專利名稱：治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物及其制備方法，特別
是涉及一種可從紅曲發(fā)酵物中的莫那可林(monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗 氧化物質(zhì)來治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，可應(yīng)用于錠劑、膠嚢劑、顆 粒劑、口服劑等。
背景技術(shù)：
阿茲海默癥(Alzheimer's disease,簡(jiǎn)稱AD)，又稱老人癡呆癥，是 一種持續(xù)性神經(jīng)功能障礙。得到阿茲海默癥的人會(huì)漸漸的喪失記憶并且出 現(xiàn)語言和情緒上的障礙。智力逐漸喪失的情形稱為癡呆(dementia )。當(dāng)這 個(gè)疾病越來越嚴(yán)重時(shí)，病患在生活各方面都需要他人的協(xié)助，像是洗澡、 吃東西、上廁所…等等。由于阿茲海默癥患者需要人日夜看護(hù)，因此病患 親友的生活往往也跟著受到很大的影響。記憶的喪失可能是阿茲海默癥最 顯而易見的的病征，尤其是記不住前不久才發(fā)生的事或是最近才獲得的訊 息。初始的癥狀細(xì)微而漸次的出現(xiàn)，不易察覺，而且這些癥狀也可能出現(xiàn) 在其他的失智癥并非阿茲海默癥特有。例如在熟悉的地方迷路，忘了某 件事做了沒，老是舊事重提或是無法學(xué)新東西。病情惡化時(shí)，患者可能會(huì) 在談話時(shí)沒辦法找到適當(dāng)?shù)挠米只蚴菬o法做重大的決定。阿茲海默癥其中 一項(xiàng)最令人痛苦的地方是患者有時(shí)會(huì)沒辦法認(rèn)得親友?；颊叩男愿褚部赡?變得異常的煩躁，偏執(zhí)多疑，不喜歡與人互動(dòng)。到后期，患者可能會(huì)出現(xiàn) 在街上游蕩，迷路回不了家的情形。新的研究顯示阿茲海默癥患者腦部處 理視覺和空間訊息的區(qū)域可能受到損傷。這可說明患者為何會(huì)有沒辦法認(rèn) 出自己在哪兒或是搞不清方向的問題?；颊咭部赡茏兊牟粚Ｗ?，因此無法 照料他們自己日常身體的各種需要。阿茲海默癥患者腦部其他對(duì)記憶很重 要的區(qū)域亦受到影響，例如基底前腦(basal forebrain)以及海馬回 (hippocampus )。許多為阿茲海默癥所苦的人死于其它的原因，像是肺炎 (pneumonia)。由診斷確定日算起，阿茲海默癥的病人一4殳可有6-8年的壽 命，但仍許多患者存活超過20年。
目前市面上約有五種治療阿茲海默癥的藥物獲得美國(guó)食品藥物管制局 (US Food and Drug Administration ，簡(jiǎn)稱FDA)的認(rèn)可。這些藥物是膽 石咸酯分解酶抑制劑cholinesterase inhibitors (非商標(biāo)名稱分別為 tacrine and donepezil) Cholinesterase是乙酰月旦堿(acetylcholine)分解反應(yīng)中的關(guān)4定酶，這些藥物借著阻斷膽石成酯分解酶(cholinesterase) 的作用來抑制乙酰膽堿(acetylcholine)的分解。兩種藥物都可以增加腦 中乙酰膽堿(acetylcholine)的含量。兩種藥物皆可延緩記憶的喪失，并 且有助于患者執(zhí)行日常起居所需的動(dòng)作。但很重要的一點(diǎn)是這些藥物并不 能治愈阿茲海默癥，它們只能減輕阿茲海默癥的癥狀。此外，此些藥品均 會(huì)對(duì)患者造成一些副作用，如惡心、頭痛、腹瀉、失眠、疼痛、幻覺或暈 眩等等，因此并非實(shí)用的阿茲海默癥治療藥品。
如上所述，如有效的治療以及預(yù)防阿茲海默癥的患者，使其沒有任何 明顯的不良副作用，實(shí)為一具有實(shí)用性的思考方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于，克服現(xiàn)有的治療阿茲海默癥的藥物存在的缺 陷，而提供一種新的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物及其制備方法，所要 解決的技術(shù)問題是使其達(dá)到確實(shí)治療與預(yù)防阿茲海默癥的功效，且無明顯 毒副作用，從而更加適于實(shí)用。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。依據(jù) 本發(fā)明提出的 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，從紅曲發(fā)酵物中進(jìn)行 提煉而成，其包含莫那可林(monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中每1克的組合物中該莫 那可一木(monacolins)含量大于100 yg。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中其中每1克的組合物中 該抗氧化物質(zhì)含量大于10jug。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中每1克的組合物中該抗 發(fā)炎物質(zhì)含量大于40jug。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中其中該莫那可林 (Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該抗氧化物質(zhì)的重量比為90-10: 4-2: 1。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中該莫那可林 (Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該抗氧化物質(zhì)的重量比為40: 2: 1。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。依據(jù)本 發(fā)明提出的 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其為紅曲發(fā)酵物。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中所述的該組合物包含莫 那可^木(monacolins)與抗發(fā)炎物質(zhì)。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中每1克組合物中該莫那 可林(monacol ins)含量大于200 ju g。前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中每1克組合物中該抗發(fā)
炎物質(zhì)含量大于60jag。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題另外還采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。依 據(jù)本發(fā)明提出的一種治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法，其有效成
分的制備方法包含下列步驟清潔一米種并在一高壓高溫環(huán)境下進(jìn)行滅菌； 將一紅曲菌抹接種至一種菌培養(yǎng)基中并在一第一特定溫度濕度環(huán)境、 一特
定震蕩環(huán)境與一第一特定時(shí)限進(jìn)行接菌；在該第一特定溫度環(huán)境中進(jìn)行攪 拌該種菌培養(yǎng)基并在一第二特定時(shí)限內(nèi)持續(xù)提供一特定比例的水分；在一 第三特定時(shí)限內(nèi)與該第 一特定溫度環(huán)境中每隔一 固定時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)攪拌來 達(dá)成后熟；收取完成發(fā)酵后的一紅曲發(fā)酵物并在一第四特定期間內(nèi)保持一 第二特定溫度將其進(jìn)行干燥化；以及將已干燥的該紅曲發(fā)酵物磨成粉末狀
并進(jìn)行分析是否符合:成分比例，-:、。力、、4.,,、
前述的制備方法，其中該米種為 一在來米(Oryza satiVa L,， Japcmica)。
前述的制備方法，其中該高壓高溫環(huán)境是指在ln。C以及1 kg/cW的壓 力環(huán)境中。
前述的制備方法，其中該種菌培養(yǎng)基其組成為至少sg該米種浸泡于蒸
餾無菌水100ml中。
前述的制備方法，其中該第一特定溫度保持在3(TC。 前述的制備方法，其中該特定震蕩環(huán)境是保持在100 - 150rpm之間。 前述的制備方法，其中該第一特定時(shí)限是指48小時(shí)之后。 前述的制備方法，其中該第二特定時(shí)限是指在72小時(shí)之內(nèi)。 前述的制備方法，其中該特定比例的水分是指2(f/。的蒸餾無菌水。 前述的制備方法，其中該第三特定時(shí)限內(nèi)是指在96小時(shí)之內(nèi)。 前述的制備方法，其中該固定時(shí)間是指每IO個(gè)小時(shí)。 前述的制備方法，其中該第四特定期間是指在24小時(shí)之內(nèi)。 前述的制備方法，其中該第二特定溫度是指保持在55°C - 6(TC之間。 前述的制備方法，其中該成分比例條件是指該組合物包含莫那可林
(monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)，此三種物質(zhì)的重量比為90-10:
4-2: 1。
前述的制備方法'其中該莫那可林(Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該 抗氧化物質(zhì)的重量比為40: 2: 1。
前述的制備方法，其中該成分比例條件是指該組合物包含該組合物質(zhì) 量的至少0. 01。/。的莫那可林(monacolins)、至少0. 004 %抗發(fā)炎物質(zhì)、至 少0. 001%抗氧化物質(zhì)。前述的制備方法，還包括將粉碎的紅曲發(fā)酵物里加入藥劑學(xué)常用輔 料，制備成膠嚢劑、錠劑、口服劑、顆粒劑。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題另外再采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。本 發(fā)明公開一種紅曲發(fā)酵物在制備治療阿茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。
