lián)依地索姆淀粉生物球(cross-linked eldexomer starch biosphere)；?；嵌浞蛭鞯厮徕c(STDHF，sodiumtaurodihydrofusidate)；N-三甲基殼聚糖鹽酸鹽(TMC，N-trimethylchitosan chloride)；降解的淀粉微球；琥石樹脂；殼聚糖納米顆粒(chistosannanoparticles)；噴霧干燥的交聚維酮；噴霧干燥的葡聚糖微球；噴霧干燥的微晶纖維素；和交聯(lián)依地索姆淀粉微球。
通常將本發(fā)明的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物組合物任選地與載體或其它添加劑組合配制成口服劑型以及以該劑型給藥。藥物制劑技術(shù)常見的合適的載體包括但不限于微晶纖維素、乳糖、蔗糖、果糖、右旋糖或其它糖、磷酸二氫鈣、硫酸鈣、纖維素、甲基纖維素、纖維素衍生物、高嶺土、甘露糖醇、乳糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇或其它糖醇、無水淀粉、糊精、麥芽糖糊精或其它多糖、肌醇或其混合物。在本發(fā)明中使用的示例性的單位口服劑型包括片劑，其可以通過可以在制備口服單位劑型中使用的制備藥物口服單位劑型的任何常規(guī)方法制備?？诜挝粍┬停热缙瑒?，可以包含一種或多種常規(guī)附加制劑成分，包括但不限于釋放調(diào)節(jié)劑、助流劑、壓制助劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、調(diào)味劑、增香劑、甜味劑和/或防腐劑。合適的潤滑劑包括硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石、硬脂酸鈣、氫化植物油、苯甲酸鈉、亮氨酸、聚乙二醇、月桂硫酸鎂、膠態(tài)二氧化硅和單硬脂酸甘油酯。合適的助流劑包括膠態(tài)氧化硅、氣相法二氧化硅(fumed silicon dioxide)、二氧化硅、滑石、熱解法二氧化硅、石膏和單硬脂酸甘油酯?？梢杂糜谕繉拥奈镔|(zhì)包括羥丙基纖維素、氧化鈦、滑石、甜味劑和著色劑。前述泡騰劑和崩解劑可用于制備本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的快速崩解片。這些典型地在口腔崩解少于一分鐘，優(yōu)選地少于三十秒。泡騰劑是指偶合物，典型地為有機酸和碳酸鹽或碳酸氫鹽。這樣的快速作用的劑型將用于例如預(yù)防或治療驚恐障礙的急性發(fā)作。
本發(fā)明另外的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物組合物可以制備成本領(lǐng)域已知的多種吸入或經(jīng)鼻遞送形式中的任一種，和以該形式給藥。能夠?qū)忪F化的催產(chǎn)素制劑沉積在患者的鼻竇腔或肺泡的裝置包括計量性劑量吸入器、噴霧器、干燥粉未發(fā)生器、噴霧器等。肺部遞送至肺用于快速穿過泡腔上皮進入血流可能對于治療抽搐或驚恐障礙的發(fā)作前時刻(impending episode)特別有用。適于肺部遞送藥物用于全身效應(yīng)的方法和組合物是本領(lǐng)域已知的。用于給藥的其中載體為液體的合適的制劑，如例如鼻噴霧劑或滴鼻劑，可以包括催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物和任何另外的活性或非活性成分的水性或油性溶液。
鼻內(nèi)遞送允許在施用有效量的化合物至鼻之后，允許該化合物直接進入血流，而不需要產(chǎn)品沉積在肺中。另外，鼻內(nèi)遞送可以獲得直接的、或增加的遞送所述活性化合物至中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在這些及其它實施方案中，本發(fā)明的鼻內(nèi)施用化合物可對于治療突然發(fā)作的焦慮病癥，比如驚恐障礙有利。典型地，當這樣的發(fā)作逼近時，患有一般性焦慮病癥和傾向于驚恐障礙發(fā)作的個體能夠感知。在這樣的時間，特別需要能夠以甚至在公共環(huán)境中方便的形式給藥本發(fā)明的化合物，而且獲得快速吸收和中樞神經(jīng)系統(tǒng)遞送。
對于鼻內(nèi)和肺部給藥，液體氣霧劑制劑通常包含本發(fā)明的活性化合物與分散劑和/或生理學(xué)可接受的稀釋劑的組合?？蛇x地，干粉氣霧劑制劑可以包含所述化合物和分散劑的微細的固體形式，該形式允許容易地分散所述干粉顆粒。對于液體或干粉氣霧劑制劑，為了保證霧化的劑量到達鼻通道或肺的粘膜，所述制劑必須被霧化成小的液體或固體顆粒。如本文使用的術(shù)語“氣霧劑顆?！泵枋鲞m于鼻(約10微米的范圍)或肺部(約2-5微米的范圍)分布至目標的粘膜或肺泡膜的足夠小顆粒直徑的液體或固體顆粒。其它需要考慮的事項包括遞送裝置的結(jié)構(gòu)、制劑中的其它組分和顆粒特征。鼻或肺部施用藥物的這些方面是本領(lǐng)域眾所熟知的，制劑操作、霧化方式和遞送裝置的結(jié)構(gòu)都在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的水平之內(nèi)。
還提供本發(fā)明的另外的組合物和方法，用于外用施用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物來治療神經(jīng)性和精神性病癥，包括孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和此類病癥的癥狀。
外用組合物可以包含催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物和加入到皮膚或粘膜可接受的載體中的任何其它活性或非活性組分，其包括如下形式氣霧劑噴霧劑、粉劑、皮膚貼劑、棒劑(stick)、顆粒劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑、洗劑、糖漿劑、軟膏劑、浸漬的紗布(impregnated sponge)、卷棉子、或者作為在水成液中的溶液劑或混懸劑、非水成液體、水包油型乳劑、或油包水型液體乳劑。這些外用組合物可以包含溶解或分散在加入外用組合物或遞送裝置中的一部分水或其它溶劑或液體中的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物。可以容易地理解，可以通過使用本領(lǐng)域已知的皮膚滲透促進劑增強透皮給藥途徑。適于這樣的劑型的制劑包括其中通常使用的輔劑，特別地指例如用于緩釋藥物經(jīng)延長的時間例如24小時吸收的結(jié)構(gòu)或基質(zhì)。對于患有一般性焦慮病癥的患者，每日一次透皮貼劑特別有用。
還另外提供用于腸胃外給藥的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物，包括水性或非水性注射溶液，其可以任選地包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和/或使該制劑與哺乳動物受試者的血液等滲的溶質(zhì)；和水性或非水性無菌混懸劑，其可以包含助懸劑和/或增稠劑。所述制劑可以存在于單位劑量或多劑量容器中。催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物還可包括用于在腸胃外給藥后延長釋放的聚合物。即用注射溶液(Extemporaneous injection solution)、乳劑和混懸劑可以由之前已經(jīng)描述的種類的無菌粉末、顆粒劑和片劑制備。優(yōu)選的單位劑量制劑為包含如本文上述的日劑量或單元劑量、每日亞劑量，或者其合適的部分的活性成分的那些。
在更詳細的實施方案中，可以將催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物包囊用于以微膠囊、微?；蛭⑶蜻f送，所述微膠囊、微?；蛭⑶蛲ㄟ^凝聚技術(shù)或界面聚合制備，例如分別在膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊)或在粗乳劑(macroemulsion)中的羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。
如上所述，在某些實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物可以使用上述催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的藥學(xué)可接受的鹽，例如酸加成鹽或堿鹽。藥學(xué)可接受的加成鹽的實例包括無機酸和有機酸加成鹽。合適的酸加成鹽由形成無毒鹽的酸形成，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽和磷酸氫鹽。另外的藥學(xué)可接受的鹽包括但不限于金屬鹽，比如鈉鹽、鉀鹽、銫鹽等；堿土金屬鹽，比如鈣鹽、鎂鹽等；有機胺鹽，比如三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環(huán)己胺鹽、N，N′-二芐基乙二胺鹽等；有機酸鹽，比如乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽、乙酸鹽、二氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、草酸鹽和甲酸鹽；磺酸鹽，比如甲磺酸鹽、苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽；和氨基酸鹽，比如精氨酸鹽、天冬酰胺(asparginate)、谷氨酸鹽、酒石酸鹽和葡糖酸鹽。合適的堿鹽由形成無毒鹽的堿形成，例如鋁鹽、鈣鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽和二乙醇胺鹽。
本發(fā)明的藥物試劑可以腸胃外給藥，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)給藥。所述腸胃外制劑可以是適于如此給藥的溶液、分散體或乳劑。也可以將所述試劑配制在用于在腸胃外給藥后延長釋放的聚合物中。藥學(xué)可接受的制劑和成分典型地為無菌的或容易滅菌的、生物學(xué)惰性的和易于給藥。這樣的聚合材料是藥物復(fù)合領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟知的。腸胃外制劑典型地包含緩沖劑和防腐劑，并可以是凍干形式，在給藥時再復(fù)制(re-constituted)。
本發(fā)明還應(yīng)被理解為涵蓋包括催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的方法和組合物，其使用所述化合物的體內(nèi)代謝產(chǎn)物(在施用所述前體化合物之后在體內(nèi)生成的，或以代謝產(chǎn)物本身的形式直接施用的)。所述產(chǎn)物可以例如通過從施用的化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、酯化、糖基化等來得到，主要是由酶促方法得到。因此，本發(fā)明包括使用如下方法生成的化合物的本發(fā)明的方法和組合物，所述方法包括用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的小檗堿相關(guān)的或衍生的化合物接觸哺乳動物受試者足夠得到其代謝產(chǎn)物的一段時間。所述產(chǎn)物典型地通過以下來鑒定制備本發(fā)明的放射性標記的化合物，將其以可檢測的劑量腸胃外施用于動物比如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人，使經(jīng)過足夠發(fā)生代謝的時間，并從尿、血或其它生物樣品中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
可以使用任何噴霧瓶或注射器施用本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑。鼻噴霧瓶的實例為“Nasal Spray Pump w/Safety Clip”Pfeiffer SAP No.60548，其每次噴射0.1mL劑量，具有的汲取管長度為36.05mm。其可以購自Pfeiffer of America ofPrinceton，NJ。催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物(例如卡貝縮宮素)的鼻內(nèi)劑量可以為約50μg至約500μg，包括，例如約150μg和約300μg的劑量。當作為鼻內(nèi)噴霧劑給藥時，噴霧劑的粒徑可以為10-100μm(微米)的尺寸，例如20-100μm的尺寸。
