專利名稱：古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素的醫(yī)藥新用途，尤其涉及古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素在制備預防和治療風濕、類風濕性關節(jié)炎藥物中的應用。
背景技術：
風濕性疾病是一個世界性疾病，可以發(fā)生在不同的年齡、性別、種族、氣候地理環(huán)境及社會人群中。世界上大約每7個人就有1個風濕性病患者，幾乎每個人在一生的某個時期出現(xiàn)個風濕性疾病的癥狀。風濕性疾病的癥狀多種多樣，遷延反復，可以持續(xù)幾天或數(shù)年，可以無不良影響，也可以造成嚴重殘疾。類風濕關節(jié)炎是一種自身免疫性疾病，是以慢性進行性關節(jié)滑膜及關節(jié)軟骨損壞為特征的炎癥性疾病，幾乎影響世界人口的1％。風濕性關節(jié)炎是一種多發(fā)性常見病，其發(fā)病與機體免疫系統(tǒng)的多種細胞功能及其分泌的細胞因子失調密切相關。治療自身免疫性疾病的最佳方案是幫助機體恢復應有的自身免疫耐受狀態(tài)，但目前人工誘導免疫耐受的方法尚不成熟，這一目標尚難實現(xiàn)。風濕性疾病的治療方法有多種，其中藥物治療占有重要的地位。但目前治療風濕性疾病的藥物種類不多，更缺乏特效藥物。而且，治療風濕性疾病的藥物不良反應較多。越來越多的臨床數(shù)據(jù)表明中醫(yī)藥治療風濕性、類風濕性關節(jié)炎具有良好療效。
近年來，中藥的抗炎免疫作用己受到廣泛的關注。臨床及實驗證實很多中藥具有抗風濕性疾病的作用，通過止痛、活血化瘀對風濕病起了緩解病情作用，但不能達到改變病程的作用，而且還有一定的毒性。我國中醫(yī)藥學具有悠久的歷史，中醫(yī)學者運用經(jīng)驗方治療風濕性、類風濕性關節(jié)炎的趨勢在不斷上升。在這些中草藥有效成分中，推測極有可能存在治療風濕性疾病的活性物質，所以，從天然產(chǎn)物中篩選具有抗風濕性疾病活性的先導化合物不失為一理想途徑；進而通過進行先導化合物的結構修飾及全合成，再從一系列衍生化合物中篩選活性較強的單體，并結合抗風濕性疾病活性的構效關系研究，最終發(fā)現(xiàn)具有臨床應用前景的藥物。
金果欖為防己科青牛膽屬植物青牛膽(Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep.)或金果欖(Tinospora capillipes Gagnep.)的干燥塊根，又名九牛膽、金銀袋(廣西)、地苦膽(四川)、九牛子(江西)、地蛋(湖南)。為中國藥典歷版所收載，有清熱解毒、利咽止痛之功效。用于咽喉腫痛，癰疽疔毒，泄瀉，痢疾，脘腹熱痛。(中國藥典(一部.2005年版)150-151.北京化學工業(yè)出版社)。
金果欖膠囊經(jīng)臨床驗證270例，其中上呼吸道感染76例，急性扁桃腺炎10例，咽喉炎78例，急性胃腸炎24例，肺炎40例，氣管炎42例，治愈136例，占50.4％；有效120例，占44.4％；無效14例，占5.25％；總有效率為94.8％。金果欖酒精浸物外敷治療輸液性靜脈炎78例，治愈64例，占82.2％；好轉12例，占15.2％；無效2例。占2.6％；總有效率為97.4％。與對照組硫酸鎂相比，治愈率和有效率經(jīng)統(tǒng)計學處理均有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05)。
雖然金果欖有如此好的臨床應用效果，但由于對其化學成分研究不深入，藥理篩選不足，導致活性成分不明確。我們通過對金果欖藥材進行系統(tǒng)的化學成分分離、純化、結構鑒定，發(fā)現(xiàn)金果欖中主要含有大量的二萜內酯及原小檗堿型生物堿，進一步的藥理活性篩選證明，二萜內酯中主要為古倫賓(columbin)、異古倫賓(isocolumbin)、去氧黃藤苦素(fibleucin)，是其抗風濕性疾病的活性成分。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提出古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素在制造用于預防和治療風濕性、類風濕性關節(jié)炎藥物中的應用。
本發(fā)明所說的古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素的結構式為 古倫賓結構式異古倫賓結構式 去氧黃藤苦素結構式本發(fā)明提出的古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素可從金果欖藥材或其他植物中提取，經(jīng)分離純化得到，也可以是經(jīng)化學合成的方法制備得到。
實驗研究證明，古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素之一種或幾種的組合具有明顯的抗風濕性疾病的作用。
