專利名稱：一種含蜂膠的藥物組合物、制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物、制備方法及其用途，具體的說(shuō)涉及一種由蜂膠、當(dāng)歸、川芎配伍，經(jīng)提取有效部位制備得到的新的藥物組合物、其制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
為蜜蜂科昆蟲意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物。性味苦，辛，寒。可抗菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、加速組織愈合。文獻(xiàn)報(bào)道，蜂膠提取物具有增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能的作用；具有增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能和小鼠NK細(xì)胞活性的作用，表明蜂膠能增強(qiáng)小鼠免疫功能(邵燕，浦錦寶.蜂膠調(diào)節(jié)小鼠免疫功能實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，15(2)90；李淑華，于曉紅，于英君，等.蜂膠對(duì)免疫功能低下模型鼠細(xì)胞免疫功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2001，29(3)39)蜂膠其性味苦、寒，需配辛溫之物以抑其苦寒之性；當(dāng)歸，甘辛性溫，質(zhì)潤(rùn)而膩；川芎，辛溫而燥。當(dāng)歸偏于養(yǎng)血和血，川芎偏于行血散血，二藥每相使配對(duì)同用，可增強(qiáng)活血祛瘀、養(yǎng)血和血之功。此外，二藥潤(rùn)燥相宜，當(dāng)歸之潤(rùn)可制川芎辛燥，川芎辛燥又防當(dāng)歸之膩，祛瘀而不耗傷氣血，養(yǎng)血而不致血壅氣滯。全方配伍，可抑蜂膠寒苦之性，又可使歸、芎之性互相協(xié)調(diào)，不傷氣血。
本組合物的特點(diǎn)蜂膠配以當(dāng)歸、川芎等具有活血、行氣作用的中藥，使本品具有祛邪、化瘀，而且又可以調(diào)整體內(nèi)正氣的作用，從而達(dá)到提高機(jī)體免疫力的作用，不同于市場(chǎng)現(xiàn)有的產(chǎn)品。因此，與市場(chǎng)現(xiàn)有的蜂膠類產(chǎn)品比較，本品具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的藥物組合物，具體的說(shuō)是一種由蜂膠、當(dāng)歸、川芎配伍，經(jīng)提取有效部位制備得到的新的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供一種上述藥物組合物在制備提高人體免疫力藥物方面的用途。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下措施達(dá)到一種含蜂膠的藥物組合物，其特征在于主要由下列重量份的原料組成蜂膠5～60，當(dāng)歸5～60，川芎5～60；優(yōu)選蜂膠25，當(dāng)歸50，川芎25。
上述的藥物組合物加上輔料后可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制成任何一種適宜的藥物制劑。如散劑、口服液、顆粒劑、片劑或膠囊劑，優(yōu)選為軟膠囊、顆粒劑、口服液、泡騰片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片或液體硬膠囊，最優(yōu)選為軟膠囊。
一種制備上述的藥物組合物的方法，包括如下步驟A、取當(dāng)歸5～60重量份，川芎5～60重量份，提取揮發(fā)油，揮發(fā)油備用；B、取提取揮發(fā)油后的藥渣，加水提取，提取液離心、濃縮，得濃縮液；C、取步驟B提取得到的濃縮液，干燥，得干燥物，備用；D、取步驟A、C得到的物質(zhì)以及蜂膠，經(jīng)后處理，得組合物的成品制劑；上述藥物組合物在制備提高人體免疫力藥物方面的用途。
本發(fā)明的目的具體可以以下措施來(lái)達(dá)到本發(fā)明所涉及的藥物組合物，其原料藥包括蜂膠、當(dāng)歸、川芎，其重量配比為蜂膠5～60，當(dāng)歸5～60，川芎5～60。制備該組合物時(shí)，先提取當(dāng)歸、川芎中的揮發(fā)油，殘?jiān)俳?jīng)提取、濃縮，得提取物，將揮發(fā)油和提取物分別或混合處理，得到該藥物組合物的各種劑型。該藥物組合物具有抗提高機(jī)體免疫力的作用。
蜂膠，為蜜蜂科昆蟲意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物；當(dāng)歸，為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的根；川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxion Hort.的根。
上述藥物組合在制備時(shí)，先提取當(dāng)歸、川芎的揮發(fā)油，將揮發(fā)油提取后的殘?jiān)俳?jīng)提取，提取液濃縮，得濃縮的提取液，將揮發(fā)油與濃縮的提取液分別或混合處理，制備成該藥物組合物的各種劑型。其具體過(guò)程包括如下步驟