如本文公開的，可以使用鼻噴霧劑或氣霧劑經(jīng)鼻內(nèi)施用催產(chǎn)素、催產(chǎn)素類似物(例如卡貝縮宮素)。在這點上，可采用下述定義 氣霧劑-在壓力下包裝且包含治療活性成分的產(chǎn)品，當開啟合適的閥門系統(tǒng)時，其釋放所述治療活性成分。
計量氣霧劑-一種加壓劑型，其包括計量的劑量閥，當每次開啟時，其允許遞送均勻量的噴霧劑。
粉末氣霧劑-一種在壓力下包裝且包含粉末形式的治療活性成分的產(chǎn)品，當開啟合適的閥門系統(tǒng)時，其釋放所述治療活性成分。
噴霧氣霧劑-一種使用壓縮氣體作為拋射劑以提供噴出為濕噴霧劑的產(chǎn)品所需力的氣霧劑產(chǎn)品；其通常適于醫(yī)用試劑在藥學(xué)可接受的水性溶劑中的溶液。
噴霧劑-一種由空氣或蒸汽噴射微細的液體。鼻噴霧劑藥物產(chǎn)品包含溶解或懸浮在藥學(xué)可接受的溶液中的治療活性成分或在非加壓分配器中的輔劑的混合物。
計量噴霧劑-一種非加壓劑型，其由閥組成，當每次開啟時，其允許分配規(guī)定量的(藥學(xué)可接受的)噴霧劑。
混懸噴霧劑-一種藥學(xué)可接受的液體制劑，其包含分散在液體載體中的固體顆粒，并且是流動的液滴或微細固體的形式。
所述藥學(xué)可接受的氣霧噴霧劑的流體動力學(xué)特征由計量的鼻噴霧泵作為藥物遞送裝置(“DDD”)來遞送(emitted)。噴霧劑的特征是食品和藥物管理局(“FDA”)批準新的和現(xiàn)有的鼻噴霧泵的研究和開發(fā)、質(zhì)量保證和穩(wěn)定性測定方法所必需的管理呈文(regulatory submissions)的組成部分。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，噴霧劑的幾何結(jié)構(gòu)的全部特征是鼻噴霧泵的綜合性能的最好指示物。特別地，測量當其從裝置排出時的噴霧劑的擴張角(噴霧幾何結(jié)構(gòu))；噴霧劑的橫截面橢圓率、均勻性和顆粒/液滴分布(噴霧模式)；并且認為形成噴霧的時間演化是表征鼻噴霧泵的最代表性的性能參數(shù)。在質(zhì)量保證和穩(wěn)定性試驗期間，對于鼻噴霧泵，噴霧幾何結(jié)構(gòu)和噴霧劑模式測量是用批準的數(shù)據(jù)標準驗證一致性和符合度的關(guān)鍵標識。
在這一點上，考慮下述定義 噴霧高度(Plume Height)-從致動器頂部至因破壞了直線流動噴霧角變成非線性的點的測量?；跀?shù)字圖像的可視觀察，為建立與噴霧模式的最遠測量點一致的寬度測量點，對該研究定義30mm的高度。
主軸-在適合的噴霧模式內(nèi)可以繪制的最大弦，其與COMw以基本單位(mm)交叉。
短軸-在適合的噴霧模式內(nèi)可以繪制的最小弦，其與COMw以基本單位(mm)交叉。
橢圓率-主軸與短軸的比例。
D10-10％的樣品的總液體體積由較小直徑液滴組成的液滴的直徑(μm)。
D50-50％的樣品的總液體體積由較小直徑液滴組成的液滴的直徑(μm)，也稱為質(zhì)量中位直徑。
D90-90％的樣品的總液體體積由較小直徑液滴組成的液滴的直徑(μm)。Span-分布的寬度、較小值、較窄分布的量度。Span根據(jù)下式計算
％RSD-％相對標準偏差，標準偏差除以組的平均值，再乘以100，也稱為％CV。
可以根據(jù)工業(yè)常規(guī)或健康管理機構(gòu)(regulatory health authorities)可接受的那些來選擇鼻噴霧裝置。合適的裝置的一個實例描述在美國申請10/869,649(S.Quay和G.Brandt用于增加粘膜遞送Y2受體結(jié)合肽的組合物和方法和用于治療和預(yù)防肥胖癥的方法(Compositions and methods for enhancedmucosal delivery of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating andpreventing obesity)，2004年6月16日申請)中。
本發(fā)明公開的內(nèi)容還理解為涵蓋用于診斷哺乳動物受試者中的催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物的危險水平、存在、嚴重性或治療指標(treatment indicia)或控制其的診斷組合物，其包括用標記的(例如同位素標記的、熒光標記的或以允許使用常規(guī)方法檢測標記化合物的其它方法標記的)催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物接觸哺乳動物受試者(例如細胞、組織、器官或個體)，該受試者正處于危險中或表現(xiàn)出一種或多種孤獨癥譜系病癥或相關(guān)病癥的癥狀，此后使用任一種寬范圍的已知測定和標記/檢測方法來檢測標記化合物的存在、位置、代謝和/或結(jié)合狀態(tài)。
在示例性的實施方案中，催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素是由具有不同原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子代替一種或多種原子的同位素標記的?？梢约尤氡景l(fā)明的化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，比如分別為2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。然后，將同位素標記化合物施用于個體或其它受試者，接著如上所述根據(jù)常規(guī)方法進行檢測，得到有用的診斷和/或治療控制數(shù)據(jù)。
實施例 提供下述實施例用于闡述，而不是限制。
實施例1 卡貝縮宮素制劑的滲透性 使用氣管/支氣管上皮細胞膜插入物(insert)完成不同的卡貝縮宮素制劑的滲透性研究。評價樣品的外觀、顏色、透明度、pH、重量克分子滲透濃度(osmolality)、細胞生存力(使用MTT測定)、細胞毒性(使用LDH測定)和跨上皮電阻(TER)和滲透性。
根據(jù)表1的配方制備樣品。試驗輔劑所使用的縮寫包括Me-β-CD為甲基β環(huán)糊精(Wacker，Munich，Germany)，DDPC為二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿(NOF Corp.，White Plains，NY)，EDTA為依地酸二鈉(JTBaker，Phillipsburg，NJ)，MP/PP為對羥苯甲酸甲酯鈉/對羥苯甲酸丙酯鈉(Spectrum，Gardena，CA)，CB為氯代丁醇，和Arg為精氨酸。
表1 卡貝縮宮素制劑的樣品組合物



使用具有Orion 520Aplus pH計的Cole Parmer半微量NMR管玻璃pH探針(Thermo Electron Corp，Waltham，MA)測量pH。根據(jù)需要，使用2N HCL或2N NaOH調(diào)節(jié)pH，以符合制劑中規(guī)定的參數(shù)。
用Advanced多道滲透壓計(Advanced multichannel osmometer，型號2020，Advanced Instruments，Inc.，Norwood，MA)測量重量克分子滲透濃度。
在試驗前一天，收到氣管/支氣管上皮細胞膜插入物(EpiAirway，MatTekCorp.，Ashland，MA)。將各個組織插入物放置在6孔板的孔中，所述孔包含0.9ml的無血清培養(yǎng)基，并在37℃培養(yǎng)24小時，以使組織平衡。試驗當天，對于各個插入物，使用連接到上皮電壓計(Epithelial Voltohmeter)的組織電阻測量室(Tissue Resistance Measurement Chamber)(World Precision Instruments，Inc.，Sarasota，F(xiàn)L)進行跨上皮電阻測量。
在測定本底跨上皮電阻之后，將1ml的培養(yǎng)基放置在6孔板的各個孔底部。倒轉(zhuǎn)插入物，并吸出(drain)，將其置于含有新鮮培養(yǎng)基的新孔中。然后，對于樣品1-12，將100μl要試驗的制劑加入到插入物中。對于樣品13-92，將25μl的制劑加入到各個插入物中。將所述插入物放置在培養(yǎng)箱中，以100rpm振搖，保持在37℃一小時。然后，從培養(yǎng)箱中移出組織插入物。將200μl的新鮮培養(yǎng)基放置在24孔板的各個孔中，并轉(zhuǎn)移插入物。在移出所述插入物后，收集保留在六孔板中的底側(cè)(basolateral)溶液，并貯存在2-8℃，直到用EIA(催產(chǎn)素酶免疫測定試劑盒(Oxytocin Enzyme Immunoassay Kit)High Sensitivity，Peninsula Laboratories Inc，San Carlos，CA)測定。制劑5具有的滲透性為21.2％，制劑1、2、3和4具有的滲透性分別為15.7％、14.4％、9.6％和17.9％。這些滲透性水平顯著地高于沒有增強輔劑的卡貝縮宮素的滲透性。單獨的卡貝縮宮素(在只有緩沖劑和鹽中)的滲透性為低于1.0％。
將200μl的新鮮培養(yǎng)基輕輕地加入到在24孔板中的各個組織插入物中，將該板放置在室溫下的搖臺上5分鐘。從各個插入物中移出150μl的頂部溶液，貯存用于乳糖酶脫氫酶測定。然后，用300μl的培養(yǎng)基洗滌該插入物；將300μl的新培養(yǎng)基加入到各個插入物中，在室溫下培養(yǎng)所述插入物20分鐘，并測量跨上皮電阻。
然后，將該插入物轉(zhuǎn)移到新的不含培養(yǎng)基的24孔板中，將合適量的培養(yǎng)基加入到頂部表面，以使總量達到300μl。然后，在室溫下，以100RPM振搖該插入物五分鐘。然后，除去50-100μl的頂部培養(yǎng)基，放置在0.5至1.5mL管中，并保存在2-8℃直至需要時。
然后，以1000rpm離心樣品5分鐘。移出2μl的上清液，并加入到96孔板中。然后，使用48μl的培養(yǎng)基稀釋上清液，達到25x稀釋，使用CytoTox96細胞毒測定試劑盒(CytoTox 96 Cytotoixcity Assay Kit，Promega Corp.，Madison，WI)測定各個樣品的LDH損失，一式三份。
為了分析底側(cè)的培養(yǎng)基，將貯存的150μl溶液中的50μl裝入96孔測定板中并測定，一式三份。
使用MTT測定試劑盒(MatTek Corp.，Ashland，MA)評價細胞生存力。融化MTT濃縮物，并以2ml MTT8ml培養(yǎng)基的比例用培養(yǎng)基稀釋。將300μl的MTT-培養(yǎng)基混合物加入到24孔板的各個孔中。吸出組織培養(yǎng)插入物，轉(zhuǎn)移到包含MTT的孔中，并在37℃下，于暗處培養(yǎng)三小時。在培養(yǎng)之后，從板中移出各個插入物，然后浸入包含2ml提取劑溶液的新24孔板的各孔中。然后，蓋住所述板，在室溫下，于暗處培養(yǎng)過夜。然后，將各個插入物中的液體輕輕倒回盛其的孔中，棄去所述插入物。然后，將來自各孔的提取劑溶液用移液器移至96孔板中，一式三份，并加入150μl新鮮提取劑溶液來稀釋。然后，使用SpectraPro軟件在Spectramax板讀數(shù)器(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上在550nm處測量樣品的光密度。
滲透性結(jié)果表明EDTA為增加滲透性的重要因素，山梨糖醇似乎降低卡貝縮宮素的滲透性。如DOE預(yù)測的最佳制劑包括EDTA和Me-β-CD。另外，EDTA是細胞毒性的最重要因素。乙醇與Me-β-CD和EDTA組合也增加滲透性。
實施例2 兔中的第一藥代動力學(xué)研究 通過鼻內(nèi)給藥藥物組合物用卡貝縮宮素處理兔。表2顯示了試驗的制劑 表2 PK研究的卡貝縮宮素制劑 PK數(shù)據(jù)的結(jié)果、％生物利用度(％BA)和％CV分別顯示在表3、表4和表6中。下述結(jié)果從平均血液水平的測量獲得 表3 兔中卡貝縮宮素的PK結(jié)果 表4 兔中卡貝縮宮素的％生物利用度 制劑(組號6)“10Me-β-CD，高劑量”產(chǎn)生了最高的卡貝縮宮素暴露，以及最高的相對生物利用度(約4.6％的相對BA)。在該情況下，通過保持劑量體積恒定和增加藥物濃度獲得較高劑量。所有其它制劑顯示出在約1.8至約3.7％范圍內(nèi)的相對生物利用度。