古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素一種或向種組合為活性成分，加上一種或多種藥學上可以接受的載體可以制備成用于臨床治療的藥物組合物，用于治療人體正氣不足，風寒濕燥等外邪侵襲引起的肢體關節(jié)肌肉疼痛、重著、麻木、腫脹、屈伸不利、甚則關節(jié)變形，或累及臟腑為特征的一類病癥，或用于治療以關節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性全身性自身免疫性結締組織疾病疾病，包括治療風濕性和類風濕性關節(jié)炎。
上文所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等；填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。所述藥物中，上述活性成分的重量含量為1-99％。
古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素的制劑可以通過口服，經(jīng)皮，鼻吸入、直腸、腸胃外、靜脈或肌肉給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、丸劑、膠囊等，或制成液體制劑如水或油懸浮劑，或其它液體制劑如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。優(yōu)選的形式是片劑、包衣片劑、膠囊、栓劑、鼻噴霧劑、貼劑和注射劑。
下面的實施例可以使本專業(yè)技術人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
具體實施例方式
實施例1金果欖干燥藥材2.5kg，用95％溶液50升回流提取2次，每次2小時，合并兩次提取液，減壓濃縮得到浸膏120g，用2升水分散后，以6L氯仿分三次萃??；減壓濃縮萃取部位，得到粗品20g，將粗品用500毫升甲醇加熱溶解，趁熱過濾，濾液置4℃冰箱中冷藏過夜，析出古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素組合物結晶，濾紙過濾，干燥，得到組合物12g，取組合物10g，與50g硅膠混合拌樣，加到已裝好的硅膠柱頂端，以石油醚∶氯仿(20∶1～5∶1)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤，合并含成分相同的洗脫液，減壓濃縮至干，得到古倫賓單體200mg，異古倫賓3.7g，去氧黃藤苦素3.0g。
實施例2片劑活性成分(三種單體或組合物)17g乳糖200g玉米淀粉50g硬脂酸鎂3g制成1000片制備方法將活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤制成軟材，把濕潤后的混合物制粒，過20目篩，80℃烘干，加入硬脂酸鎂，再過篩，然后將混合物壓片，每片重270mg，活性成分含量為17mg。
實施例3輸液活性成分2g氯化鈉 9g注射用水100000ml制成1000瓶制備方法將活性成分和氯化鈉溶解于100000ml的注射用水中，加0.01％活性炭吸附，中間體檢測，0.45um膜過濾，分裝，100ml/瓶，滅菌，檢驗即得。
實施例4古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素對大鼠佐劑性關節(jié)炎防治作用。
1 實驗動物SD大鼠，雌雄兼用，體重180-220g。
2.實驗模型和測試方法取大鼠80只，隨機分成8組，用排水法測定正常狀態(tài)下右關節(jié)以下的溶積(ml)，然后于每鼠左后足踝皮內注射0.1ml弗氏完全佐劑致炎，分別于致炎后6、12、18、24、48h同法測量致炎足的容積，以致炎前后差值表示其腫脹度，以觀察藥物對大鼠佐劑性關節(jié)炎原發(fā)病變的影響。并分別于致炎后的第12、15、19d同法測定非致炎足(右足)的容積變化，以觀察藥物對大鼠佐劑性關節(jié)炎大鼠繼發(fā)性炎癥腫脹的影響。致炎前3d按表6所示的劑量灌胃給藥，對照組給予等容量的生理鹽水，每日一次，連續(xù)給藥至取材之日的前一天。
大鼠致炎19d后處死，在非致炎側踝關節(jié)上方0.5cm處摘取腫脹足爪，縱向切開，放入存有5ml生理鹽水的試管中，4℃浸泡過夜，離心取上清，-20℃保存待測。PGE2的含量測定采用放免法，按試劑盒說明書操作。
3 統(tǒng)計分析全部實驗結果均以均數(shù)±標準誤表示。用student t-檢驗比較兩組間數(shù)據(jù)的顯著性差異，P＜0.05，表示差異有顯著性意義。
4 試驗結果表1.古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素對大鼠佐劑性關節(jié)炎原發(fā)性炎癥的影響(n＝10)