A、取當(dāng)歸5～60重量份，川芎5～60重量份，以CO2超臨界萃取法萃取其中的揮發(fā)油，萃取壓力10～50MPa，解析壓力4～6MPa，萃取溫度20℃～45℃，萃取時(shí)間2h～8h，得揮發(fā)油，殘?jiān)鼈溆谩?br> B、取提取揮發(fā)油后的當(dāng)歸、川芎藥渣，加水提取1～3次，每次0.5～3小時(shí)，提取液濃縮至每ml含1～4g藥材時(shí)高速離心，離心液繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.35(60℃)，得提取液的濃縮液。
C、取步驟B所得的濃縮液，干燥，得藥物的干提取物。
D、將步驟A提得的揮發(fā)油和步驟C的提取物、蜂膠混合，經(jīng)后處理，得組合物的成品制劑。
E、上述步驟D中成品制劑的劑型為藥劑學(xué)上可接受的劑型，如軟膠囊、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、泡騰片、分散片、散劑、咀嚼片、口腔崩解片、液體硬膠囊等，優(yōu)選為膠囊劑、軟膠囊劑；最優(yōu)選為軟膠囊劑。
本發(fā)明最優(yōu)選的藥物組合物軟膠囊的規(guī)格為0.5g/粒，0.6g/粒，1g/粒?？诜淮?粒，一日3次，或遵醫(yī)囑。
本發(fā)明所述藥物組合物具有提高免疫力的作用，可用于治療免疫功能低下癥。
本組合物中蜂膠配以當(dāng)歸、川芎等具有活血、行氣作用的中藥，使本品具有祛邪、化瘀，而且又可以調(diào)整體內(nèi)正氣的作用，從而達(dá)到提高機(jī)體免疫力的作用，不同于市場(chǎng)現(xiàn)有的產(chǎn)品。因此，與市場(chǎng)現(xiàn)有的蜂膠類產(chǎn)品比較，本品具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1取蜂膠2500g，粉碎，備用；再取當(dāng)歸5000g，防川芎2500g，置CO2超臨界流體萃取器萃取，溫度30℃，壓力30MPa，萃取3小時(shí)，6MPa解壓，得揮發(fā)油，備用。提取揮發(fā)油后的藥渣，加10倍量水，煎煮2次，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至每1毫升含3g原生藥的藥液，高速離心；離心液繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(60℃)，噴霧干燥，得棕黃色干燥細(xì)粉，與蜂膠粉、上述揮發(fā)油混合，加入適量糊精、淀粉、硬脂酸鎂，至總量4000g，混勻，制粒，壓片，封裝，即得。
實(shí)施例2取蜂膠2500g，粉碎，備用；再取當(dāng)歸5000g，防川芎2500g，置CO2超臨界流體萃取器萃取，溫度30℃，壓力30MPa，萃取3小時(shí)，6MPa解壓，得揮發(fā)油，備用。提取揮發(fā)油后的藥渣，加10倍量水，煎煮2次，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至每1毫升含3g原生藥的藥液，高速離心；離心液繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(60℃)，噴霧干燥，得棕黃色干燥細(xì)粉，與蜂膠粉、上述揮發(fā)油混合，加入適量糊精、淀粉，至總量4000g，混勻，裝填于空心膠囊，即得。
實(shí)施例3取蜂膠2500g，粉碎，備用；再取當(dāng)歸5000g，防川芎2500g，置CO2超臨界流體萃取器萃取，溫度30℃，壓力30MPa，萃取3小時(shí)，6MPa解壓，得揮發(fā)油，備用。提取揮發(fā)油后的藥渣，加10倍量水，煎煮2次，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至每1毫升含3g原生藥的藥液，高速離心；離心液繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(60℃)，噴霧干燥，得棕黃色干燥細(xì)粉，與蜂膠粉、上述揮發(fā)油混合，加入適量聚乙二醇-400，至總量6000g，于50～60℃混勻，以軟膠囊制備技術(shù)制成0.6g/粒的軟膠囊，即得。
本藥物組合的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究將實(shí)施例3所得的軟膠囊，經(jīng)口給予小鼠不同劑量(300mg/kg.bw，600mg/kg.bw，1800mg/kg.bw)1個(gè)月，另設(shè)0mg/kg.bw組以食用油代替受試樣品。
實(shí)驗(yàn)方法按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)之增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法進(jìn)行1)、ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)——MTT法各劑量組動(dòng)物連續(xù)灌胃1個(gè)月后，頸椎脫臼法處死動(dòng)物，無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，制成單個(gè)細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾，用Hank’s液洗2次，每次離心10min(1000r/min)，然后將細(xì)胞懸浮于1mL RPMI640完全培養(yǎng)液中，臺(tái)酚藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(均在95％以上)，用RPMI640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106個(gè)/mL。