0和20mg/ml的Me-β-CD濃度(分別為組號2和5)的比較顯示出較高濃度Me-β-CD的Cmax(分別為1245和1678pg/ml)和AUC最終(分別為46725和51912min*pg/ml)增加。然而，當與“0Me-β-CD”和“20Me-β-CD”相比時，含有中等濃度的Me-β-CD(組#3)″10Me-β-CD”的樣品得到了最低的Cmax(1099pg/ml)和最高的AUC最終(67284min*pg/ml)。
觀察到，在體外，與包含鹽的制劑相比，包含山梨糖醇的制劑降低卡貝縮宮素滲透性(參見表5中列出的結(jié)果)。如在實施例1中所公開進行這些體外研究。在目前體內(nèi)測定中，還觀察到令人意料不到的張力調(diào)節(jié)劑的作用。特別地，組3和4的比較顯示出所述鹽-張力調(diào)節(jié)的制劑產(chǎn)生比包含山梨糖醇的制劑(分別為32378min*pg/ml和693pg/ml)更高的AUC最終和Cmax(分別為67284min*pg/ml和1099pg/ml)。
表5 體外滲透性研究
隨著卡貝縮宮素的濃度從2mg/ml增加至4mg/ml，觀察到劑量反應(yīng)，AUC最終從67284min*pg/ml(組3)增加到169038min*pg/ml(組6)。這相當于相對BA從約3.7輕微增加至約4.8％。另外，增加劑量使IN卡貝縮宮素制劑與IM劑量的AUC最終相當(分別為169038vs.184237min*pg/ml)。還觀察到IN制劑的Tmax比較長(在該研究中，與典型的IN給藥的～15min相比，Tmax＝27-30min)。
表6 兔中卡貝縮宮素的％CV 體內(nèi)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析表明，除“10Me-β-CD，高劑量”之外的所有制劑的AUC最終都與IM對照有統(tǒng)計學(xué)差異。另外，所有給藥劑量為2mg/ml卡貝縮宮素的IN制劑都與IM對照有統(tǒng)計學(xué)差異，彼此的Cmax、AUC最終和Tmax沒有統(tǒng)計學(xué)差異。所述“高劑量”4mg/ml卡貝縮宮素制劑與IM對照在統(tǒng)計學(xué)上相似，與所有其它制劑的Tmax沒有統(tǒng)計學(xué)差異。例如，組2-5的AUC最終和Cmax的P值為＜0.0001，組6的AUC最終和Cmax分別為0.8119和0.0091。組2的Tmax的P值為0.0023，組2的Tmax的P值為0.0062，組3的Tmax的P值為0.0014，組5的Tmax的P值為0.0062和組6的Tmax的P值為0.0014。制劑#6具有最高的生物利用度(約5％)。結(jié)果表明可以通過本發(fā)明的鼻內(nèi)藥物制劑獲得約4-5％的卡貝縮宮素的生物利用度。
結(jié)合表3、4和6中列出的體內(nèi)數(shù)據(jù)與表5中列出的體外數(shù)據(jù)評價可能的體內(nèi)-體外相關(guān)性(IVIVC)，圖示在圖1中。觀察卡貝縮宮素的體內(nèi)生物利用度和體外滲透性之間的相關(guān)性(R2＝0.7608，圖1)。另外，比較體內(nèi)AUC最終或Cmax與體外卡貝縮宮素滲透性(R2分別為0.9236和0.9881)來觀察強的IVIVC。這些相關(guān)性表明在該研究中觀察到的體外滲透性可預(yù)測在兔中體內(nèi)觀察到的暴露。顯著地，張力調(diào)節(jié)劑(鹽vs.糖)影響體外滲透性的非顯而易見作用也可預(yù)測體內(nèi)觀察到的張力調(diào)節(jié)劑的作用；含有氯化鈉的制劑在體外產(chǎn)生較高的滲透性和在體內(nèi)產(chǎn)生更大的暴露。
實施例3 在兔中的肌內(nèi)第二藥代動力學(xué)研究和卡貝縮宮素的鼻內(nèi)給藥 為了重復(fù)試驗在我們的第一人臨床研究中評價的制劑，進行第二兔PK研究，以試驗增加Me-β-CD(約10至約40mg/ml)的含量的作用，評價在張力調(diào)節(jié)劑山梨糖醇和NaCl的存在下卡貝縮宮素的生物利用度，試驗增加重量克分子滲透濃度(約170至約220mOsm/kgH2O)的影響和試驗乙醇對％BA的作用。在該研究中，卡貝縮宮素的劑量濃度也增加至60μg/kg(即4μg/ml的卡貝縮宮素)。試驗的制劑顯示在表7中。
在開始該第二體內(nèi)研究之前，我們根據(jù)在實施例1中列出的方法，使用氣管/支氣管上皮細胞膜系統(tǒng)(EpiAirway，MatTek Corp.，Ashland，MA)，評價在體外，在表7中列出的制劑降低跨上皮電阻(TER)的能力，以及其對細胞生存力、細胞毒性和滲透性的影響。
在該上皮細胞的體外研究的結(jié)果表明所有的制劑顯著地降低TER，具有高水平的細胞生存力、低水平的細胞毒性和約2.5％至約24％的卡貝縮宮素滲透性水平。例如，關(guān)于％滲透性，包含10mg/ml Me-β-CD+CMC的制劑(樣品號8)具有最好的性能，％滲透性為約24％。命名為10mg/ml Me-β-CD的制劑(樣品號2)顯示％滲透性為約9％，命名為10mg/ml Me-β-CD+山梨糖醇的制劑(樣品號3))提供約5％的滲透性，命名為20mg/ml Me-β-CD的制劑(樣品號4)和40mg/ml Me-β-CD的制劑(樣品號5)提供約12％的滲透性，命名為10mg/ml Me-β-CD hi osm(10mg/ml Me-β-CD高重量克分子滲透濃度)的制劑提供約4％的滲透性(樣品號6)，和命名為EDTA+EtOH的制劑(樣品號7)提供約15％的滲透性。在該試驗中，陰性對照提供的％滲透性為約2％。來自該試驗的結(jié)果表明相對于在本文給出的我們的第一人臨床研究中使用的制劑，高重量克分子滲透濃度和張力調(diào)節(jié)劑兩者似乎降低了滲透性(參見實施例8)。
對于該第二兔PK研究，通過肌內(nèi)(IM)或鼻內(nèi)(IN)施用藥物組合物用卡貝縮宮素處理新西蘭白兔。該研究是在每組5只禁食的雄性兔的八組中進行的隨機的、單次治療平行研究。在給藥前一天，對所有的動物禁食，在第0天下午移走任何剩余的食品，并使動物保持禁食狀態(tài)至研究結(jié)束。給鼻內(nèi)組(組2-8)的所有動物施用60μg/kg的卡貝縮宮素(給藥濃度為4.0mg/ml，給藥體積為0.015ml/kg)。給肌內(nèi)組(組1)施用3.0μg/kg的卡貝縮宮素(給藥濃度為0.03mg/ml，給藥體積為0.10ml/kg)。
制備25mL的各種IN制劑。所有的組包含10mM的精氨酸。組2-8包含5mg/ml的氯代丁醇(CB)。將IN制劑保存在1cc棕色玻璃瓶中。制備IM制劑，并保存在3cc透明玻璃瓶中。所有的制劑(除1號外)還包含5mg/ml的氯代丁醇，并貯存在2-8℃。表7顯示試驗的制劑(縮寫PG＝丙二醇；CMCLV＝羧甲基纖維素鈉(低粘度，10-50cps)；乙醇＝EtOH)。
表7 PK研究的卡貝縮宮素制劑 以單次快速推注到一側(cè)后肢來施用組1的制劑。在插入之前，夾住針插入部位周圍的毛皮，用70％的異丙醇擦拭皮膚。將針從側(cè)面且對著尾部的方向插入股骨后側(cè)的肌群中，以避開坐骨神經(jīng)。對每個動物用其自己的針/注射器給藥。獲得給藥注射器的皮重和最后重量，計算給藥劑量的凈重。
使用移液器(pipetteman)和一次性塑料吸頭將組2-8給藥至左側(cè)鼻孔。當遞送劑量時，稍微將動物的頭部向后傾斜。通過使給藥同允許毛細作用的吸氣一致來進行給藥，以將所述溶液吸入鼻孔。在每次給藥或試圖給藥之間，使用新的吸頭。在鼻內(nèi)給藥之后，限制動物的頭部至向后傾斜的位置約15秒，以防止試驗制品制劑從左側(cè)鼻孔流失。
在給藥之后，在給藥后第0(預(yù)劑量)、5、10、15、30、45、60、120和240分鐘，通過直接靜脈穿刺邊緣耳靜脈獲得十一次系列血樣。將50μl的抑肽酶溶液加入到各個包含作為抗凝劑的K2EDTA的血樣中。對于IM劑量組，預(yù)劑量、給藥后5分鐘和1小時，進行注射部位的肉眼目測觀察，對于IN劑量組，預(yù)劑量、給藥后5分鐘和1小時，進行兩個鼻孔的檢查。在施用不同的卡貝縮宮素制劑之后，測定卡貝縮宮素的PK血漿水平。
將在該第二PK研究中給藥兔卡貝縮宮素的PK結(jié)果的概述顯示在表8中。將IN％生物利用度結(jié)果顯示在表9中。通過測量平均血液水平獲得下述結(jié)果 表8 卡貝縮宮素在兔中的PK結(jié)果概述 表9 卡貝縮宮素在兔中的％生物利用度 這些結(jié)果顯示出本發(fā)明的鼻內(nèi)藥物制劑獲得的卡貝縮宮素的生物利用度為約4％至約9％。
在該第二兔PK研究中，通過測量(施用調(diào)節(jié)Me-β-CD濃度的制劑的)兔的平均血液水平得到的結(jié)果(即Tmax、Cmax、AUC最終和％生物利用度)也顯示在表10中，包括有關(guān)張力調(diào)節(jié)劑的作用，調(diào)節(jié)重量克分子滲透濃度的結(jié)果和新的制劑的結(jié)果。
表10 藥代動力學(xué)研究2的結(jié)果
在表10中列出的數(shù)據(jù)表明，當改變Me-β-CD的濃度時，似乎對于BA沒有顯著的作用，當改變張力調(diào)節(jié)劑(NaCl或山梨糖醇)時，似乎對于BA沒有顯著的作用，當重量克分子滲透濃度增加時，BA有輕微的增加，當使用這些新的制劑時，BA也沒有顯著的增加；因為在CMC+PG組中的一只兔子可被認為是異常值。
更詳細地，重復(fù)臨床對照(“10Me-β-CD”)和“10Me-β-CD，山梨糖醇”，數(shù)據(jù)顯示出各自產(chǎn)生與在第一PK研究中觀察到的那些類似的卡貝縮宮素暴露水平。所述“10Me-β-CD”臨床制劑產(chǎn)生4.8％的相對BA(與之相比，在第一PK研究中為4.6％)，而“10Me-β-CD，山梨糖醇”相對于“10Me-β-CD”降低Cmax。盡管“10Me-β-CD，山梨糖醇”的AUC最終值(155500min*pg/ml)稍微高于“10Me-β-CD”的值(133600min*pg/ml)，但是這一結(jié)果主要是由于單個數(shù)據(jù)點(來自在前的劑量組中，在120分鐘時測定的單只動物)導(dǎo)致的。PK數(shù)據(jù)的初次分析表明最好的實施制劑為“10Me-β-CD+CMC+PG”(9.4％的相對BA)和“20Me-β-CD”(7.8％的相對BA)。由于在30和240分鐘的值升高，對包含20Me-β-CD的制劑的個體動物數(shù)據(jù)進行分析。發(fā)現(xiàn)這些值是一只作為高應(yīng)答者的動物在30分鐘時間點和另一只作為高應(yīng)答者的動物在240分鐘時間點的結(jié)果。另外，當分析“10Me-β-CD+CMC+PG”的個體結(jié)果時，暴露增加應(yīng)歸于一只高應(yīng)答者動物。當除去該只動物之后，重新計算“10Me-β-CD+CMC+PG”制劑的結(jié)果，相對BA從9.4％的初始值降低至5.4％，其與其它制劑是相當?shù)摹?br> 所述數(shù)據(jù)也顯示出與第一PK研究一致的類似趨勢，Me-β-CD從低水平(10mg/ml)增加至高水平(40mg/ml)，引起增加的相對BA(分別為4.8和6.1)、AUC最終(分別為133600和169800min*pg/ml)和Cmax(分別為2950、4190、2890pg/ml)。然而，中等水平劑量(20mg/ml)提供了最高水平的相對BA(7.8％)、AUC最終(216200min*pg/ml)和Cmax(4190pg/ml)。與該增加一致，所有的結(jié)果都顯示出統(tǒng)計學(xué)上的類似。增加所述制劑的重量克分子滲透濃度則輕微增加相對BA(5.3vs.4.8％)、AUC最終(133600vs.146900min*pg/ml)和Cmax(2950vs.4530pg/ml)。該結(jié)果與對于作為制劑重量克分子滲透濃度的函數(shù)的體外滲透性所觀察到的趨勢形成對比。所述“EDTA+EtOH”制劑產(chǎn)生與“10mg/ml Me-β-CD”(4.8％相對BA)類似的卡貝縮宮素暴露。
體內(nèi)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析表明所有制劑都與IM對照，在AUC最終和CmaxAUC最終和Cmax方面沒有統(tǒng)計學(xué)差異。例如，組2、3、6和7的AUC最終的P值為1.0000，組4為0.8408，組5為0.9985和組8為0.4516。類似地，組2的Cmax的P值為0.9989，組3為0.8914，組4為0.9997，組5為0.9981，組6為0.9939，組7為0.9997和組8為0.9946。