前述的應(yīng)用，其中紅曲發(fā)酵物中包含
至少0. 01。/。質(zhì)量百分比的莫那可林(monacolins);以及
至少0. 001%質(zhì)量百分比的抗發(fā)炎物質(zhì)。
前述的應(yīng)用，其中紅曲發(fā)酵物中還包含
至少0. 004 %質(zhì)量百分比的抗氧化物質(zhì)。
本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題另外再采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。本 發(fā)明公開一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其包含包含如下有效成分 的紅曲發(fā)酵物至少0. 01 。/。質(zhì)量百分比的莫那可林(monacolins);至少 0. 004 %質(zhì)量百分比的抗氧化物質(zhì)；以及至少0. 001%質(zhì)量百分比的抗發(fā)炎物質(zhì)。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中該抗氧化物質(zhì)為紅曲抗 氧化酸(dimer，ic acid)、單寧(tannin)、酚化合物(phenol)、單元不飽 和脂肪酸(monounsaturated fatty acid)、超氧歧化酶與固醇類(sterols) 或超氧化物歧化酶(S叩eroxide dismutase; SOD)。
前述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其中該抗發(fā)炎物質(zhì)為y-胺基 丁酸、(y-aminobutyric acid, GABA)、莫那斯辛(monascin)、安卡分拉 命(ankaflavin)、路柏龐克坦汀(rubropimctatin)、莫那斯克布林 (monascorbur i n)、路柏龐克胺 (rubropunctamine)、莫那斯克布胺 (monascorburatiiine) 、 i^各莫刃卩其斤辛A (xanthomonasin A) 、 J山7各莫刃卩其斤辛 B (xanthomonasin B) 、 (+)-莫那斯庫(kù)糜酸((+)-raonas國(guó)ic acid)或(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid)。
借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物及其制備
作用的:力效。^ ' 一 、 、 P ,''''.'、、。、、
上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的 技術(shù)手段，而可依照-沈明書的內(nèi)容予以實(shí)施，并且為了讓本發(fā)明的上述和 其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更明顯易懂，以下特舉較佳實(shí)施例，并配合附 圖，詳細(xì)說明如下。


圖1為本發(fā)明試驗(yàn)裝置的示意圖。圖2為大鼠停留于明室直到進(jìn)入暗室的時(shí)間統(tǒng)計(jì)圖。
圖3為本發(fā)明水迷宮裝置與分區(qū)域示意圖。
圖4為本發(fā)明組合物于對(duì)類淀粉樣蛋白40 (A (3 40)腦部輸注的大鼠于參 考記憶試驗(yàn)與探測(cè)性試驗(yàn)(probe test)中的記憶學(xué)習(xí)能力影響圖。
圖5為本發(fā)明組合物于對(duì)腦部輸注A (3 40的大鼠于工作記憶試驗(yàn)中的 記憶學(xué)習(xí)能力。
圖6為本發(fā)明組合物于對(duì)腦部輸注AP40的大鼠大腦皮質(zhì)與海馬回組 織中乙酰膽堿酶活性的影響圖。
圖7為腦部輸注AP的大鼠大腦皮質(zhì)與海馬回組織中總抗氧化劑狀態(tài) (TAS)比較圖。
圖8為本發(fā)明組合物對(duì)于大鼠大腦皮質(zhì)與海馬回組織中丙二醛(MDA)濃 度的影響圖。，， 一 ，成 ；人'.。， 一 召' —
(superoxide dismutase, SOD)活寸生的影響圖。
圖10為本發(fā)明組合物于對(duì)A (3 40腦部輸注的大鼠大腦皮質(zhì)與海馬回組 織中活性氧原子(ROS)含量與海馬回組織中 一氧化氮合成酶(iNOS)表現(xiàn)量 的影響。
圖11為連續(xù)輸注A (3 40至大鼠的海馬回組織后，A (3 40的沉積示意圖。 圖12A-圖12C為本發(fā)明的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法。
10
試驗(yàn)裝置 11
明室 閘門
水迷宮裝置 休息平臺(tái)
12:暗室 13:
14:金屬線 20:
21:圓形;永〉也 PI:
步驟100:清潔一米種并在一高壓高溫環(huán)境下進(jìn)行滅菌。
步驟110:將一紅曲菌抹接種至一種菌培養(yǎng)基中并在一第一特定溫度濕 度環(huán)境、 一特定震蕩環(huán)境與一第一特定時(shí)限進(jìn)行接菌。
步驟120:在該第一特定溫度環(huán)境中進(jìn)行攪拌該種菌培養(yǎng)基并在一第二 特定時(shí)限內(nèi)持續(xù)提供一特定比例的水分。
步驟130:在一第三特定時(shí)限內(nèi)與該第一特定溫度環(huán)境中每隔一固定時(shí) 間進(jìn)行適當(dāng)攪拌來達(dá)成后熟。
步驟140:收取完成發(fā)酵后的一紅曲發(fā)酵物并在一第四特定期間內(nèi)保持 一第二特定溫度將其進(jìn)行干燥化。
步驟150:將已干燥的該紅曲發(fā)酵物磨成粉末狀并進(jìn)行分析是否符合一
成分比例條件。
步驟160:將制備完成的該紅曲發(fā)酵物的粉末以一特定比例添加入可食 用的飲料中制備成一具有治療與預(yù)防阿茲海默癥的紅曲飲品。步驟170:將制備完成的該紅曲發(fā)酵物的粉末填充至一膠嚢中或是制備
成一錠劑。
具體實(shí)施例方式
為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功 效，以下結(jié)合附圖及較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的治療與預(yù)防阿茲海默 癥的組合物及其制備方法其具體實(shí)施方式
、方法、特征及其功效，詳細(xì)說 明如后。
本發(fā)明為 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，在介紹本發(fā)明的組合 物前，先就本發(fā)明的觀念加以說明。阿茲海默癥形成的主要因素為類淀粉
樣蛋白(Amyloid (3 -protein, A |3 )于腦部大量沉積所造成，并導(dǎo)致神經(jīng)傳 導(dǎo)物質(zhì)的缺乏與氧化發(fā)炎反應(yīng)而使病情逐漸加重。A(3的產(chǎn)生即由切割酶 (secretase)只于類;定4分才羊前馬區(qū)蛋白(Amyloid precursor protein, APP;M乍專 一性位置的切割后所產(chǎn)生的片段蛋白。剪切的酶包含a、 P及y -secretase。而A (3就是經(jīng)過(3-secretase可以切斷連j妄671 、 672的胺基 酸鍵結(jié)，及y-secretase對(duì)APP上713附近位置切割后可產(chǎn)生Ap片_|殳。 在酶對(duì)胺基酸序列上切割時(shí)，除了 1-40、 l-42片段之外也會(huì)產(chǎn)生其余的片 段。若APP單被a-secretase切割產(chǎn)生sAPP-cc與p10 kDa的片段，而plO 又可被y-secretase切割產(chǎn)生p3與p7片段，其中p3為一小片段的A (3 。 另外，若APP單被P-secretase切割產(chǎn)生sAPP-P與p12 kDa的片段，pl2 片段也可再次被y-secretase切割產(chǎn)生A (3與p7片段(Evinetal. 2003; Shoji et a1.1992)。這些小片段在腦中雖無聚集的能力，但可以證明不同 型態(tài)secretase的切割活性表J見。當(dāng)APP經(jīng)過p—secretase及y—secretase 的分解產(chǎn)生各型態(tài)的AP，其中可溶性的AP并不具毒性，必須經(jīng)聚合形成 纖維束(fibrils)后對(duì)神經(jīng)細(xì)胞才具有毒性。可溶的A(3并不具毒性，必須 經(jīng)聚合形成AP fibrils后才可經(jīng)由破壞胞內(nèi)鈣離子平衡與引發(fā)氧化壓力 等機(jī)轉(zhuǎn)毒殺神經(jīng)細(xì)胞。AP聚合物亦能經(jīng)由促進(jìn)胞內(nèi)tau蛋白的過磷酸化 (hyperphosphorylation)而干擾軸突的延展，造成細(xì)胞死亡。此外，A (3纖 維束尚可借由與腦中microglia與astrocyte膜上的特殊受器結(jié)合，將其 活化，前者會(huì)釋放多種神經(jīng)毒素，包括介白素-l(IL-l)、介白素-6(IL-6)、 腫瘤壞死因子(TNF- cc)等致發(fā)炎物質(zhì)以及一 氧化氮、超氧陰離子等自由基 去攻擊神經(jīng)細(xì)胞，造成其死亡。近年發(fā)現(xiàn)，位于第19對(duì)染色體上的載脂蛋 白E(ApoE，apoIip叩roteinE)基因與阿茲海默癥相關(guān)，所表現(xiàn)的ApoE與A (3迅速結(jié)合并沉積腦中形成老人斑塊，會(huì)造成神經(jīng)細(xì)胞的壞死。
此外，許多文獻(xiàn)中是指出心血管疾病與阿茲海默癥兩者具有一定的相 關(guān)性。Martha等人經(jīng)研究是指出以65歲以上的老人為調(diào)查對(duì)象，飲食中富含易導(dǎo)致心血管疾病的飽和脂肪酸的老人，經(jīng)追蹤調(diào)查平均在4年后有多
數(shù)的老人會(huì)罹患阿茲海默癥；而相反的飲食中富多元不飽和脂肪酸與單元 不飽和脂肪酸的老人則有逆相關(guān)(Freund-Levi et al. 2006)。并有許多 研究證明引起阿茲海默癥的AP的產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝有相關(guān)(Frears et al. 1999; Kuo et al. 1998; Roher and Kuo 1999)。近年來研究是指出A P會(huì)受到細(xì)胞內(nèi)膽固醇的分布與膽固醇酯化作用而改變(Frears et al.