將細(xì)胞懸浮液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液，另一孔作為對(duì)照，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。將溶解液移入96孔培養(yǎng)板中，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)570nm下測(cè)定各樣品管光密度值。
由表1結(jié)果可見，1800mg/kg.bw組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值顯著高于0mg/kg.bw組。
表1 軟膠囊對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

2)、血清溶血素測(cè)定——半數(shù)溶血值(HC50)各劑量組動(dòng)物連續(xù)灌胃1個(gè)月后，制備2％(v/v)的SRBC懸液，每只鼠腹腔注射0.2mL進(jìn)行免疫，4d后摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置1h，2000r/min離心10min，分離并收集血清。血清200倍稀釋后，按檢驗(yàn)方法測(cè)定樣品管及SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示。
由表2結(jié)果可見，1800mg/kg.bw組HC50顯著高于0mg/kg.bw組。
表2 軟膠囊對(duì)小鼠HC50的影響


3)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)——半體內(nèi)法各劑量組動(dòng)物連續(xù)灌胃1個(gè)月，制備20％(v/v)的雞紅細(xì)胞懸浮液，每只鼠腹腔注射1mL，間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠，將其仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移置37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育30min，然后，于生理鹽水中漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸緩沖液染色3min，再用蒸餾水漂洗晾干，封片，光鏡下觀察。
由表3結(jié)果可見，600mg/kg.bw、1800mg/kg.bw組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞百分率和吞噬指數(shù)均高于0mg/kg.bw組。

4)、NK細(xì)胞活性測(cè)定——乳酸脫氫酶測(cè)定法各劑量組動(dòng)物連續(xù)灌胃1個(gè)月后，頸椎脫臼法處死下鼠，無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，制成單個(gè)細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾，用Hank’s液洗2次，每次離心10min(1000r/min)，棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0.5mL滅菌水20秒，裂解紅細(xì)胞后再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mL Hank’s液，離心10min(1000r/min)，用1mL含10％小牛血清RPMI 1640完全培養(yǎng)液重懸，用1％冰乙酸稀釋后計(jì)數(shù)，臺(tái)酚藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(均在95％以上)，用RPMI 1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/mL。
實(shí)驗(yàn)前24h將靶細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞)傳代培養(yǎng)，應(yīng)用前以Hank’s液洗3次，用RPMI 1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/mL。取YAC-1細(xì)胞和脾細(xì)胞各100μl(效靶比50∶1)加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中，YAC-1細(xì)胞自然釋放孔加YAC-1細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μl，YAC-1細(xì)胞最大釋放孔加YAC-1細(xì)胞和1％NP40各100μL，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)平行孔，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清液100μL置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100μL，反應(yīng)8min，每孔加入1mol/L的HCl 30μL，在酶標(biāo)儀490nm處測(cè)定光密度值。