將來自該第二體內(nèi)PK研究的數(shù)據(jù)概述在表10中，并檢查在該實施例3中公開的體外滲透性研究以找出體外-體內(nèi)相關(guān)性(IVIVC)的可能性。當比較體內(nèi)生物利用度和體外卡貝縮宮素滲透性的AUC最終(分別地，R2＝0.4939和0.4973)時，提示具有微小的相關(guān)性。在卡貝縮宮素的體內(nèi)Cmax和體外滲透性之間觀察到差的IVIVC(R2＝0.1185)。任何體內(nèi)參數(shù)與體外滲透性之間相關(guān)性的缺乏表明體外觀察到的滲透性對于在兔體內(nèi)觀察到的暴露是不完全可預(yù)測的。
在兔中，IM和IN給藥所有試驗制品制劑都是良好耐受的。在IM給藥(組1)或IN給藥(組2-8)之后，沒有觀察到不良的臨床征兆。對于組1中的所有動物，在肌內(nèi)給藥后5分鐘和1小時進行的注射部位的觀察結(jié)果都是正常的。對于組2-8中的所有兔，在鼻內(nèi)給藥后5分鐘和1小時進行的鼻腔觀察結(jié)果都是正常的；在任一只兔鼻孔中都沒有觀察到相應(yīng)制劑的鼻腔刺激和/或沉淀。
總之，如本文所公開的，注意到我們沒有觀察到體外結(jié)果和體內(nèi)結(jié)果之間的顯著相關(guān)性。在該研究中，我們采用卡貝縮宮素的體外試驗對于體內(nèi)獲得的結(jié)果沒有可預(yù)測性。
實施例4 大鼠中卡貝縮宮素和催產(chǎn)素的抗焦慮作用 如在Holmes，A.等人，Behav.Neurosci.115(5)1129-44，2001中描述的，在大鼠中，使用高架十字迷宮試驗來測定卡貝縮宮素和催產(chǎn)素的抗焦慮作用。另參見Sahuque，L.等人，Psychopharmacology 186(1)122-132，Berl.，2006；Carvalho，M.C.等人，Braz.J.Med.Biol.Res.38(12)1857-66，2005；和Langen，B.等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.314717-724，2005。在該研究中，還包括一種已知的焦慮藥物阿普唑侖。將從Charles River laboratories獲得的六十只雄性6-10周齡的實驗性幼稚大鼠(

rat)分成六組，每組10只動物。遵照國家研究委員會(the National Research Council)的標準飼養(yǎng)所有的動物，并飼喂經(jīng)檢驗的嚙齒類飲食(Teklad，，Madison，WI)，隨意飲水。將所有動物豢養(yǎng)在專用研究室中，給予12小時光照/12小時黑暗，RT 18至26℃，30-70％的濕度。在給藥第一天之前，使研究動物適應(yīng)它們豢養(yǎng)環(huán)境至少5天。給藥途徑包括腦室內(nèi)(ICV)、腹膜內(nèi)(IP)或肌內(nèi)(IM)。
對于抗焦慮研究，向所有組注射施用包含在0.9％鹽水溶液中的合適的API的制劑。阿普唑侖為口服溶液劑型，將阿普唑侖IntensolTM口服溶液(濃縮液)1mg/ml(每ml包含1mg阿普唑侖)在0.9％生理鹽水中稀釋至期望的濃度用于抗焦慮研究。所述阿普唑侖不含乙醇，且包含下述非活性成分丙二醇、琥珀酸、琥珀酸二鈉鹽和水。將用API的動物處理組及其在制劑中的濃度顯示在表11中。
表11 組分配和劑量水平 將給藥制劑一次性推注施用于每只大鼠。在ICV給藥組中，通過已經(jīng)植入ICV套管中的口，將試驗劑量給藥進入側(cè)腦室。在ICV后20分鐘以及在IM和IP之后30分鐘，進行試驗。從飼養(yǎng)籠放出后，立即在所述迷宮中試驗動物15分鐘。
所述高架十字迷宮由具有4個臂的平臺組成，其中兩個開臂和兩個閉臂(有開頂?shù)膰傻?0x10x50cm)。每次試驗大鼠兩只，用手放置在兩個分開的迷宮的平臺中心，4個臂的十字路口，面向一個開臂。在十五分鐘之后，留置第一只大鼠幾秒，直到完成第二只大鼠的十五分鐘。遙控監(jiān)測大鼠。
在每只大鼠試驗之前，打掃所述高架十字迷宮表面和閉側(cè)。用戴手套的手處理大鼠。從飼養(yǎng)籠移走至開始試驗的時間少于15秒。從飼養(yǎng)籠中輕輕地移出大鼠，放置在開臂和閉臂之間的中央方格上，面向相反的開臂。使大鼠遠離實驗者。實驗者離開所述迷宮，到大鼠看不見的區(qū)域，并經(jīng)由電視監(jiān)視器觀察大鼠。在試驗結(jié)束時，停止記錄器，從迷宮中移出大鼠。
在開臂花費的時間表示低焦慮，而在閉臂花費的時間表示較高焦慮。評估大鼠在開臂探索花費的時間(開時間)、在閉臂探索花費的時間(閉時間)，并根據(jù)在開臂探索花費的時間百分數(shù)([在開臂花費的時間/(在開臂花費的時間+在閉臂花費的時間)×100])(開時間％)；在開臂探索花費的絕對時間；和進入開臂的百分數(shù)([進入開臂的次數(shù)/(進入開臂的次數(shù)+進入閉臂的次數(shù))]×100)進行評分。使用進入所有臂的次數(shù)作為全部運動活動的量度。使用單向ANOVA然后進行合適的事后比較檢驗(post-hoc test，Bonferroni/Dunnets)比較該得分與賦形劑對照和基準值，p＜0.05被認為是統(tǒng)計學(xué)顯著的?？菇箲]研究的結(jié)果顯示在表12中。
表12 抗焦慮研究的迷宮時間結(jié)果 在開臂探索花費的時間(開時間)和開臂探索花費的時間％(開時間％)的結(jié)果表明，在使用高架十字迷宮試驗中，與催產(chǎn)素相比，ICV給藥大鼠卡貝縮宮素降低了焦慮。
實施例5 卡貝縮宮素鼻噴霧劑的制備 通過將下述成分(按順序)加入滅菌沖洗用水或純凈水中制備卡貝縮宮素鼻噴霧劑L-精氨酸鹽酸鹽(L-arginine hydrochloride)，依地酸二鈉(EDTA)，甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)，氯化鈉(NaCl)，和氯代丁醇(CB)。攪拌各個成分，直到獲得目測確認的溶解。除了M-β-CD和CB之外的所有成分在10min或更少的時間內(nèi)獲得溶解。如有必要，一旦溶解所有的成分，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.0±0.3。用滅菌沖洗用水或純凈水使溶液達到體積(目標重量)，以制備出卡貝縮宮素鼻噴霧劑的“稀釋劑”。然后，將合適量的卡貝縮宮素溶于～85％的所述稀釋劑中，用稀釋劑達到體積(目標重量)以制備卡貝縮宮素鼻噴霧劑，如有必要，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH。
所述卡貝縮宮素鼻噴霧劑的可能包裝組件的說明顯示在表13中。
表13 用于卡貝縮宮素鼻噴霧劑的包裝組件
將卡貝縮宮素鼻噴霧劑貯存在5℃?？ㄘ惪s宮素鼻噴霧劑的貯存期限為在5℃至少9個月，預(yù)期在在5℃和在25℃穩(wěn)定期超過2年。
實施例6 卡貝縮宮素鼻噴霧劑的穩(wěn)定性 卡貝縮宮素IN制劑的穩(wěn)定性 進行穩(wěn)定性研究，以鑒定已經(jīng)證明增加卡貝縮宮素滲透性的卡貝縮宮素制劑的穩(wěn)定性。所有的制劑包含終濃度10mg/ml的卡貝縮宮素。試驗制劑顯示在表14中。
表14 穩(wěn)定性研究中的試驗制劑 在溫度5℃、25℃和40℃，在第1天、4天、2周、1個月、2個月、3個月和6個月的時間點，收集下述數(shù)據(jù)外觀、pH、重量克分子滲透濃度、肽含量、純度和氯代丁醇含量。
結(jié)果概述 在5℃在冷藏條件下，外觀、pH、重量克分子滲透濃度、肽含量、純度和氯代丁醇含量沒有顯著地改變。所有的樣品保持澄清。t＝0時，總肽雜質(zhì)為1.0-1.1％，t＝6個月時，其為1.1-1.3％。
在25℃在25℃，外觀、pH、重量克分子滲透濃度、肽含量和氯代丁醇含量沒有顯著地改變。對于pH 4.5的制劑(1號)，觀察到總肽雜質(zhì)稍微增加，達到1.9％，對于pH 4.0制劑(2、3號)，達到2.9-3.0％。
在40℃所有的制劑保持澄清。在pH 4.5，制劑#1保持pH、肽含量和氯代丁醇含量。重量克分子滲透濃度從183增加至202mosm/kg H2O，增加～10％。在t＝6個月，制劑1號的總肽雜質(zhì)增加至5.7％，這在所有樣品中最小，氯代丁醇含量和肽含量沒有顯著地變化。在pH 4.0，制劑#2號顯示出最大的變化，pH改變約-0.4pH單位(pH 4.0至3.6)，重量克分子滲透濃度增加約20％(197至239mOsm/kg H2O)，總肽雜質(zhì)增加至17.5％。也在pH 4.0，制劑3號顯示出pH從pH 4.1至4.2的一些微小變化，重量克分子滲透濃度增加26％(204至257mOsm/kg H2O)，總肽相關(guān)雜質(zhì)增加至10.3％，肽含量似乎沒有改變，而氯代丁醇含量稍微減少。
在25℃和40℃，制劑1號在所有時間點都具有最少的總肽雜質(zhì)?；?5℃數(shù)據(jù)的預(yù)期提出在pH 4.5，制劑1號可具有＞4年的貯存期限(假定10％的總雜質(zhì))，并且在室溫條件下，在pH 4.0，制劑2和3號可具有＞2年的貯存期限。
包含防腐劑的卡貝縮宮素IN制劑的穩(wěn)定性 進行進一步的穩(wěn)定性研究，以監(jiān)測包含防腐劑的制劑的穩(wěn)定性。將基本配方(不含防腐劑)列在表15中。所有的制劑包含3mg/ml的卡貝縮宮素。
表15 用于防腐劑穩(wěn)定性研究的基本配方 采用下述不同的防腐劑系統(tǒng)制備各個制劑單獨的對羥苯甲酸甲酯/對羥苯甲酸丙酯(MP/PP)、氯代丁醇(CB)和苯甲醇(BA)及它們的組合。將試驗的防腐劑水平顯示在表16中 表16 防腐劑水平和組合 因此，制備總共18個活性制劑及其安慰劑。將得到的包含防腐劑的制劑顯示在表17中。用星號標記僅包含5mg/ml的氯代丁醇作為防腐劑的制劑。
表17 用于穩(wěn)定性研究的包含防腐劑的制劑 收集在溫度5℃、25℃和40℃和時間點0天、2周、1個月、1.5個月、2個月、3個月和6個月的下述數(shù)據(jù)外觀、pH、重量克分子滲透濃度、肽含量和純度。
結(jié)果概述 在5℃除了一個例外，其余所有的制劑保持澄清。制劑18號(含有MP/PP/BA)在t＝3和6個月含有沉淀物。所有的制劑保持pH、重量克分子滲透濃度、肽含量和純度至t＝6個月。在t＝6個月的總雜質(zhì)為1.2％至1.3％。
在25℃除了一個例外，其余所有的制劑保持澄清。制劑18號(含有MP/PP/BA)在t＝3和6個月含有沉淀物。所有的制劑保持pH、重量克分子滲透濃度和肽含量至t＝6個月。在t＝6個月的總雜質(zhì)稍微增加至3.1-3.9％。
在40℃所有的制劑保持澄清。在t＝2個月，一些制劑開始顯示出pH移動-0.1個pH單位，除了含有2.5mg/ml CB的制劑或含有20mg/ml Me-β-CD的制劑之外。重量克分子滲透濃度沒有顯著地增加。對于一些制劑，在t＝2個月，肽含量稍微降低(96.2-103.1％的肽含量)。與上述在pH 4.0的制劑類似，總肽相關(guān)雜質(zhì)增加到5.0-7.2％(表12)。
基于40℃的數(shù)據(jù)，含有MP/PP防腐劑系統(tǒng)的制劑似乎具有最好的穩(wěn)定性，而含有5mg/ml CB的制劑和含有MP/PP/CB組合的制劑具有最差的穩(wěn)定性。不過，基于收集的數(shù)據(jù)，在該研究中具有最低穩(wěn)定性的IN制劑將具有在5℃＞2年的貯存期限，和在室溫≥1.5年的貯存期限。
緩沖劑和pH范圍對卡貝縮宮素IN制劑的穩(wěn)定性 進行進一步的研究，以監(jiān)測pH范圍為3-10的卡貝縮宮素制劑的穩(wěn)定性。所有的制劑包含在等滲的NaCl中的10mM緩沖劑中的2mg/ml卡貝縮宮素。將試驗制劑顯示在表18中。收集在溫度25℃、40℃和50℃和時間點0天、2周、1個月、1.5個月、2個月和3個月的下述數(shù)據(jù)pH、重量克分子滲透濃度、外觀、卡貝縮宮素含量和純度(HPLC)。
表18 在pH穩(wěn)定性研究中試驗制劑 結(jié)果概述 在25℃在所有的時間點，所有的制劑保持澄清，并保持pH和重量克分子滲透濃度。在pH范圍的端值處，總肽相關(guān)雜質(zhì)增加。最好的肽純度保持在pH 4.5至6.0(在t＝3個月，總肽相關(guān)雜質(zhì)為1.1至1.4％)。在t＝3個月，在pH 4.0，肽純度增加至2.2％。肽含量有類似的趨勢。緩沖劑類型也有助于肽的穩(wěn)定性；緩沖劑的電離位點越少，卡貝縮宮素的穩(wěn)定性越好(即，穩(wěn)定性趨勢如下乙酸鹽＞酒石酸鹽＞檸檬酸鹽＞磷酸鹽)。