1999) 。 ApoE會(huì)促使血漿中膽固醇的含量提高，是造成心血管疾病發(fā)生的危 險(xiǎn)因子之一。Puglielli等人于2001年是指出倉(cāng)鼠的細(xì)胞內(nèi)乙酰膽堿酶的 活性會(huì)與膽固醇脂的含量呈正相關(guān)(Puglielli et al. 2001; Zhao et al. 2005)。所以心血管疾病與阿茲海默癥具有正相關(guān)性。
因此，本發(fā)明的組合物即著重于降低A p在腦中的沉積以及降低導(dǎo)致心 血管疾病的飽和脂肪酸，用以治療阿茲海默癥。
近年來紅曲菌(M7/7^CM species)的相關(guān)研究日益增加。于未來的發(fā) 展上紅曲發(fā)酵物將可被發(fā)展成為一復(fù)合式多功效的保健食品。紅曲發(fā)酵物 中包含monacolin K、 y-胺基丁酸 (y-aminobutyr ic acid, GABA) 與抗 氧化物質(zhì)。紅曲發(fā)酵物(即紅曲米)現(xiàn)用于治療降血脂等的藥物，其制備 方法已經(jīng)非常成熟，如中國(guó)專利號(hào)971 00245. 2等所公開。
莫那可林K (Monacolin K)的別名包含洛伐史坦汀(lovastatin)，為膽 固醇合成的速率限制酶-羥曱基戊二酸輔酶A環(huán)袁酶 (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase,畫G CoA reductase) 的抑制劑，屬于史坦汀(statin)類的化合物，臨床上也已證實(shí)此類化合物 確實(shí)能有效改善心血管疾病(cardiovascular disease, CAD)。近年來的流 行病學(xué)研究也是指出以statin類藥物治療阿茲海默癥病患，確實(shí)具有良好 的改善效果。在歐洲醫(yī)師研究資料庫(kù)(UK General Practitioners Research Database)中是指出以statin類藥物治療阿茲海默癥時(shí)，有70%的病患具有 明顯改善效果(Jick et al.2000);類似實(shí)驗(yàn)尚包含2000年Wolozin等人 以美國(guó)三家不同醫(yī)院中60歲以上罹患阿茲海默癥老人做為受試者，其診斷 結(jié)果是根據(jù)NINCDS-ADRDA (National Institute of Neurological and Communicative Disorders and Stroke and the Alzheimer's Disease and Related Disorders Association)的標(biāo)準(zhǔn),此試馬企是將受試者分為三組，A 組為控制組，B組為使用statins來治療者，C組為以其他心血管疾病用 藥(包含降血壓藥物)來治療者，其結(jié)果令人驚訝的是以statins治療病患 時(shí)，可使罹患阿茲海默癥的程度下降70%，其中又以洛伐史坦汀 (lovastatin)與巴;各j戈史坦打(pravas tat in)的歲文果最好(Wolozin et al.
2000) 。
阿茲海默癥患者腦中的煙石威酸(nicotinic)、毒蕈堿(muscarinic)、血清素(serotonin)、麩胺酸(glutamate)受器以及y-胺基丁酸(y -aminobutyric acid, GABA)、新腎上腺素(norepinephrine)等神經(jīng)沖動(dòng)傳 遞因子皆有缺損的現(xiàn)象。大腦在老化過程中體積會(huì)減少百分之十，最主要 是大腦皮層神經(jīng)元的數(shù)目減少所致，在某些區(qū)域甚至?xí)p少30-50%，另外 神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)亦會(huì)減少，如乙酰膽堿、GABA、兒茶酚胺(catecholamine)等。 由于這些物質(zhì)的減少，使大腦認(rèn)知功能降低或記憶能力障礙。最早的癥狀 有記憶力減退，失去對(duì)事物的判斷能力，容易迷失。到晚期時(shí)病人會(huì)出現(xiàn) 語言障礙、異常行為、痙攣、生活無法自理(Mohr et al. 1994)。
當(dāng)粒腺體缺02或HA和OH.過多時(shí)，會(huì)導(dǎo)致高反應(yīng)性O(shè)H.的形成。而 A P經(jīng)自由基氧化后又會(huì)導(dǎo)致不溶性A生成，使阿茲海默癥更加惡化(Hsieh and Tai 2003)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)口服抗氧化劑如維生素C維生素E合并制劑可有 效減緩阿茲海默癥引起的現(xiàn)象(Yallampalli et al. 1998; Yamada et al. 1999)。另外像是神經(jīng)酰胺(ceramlde)， 一種天然的神經(jīng)鞘質(zhì)，可對(duì)抗A (3 及FeSO,導(dǎo)致海馬回神經(jīng)損傷的作用(Abousalham et al. 2002)紅曲的抗氧 化能力于1999年被Aniya等人提出，紅曲發(fā)酵物中紅曲抗氧化酸 (dime濯ic acid)的抗氧化機(jī)制可得知其可清除-0H、 02 、 ferryl-Mb、 peroxyl radicals與對(duì)脂質(zhì)過氧化(LP0)的抑制備用，其會(huì)提供一個(gè)電子 給氧化物使本身氧化為一氧化氮自由基(nitroxide radical),而此一氧化 氮自由基(nitroxide radical)會(huì)再被清除掉而達(dá)到抗氧化的效果(Taira et al. 2002)。紅曲發(fā)酵物的抗氧化效果可運(yùn)用在阿茲海默癥的預(yù)防上， 以避免病情受氧化自由基的攻擊而加重。
實(shí)驗(yàn)例 分組及給藥
本發(fā)明的研究所采用的動(dòng)物為購(gòu)自臺(tái)灣大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的 Wistar品系雄性大鼠，周齡8周，體重約250g，每組7只，飼養(yǎng)于具空調(diào) 的空間，溫度維持在23土rC燈光控制采12小時(shí)亮12小時(shí)暗(08: 00燈亮、 20:00燈暗)，食物與水不予限制。大鼠預(yù)養(yǎng)至體重達(dá)到300 g時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 分組與腦部輸注泵植入手術(shù)，各組的每日本發(fā)明組合物攝取量與A(3 40的 注射量如表一。Vehicle組為進(jìn)行手術(shù)但不輸注A (3 40以作為正常記憶學(xué)習(xí) 能力的大鼠，A P組為進(jìn)行手術(shù)輸注A P 40以作為記憶學(xué)習(xí)能力障礙的阿茲 海默癥大鼠，本實(shí)驗(yàn)的本發(fā)明組合物喂食劑量相當(dāng)于是成人(170cm, 65kg) 每日食用2g的本發(fā)明組合物，RH組為高劑量的本發(fā)明組合物喂食組，'而 LS組則為每日喂食與RL組相同劑量的lovastatin(l. 43 mg/kg rat),用 于比較單純莫那可林K與含莫那可林、抗氧化物與抗發(fā)炎物質(zhì)的本發(fā)明組 合物在阿茲海默癥治療與預(yù)防的效果。阿茲海默癥大鼠以A(3 40連續(xù)28天輸注于大鼠腦部，使A(3 40直接于 腦部大量沉積而引發(fā)阿茲海默癥，試驗(yàn)期間每日喂食本發(fā)明組合物或與本 發(fā)明組合物中的莫那可林K相同濃度的1 ova s ta t i n以探討本發(fā)明組合物對(duì) 于已生成A (3毒性的抑制效果并評(píng)估對(duì)記憶學(xué)習(xí)能力的影響。
本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以連續(xù)28天輸注A (3 40于大鼠腦部，會(huì)提升 腦部乙酰膽;咸酶活性、活性氧原子(reactive oxygen species, ROS)生成 量與脂質(zhì)過氧化的程度，并降低總抗氧化力與超氧歧化酶(s叩eroxide dismutase， SOD)活性。而本發(fā)明組合物的喂食可顯著抑制這些因腦部輸注A P40所造成的損傷，并且其效果較lovastatin藥物治療組佳。此外，借由 抑制氧化發(fā)炎反應(yīng)而使輸注的A |3 40無法于海馬回組織中大量沉積。本發(fā) 明組合物被證實(shí)具降低阿茲海默癥危險(xiǎn)因子與改善記憶學(xué)習(xí)能力的效果， 且其效果會(huì)較lovastatin藥物更具顯著效果。
本發(fā)明的試驗(yàn)分組如表一所示
群組Af3本發(fā)明組合物L(fēng)ovastatin
注入(monacolin K) (mg/kg只天)(mg/kg只天)
Vehicle_——
A(3+——
+一1. 43
—
RH755 (7.20)一
表一