由表4結(jié)果可見，600mg/kg.bw組小鼠NK細(xì)胞活性顯著高于0mg/kg.bw組。
表4 軟膠囊對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響


由以上實(shí)驗(yàn)可見，本組合物具有增強(qiáng)免疫力功能。
本藥物組合毒性實(shí)驗(yàn)(1)本組合物的軟膠囊經(jīng)雌、雄小鼠口服，急性毒性劑量大于22.4g/kg.bw，屬于無(wú)毒類；(2)本組合物的軟膠囊連續(xù)給予大鼠30天，劑量分別為1800mg/kg.bw，3900mg/kg.bw，6000mg/kg.bw，受試動(dòng)物一般情況良好，體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數(shù)均無(wú)異常改變；血液學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)結(jié)果顯示，各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍；各臟器病理組織學(xué)檢查均未見有關(guān)的病理改變。
權(quán)利要求
1.一種含蜂膠的藥物組合物，其特征在于主要由下列重量份的原料組成蜂膠5～60，當(dāng)歸5～60，川芎5～60。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于蜂膠、當(dāng)歸和川芎的重量配比為蜂膠25，當(dāng)歸50，川芎25。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于加上輔料后可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制成任何一種適宜的藥物制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為散劑、口服液、顆粒劑、片劑或膠囊劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為軟膠囊、顆粒劑、口服液、泡騰片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片或液體硬膠囊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為軟膠囊。
7.一種制備權(quán)利要求1所述的藥物組合物的方法，包括如下步驟A、取當(dāng)歸5～60重量份，川芎5～60重量份，提取揮發(fā)油，揮發(fā)油備用；B、取提取揮發(fā)油后的藥渣，加水提取，提取液離心、濃縮，得濃縮液；C、取步驟B提取得到的濃縮液，干燥，得干燥物，備用；D、取步驟A、C得到的物質(zhì)以及蜂膠，經(jīng)后處理，得組合物的成品制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于包括如下步驟A、取當(dāng)歸5～60重量份，川芎5～60重量份，以CO2超臨界萃取法萃取其中的揮發(fā)油，萃取壓力10～50MPa，解析壓力4～6MPa，萃取溫度20℃～45℃，萃取時(shí)間2h～8h，得揮發(fā)油，殘?jiān)鼈溆茫籅、取提取揮發(fā)油后的當(dāng)歸、川芎藥渣，加水提取1～3次，每次0.5～3小時(shí)，提取液濃縮至每ml含1～4g藥材時(shí)高速離心，離心液繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.35(60℃)，得提取液的濃縮液；C、取步驟B所得的濃縮液，干燥，得藥物的干提取物；D、將步驟A提得的揮發(fā)油和步驟C的提取物、蜂膠混合，經(jīng)后處理，得組合物的成品制劑。
9.上述藥物組合物在制備提高人體免疫力藥物方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含蜂膠的藥物組合物，主要由下列重量份的原料組成蜂膠5～60，當(dāng)歸5～60，川芎5～60，以及這種藥物組合物的一種制備方法，步驟包括先取當(dāng)歸5～60重量份，川芎5～60重量份，提取揮發(fā)油，揮發(fā)油備用；再取提取揮發(fā)油后的藥渣，加水提取，提取液離心、濃縮，得濃縮液；取步驟B提取得到的濃縮液，干燥，得干燥物，備用；取蜂膠、揮發(fā)油和干燥物經(jīng)后處理，得組合物的成品制劑。上述藥物組合物在制備提高人體免疫力藥物方面的用途。本品具有祛邪、化瘀，而且又可以調(diào)整體內(nèi)正氣的作用，從而達(dá)到提高機(jī)體免疫力的作用。
文檔編號(hào)A61K9/20GK1951409SQ200610096429
公開日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2006年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月26日
發(fā)明者姚仲青, 李文林 申請(qǐng)人:姚仲青, 李文林