在40℃所有的制劑保持澄清。在t＝1個月，低于pH 7的制劑保持好的pH，而高于pH 7的制劑顯示出明顯的移動(＞0.2個pH單位)。在試驗的時間點，重量克分子滲透濃度保持不變。最好的肽純度保持在pH 5.0(在t＝3個月，1.9-2.1％的總肽相關(guān)雜質(zhì))。在50℃，關(guān)于pH和緩沖劑對肽純度的作用，觀察到與在25℃看到的趨勢類似。
在50℃所有的制劑保持澄清。在t＝1個月，低于pH 7的制劑保持pH較好，而高于pH 7的制劑顯示出明顯的移動(＞0.2個pH單位)。在試驗的時間點，重量克分子滲透濃度保持不變。最好的肽純度保持在pH 5.0(在t＝1.5個月，2.9-3.1％的總肽相關(guān)雜質(zhì))。在40℃，關(guān)于pH和緩沖劑對肽純度的作用，觀察到如在25℃看到的類似趨勢。
圖2顯示了pH穩(wěn)定性研究中的總肽相關(guān)雜質(zhì)。最好的肽純度保持在pH4.5至6.0。肽含量具有類似的趨勢。緩沖劑類型也有助于肽的穩(wěn)定性；緩沖劑的電離位點越少，卡貝縮宮素的穩(wěn)定性越好(即，穩(wěn)定性趨勢如下在乙酸鹽中的穩(wěn)定性＞在酒石酸鹽中的穩(wěn)定性＞在檸檬酸鹽中的穩(wěn)定性＞在磷酸鹽中的穩(wěn)定性)。


(巧特欣)穩(wěn)定性 將

貯存在5℃、25℃和40℃的1ml安瓿(市售)中。收集在0天、2個月、3個月、6個月、12個月和24個月時間點的下述數(shù)據(jù)pH、重量克分子滲透濃度、外觀和肽含量及純度(HPLC)。
在25和40℃下，觀察到

中的pH保持恒定長達6個月(在25℃，在t＝0，pH 4.2，在t＝6個月，pH 4.2)。觀察穩(wěn)定性達1年；制劑pH僅僅有微小變化(在25℃，在t＝0，pH 4.2，在t＝12個月，pH 4.4)，并且在5℃，保持未改變。重量克分子滲透濃度和外觀達12個月沒有變化。在t＝6個月，在25℃下，總肽相關(guān)雜質(zhì)從最初1.2％稍微增加至2.5％，在40℃下，增加至4.6％；在12個月，在25℃下，增加至3.4％，在40℃下，增加至4.6％。在50℃下，總雜質(zhì)保持不變12個月。
卡貝縮宮素IN制劑的穩(wěn)定性 在5℃、25℃和40℃，和在1個月、2個月、3個月和6個月時間點，測定在表19中顯示的IN卡貝縮宮素制劑的穩(wěn)定性外觀、pH、重量克分子滲透濃度、肽含量、純度和氯代丁醇含量。所有的組都包含10mM精氨酸。組2-8包含5mg/ml的氯代丁醇。組8包含CMC LV＝羧甲基纖維素鈉(低粘度，10-50cps)和PG＝丙二醇。
表19 用于IN卡貝縮宮素穩(wěn)定性研究的制劑 結(jié)果概述 在5℃迄今為止，所有的制劑都保持澄清。所有的制劑保持pH和重量克分子滲透濃度至t＝6個月。
在25℃迄今為止，所有的制劑都保持澄清。所有的制劑保持pH和重量克分子滲透濃度至t＝6個月。在t＝6個月，總雜質(zhì)稍微增加至2.8-3.3％。所有的制劑表現(xiàn)類似。
在40℃所有的制劑保持澄清。在t＝3個月，一些制劑開始顯示出pH移動±0.1個pH單位。在t＝3個月，重量克分子滲透濃度沒有顯著地增加。在t＝2個月，一些制劑的肽含量稍微降低(97.4-102.1％的肽含量)。在t＝3個月，沒有檢測到含量降低。在t＝3個月，總肽相關(guān)雜質(zhì)增加至6.8-9.1％，類似于包含防腐劑的研究中在pH 4.0的制劑，或比其更好(表17)。
卡貝縮宮素IN制劑的光穩(wěn)定性 測定卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑在琥珀色和透明玻璃非硅烷化的小瓶中的光穩(wěn)定性(即光和能量暴露)。使卡貝縮宮素鼻噴霧劑樣品接受至少1.2百萬勒克司小時和總共不少于200瓦時/m2光強的近紫外能量。用純度-指示HPLC測定法來測定該暴露的影響。將在光穩(wěn)定性研究中試驗的制劑顯示在表20中。
表20 在光穩(wěn)定性研究中試驗的制劑 通過“日照試驗”評價光對“市售”結(jié)構(gòu)(configuration)和水平(測向)位置的產(chǎn)品的作用。樣品暴露不少于1.2百萬勒克司小時和總共非紫外能量200瓦時/平方米。在暴露于“1X ICH光”條件之后，從陽光盒中移出樣品，使其平衡至室溫條件，之后進行試驗。對于各個制劑，評價5個子樣品(A-E)，如在表21中所述。
表21 光穩(wěn)定性子樣品組 結(jié)果概述 在不同的條件下光暴露后，肽和氯代丁醇含量沒有改變。在試驗后，所有樣品的總肽相關(guān)雜質(zhì)為1.2-1.7％。對于所有的制劑，未處理的對照樣品(E)具有1.2-1.3％的總雜質(zhì)。樣品B、C、D相對于所有樣品的對照(E)，沒有顯示出總雜質(zhì)的變化，然而，樣品A(在透明小瓶中)顯示總雜質(zhì)稍微增加至1.5-1.7％。
臨床卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑的穩(wěn)定性 如在實施例5中描述的那樣制備卡貝縮宮素鼻噴霧劑?？ㄘ惪s宮素鼻噴霧劑的結(jié)構(gòu)為2ml，裝入3cc透明1-型U-Save玻璃瓶中，該玻璃瓶具有trifoil襯里的聚丙烯帽。配制所述產(chǎn)品，裝入瓶子中并蓋帽，貯存在不同溫度條件下不同的時間，以研究卡貝縮宮素的濃度和純度(HPLC)、氯代丁醇濃度(HPLC)和制劑的pH、外觀及重量克分子滲透濃度的變化。將試驗制劑顯示在表22中。對于5℃/環(huán)境RH、25℃/60％RH和40℃/75％RH，穩(wěn)定性試驗進度表包括1個月和2個月的試驗。
表22 臨床卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑 結(jié)果概述 在t＝6個月，制劑表現(xiàn)為與之前包含防腐劑的穩(wěn)定性研究(表17)和卡貝縮宮素IN制劑穩(wěn)定性研究(表19)中的類似制劑相當，或比其更好。在25℃，總雜質(zhì)的范圍為2.7-3.4％。在40℃，總雜質(zhì)的范圍為6.4-8.7％。將HPLC數(shù)據(jù)的概述顯示在表23中。
表23 臨床卡貝縮宮素鼻噴霧劑的HPLC數(shù)據(jù)
實施例7 卡貝縮宮素制劑的增強性輔劑 測定輔劑濃度的變化，以測定體外對卡貝縮宮素滲透性、MTT和LDH的影響。變化下述輔劑CMC LV、CMC MV、EtOH。調(diào)節(jié)氯化鈉濃度以保持重量克分子滲透濃度在～200mOsm/kg H2O。
根據(jù)初步的滲透性結(jié)果選擇Me-β-CD(20mg/ml)、EDTA(3.5mg/ml)和精氨酸(10mM)的濃度，所述初步的滲透性結(jié)果表明當其它輔劑保持恒定時，相對于10mg/ml的Me-β-CD，20mg/ml的Me-β-CD產(chǎn)生稍微改善的滲透性。根據(jù)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，將DOE制劑的pH設(shè)定在pH 4.5，所述穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表明卡貝縮宮素在pH 4.5比在pH 4.0更穩(wěn)定。每個制劑包含4mg/ml的卡貝縮宮素，裝載體積為25uL。將在該研究中試驗的制劑顯示在表24中。
表24 卡貝縮宮素制劑
結(jié)果表明所有的試驗制劑均降低TER(＞90％)，所有的制劑均獲得＞80％的MTT，所有的制劑均獲得＜20％百分數(shù)的LDH(頂部和底側(cè)的LDH)。滲透性結(jié)果表明EtOH正性地影響滲透性。樣品#4(不含EtOH)具有最低的滲透性(0.73mg/ml EtOH)，約為3％。樣品2、5和6(所有的都包含＞4.0mg/ml的EtOH)顯示出滲透性增加，＞8％。加入CMC-LV，沒有觀察到滲透性結(jié)果的顯著性差異。
進行第二研究，以測定輔劑濃度變化的影響。變化下述輔劑CMC-MV、HPMC和EtOH。調(diào)節(jié)氯化鈉濃度以保持重量克分子滲透濃度為～200mOsm/kg H2O?；谥把芯款A(yù)測的最好制劑設(shè)定CMC-MV和EtOH的濃度，其預(yù)測CMC-MV為1.8mg/ml和EtOH為3.3mg/ml。本文使用中心復(fù)合DOE，其設(shè)定這兩種輔劑在DOE軟件預(yù)測的最佳值的中心點。對于HPMC和EtOH試驗，使用稍微寬范圍的EtOH濃度，HPMC濃度基于中心復(fù)合設(shè)計的中心點3.0mg/ml。
每個制劑包含4mg/ml的卡貝縮宮素，裝載體積為25uL。測試所有樣品的LDH、MTT、TER降低和卡貝縮宮素滲透性。將試驗制劑顯示在表25中。
表25 卡貝縮宮素制劑(第二研究)

結(jié)果表明所有的試驗制劑都導(dǎo)致TER降低(＞90％)。所有的制劑均獲得＞80％MTT。對于頂部測定，制劑顯示的％LDH值為約4％至約39％。樣品1-6、9、11-14、16、17、19具有少于20％的LDH。樣品7、8、10和15具有～20％的LDH值。樣品18和20具有的％LDH值分別為33％和39％。對于底側(cè)的樣品測定，所有的制劑均獲得～0％的LDH。
對于EtOH、CMC MV和HPMC的所有試驗組合，樣品1-20顯示出相對高的滲透性(＞20％)。將滲透性結(jié)果顯示在表26中。
表26 滲透性結(jié)果 實施例8 第一人臨床卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑的藥代動力學(xué)研究 用于在人臨床研究中評價的包含不同濃度的卡貝縮宮素的鼻噴霧劑給藥制劑公開在實施例6、表22中。在該實施例中，給藥第一(1期)臨床研究的志愿者人受試者相關(guān)制劑，如在表31中所列出的。
在開始第一人臨床研究之前，我們根據(jù)美國(即USP)和歐洲(EP)的抗微生物試驗標準測試了包含防腐劑的IN卡貝縮宮素制劑。將USP抗微生物有效性試驗(AET)要求顯示在表27中，試驗結(jié)果顯示在表28中。將EP抗微生物有效性試驗(AET)要求顯示在表29中，試驗結(jié)果顯示在表30中。
表27 USP試驗要求
表28 USPAET的結(jié)果
對羥苯甲酸甲酯(MP)，對羥苯甲酸丙酯(PP)，和氯代丁醇(CB)，和苯甲醇(BA) 表30中列出的數(shù)據(jù)顯示出包含一種或多種防腐劑的制劑符合AET的USP標準。
表29 EPAET試驗要求
表30 EPAET的結(jié)果
表30中列出的數(shù)據(jù)顯示出包含防腐劑組合的兩個制劑符合AET的EP標準。
在進一步的研究中，我們使用氣管/支氣管上皮細胞膜系統(tǒng)(EpiAirway，MatTek Corp.，Ashland，MA)，如在實施例1中給出的，評價在表27和30中列出的包含防腐劑的制劑降低跨上皮電阻(TER)的能力以及其對細胞生存力、細胞毒性和滲透性的影響。
來自該上皮細胞體外研究的結(jié)果表明所有的制劑顯著地降低TER，具有高水平的細胞生存力、低水平的細胞毒性和約20％至約44％的卡貝縮宮素滲透性水平。例如，包含MP/PP/Me-β-CD(10mg/ml)的制劑提供約22％的滲透性。在Me-β-CD(10mg/ml)的存在下，包含高和低濃度的CB的制劑提供約44％的滲透性，而MP/PP/CB/Me-β-CD的組合(10mg/ml)提供約24％的滲透性。在不含Me-β-CD或在20mg/ml Me-β-CD的存在下，包含MP/PP的制劑提供的滲透性水平為約24％。在該實驗中，陰性對照顯示出非常低水平的滲透性(約1.5％)。來自該實驗的數(shù)據(jù)表明使用體外EpiAirway模型系統(tǒng)，包含CB的制劑提供最好的卡貝縮宮素的滲透性。
基于在實施例2中給出的第一體內(nèi)兔PK研究以及來自AET試驗(表28和30)及滲透性實驗的結(jié)果，制備在表31中給出的制劑，并將其用于我們的第一人臨床研究(1期)。
表31 人臨床鼻噴霧劑卡貝縮宮素制劑
在該人臨床研究(交叉組，劑量逐步升高)中，施用于12名健康人受試者(18-65歲)(單劑量)三種強度(150、300和500μg/劑量)的卡貝縮宮素的鼻內(nèi)(IN)制劑，并與肌肉注射(IM)施用50μg劑量的

相比較。在t＝0(預(yù)劑量)和給藥后6小時，按時采集血樣。IN和IM卡貝縮宮素的PK分布圖顯示在圖3中。明顯地，如圖3所示，IN施用卡貝縮宮素制劑證實了系統(tǒng)檢測血漿中卡貝縮宮素的劑量反應(yīng)，Cmax和AUC最終都增加(參見表32)。而且，也觀察到變化性(如由變異系數(shù)(％CV)描述的)隨著藥物吸收的增加而降低。在該實驗中，500μg劑量的生物利用度(BA)為7.0％。出人意料地，這樣的％BA大于在我們的第一兔(即臨床前)PK研究中檢測的3-5％BA。