實(shí)驗(yàn)l:
本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)1的裝置如圖1所示，該試驗(yàn)裝置10包含大小相同的明 室11與暗室12,兩室中央有一 10(W) x lo(D)cm的閘門13，當(dāng)閘門13開 啟時(shí)，明室11與暗室12即可相通。明室ll具有光照，而暗室12不具光 照，且其底部設(shè)有間隔1cm平行排列的金屬線14 ，并通有電流。實(shí)驗(yàn)流程 為先將各組的大鼠輪流置入明室11，且同時(shí)開放閘門13。待大鼠進(jìn)入暗室 12后,立即關(guān)閉閘門13，同時(shí)于金屬線14通以電流(100V, 0. 3mA， 2sec)， 待電刺激后5秒，自暗室取出大鼠，歸回飼養(yǎng)籠。如大鼠300秒后未進(jìn)入 暗室12，則強(qiáng)迫大鼠進(jìn)入暗室12且關(guān)閉閘門13,同時(shí)將暗室12底部金屬 線14通以電流，再歸回飼養(yǎng)籠。測(cè)定期于訓(xùn)練后24小時(shí)、48小時(shí)，再 將大鼠置入明室11,同時(shí)并開啟閘門13，記錄大鼠在明室11的滯留時(shí)間 (step-through latency)。當(dāng)于明室11的滯留時(shí)間大于300秒時(shí)，則稱大 鼠的學(xué)習(xí)記憶能力正常。
14大鼠停留于明室11直到進(jìn)入暗室12的時(shí)間可視為評(píng)估被動(dòng)回避試驗(yàn) 中記憶學(xué)習(xí)能力的是指標(biāo)。如圖2所示，所有大鼠因趨暗的特性而在第一
次試驗(yàn)時(shí)立即進(jìn)入暗室12之中，暗室12中所釋出的電擊刺激使具正常記 憶學(xué)習(xí)能力的大鼠于下次試驗(yàn)中懼怕再進(jìn)入暗室12。因此，于第二次試驗(yàn) 中各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物停留在明室11的時(shí)間將因記憶學(xué)習(xí)能力的差異而具顯著差 異。第二次試驗(yàn)的結(jié)果顯示，AP組于明室所停留的時(shí)間會(huì)顯著低于 vehicle組。試驗(yàn)組RL與RH組于明室的停留時(shí)間會(huì)顯著長(zhǎng)于A0組 (/K0. 05)。 Lovastatin組的效果雖然不及具相同monacolin K含量的RL 組，但記憶學(xué)習(xí)的效果依然顯著高于A(3組。 實(shí)驗(yàn)2:
本發(fā)明的另一試驗(yàn)2的裝置如圖3所示，其為一水迷宮裝置20,其圓 形泳池21的直徑為140cm，高度45 cm,泳池中含有一可移動(dòng)的^^息平臺(tái) Pl(或稱逃逸平臺(tái)，escape platform)。平臺(tái)的直徑為12cm,高度為25cm。 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前圓形泳池21須加水至27 cm的液面高度。圓形泳池21區(qū)分為 四個(gè)象限(I、 II、 III與IV區(qū))，并設(shè)置5個(gè)起始點(diǎn)，休息平臺(tái)P1放置于 任一 象限的中心點(diǎn)。試驗(yàn)期間并于泳池中心點(diǎn)的正上方架設(shè)攝影機(jī)以記錄 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的游泳路徑。
本發(fā)明組合物對(duì)腦部輸注A P的阿茲海默癥大鼠的參考記憶學(xué)習(xí)能力 損傷的影響如圖4所示。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自水迷宮裝置20起點(diǎn)至尋得休息平臺(tái)Pl 的時(shí)間視為評(píng)估參考記憶試驗(yàn)的是指標(biāo)。由第2次至第9次的記憶訓(xùn)練的 結(jié)果顯示，AP輸注的阿茲海默癥大鼠總是較具正常記憶能力的vehicle組 花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間去找到休息平臺(tái)Pl，但喂食本發(fā)明組合物的阿茲海默癥大 鼠(RL與RH組)則可顯著降低尋找的時(shí)間(/7<t). 05)。 Lovastatin飲食雖 然可較A (3組花費(fèi)較短的搜尋時(shí)間，但是其效果均低于RL組與RH組。相同 的搜尋時(shí)間將呈現(xiàn)出相類似的游泳路徑長(zhǎng)度。此外，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間的 游泳速度均不具顯著差異(data not shown) (/7>0. 05)。
空間性探測(cè)試驗(yàn)緊接于第24天的最后一次參考記憶試驗(yàn)。休息平臺(tái)Pl 將在參考記憶試驗(yàn)結(jié)束后自水迷宮裝置20移出，而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物徘徊于原本放 置休息平臺(tái)Pl的象限中的時(shí)間視為空間性探測(cè)試驗(yàn)的記憶學(xué)習(xí)能力是指 標(biāo)。結(jié)果如圖4A所示，A P組會(huì)于目標(biāo)象限中搜尋的時(shí)間會(huì)顯著低于vehicle 組OKO. 05) 。RL組與RH組則在目標(biāo)象限的搜尋時(shí)間分別較A P組提高38. 2% (p<t). 05)與48.0% (p<t). 01)，證明本發(fā)明組合物確實(shí)可改善阿茲海默癥大 鼠的記憶學(xué)習(xí)能力損傷。游泳路徑可有助于判斷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于空間性探測(cè)試 驗(yàn)中記憶學(xué)習(xí)能力表現(xiàn)的真實(shí)性。圖4B顯示A(3組在空間性探測(cè)試驗(yàn)中無 方向性與無目標(biāo)性的尋找目標(biāo)象限，且游泳的路徑遍及整個(gè)圓形泳池21。 相反地，具有較佳記憶學(xué)習(xí)能力的RL組、RH組與vehicle組會(huì)直接游入目標(biāo)象限中，且花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間于目標(biāo)區(qū)域徘徊。然而，1 ova s t a t i n 4t食組 依然呈現(xiàn)介于RL組與AM且的效果在記憶學(xué)習(xí)能力的改善(圖4B與圖4C)。 工作記憶試驗(yàn)為短期記憶學(xué)習(xí)能力評(píng)估方式的一種，其結(jié)果如圖5所示，A P組在尋找1木息平臺(tái)Pl的時(shí)間會(huì)顯著長(zhǎng)于vehicle組0 <t). 01)。然而， RL組與RH組在工作記憶試驗(yàn)中可呈現(xiàn)如同正常記憶能力的vehicle組的記 憶學(xué)習(xí)效果，并分別較A P組縮短57. 3%與58. 9%的搜尋時(shí)間(/ <t). 01)。 LS組雖然可較A0組顯著縮短26. 7%的搜尋時(shí)間(;7<1). 05)，但其效果均較 低于RL組與RH組(p復(fù)05)。
A (3已被證實(shí)為阿茲海默癥病患記憶學(xué)習(xí)能力不足的主要危險(xiǎn)因子 (Hashimoto et al. 2005; Stephan and Phillips 2005)。輸注A(3 40于 大鼠腦部的側(cè)腦室的方式已被證實(shí)可成功建立阿茲海默癥的動(dòng)物模式 (Stephan and Phillips 2005)。而此種方式建立的模式動(dòng)物亦具有記憶行 為與學(xué)習(xí)能力不足的特性(Kar et al. 1998; Schubert et al. 1995; Townsend and Pratico 2005)。輸注的A P會(huì)誘發(fā)自由基與活性氧原子并造 成神經(jīng)元的損傷與突觸延伸受到抑制，進(jìn)而造成記憶學(xué)習(xí)能力的不足 (Townsend and Pratico 2005)。因此，目前有數(shù)研究均以抗氧化與抗發(fā)炎
物質(zhì)降低這些阿茲海默癥腦部中的氧化發(fā)炎危險(xiǎn)因子與減輕記憶學(xué)習(xí)能力 的受損(Chauhan et al. 2004; Cordle et al. 2005)。