表32 人給藥IN卡貝縮宮素的PK參數(shù)(％CV顯示在括號中) 在進一步的研究中，評價施用于人受試者的IN給藥制劑在5℃、25℃和40℃的穩(wěn)定性，表明預(yù)期這樣的制劑提供在冷凍條件下2年的貯存期限。經(jīng)6個月的時間期間，檢測在5℃、25℃或40℃，外觀、pH或重量克分子滲透濃度沒有變化。數(shù)據(jù)表明，在冷凍和環(huán)境條件(即，分別為5℃和25℃)下，卡貝縮宮素超過在6個月的時間期間保持穩(wěn)定。在6個月的時間點，在冷凍條件下，總雜質(zhì)增加約0.2％，在環(huán)境條件下，增加約1.2％(即，在t＝0的％雜質(zhì))。對于貯存在40℃的樣品，總雜質(zhì)顯著地增加(6-9％)。另外，表明卡貝縮宮素穩(wěn)定性隨著卡貝縮宮素的濃度增加而增加。
實施例9 兔PK研究3，改善的卡貝縮宮素生物利用度 在該實施例中，試驗評價用于貯存穩(wěn)定性改善的制劑用于改善體內(nèi)卡貝縮宮素BA的能力。此處提供的結(jié)果是意想不到的，顯示出隨著pH增加(從pH 4.0增加至4.5±0.3)、重量克分子滲透濃度增加(從約170mOsm/kg H2O至約220mOsm/kg H2O)和作為緩沖劑的乙酸鹽的加入(加入以保持pH為約4.5±0.3)，卡貝縮宮素的體內(nèi)生物利用度和化學(xué)穩(wěn)定性增加。制劑的這一變化引起在兔血漿(即體內(nèi))生物利用度增大＞2倍(參見表33和圖4)。這一結(jié)果是意想不到的，因為存在或不存在緩沖劑(即乙酸鹽)以及pH的輕微改變(＜1-2個pH單位＝和重量克分子滲透濃度的輕微改變(約50mOsm/kg H2O)通常不影響鼻粘膜的藥物吸收。緩沖劑和張力調(diào)節(jié)劑比如鹽通常不認為是滲透促進劑(permeation enhancer)。
表33 兔PK研究3，卡貝縮宮素的生物利用度 OPT＝10mM乙酸鹽緩沖控制試劑 在該實施例中，對八組兔施用表34中列出的制劑；組1接受30μg劑量的肌內(nèi)(IM)卡貝縮宮素注射劑，而其余7組接受60μg劑量的鼻內(nèi)(IN)卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑。組1的重量克分子滲透濃度為約350mOsm/kgH2O，組2的重量克分子滲透濃度為約180mOsm/kgH2O，組3至8的重量克分子滲透濃度為約215mOsm/kgH2O。
表34 在兔PK研究3中給藥的制劑 所有的組包含10mM的精氨酸。
組2-8包含5mg/ml的氯代丁醇。
組3-8包含10mM的乙酸鹽。
縮寫EDTA＝依地酸二鈉，Me-β-CD＝任意的甲基-β-環(huán)糊精，CB＝氯代丁醇，PG＝丙二醇，CMCLV＝羧甲基纖維素鈉(低粘度，10-50cps)，HPMC＝羥丙基甲基纖維素10cps，EtOH＝乙醇，NaCl＝氯化鈉。
將來自第三兔PK研究的結(jié)果概述在表35中。簡而言之，在該兔PK研究3中，組1代表對照肌內(nèi)注射；組2代表我們的第一人臨床研究使用的制劑。制劑3-5各自包含10mg/ml的Me-β-CD、3.5mg/ml的EDTA、10mM的精氨酸、10mM的乙酸鹽緩沖劑(pH 4.5±0.3)，因此，其可以彼此直接比較，并且，在采用制劑3(其可以被認為是改良的第一人臨床制劑)的情況下，可以看到測試pH、緩沖劑和重量克分子滲透濃度對生物利用度(BA)的作用。簡而言之，pH增加到4.5和加入用于增加穩(wěn)定性的乙酸鹽緩沖劑，重量克分子滲透濃度也增加至200-250mOsm/kg H2O的目標。部分地評價制劑4，以證實EtOH對BA的影響，如在體外看到的滲透性改善以及如EtOH制劑w/oMe-β-CD之前表明的產(chǎn)生與包含Me-β-CD w/o EtOH的制劑類似的BA。在采用制劑#5的情況下，該方案是用來進一步證實CMC-LV對BA的影響。
制劑6-8號各自包含20的mg/ml Me-β-CD、3.5mg/ml的EDTA、10mM的精氨酸、10mM的乙酸鹽緩沖劑(pH 4.5±0.3)，因此，其可以彼此直接比較。在采用制劑6號的情況下，基于在體外看到的滲透性改善和在兔PK研究1和2中觀察到的結(jié)果，我們評價增加Me-β-CD對滲透性的影響。在該實驗中，也可以直接將制劑6號與制劑4號比較。在制劑7號中，我們評價HPMC作為增粘劑的作用(如之前在體外試驗的)。在制劑8號的情況下，我們評價CMC-LV作為增粘劑的作用(如之前體外試驗)。
表35 兔藥代動力學(xué)研究3的結(jié)果
如在表35中所示，只改進制劑的穩(wěn)定性產(chǎn)生卡貝縮宮素暴露的最大變化，引起相對BA增加超過兩倍(2.9vs.5.9％)。也可看到AUC最終(99300vs.201900min*pg/ml)和Cmax(1970vs.4140pg/ml)的兩倍增加。將Me-β-CD從10mg/ml增加至20mg/ml和/或加入EtOH都不進一步使相對BA(5.9-6.9％)、AUC最終(198900-236400min*pg/ml)或Cmax(4270-5280pg/ml)增加至高于用單獨的穩(wěn)定性改進產(chǎn)生的水平。這些結(jié)果與相應(yīng)的體外滲透性結(jié)果沒有相關(guān)性(參見表36)。
表36 兔藥代動力學(xué)研究3制劑的體外滲透性數(shù)據(jù)
TER結(jié)果用ohmx cm2表示 在該研究中，增粘劑對卡貝縮宮素滲透性的作用表明加入CMC至“20Me-β-CD+EtOH，opt”制劑稍微降低BA(含有CMC為6.0％vs.不含有CMC為6.9％)、AUC最終(206800vs.236400min*pg/ml)和Cmax(4090vs.5280pg/ml)。類似地，向“10Me-β-CD opt”制劑中加入CMC降低卡貝縮宮素的暴露。相反，含有HPMC的制劑產(chǎn)生最高的相對BA和AUC最終；“20Me-β-CD+EtOH+HPMC opt”的Cmax為第二，僅次于“Me-β-CD+EtOH opt”制劑。
表明制劑(10Me-β-CD+CMC+PG)具有改善的穩(wěn)定性，且具有6.7％的相對BA。制劑“20Me-β-CD+EtOH+HPMC，opt”產(chǎn)生最高的相對BA(8.0％)和AUC最終(272800min*pg/ml)。然而，“20Me-β-CD+EtOH，opt”具有最高的Cmax(5280pg/ml)和與包含HPMC的制劑相當?shù)南鄬A(6.9％)及AUC最終(236400min*pg/ml)。這表明至少在該研究中，HPMC沒有提供卡貝縮宮素暴露的大的增加。
進行所述數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析來評價制劑性能的統(tǒng)計學(xué)差異。已測定，所有IN制劑與IM對照的AUC最終、Cmax和生物利用度沒有統(tǒng)計學(xué)差異(參見表37)。
表37 在兔藥代動力學(xué)研究3中IN制劑相對于IM對照的P值概述
對于該實驗，制備25ml的各鼻內(nèi)(IN)制劑。將所有的IN制劑以3x1ml等分試樣貯存在1cc琥珀色玻璃瓶中。另外，還制備400ml的肌內(nèi)(IM)制劑，并以3x3mL等分試樣貯存在3cc透明玻璃瓶中。將所有的制劑貯存在2-8℃。
總之，該兔PK研究3的結(jié)果(參見圖4)提供的生物利用度比所述OPT制劑增加2倍，可以表明加入HPMC提高性能。與在之前的兔PK研究中觀察的5-6％相比，來自該兔PK研究3的數(shù)據(jù)表明卡貝縮宮素的BA為約9％。進一步，基于統(tǒng)計學(xué)分析，在該試驗中的IN BA與從IM注射獲得的BA沒有顯著差異。
將來自該第三體內(nèi)PK研究的數(shù)據(jù)概述在表35中，并且檢查表36中提供的相應(yīng)體外滲透性研究的體外-體內(nèi)相關(guān)性(IVIVC)的可能性。比較卡貝縮宮素的體內(nèi)生物利用度、AUC最終或Cmax與其體外滲透性，沒有觀察到相關(guān)性(分別為R2＝0.0188，0.0203，0.0042)。這些PK參數(shù)中的任一個均缺乏相關(guān)性表明，體外觀察的滲透性對于兔的體內(nèi)暴露沒有預(yù)測性。
總之，這樣的數(shù)據(jù)引導(dǎo)我們提出用于第二人臨床研究的制劑(參見表38)。
表38 用于人PK臨床研究2的制劑


加入用于pH調(diào)節(jié)以符合目標pH4.5±0.3。*使用的平均MW為～1317-1359Da。
提議的人PK臨床研究2的設(shè)計(例如，IM-比較、劑量范圍)可以包括12名18-65歲的健康人受試者；處理組比如巧特欣(Duratocin)IM，24IU的催產(chǎn)素(Syntocin)，150、250和400μg/劑量的卡貝縮宮素IN。
由于與之前臨床制劑相比，在體內(nèi)看到AUC最終增加，因而選擇命名為″10Me-β-CD，opt″的制劑。在此時用于臨床評價時，不選擇更復(fù)雜的制劑，因為統(tǒng)計分析表明另外的輔劑的作用不提供AUC或Cmax的顯著差異的增加。盡管體內(nèi)數(shù)據(jù)表明所述制劑“20Me-β-CD+EtOH+HPMC opt”可能具有更大的BA，但是由于缺乏體內(nèi)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)顯著性，因此此時不再繼續(xù)該制劑，但其在隨后研究中可非常好地被試驗。
在該第二臨床試驗中，基于在表38中公開的制劑制備三種濃度的卡貝縮宮素，以提供150μg、250μg和400μg的卡貝縮宮素劑量。將用于PK分析卡貝縮宮素和催產(chǎn)素水平的患者血樣收集在EDTA涂層的血液收集管中。立即加入抑酶肽，離心該樣品以獲得血漿樣品。使用100μl致動器(actuator)，將卡貝縮宮素的鼻內(nèi)(IN)制劑以三種強度(1.5、2.5和4.0mg/ml)劑量施用于12名健康的人受試者，和與給藥肌內(nèi)(IM)劑量的

(卡貝縮宮素注射劑)相比較。也進行與商購可獲得形式的鼻內(nèi)催產(chǎn)素(Syntocinon

)的另外的比較。在t＝0(預(yù)劑量)和6小時，定期采集血樣。
IN卡貝縮宮素的PK分布圖證實了劑量反應(yīng)趨勢；隨著劑量增加，Cmax和AUC最終兩者都增加(表39)。這是之前在本文公開的我們的第一臨床研究中觀察到的。150和400μg劑量的生物利用度相對于IM劑量為7％，而250μg劑量的生物利用度為6％。該生物利用度與之前在我們的第一臨床研究中給藥的卡貝縮宮素制劑的類似。
表39 第二臨床研究的PK參數(shù) 基于用于選擇所評價制劑的兔PK研究(其顯示兔PK研究的生物利用度相對于評價的第一臨床制劑增加大于兩倍)，描述的臨床研究結(jié)果有些意想不到。在第二人研究中，該結(jié)果沒有重復(fù)，反而觀察到相當?shù)纳锢枚?。值得注意的是在兩次臨床研究中IM對照劑量的AUC最終值非常好地相當(在第一研究中64000min*pg/ml vs.在第二研究中62049min*pg/ml)，表明數(shù)據(jù)的好的可靠性。
在正在進行的對照穩(wěn)定性研究中評價在第二臨床研究中評價的制劑穩(wěn)定性。在IN制劑中卡貝縮宮素的早期穩(wěn)定性結(jié)果表明，所述制劑甚至在40℃貯存兩個月后仍非常穩(wěn)定，而總雜質(zhì)不超過2.5％，肽含量的變化不超過1％。
進一步，相對于在人臨床研究1中試驗的制劑，公開的改進制劑具有顯著改善的穩(wěn)定性，如在40℃貯存2個月之后，總雜質(zhì)減少約一半。在40℃貯存2個月之后，在我們的第一人臨床研究中使用的制劑具有約5％的總雜質(zhì)，然而，相反，在40℃貯存2個月之后，所述改進的制劑具有約2.5％的總雜質(zhì)。對于改進的制劑，在40℃貯存2個月之后，總雜質(zhì)比在T＝0時檢測到的增加約1.25％。所述增加的穩(wěn)定性可能歸因于pH增加。
為了該穩(wěn)定性試驗(改進的制劑)，放置14瓶所制備的制劑以測定穩(wěn)定性。六瓶放置在5℃(包括三個額外瓶(extra))，四瓶放置在25℃(包括一個額外瓶)和四瓶放置在40℃(包括一個額外瓶)。用于測試而取出的每個樣品的時間點定義為規(guī)定日期±3天(參見表40的取樣時間表)。對于每個時間點，記錄規(guī)定日期和實際取出日期(pull date)。在40℃的樣品在3個月后和5℃和25℃的樣品在6個月后，評價結(jié)果以確定所述研究是否繼續(xù)進行另外的其它時間點40℃的樣品6個月，25℃的樣品12個月，以及5℃的樣品12、18或24個月。
按照取樣時間表，在各個條件/時間點取樣(即取出)一瓶，測量pH、重量克分子滲透濃度、透明度、肽含量和純度(RP-HPLC)和氯代丁醇含量。如果在任何時間點，樣品顯示出可鑒定的物理不穩(wěn)定性(即沉淀)，則記錄，并且此時間點，只對樣品進行透明度、pH和重量克分子滲透濃度試驗。在所有預(yù)期的試驗時間點，取出這樣的樣品。也按照相同的取樣時間表，進行各個制劑的安慰劑的穩(wěn)定性測定。目測檢查安慰劑的外觀，如果需要，可以用于HPLC檢測。在所述評價的時間點，外觀、pH、重量克分子滲透濃度、卡貝縮宮素或CB含量都沒有改變。在5℃和25℃，總雜質(zhì)保持恒定。
在該穩(wěn)定性試驗中，使用具有Orion 520Aplus pH計(Thermo ElectronCorp(USA))或等效物的Cole Parmer半微量NMR管玻璃pH探針(目錄號05990-30)測量pH。用來自Advanced Instruments Inc.(Norwood，MA)的Advanced Multichann el Osmometer，型號2020或等效物測量重量克分子滲透濃度。在測量每個樣品前進行校準。通過目測檢查確定透明度。
表40 用于穩(wěn)定性試驗的取樣時間表 更詳細地，列出在該第二臨床研究中評價制劑的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)(參見表38以及我們的第一臨床研究(參見表31))。完成零時間點樣品作為釋放試驗的一部分。在所述第二臨床研究中評價的制劑改善的穩(wěn)定性很可能提供可以制備的市售產(chǎn)品，其能夠提供以“銷售的”以及“使用中”形式室溫貯藏達到兩年。在多個實驗中報道的一個非顯而易見的結(jié)果是在25℃的物理穩(wěn)定性與在5℃的相當。這是意想不到的，因為對于肽而言可能更期望穩(wěn)定性隨著貯存溫度的降低而增加。將在該穩(wěn)定性研究中評價的制劑顯示在表41中。
表41 穩(wěn)定性試驗的卡貝縮宮素制劑 *組2＝在臨床研究#1中給藥的制劑。
**組3＝在臨床研究#2中給藥的制劑。
所有的組都包含10mM的精氨酸。
組2-8包含5mg/ml的氯代丁醇。
組3-8包含10mM的乙酸鹽。
縮寫EDTA＝依地酸二鈉，Me-β-CD＝任意的甲基-β-環(huán)糊精，CB＝氯代丁醇，PG＝丙二醇，CMCLV＝羧甲基纖維素鈉(低粘度，10-50cps)，HPMC＝羥丙基甲基纖維素10cps，EtOH＝乙醇，NaCl＝氯化鈉。
從貯存中取出每種樣品的時間點窗(基于在表40中提供的時間表)定義為規(guī)定日期±3天。對于每個時間點，記錄規(guī)定日期和實際取出日期。在40℃的樣品在3個月后和5℃和25℃的樣品在6個月后，評價結(jié)果以確定所述研究是否繼續(xù)進行另外的其它時間點40℃的樣品六個月，和25℃的樣品12個月，以及5℃的樣品12、18或24個月。對于該穩(wěn)定性研究，使用具有Orion520Apluwas pH計(Thermo Electron Corp，USA)或等效物的Cole Parmer半微量NMR管玻璃pH探針(目錄號05990-30)測量樣品的pH。用來自AdvancedInstruments Inc.(Norwood，MA)的Advanced Multichannel Osmometer，Model2020或等效物測量重量克分子滲透濃度。在測量樣品前進行校準。通過目測觀察來測量樣品的透明度。通過HPLC分析測定純度和含量。
將貯存在5℃、25℃和40℃的所有樣品在達3個月的所有試驗時間點的化學(xué)試驗結(jié)果的概述以及通過其中數(shù)據(jù)可以產(chǎn)生足夠的R2(＞0.7)的線性回歸預(yù)測的預(yù)期未來值的概述分別顯示在表42、43和44中。
在三個月的時間點，樣品的pH和和重量克分子滲透濃度保持與t＝0時一致。與在冷凍條件下t＝0值顯示出的優(yōu)良穩(wěn)定性相比，當貯存在5℃三個月時，所有的制劑顯示出總雜質(zhì)增加約＜0.1％。由于缺乏迄今為止收集的實際數(shù)據(jù)的有意義的斜率，使用線性回歸不能預(yù)測預(yù)期的總雜質(zhì)。
表42 樣品在5℃貯存條件下的HPLC數(shù)據(jù)概述
*組2＝在臨床研究#1)中給藥的制劑 **組3＝在臨床研究#2)中給藥的制劑 對于在該穩(wěn)定性研究中試驗的所有制劑，相對于t＝0，貯存在5℃下三個月肽含量的損失(％標示量)為4％。更重要地，制劑3號(最新臨床制劑)的肽含量的損失為在制劑2號(第一臨床制劑)中看到的一半，表明第二臨床制劑比第一臨床制劑的穩(wěn)定性具有顯著改善。在貯存在25℃和40℃的樣品中，進一步證實了穩(wěn)定性的改善。而且，在最終產(chǎn)品中API含量的標準規(guī)格是80-120％標示量。通過線性回歸預(yù)測第二臨床制劑(組3)在5℃下2年(24個月)，具有89％的卡貝縮宮素標示量，其保持在規(guī)定之內(nèi)，而第一臨床制劑(組2)不可能達到保持所述規(guī)定2年的目標。氯代丁醇含量保持在1％的初始濃度之內(nèi)，表明該化合物保持穩(wěn)定。
對于在25℃的貯存條件下評價的樣品，在三個月的時間點中pH和重量克分子滲透濃度保持與t＝0時一致。將代表純度和含量的相應(yīng)HPLC分析顯示在表43中。數(shù)據(jù)顯示貯存在25℃三個月，pH 4.5的制劑(樣品3-8)中樣品的％總雜質(zhì)增加至多約0.6％，而對于制劑2號(第一臨床制劑)，增加約為兩倍(增加1.4％)。對25℃總雜質(zhì)數(shù)據(jù)進行線性回歸，除7號外的其它所有組產(chǎn)生的R2值≥0.8。在25℃貯存24個月之后，制劑2號的預(yù)測％總雜質(zhì)為11.4％，其為制劑3號(目前的臨床制劑)的預(yù)測％總雜質(zhì)5.8％的兩倍。這是第二臨床制劑比第一臨床制劑的穩(wěn)定性改善的進一步證據(jù)。而且，預(yù)測在25℃2年之后的總雜質(zhì)遠低于10％，其是能夠在室溫下長期貯存的市售產(chǎn)品的可行的選擇。
對于在25℃貯存三個月的樣品，當與t＝0的值相比時，肽含量損失＜4％(％標示量)，表明良好的穩(wěn)定性。明顯地，這與貯存在冷凍條件下的肽含量結(jié)果非常類似，表明冷凍不顯著地改善這些卡貝縮宮素制劑的物理穩(wěn)定性?；诔藰悠?的其它所有樣品的具有R2值＞0.8的線性回歸，貯存在25℃2年的預(yù)測肽含量值表明在該穩(wěn)定性研究中，幾乎所有的制劑都接近具有80％標示量的卡貝縮宮素。在冷凍和室溫下的類似結(jié)果是意想不到的，因為貯存在低溫下的大多數(shù)肽的穩(wěn)定性得到改善。在這些穩(wěn)定性研究中，在25℃的貯存條件下，氯代丁醇含量保持在初始濃度的1％內(nèi)，表明該化合物保持穩(wěn)定。
表43 樣品在25℃貯存條件下的HPLC數(shù)據(jù)概述

*組2＝在臨床研究#1中給藥的制劑 **組3＝在臨床研究#2中給藥的制劑 對在40℃的貯存條件下的樣品進行穩(wěn)定性分析(參見表44)，盡管在三個月的時間點，重量克分子滲透濃度與t＝0時保持一致，但是對于貯存在40℃的所有樣品，pH顯著地降低。在該研究中，例如，對于所有的制劑，在三個月的時間點，觀察到樣品的pH降低0.1-0.3個pH單位。40℃的貯存條件可以被認為是室溫(即25℃)貯存的加速溫度條件。在40℃，制劑2號(第一臨床制劑)的總雜質(zhì)為6.3％，其為在制劑3號(第二臨床制劑)中觀察到的2.9％總雜質(zhì)的兩倍。在pH 4.5的所有制劑(樣品3-8)表現(xiàn)出相對于在pH 4.0的制劑2號的穩(wěn)定性具有顯著的改善。另外，對于制劑2號，在12個月的預(yù)測總雜質(zhì)(根據(jù)線性回歸確定)差不多約為對于制劑3號所預(yù)測的2.5倍(分別為22％vs.9％總雜質(zhì))。
當在40℃貯存三個月時，與t＝0時的值相比，制劑2號的肽含量損失約8％。制劑3號中的該損失顯著地少約4％。注意，制劑6和7號實際表現(xiàn)出濃度的顯著增加。該作用很可能是由于當將樣品貯存在40℃時，蓋子松弛引起蒸發(fā)的結(jié)果。
表44 樣品在40℃貯存條件下的HPLC數(shù)據(jù)概述
*組2＝在臨床研究#1中給藥的制劑 **組3＝在臨床研究#2中給藥的制劑 對與在表38中公開的制劑(如在我們的14天非臨床毒性研究中所使用的)一致的非臨床制劑，以兩種卡貝縮宮素濃度(參見表45)進行隨后的“長期”穩(wěn)定性研究(在該實施例中的穩(wěn)定性研究2)。評價貯存t＝0和t＝1、2和3個月時的樣品。對于每種制劑，進行零時間試驗作為釋放試驗的一部分。對于該研究，進行14瓶的穩(wěn)定性檢測六瓶在5℃(包括三個額外瓶)、四瓶在25℃(包括一個額外瓶)和四瓶在40℃(包括一個額外瓶)。將從貯存中取出的每種樣品的時間點窗定義為規(guī)定日期±3天。對于每個時間點，記錄規(guī)定日期和實際取出日期。
按照取出時間表在每個條件/時間點取出一瓶，測量pH、重量克分子滲透濃度、透明度、肽含量和純度(RP-HPLC)以及氯代丁醇含量。如果在任何時間點，樣品顯示出可鑒定的物理不穩(wěn)定性(即沉淀)，記錄在分析者的筆記本中，并且在此時間點，只對樣品進行透明度、pH和重量克分子滲透濃度試驗。從試驗的所用未來時間點取出樣品。在研究期間的任何時間點，可以停止任一種樣品的穩(wěn)定性研究。將終止的說明記錄在筆記本中。使用來自STAB07072的安慰劑作為用于這些研究的比較物。目測檢查安慰劑的外觀，如果確定需要，則可以使用HPLC測試。
表45 長期穩(wěn)定性研究的制劑 縮寫EDTA＝依地酸二鈉，Me-β-CD＝任意的甲基-β-環(huán)糊精，CB＝氯代丁醇，NaCl＝氯化鈉。
來自該研究的數(shù)據(jù)表明在三個月的時間點，所有的樣品保持透明無色。另外，在所有的貯存條件下，與t＝0相比，在t＝3個月，制劑pH和重量克分子滲透濃度值保持穩(wěn)定。將這些數(shù)據(jù)分別概述在表46和47中。
表46 在長期貯存條件下的制劑pH測定 表47 在長期貯存條件下的制劑重量克分子滲透濃度測定

在5、25和40℃貯存下，在該研究中的兩種樣品在所有貯存條件下達兩個月時間點的HPLC測定的含量和純度的概述可以分別在表48、49和50中找到。
表48 樣品在5℃貯存條件下的HPLC結(jié)果的概述
表49 樣品在25℃貯存條件下的HPLC結(jié)果的概述
表50 樣品在40℃貯存條件下的HPLC結(jié)果的概述
貯存在25℃兩個月的樣品的總雜質(zhì)增加為＜0.1％，在40℃為～1％，表明制劑在兩種強度下優(yōu)良的化學(xué)穩(wěn)定性。甚至貯存在40℃下兩個月的樣品中肽含量(％標示量)降低＜1.5％，這對以下在對臨床研究#2中評價的制劑所顯示的穩(wěn)定性研究中的意想不到的觀察結(jié)果提供進一步證據(jù)物理穩(wěn)定性至少在早期時間點不受貯存溫度的極大影響。
實施例10 在第一臨床研究中所評價制劑的九個月穩(wěn)定性研究 在該實施例中，評價在表22中列出的制劑在5、25和40℃的穩(wěn)定性；所列出的數(shù)據(jù)涉及九個月的穩(wěn)定性時間點。該研究的接受標準提供在表51中。簡而言之，將51瓶各制劑用于初始(釋放)試驗和該穩(wěn)定性研究。對于每個制劑，使用5瓶用于初始(釋放)試驗，24瓶用于在為長期貯存條件的5℃/環(huán)境濕度下直立貯存(其包括額外的4瓶)，14瓶用于在為加速穩(wěn)定性貯存條件的25℃/60％RH下直立貯存(其包括額外的4瓶)，和8瓶用于在也為加速穩(wěn)定性貯存條件的40℃/75％RH下直立貯存(其包括額外的2瓶)。
表51 第一臨床制劑的穩(wěn)定性評價的試驗方法和接受標準 將在我們的第一臨床研究中所評價樣品的九個月HPLC穩(wěn)定性數(shù)據(jù)(參見實施例6，6個月時間點的表23)列在表52中。
表52 第一臨床樣品中九個月穩(wěn)定性樣品的概述
簡而言之，在表52中列出的數(shù)據(jù)表明，當將制劑在5℃貯存九個月時，觀察到總雜質(zhì)從t＝0的值增加少于0.1％。該數(shù)據(jù)與相同制劑在貯存6個月時的預(yù)測值很好地一致。然而，肽含量被明顯地改善。如該實施例所示，在九個月的貯存后，肽含量僅僅比t＝0時少3％，表明在5℃長期貯存的化學(xué)穩(wěn)定性甚至比早期時間點(例如6個月)更好。