莫氏(Morr i s)水迷宮試驗(yàn)為評(píng)估記憶學(xué)習(xí)能力的主要方法之一 ，其中 參考記憶試驗(yàn)所代表的是一種長(zhǎng)期記憶能力的評(píng)估方法，而工作記憶試驗(yàn) 則屬于短期記憶能力的評(píng)估方式。根據(jù)上述記憶學(xué)習(xí)試驗(yàn)的結(jié)果顯示，喂 食一倍劑量與五倍劑量本發(fā)明組合物的阿茲海默癥大鼠可縮短參考記憶試 驗(yàn)與工作記憶試驗(yàn)的搜尋時(shí)間(/7<0. 05)。此外，本發(fā)明組合物飲食組更可 在空間性探測(cè)試驗(yàn)中延長(zhǎng)于目標(biāo)象限的搜尋時(shí)間。這些結(jié)果可清楚的是指 出喂食本發(fā)明組合物可改善記憶學(xué)習(xí)能力以較短的時(shí)間尋得水迷宮的休息 平臺(tái)。相反地，未治療的阿茲海默癥大鼠則以無目標(biāo)性的四處搜尋整個(gè)水 迷宮，因此在參考記憶與工作記憶試驗(yàn)中均需花費(fèi)較多的時(shí)間。
莫那可林K(Monacolin K)為紅曲發(fā)酵物降血脂的主要功效成分之一， 而statin類化合物因?yàn)榫哂幸种颇X部A |3的生成與抗發(fā)炎的效果，已^C認(rèn) 為是治療阿茲海默癥的新興藥物(Chauhan et al. 2004; Li et al. 2006)。 多數(shù)有關(guān)阿茲海默癥治療研究均使用statins以降低阿茲海默癥的基因轉(zhuǎn) 殖小鼠腦部AP的生成(Yamada et al. 1999)。目前所知的研究中尚未以 1ovastatin去減輕A(3輸注的阿茲海默癥模式大鼠的記憶學(xué)習(xí)能力的損傷。 本發(fā)明以1 ova s ta U n替代本發(fā)明組合物中的monaco 1 in K ，以探討本發(fā)明 組合物中monacolin K是否為減輕阿茲海默癥記憶學(xué)習(xí)能力損傷的唯一物 質(zhì)。但由上述記憶學(xué)習(xí)試驗(yàn)的結(jié)果是指出，lovastatin喂食組在減輕記憶學(xué)習(xí)能力損傷的效果均4交弱于具相同monacolin K濃度的RL組。因此，證 實(shí)本發(fā)明組合物中的monacolin K并非唯一減輕A (3引起記憶能力損傷的功 效性成分。食用monacolin K確實(shí)可以有效改善因?yàn)锳^所造成的阿茲海 默癥的癥狀。
目前阿茲海默癥的治療多著重于抑制乙酰膽堿酶活性以提高乙酰膽堿 濃度與改善認(rèn)知與記憶4亍為(Nabeshima and Nitta 1994)。阿茲海默癥才莫 式動(dòng)物建立的相關(guān)研究亦證實(shí)以連續(xù)輸注A(3至大鼠腦部將造成膽;咸神經(jīng) 功能衰退與不足的神經(jīng)毒性。研究亦證實(shí)腦部輸注A P阿茲海默癥大鼠的腦 部乙酰膽堿含量會(huì)較正常大鼠明顯不足(Arendt et al， 1984; Darvesh et al. 2004)。隨著乙酰膽堿濃度的下降與乙酰膽堿酶活性的增加將使神經(jīng)元 的喪失更為嚴(yán)重(Stephan and Phillips 2005)。此外，乙酰膽堿酶活性 增加亦被是指出會(huì)造成的聚合程度更為嚴(yán)重，且形成更為安定與毒性更 強(qiáng)的纖維化類淀粉樣蛋白(AP fibrils) (St印han and Phillips 2005)。 因此，抑制乙酰膽堿酶的活性被認(rèn)為是間接減輕引發(fā)記憶學(xué)習(xí)能力不足 的神經(jīng)保護(hù)作用。
圖6為本發(fā)明組合物于對(duì)腦部輸注AP40的大鼠大腦皮質(zhì)與海馬回組 織中乙酰膽堿酶活性的影響，圖中是指出A P組大腦皮質(zhì)的乙酰膽堿酶活性 會(huì)較vehicle組提高50.5%,而于海馬回組織中則提高1". 1%。喂食一倍 與五倍劑量的本發(fā)明組合物均可顯著抑制受A (3所提高的乙酰膽堿酶活 性，然而lovastatin卻對(duì)大腦皮質(zhì)與海馬回組織中的乙酰膽石成酶活性不具 抑制效果。此結(jié)果證實(shí)紅曲發(fā)酵物中具有抑制乙酰膽堿酶活性的物質(zhì)，而 此物質(zhì)應(yīng)不是monacolin K而是其他功能性代謝物。鮮少研究是指出 1 ovastatin可抑制乙酰膽堿酶的活性，有研究是指出lovastatin對(duì)于乙酰 膽堿酶的活性不具有顯著的抑制效果。此研究結(jié)果與本發(fā)明的趨勢(shì)相符合。 除了 monacolin K外，紅曲發(fā)酵物的復(fù)合性功效代謝物可能包含其他乙酰 膽石咸酶抑制劑。然而，紅曲發(fā)酵物中的代謝物GABA亦是為一種神經(jīng)傳導(dǎo) 物質(zhì)，亦有助于改善阿茲海默癥的認(rèn)知與記憶行為能力。
A(3已被證實(shí)會(huì)引發(fā)阿茲海默癥患者腦部的氧化壓力。因此，抑制A(3 誘發(fā)的氧化壓力被認(rèn)為是阿茲海默癥藥物開發(fā)的重要是指標(biāo)。如圖7所示， 腦部輸注A P將造成大腦皮質(zhì)與海馬回組織中的總抗氧化劑狀態(tài)(total antioxidants status, TAS)分別較vehicle組下降20.9°/。與20.4°/。。喂 食lovasUUn僅能提高大腦皮質(zhì)的TAS 13. 9%，但于海馬回組織中則不具 效果。RL組的大腦皮質(zhì)與海馬回組織中TAS則被顯著提高24. 6%與46.2%。 然而，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見喂食五倍劑量本發(fā)明組合物的阿茲海默癥大鼠的大 腦皮質(zhì)與海馬回組織中的TAS均顯著高于組。
本發(fā)明組合物對(duì)于大腦皮質(zhì)與海馬回組織中丙二醛(MDA)濃度的影響，
17如圖8所示。大腦皮質(zhì)與海馬回組織中MDA濃度于腦部輸注A (3后會(huì)分別 被顯著提高95. 3%與112%,但此MDA濃度的上升可因?yàn)樘岣弑景l(fā)明組合物 的喂食劑量而有效地再度被降低。
RL組與RH組的大腦皮質(zhì)與海馬回組織中超氧歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性亦呈現(xiàn)相類似的神經(jīng)元保護(hù)效果，即如圖9所示。 雖然大腦皮質(zhì)與海馬回組織中的SOD活性會(huì)受腦部輸注AP而分別降低 19.8%與25.2%，但喂食一倍劑量的本發(fā)明組合物會(huì)分別提高大腦皮質(zhì)與 海馬回組織的海馬回組織中的SOD活性27. 2%與52,7%, 5倍的本發(fā)明組 合物更可使其分別提升27. 2%與60. 9%。
由上述的結(jié)果得知，記憶學(xué)習(xí)能力受損的阿茲海默癥模式大鼠，其大 腦皮質(zhì)與海馬回組織均有嚴(yán)重的氧化壓力。但這些氧化壓力可因?yàn)槊吭晃?食本發(fā)明組合物而得到改善，且其效果不僅具劑量效應(yīng)關(guān)系，且更勝于 lovastatin喂食組。
紅曲發(fā)酵產(chǎn)物中的抗氧化物質(zhì)目前已被提到的有紅曲抗氧化酸 (dimerumic aci d)、單寧(tannin)、酚化合物(phenol)、單元不飽和脂肪 酸(mono簡(jiǎn)aturated fatty acid)、超氧歧化酶與固醇類(sterols) (Aniya et al. 1999; Wang et al. 2006)。
是故本發(fā)明的抗氧化物質(zhì)可從紅曲抗氧化酸(dimerumic acid)、單寧 (tannin)、酚化合物(phenol)、單元不飽和月旨肪酸(monounsaturated fatty acid)、 超氧歧化酶與固醇類(stero Is)與超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase; SOD)中任選一種。
本發(fā)明的體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果如圖IOA所示，AP的腦部輸注會(huì)使大鼠 大腦皮質(zhì)與海馬回組織中的活性氧原子(reactive oxygen species, R0S) 濃度分別顯著提高39. 8%與28. 7% (p<0. 05)。每日喂食本發(fā)明組合物的阿 滋海默癥大鼠的大腦皮質(zhì)與海馬回組織中R0S濃度均會(huì)降低。其中RL組 可分別降低16. 0% (p<0. 05)與21. 2% (一. 05) ， RH組則可分別降低35. 4% 0 <t). 01)與21.3% 0^0.05)。 Lovastatin飲食會(huì)降低大腦皮質(zhì)中R0S濃 度29.3%，并于海馬回組織中降低15.7% ( p<t). 05)。誘發(fā)性一氧化氮合 成酶(iN0S)于海馬回組織的表現(xiàn)量圖10B的免疫組織染色所示，AP的輸 注顯著增加i冊(cè)S的表現(xiàn)量，在RL組與RH組的海馬回組織中可發(fā)現(xiàn)iNOS 的表現(xiàn)量會(huì)被顯著受到抑制。但亦可發(fā)現(xiàn)對(duì)于抗發(fā)炎的效果lovastatin喂 食組較差于1倍與5倍劑量的本發(fā)明組合物喂食組。
阿茲海默癥大鼠的大腦皮質(zhì)與海馬回組織中R0S濃度會(huì)因提高喂食本 發(fā)明組合物的劑量而有更為顯著下降。雖然lovastatin曾經(jīng)證實(shí)可有效于 細(xì)胞模式中抑制A |3所引發(fā)的發(fā)炎反應(yīng)，但這樣的效果并未在動(dòng)物模式中 被證實(shí)，且statins的抗發(fā)炎效果亦未被應(yīng)用于減經(jīng)腦部輸注的阿茲海默癥大鼠的記憶學(xué)習(xí)能力損傷。本研究證實(shí)lovastatin的喂食可顯著 降低腦組織中的R0S含量與iN0S的表現(xiàn)量，但這些效果稍劣于本發(fā)明組 合物飲食組。近年來紅曲次級(jí)代謝物的保健功效已逐漸被開發(fā)研究，因此， 許多抗發(fā)炎的物質(zhì)亦陸續(xù)被提出，其中包含多種形式的莫那可林 (monacol ins) 、 6種紅曲代謝物(azaphi lones): 莫那斯辛(monascin)、 安 卡分拉命(ankaflavin)、路柏龐克坦汀(rubropunctatin)、莫那斯克布林 (monascorbur in) 、 3各^白龐克胺 (rubropunctamine)與莫刃卩其斤克布胺 (monascorburamine) ， 2種伏瑞喃薩弗萊德(furanoisophthalides): 仙洛 莫刃卩,斤辛A (xanthomonasin A) 與j山》各莫刃(^其斤辛B (xanthomonasin B); 及2種胺基酸(amino acids): (+)-莫那斯庫(kù)糜酸((+)-monascumic acid) 與(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid) (Schubert et al. 1995)。
因此，monacolin K確實(shí)并非抑制A |3引起的發(fā)炎反應(yīng)的唯一代謝物。 Akihisa等人(2005)曾于小鼠動(dòng)物4莫式中以紅曲發(fā)酵物抑制致發(fā)炎物質(zhì) (12-0-tetradecanoylphorbo卜13-acetate; TPA)所引起的發(fā)炎反應(yīng)。并 i正實(shí)主要的4元發(fā)炎物質(zhì)為 azaphilones類與 furanoisophthalides類的
究，紅曲發(fā)酵物抑制A (3 "發(fā)的發(fā)炎反應(yīng)主要是:自于monadun K與 其他抗發(fā)炎物質(zhì)共同呈現(xiàn)的協(xié)同機(jī)制。
是故本發(fā)明所提的發(fā)炎物質(zhì)可以從Y -胺基丁酸(Y -aminobutyric acid, GABA)、莫那斯辛(monascin)、安卡分拉命(ankafl avin) 、 3各^白^^> i旦汁(rubropunctatin)、 莫那其斤克布沖木(monascorburin) 、 3各才白龐克胺 (rubropimctamine)、莫刃卩其斤克布胺(monascorburamine) 、 4山〉各莫刃卩其斤辛A (xanthomonasin A)與仙洛莫那斯辛B (xanthomonasin B) 、 (+)-莫那斯庫(kù) 糜酸((+)_monascumic acid)與(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid) 中任選一種。
經(jīng)28天連續(xù)輸注A P 40至大鼠的海馬回組織后，由圖11中與vehicle 組比較結(jié)果得知，A(3組的海馬回組織中有大量A(3 40的沉積。由上述結(jié)果 與前人研究可得知輸注的A0 4O會(huì)于腦部中引起氧化壓力與發(fā)炎反應(yīng)，進(jìn) 而造成AP40的沉積。當(dāng)沉積的A(3 40含量越多時(shí)即引發(fā)更為嚴(yán)重的氧化 壓力與發(fā)炎反應(yīng)，反復(fù)不斷惡性循環(huán)會(huì)造成腦部損傷持續(xù)加重。Lovastatin 具有抑制A |3 40引起發(fā)炎反應(yīng)的效果，但在對(duì)抗氧化壓力的能力則較為薄 弱。因此由結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，LS組的海馬回組織中的A (3 40雖然些微低于A (3組，但依然可發(fā)現(xiàn)大量的A (3 40的沉積。喂食本發(fā)明組合物的RL組 與RH組則有較為顯著降低Ap40累積量的效果。本發(fā)明組合物降低 40于海馬回組織的累積量的原因主要?dú)w因于其對(duì)氧化壓力與發(fā)炎反應(yīng)的抑 制。輸注至腦部的A (3 40不受氧化發(fā)炎物質(zhì)促進(jìn)而沉積。使Ap40無法對(duì)于腦部造成損傷，進(jìn)而有效改善記憶學(xué)習(xí)的能力。
實(shí)施例1:
由于本發(fā)明的治療與預(yù)防阿茲海默癥的莫那可林(Monacolins)、抗發(fā) 炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)的組合物均可于紅曲發(fā)酵物提供改善阿茲海默癥的癥 狀，其中在第一實(shí)施例中，每一克的本發(fā)明組合物中莫那可林(Monacolins) 有效最低含量至少大于100jLlg，而每一克的本發(fā)明組合物中抗氧化物質(zhì)有 效最低含量至少大于10^g，而每一克的本發(fā)明組合物中抗發(fā)炎物質(zhì)有效最 低含量至少大于40|iig;其中莫那可林(Monacolins)、發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物 質(zhì)的最佳重量比例為40: 2: 1為第一實(shí)施例中達(dá)到最佳功效，此外莫那可 林(Monacolins)、發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)的有效重量比例范圍為90-10: 4-2: 1均可加以實(shí)施，并應(yīng)用實(shí)施在錠劑、膠嚢劑、顆粒劑、口服劑等方 式讓消費(fèi)者服用。
實(shí)施例2:
此外，在第二實(shí)施例中，使用莫那可林(Monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)的 組合物，也可治療與預(yù)防阿茲海默癥，當(dāng)每一克的本發(fā)明組合物中莫那可 林(Monacolins)有效最低含量至少大于200 |i g與每一克的本發(fā)明組合物中 抗發(fā)炎物質(zhì)有效最低含量至少大于60|ig的組合物中，亦可以有上述過程 中的效用；其中莫那可林(Monacolins)與發(fā)炎物質(zhì)的最佳重量比例為10: 1為第二實(shí)施例中達(dá)到最佳功效者，此外莫那可林(Monacolins)與發(fā)炎物質(zhì) 的有效重量比例范圍為45-10: 3-1，均可在第二實(shí)施例中加以實(shí)施，并 應(yīng)用實(shí)施在錠劑、膠嚢劑、顆粒劑、口服劑等方式讓消費(fèi)者服用。
在紅曲發(fā)酵物內(nèi)所含的抗發(fā)炎物質(zhì)為Y -胺基丁酸(Y -aminobutyric acid， GABA),且紅曲發(fā)酵物為一天然食品，可通過特定的方式加以發(fā)酵提 煉，因此對(duì)人體不會(huì)產(chǎn)生任何明顯不良的副作用。故若將紅曲發(fā)酵物當(dāng)做 治療阿茲海默癥的調(diào)理食品，其效果不但顯著，且并無一般藥品會(huì)令患者 產(chǎn)生多種的副作用，實(shí)為一造福人群的發(fā)明。
實(shí)施例3:本發(fā)明組合物的制備
請(qǐng)參照?qǐng)D12A至圖12C為應(yīng)用于本發(fā)明的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合
物的制備方法，說明如下
首先，先要清潔一在來米(Oryza satiVaL. ， Japonica)，并在121。C、 1 kg/ci^的壓力環(huán)境中下進(jìn)行滅菌(步驟100);
然后將紅曲菌抹接種至種菌培養(yǎng)基，并保持在30°C、 125 rpm振蕩培 養(yǎng)約48小時(shí)后便可進(jìn)行接菌，該種菌培養(yǎng)基其組成為至少Sg該米種浸泡 于蒸餾無菌水100ml中；秤取固態(tài)培養(yǎng)基500g，清洗后浸水6-8小時(shí)。用 棉布濾水后，置于曲布之上，鋪平在曲盤中，殺菌(in°C, 20_25min)。 再進(jìn)行灑水100 raL。進(jìn)行第二次殺菌(12rC, 20 min)，并于冷卻后進(jìn)行接菌。取種菌液接入固態(tài)基質(zhì)中(5W,并充分?jǐn)嚢杈鶆颉＝又谠摰谝惶?定溫度環(huán)境中進(jìn)行攪拌該種菌培養(yǎng)基并在一第二特定時(shí)限內(nèi)持續(xù)提供一特