實施例11 在第二臨床研究中所評價的制劑的兩個月穩(wěn)定性時間點 在該實施例中，將關(guān)于在表39中列出的四種濃度的如在表38中所示臨床制劑(第二臨床研究)的兩個月穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示在下表53中。
表53 用于臨床研究2的九個月穩(wěn)定性時間點的樣品組 如之前所述制備制劑。用2.0ml的卡貝縮宮素鼻噴霧劑-制劑1、2、3、4和5號裝瓶-將各制劑裝入至少五十五個3-cc非硅烷化1型螺帽透明玻璃瓶中用于穩(wěn)定性目的。用trifoil襯里的聚丙烯帽給瓶子加蓋。將物理和化學(xué)穩(wěn)定性結(jié)果的概述顯示在表54中。
表54 在t＝2個月對臨床研究2樣品的物理和化學(xué)試驗

這些數(shù)據(jù)表明當與樣品t＝0時的值相比，樣品貯存在25℃2個月的肽含量損失(％標示量)不超過1％。對于所有樣品，總雜質(zhì)增加＜0.1％。證實了之前對于相同制劑得到的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，表明穩(wěn)定性可能比預(yù)期的更好。
實施例12 通過LC-MS分析鑒定熱應(yīng)力(thermal stress)誘導(dǎo)的卡貝縮宮素降解產(chǎn)物 在該實施例中，通過LC-MS分析鼻內(nèi)遞送的卡貝縮宮素制劑在加速條件(例如40-50℃)下產(chǎn)生的熱應(yīng)力誘導(dǎo)的降解產(chǎn)物的存在。該信息可用于預(yù)測市售卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑的貯存期限，和解釋在正常情況(例如5-25℃)下出現(xiàn)的降解產(chǎn)物和降解途徑。
因此，該實施例提供一系列通過分子量和相應(yīng)的HPLC相對保留時間(RRT)(用于歸類卡貝縮宮素HPLC樣品雜質(zhì))鑒定的卡貝縮宮素降解產(chǎn)物。特別地，該信息將有助于鑒定存在于在臨床和臨床前研究中所評價卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑的穩(wěn)定性試驗中的降解產(chǎn)物。分析的制劑在表55、56和57中提供。
表55 分析的CARB-006樣品 縮寫DDPC＝二癸?；鵏-α-磷脂酰膽堿，EDTA＝依地酸二鈉，Me-β-CD＝任意的甲基-β-環(huán)糊精，CB＝氯代丁醇。
表56 分析的CARB-013樣品 *樣品包含在10mM緩沖劑中的2mg/ml卡貝縮宮素和和等滲NaCl(138-141mM) 表57 分析的CARB-052樣品 每次使用在UPLC儀器上的C18反相柱進行HPLC分析。MS分析參數(shù)pos.，掃描方式100-1100amu范圍，1.2秒/掃描。鑒定出12種卡貝縮宮素降解產(chǎn)物，歸類為四種降解種類氧化、脫酰胺、水解和API異構(gòu)體。另外，觀察到兩種未歸類的降解產(chǎn)物。
在1.16和1.23RRT的脫酰胺產(chǎn)物具有與天然卡貝縮宮素+1amu的差異(Δamu)，以最大的豐度存在。提議的卡貝縮宮素脫酰胺的可能位點包括天冬酰胺、谷氨酰胺殘基和C末端胺。在RRT 0.22、0.24-0.25(水解產(chǎn)物，+18Δamu，圖2)、0.57-0.59、0.73-0.74(氧化產(chǎn)物，+16Δamu)、0.92、0.95-0.96、1.08-1.09(API異構(gòu)體，0Δamu)、0.78、1.18、1.26(脫酰胺產(chǎn)物，+1Δamu)和0.29、0.53(未歸類的產(chǎn)物，+19Δamu)觀察到可檢測水平的其它降解產(chǎn)物。表VII概述了本節(jié)中討論的RRT和Δamu結(jié)果。將觀察到的降解產(chǎn)物概述在表59中。
表59 卡貝縮宮素制劑相關(guān)降解產(chǎn)物的概述 根據(jù)在CARB-052中的各種pH和緩沖條件，檢查熱應(yīng)力的影響。比較包含檸檬酸鹽vs.乙酸鹽的樣品，這兩種緩沖劑都未引起出現(xiàn)不同的降解產(chǎn)物。然而，在50℃，t＝1M(CARB-052-3和4)vs.40℃，t＝1M(CARB-052-1和2)的培養(yǎng)引起未歸類的0.29RRT降解產(chǎn)物以及脫酰胺產(chǎn)物的水平提高。氧化以及另外的脫酰胺和水解產(chǎn)物在40℃，t＝11M樣品(CARB-052-5和6)中存在，其在40℃和50℃，t＝1M樣品中沒有發(fā)現(xiàn)。而且，在t＝1、2和3M穩(wěn)定性時間點，CARB-033、I期臨床研究卡貝縮宮素鼻噴霧劑制劑CARB-011-3-XX和NF-CARB07001-XX顯示出具有存在于所有樣品中的主要水平的1.18RRT卡貝縮宮素脫酰胺產(chǎn)物。
雖然為清楚地理解，已經(jīng)通過實施例對本發(fā)明前述內(nèi)容進行了詳細說明，但技術(shù)人員清楚，某些變化和修飾可以在所附的權(quán)利要求書的范圍內(nèi)實施，權(quán)利要求的提出是為說明而不是限制。將在本說明書中提及的所有美國專利、美國專利申請公開、美國專利申請、外國專利、外國專利申請、非專利出版物、圖、表和網(wǎng)址的全部內(nèi)容明確地引入本文作為參考。
然而，應(yīng)當指出，對于本文討論的各種出版物僅僅引入它們在本申請的申請日之前的公開內(nèi)容，本發(fā)明人保留有根據(jù)在先公開預(yù)期這樣的公開內(nèi)容的權(quán)利。
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<213>人工序列
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<213>人工序列
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<223>人工序列的描述合成肽
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<221>MOD_RES
<222>(1)
<223>Tyr(Me)
<220>
<223>C末端酰胺化
<400>3
Tyr Ile Gln Asn Cys Pro Leu Gly
1 權(quán)利要求
1.一種用于鼻內(nèi)遞送卡貝縮宮素的藥物制劑，其包含卡貝縮宮素、增溶劑、螯合劑、張力調(diào)節(jié)劑和兩種或多種緩沖劑。
2.權(quán)利要求1的制劑，其中所述增溶劑為甲基-β-環(huán)糊精，所述螯合劑為EDTA，所述張力調(diào)節(jié)劑為氯化鈉，所述緩沖劑為精氨酸和乙酸鹽。
3.權(quán)利要求1的制劑，其進一步包含防腐劑，所述防腐劑為苯扎氯銨、氯代丁醇、對羥苯甲酸甲酯或?qū)αu苯甲酸丙酯。
4.權(quán)利要求1的制劑，其進一步包含為氯代丁醇的防腐劑。
5.權(quán)利要求1的制劑，其進一步包含增粘劑，所述增粘劑為甲基纖維素(MC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)、纖維素、明膠、淀粉、羥乙基淀粉、泊洛沙姆、普流尼克、羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、阿拉伯膠、聚維酮、卡波普、聚卡波非、殼聚糖、殼聚糖微球、海藻酸鹽微球、殼聚糖谷氨酸鹽、琥石樹脂、透明質(zhì)酸、乙基纖維素、麥芽糖糊精DE、鼓式干燥玉米淀粉(DDWM)、可降解的淀粉微球(DSM)、脫氧甘氨膽酸鹽(GDC)、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、微晶纖維素(MCC)、聚甲基丙烯酸和聚乙二醇、磺基丁基醚B環(huán)糊精、交聯(lián)依地索姆淀粉生物球、?；嵌浞蛭鞯厮徕c(STDHF)、N-三甲基殼聚糖鹽酸鹽(TMC)、降解的淀粉微球、琥石樹脂、殼聚糖納米顆粒、噴霧干燥的交聚維酮、噴霧干燥的葡聚糖微球、噴霧干燥的微晶纖維素或交聯(lián)依地索姆淀粉微球。
6.權(quán)利要求1的制劑，其進一步包含增粘劑HPMC。
7.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，其中所述制劑的pH為4.5±0.3。
8.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，其中所述制劑的重量克分子滲透濃度為200-250mOsm/kgH2O。
9.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的藥物中的用途，其中所述藥物減少孤獨癥的癥狀，所述癥狀為社會退縮、目光接觸回避、重復(fù)性行為、焦慮、注意力不足、多動、抑郁、失語、言語交流困難、厭惡碰觸、視覺困難、理解困難、聲音敏感或光敏感。
11.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的藥物中的用途，其中所述藥物與輔助治療劑一起使用，所述輔助治療劑為5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、抗精神病藥、抗驚厥藥、興奮藥物、抗病毒藥、抗焦慮藥、維生素或免疫治療劑。
12.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的藥物中的用途，其中所述藥物與行為調(diào)節(jié)和飲食調(diào)節(jié)一起使用。
13.權(quán)利要求1-6中任一項的制劑在制備配制用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的藥物中的用途。
14.卡貝縮宮素在用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑中的用途。
15.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑。
16.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，其中所述方法減少孤獨癥的癥狀，所述癥狀為社會退縮、目光接觸回避、重復(fù)性行為、焦慮、注意力不足、多動、抑郁、失語、言語交流困難、厭惡碰觸、視覺困難、理解困難、聲音敏感或光敏感。
17.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，所述制劑進一步包含輔助治療劑。
18.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，所述制劑進一步包含輔助治療劑，所述輔助治療劑為5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、抗精神病藥、抗驚厥藥、興奮藥物、抗病毒藥、抗焦慮藥、維生素或免疫治療劑。
19.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物受試者的孤獨癥病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的制劑，所述方法進一步包括行為調(diào)節(jié)或飲食調(diào)節(jié)。
全文摘要
本發(fā)明提供用于預(yù)防和治療孤獨癥譜系病癥、相關(guān)病癥和這種病癥的癥狀的方法和組合物，所述組合物包含催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物比如卡貝縮宮素。本發(fā)明的方法和組合物可有效地治療社會退縮、目光接觸回避、重復(fù)性行為、焦慮、注意力缺陷、多動、抑郁、失語、言語交流困難、厭惡碰觸、視覺困難、理解困難和聲音敏感及光敏感。本發(fā)明提供另一種組合物和方法，其應(yīng)用催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物與第二種或輔助治療劑的組合來獲得抗孤獨癥譜系病癥和相關(guān)病癥更有效的治療工具。
文檔編號A61K38/10GK101677948SQ200780053262
公開日2010年3月24日 申請日期2007年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月7日
發(fā)明者亞歷克西斯·凱斯·萊昂納多, 喬舒亞·O·謝斯塔克, 亨利·R·康斯坦丁諾, 安東尼·P·西萊諾, 拉利特·拉伊·佩達科塔, 卡文·埃米爾·沙爾基, 加蘭·M·貝拉米, 詹森·菲利普·格斯蒂 申請人:納斯泰克制藥公司