定比例的水分(步驟120),此一第二特定時(shí)限是指在72小時(shí)之內(nèi)，此一該 特定比例的水分是指20%的蒸餾無菌水，在72小時(shí)內(nèi)，每隔24小時(shí)便攪拌 該種菌培養(yǎng)基并補(bǔ)充20%的蒸餾無菌水并在3(TC恒溫箱中培養(yǎng)，然后在一 第三特定時(shí)限內(nèi)與該第 一特定溫度環(huán)境中每隔一 固定時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)攪拌來 達(dá)成后熟(步驟130),后熟是指讓代謝物生成的階段，此一第三特定時(shí)限 內(nèi)是指在96小時(shí)之內(nèi)。此一固定時(shí)間是指每10個(gè)小時(shí)。在96小時(shí)之內(nèi)， 平均每隔IO個(gè)小時(shí)針對(duì)種菌培養(yǎng)基進(jìn)行適當(dāng)?shù)臄嚢?，然后收取完成發(fā)酵后 的一紅曲發(fā)酵物并在一第四特定期間內(nèi)保持一第二特定溫度將其進(jìn)行干燥 化(步驟140)，此一第四特定期間是指在24小時(shí)之內(nèi)，此一第二特定溫度 是指保持在55-60X:。此步驟為收曲，將完成發(fā)酵后的紅曲發(fā)酵物于烘箱內(nèi) 進(jìn)行24小時(shí)6(TC的干燥程序，接著將已干燥的該紅曲發(fā)酵物磨成粉末狀并 進(jìn)行分析是否符合一成分比例條件(步驟150)，此一成分比例條件是指該組 合物包含一莫那可林(monacolins)、 一抗發(fā)炎物質(zhì)與一抗氧化物質(zhì)，此三 種物質(zhì)的有效重量比例范圍為10: 4: l至90: 2: 1，在這范圍中，就確認(rèn) 是符合再該成分比例條件之中，若不是則結(jié)束本流程，因?yàn)槭鞘〉闹苽?過程；若確認(rèn)在范圍中，更有步驟A與步驟B,請(qǐng)請(qǐng)參閱圖UB與圖UC, 步驟A之后，將制備完成的該紅曲發(fā)酵物的粉末以一特定比例添加入可食 用的飲料中制備成口服劑(步驟160),此一特定比例是指在1. 0-4. 0°/。之間。
步驟B之后，將制備完成的該紅曲發(fā)酵物的粉末填充至一膠嚢中或是 制備成一錠劑(步驟170)。
本實(shí)施制備方式可通過傳統(tǒng)曲盤進(jìn)行培養(yǎng)，制備較小型的曲盤，長(zhǎng)、 寬、高各約20 x 30 x 5 cm;培養(yǎng)時(shí)底層放置曲布包裹固態(tài)基質(zhì)，此有 利于翻曲，同時(shí)可以保持濕度；上層再蓋上一層曲布以隔絕外界的污染， 同時(shí)并可保持發(fā)酵過程紅曲發(fā)酵物的濕度。整個(gè)培養(yǎng)過程于開放式空間進(jìn) 行，是故，通過本制備方式將可以實(shí)施本發(fā)明的組合物，并可應(yīng)用在錠劑、 膠嚢劑、顆粒劑、口服劑等。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式 上的限制，雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，然而并非用以限定本發(fā) 明，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利 用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容作出些許更動(dòng)或修飾為等同變化的等效實(shí)施例，但 凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所 作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，如其他利用含有莫那可林 (Monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)來治療阿茲海默癥的任何物品均 仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1. 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，從紅曲發(fā)酵物中進(jìn)行提煉而成，其包含莫那可林(monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中每1克的組合物中該莫那可林(monacolins)的含量大于100jug。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中每1克的組合物中該抗氧化物質(zhì)的含量大于10)ig。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中該抗氧化物質(zhì)為紅曲抗氧化酸(dimerumic acid)、單寧(tannin)、 酚化合物(phenol)、單元不飽和月旨肪酸(mo訓(xùn)nsaturated fatty acid)、 超氧歧化酶與固醇類(sterols)或超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase; S0D)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中每1克的組合物中該抗發(fā)炎物質(zhì)的含量大于40j^g。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中該抗發(fā)炎物質(zhì)為Y-胺基丁酸、(Y -aminobutyric acid， GABA)、莫 那斯辛(monascin)、 安卡分拉命(ankaf lavin)、 路柏龐克坦汀 (rubropunctatin)、 莫那其斤克布4木(monascorburin) 、 3各柏龐克胺 (rubropunctamine)、莫刃卩-斤克布胺(monascorburamine) 、 ^山》各莫刃卩其斤辛A (xanthomonasin A)、仙洛莫那斯辛B (xanthomonasin B) 、 (+)-莫那斯庫(kù) 糜酸((+)-monascumic acid)或(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-畫ascuraic acid)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中該莫那可林(Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該抗氧化物質(zhì)的重量比 為90 - 10: 4 - 2: 1。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中該莫那可林(Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該抗氧化物質(zhì)的重量比 為40: 2: 1。
9. 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其為紅曲發(fā)酵物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中該組合物包含莫那可林(monacolins)與抗發(fā)炎物質(zhì)。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中每1克組合物中該莫那可林(monacolins)含量大于200jag。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在 于其中每1克組合物中該抗發(fā)炎物質(zhì)含量大于60"g。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征在于其中該抗發(fā)炎物質(zhì)為Y-胺基丁酸、(y-aminobutyric acid， GABA)、莫 那其斤辛(monascin)、 安卡分^立命(ankaf lavin) 、 ^各^白龐克iE打 (rubropunctat in)、 莫刃卩其斤克布4木(monascorbur in) 、 3各#白龐克胺 (rubropimctamine)、莫刃卩其斤克布胺(monascorburamine) 、 ^山〉各莫刃卩其斤辛A (xanthomonasin A)、仙洛莫那斯辛B (xanthomonasin B) 、 (+)-莫那斯庫(kù) 糜酸((+)-monascumic acid)或(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid)。
14. 一種治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法，其有效成分的制 備方法包含下列步驟清潔一米種并在一高壓高溫環(huán)境下進(jìn)行滅菌；將一紅曲菌株接種至一種菌培養(yǎng)基中并在一第一特定溫度濕度環(huán)境、 一特定震蕩環(huán)境與一第一特定時(shí)限進(jìn)行接菌；在該第一特定溫度環(huán)境中進(jìn)行攪拌該種菌培養(yǎng)基并在一第二特定時(shí)限內(nèi)持續(xù)提供一特定比例的水分；在一第三特定時(shí)限內(nèi)與該第 一特定溫度環(huán)境中每隔一 固定時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)攪拌來達(dá)成后熟；收取完成發(fā)酵后的一紅曲發(fā)酵物并在一第四特定期間內(nèi)保持一第二特 定溫度將其進(jìn)行干燥化；以及將已干燥的該紅曲發(fā)酵物磨成粉末狀并進(jìn)行分析是否符合一成分比例 條件。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該米種為一在來米(Oryza satiVa L. , Japonica)。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該高壓高溫環(huán)境是指在ln。C以及l(fā) kg/cW的壓力環(huán)境中。
17. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該種菌培養(yǎng)基其組成為至少5g該米種浸泡于蒸餾無菌水 100ml中。
18. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第一特定溫度保持在30°C。
19. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該特定震蕩環(huán)境是保持在10 0 - 15 0 r pm之間。
20. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第一特定時(shí)限是指化小時(shí)之后。
21. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第二特定時(shí)限是指在72小時(shí)之內(nèi)。
22. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該特定比例的水分是指20%的蒸餾無菌水。
23. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第三特定時(shí)限內(nèi)是指在96小時(shí)之內(nèi)。
24. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該固定時(shí)間是指每IO個(gè)小時(shí)。
25. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第四特定期間是指在24小時(shí)之內(nèi)。
26. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該第二特定溫度是指保持在55°C - 6(TC之間。
27. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該成分比例條件是指該組合物包含莫那可林 (monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)，此三種物質(zhì)的重量比為90-10: 4-2: 1。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于其中該莫那可林(Monacolins)、該抗發(fā)炎物質(zhì)與該抗氧化物質(zhì) 的重量比為40: 2: 1。
29.其特征在于該成分比例條件是指該組i物包;該組合物質(zhì)量的至少0. 01%的莫那可林(monacolins)、至少0. 004 %抗發(fā)炎物質(zhì)、至少0.001%抗氧化 物質(zhì)。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥組合物的制備方法， 其特征在于還包括將粉碎的紅曲發(fā)酵物里加入藥劑學(xué)常用輔料，制備成 膠嚢劑、4t劑、口服劑、顆粒劑。
31 、紅曲發(fā)酵物在制備治療阿茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。
32、 如權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其特征在于，其中紅曲發(fā)酵物中包含 至少0. 01 。/。質(zhì)量百分比的莫那可林(monacolins);以及至少0. 004 %質(zhì)量百分比的抗發(fā)炎物質(zhì)。
33、 如權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其特征在于，其中紅曲發(fā)酵物中還包含至少0. 001%質(zhì)量百分比的抗氧化物質(zhì)。
34、 如權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其特征在于，該抗氧化物質(zhì)為紅曲抗 氧化酸(dimer腦ic acid)、單寧(tannin)、酚化合物(phenol)、單元不飽 和脂肪酸(monounsaturated fatty acid)、超氧歧化酶與固醇類(sterols) 或超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase; SOD)。
35、 如權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其特征在于，該抗發(fā)炎物質(zhì)為y-胺 基丁酸、(y -aminobutyric acid, GABA)、莫那斯辛(monascin)、安卡分 拉命(ankaf lavin)、路柏龐克坦汀(rubropunctat in)、莫那斯克布林(monascorburin) 、 3各柏龐克胺 (rubropunctamine)、 莫那其斤克布胺 (monascorburamine) 、 ^f山〉各莫刃卩4斤辛A (xanthomonasin A) 、 j山〉各莫刃P其斤辛 B (xanthomonasin B) 、 (+)_莫那斯庫(kù)糜酸 ((+)-monascumic acid)或(_) -莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid)。
36. —種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其包含包含如下有效成分 的紅曲發(fā)酵物至少0. 01。/o質(zhì)量百分比的莫那可林(monacolins); 至少0. 001%質(zhì)量百分比的抗氧化物質(zhì)；以及 至少0. 004 %質(zhì)量百分比的抗發(fā)炎物質(zhì)。
37. 根據(jù)權(quán)利要求1項(xiàng)所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征 在于其中該抗氧化物質(zhì)為紅曲抗氧化酸(dimerumic acid)、單寧(tannin)、 酚化合物(phenol)、單元不飽和月旨肪酸(mo謂nsaturated fatty acid)、 超氧歧化酶與固醇類(sterols) 或超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase; SOD)。
38. 根據(jù)權(quán)利要求1項(xiàng)所述的治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物，其特征 在于其中該抗發(fā)炎物質(zhì)為Y-胺基丁酸、(Y-aminobutyric acid, GABA)、 莫那斯辛(monascin)、安卡分拉命(ankaflavin)、路柏龐克坦汀 (rubropunctatin)、 莫刃卩其斤克布4木(monascorburin) 、 3各^白龐克胺 (rubropunctamine)、莫刃卩其斤克布胺(monascorburamine) 、 ^f山〉各莫刃卩其斤辛A (xanthomonasin A)、仙洛莫那斯辛B (xanthomonasin B) 、 (+)-莫那斯庫(kù) 糜酸 ((+)-monascumic acid)或(-)-莫那斯庫(kù)糜酸((-)-monascumic acid)。
全文摘要
本發(fā)明公開一種治療與預(yù)防阿茲海默癥的組合物及其制備方法，其為一包含莫那可林(monacolins)、抗發(fā)炎物質(zhì)與抗氧化物質(zhì)的組合物。利用包含此三類物質(zhì)的組合物來治療與預(yù)防阿茲海默癥，并通過本發(fā)明的制備方法加以實(shí)施，可達(dá)到確實(shí)治療與預(yù)防以及不會(huì)產(chǎn)生明顯毒副作用的功效。
文檔編號(hào)A61K36/06GK101468046SQ20071030612
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者李俊霖, 潘子明 申請(qǐng)人:晨暉生物科技股份有限公司