a與空白對照比較，p＜0.05.b與空白對照比較，p＜0.01.
結果表明，與對照組比較，古倫賓高劑量組，異古倫賓高劑量組，去氧黃藤苦素高劑量組在致炎后6-48h均有顯著抑制大鼠佐劑性關節(jié)炎原發(fā)足腫脹的作用。
表2.古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素對大鼠佐劑性關節(jié)炎繼發(fā)性足腫脹的影響(n＝10)

a與空白對照比較，p＜0.05. b與空白對照比較，p＜0.01.
結果表明，對于大鼠佐劑性關節(jié)炎繼發(fā)性關節(jié)炎的足腫脹，與對照組比較，古倫賓高劑量組，異古倫賓高劑量組，去氧黃藤苦素高低劑量組在11d，15d，19d均有顯著抑制作用。
表3.古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素對大鼠關節(jié)浸液內PEG2的影響(n＝10)

a與空白對照比較，p＜0.05.
結果表明，對于治療19d后的非致炎足關節(jié)液中的PEG2的含量古倫賓高劑量組，異古倫賓高劑量組，去氧黃藤苦素高低劑量均有顯著下調作用。
實施例5
古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素對II型膠原(CIA)誘導的關節(jié)炎的抑制作用1實驗動物Wistar大鼠，130-150g。
2.模型復制和動物分組隨機從130只大鼠中選10只作為正常對照，其余用于模型復制。參照文獻的方法配制成II型膠原乳劑，沿大鼠背部及尾根部分五點皮內注射，每點0.05ml，15d后分兩點皮內激發(fā)注射。正常對照組予以9.0g/L氯化鈉注射液同法注射。初次免疫30d后參照關節(jié)炎指數(shù)評分標準對模型復制效果進行評估，評分達6分以上的大鼠(約50％)被用于繼續(xù)實驗。將模型復制成功的大鼠隨機分為7組，每組10只，分別作為CIA模型組和給藥組。給藥劑量按下表并預先用丙二醇配制成注射液。3天用藥1次。
3取材大鼠稱質量，用20ml/L戊巴比妥鈉2.5ml/kg腹腔麻醉，腹主動脈采血，常規(guī)分離血清，用于檢測細胞因子；大鼠仰位固定，打開膝關節(jié)腔，用9.0g/L氯化鈉注射液1ml沖洗關節(jié)腔，收集關節(jié)腔液，用于檢測細胞因子。
4細胞因子的檢測按照ELISA試劑盒公司提供的說明進行操作。
5統(tǒng)計學方法用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，組間差異采用t檢驗，結果用均值±方差表示。
6試驗結果表4各組外周血和關節(jié)腔中TNFα含量

a與模型組比較，p＜0.01.b與空白對照比較，p＜0.05.
CIA模型組中，外周血和關節(jié)腔內的TNFα含量最高，經(jīng)給藥治療后，大鼠外周血和關節(jié)腔內TNFα水平明顯下降，表明藥物能降低TNFα水平(P＜0.01)。
表5各組外周血和關節(jié)腔中IL-6含量

a與模型組比較，p＜0.01.b與空白對照比較，p＜0.05.
CIA模型組中，外周血和關節(jié)腔內的IL-6含量最高，經(jīng)給藥治療后，大鼠外周血和關節(jié)腔內IL-6水平明顯下降，表明藥物能降低IL-6水平(P＜0.01)。
表6各組外周血和關節(jié)腔中IL-10含量

a與模型組比較，p＜0.01.b與空白對照比較，p＜0.05.
CIA模型組中，外周血和關節(jié)腔內的IL-10含量顯著降低，經(jīng)給藥治療后，大鼠外周血和關節(jié)腔內IL-10水平明顯上升，表明藥物能提高IL-10水平(P＜0.01)。
權利要求
1.古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素一種或幾種的組合物在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用，所述古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素為從植物中分離純化得到的化合物或化學合成的化合物，關節(jié)炎包括風濕性和類風濕性關節(jié)炎。
2.一種用于治療關節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于含有治療有效量的古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素及藥學上可接受的載體。
3.根據(jù)權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其劑型為注射劑，片劑，丸劑，膠囊，溶液，懸浮劑，乳劑，鼻噴霧劑，貼劑之一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體為古倫賓、異古倫賓、去氧黃藤苦素在制備治療關節(jié)炎藥物中的應用。試驗表明，上述化合物的一種或多種組合具有明顯的抗風濕性疾病的作用，因此，可以用于制備治療風濕性和類風濕性關節(jié)炎的藥物。該藥物可以是由上述化合物為活性成分，配以藥學可接受的載體組成的組合物，其中，活性成分的重量含量為1－99.5％。藥物劑型可以是片劑、包衣片、膠囊、栓劑、鼻噴霧劑、貼劑或注射劑。
文檔編號A61P19/00GK1947715SQ20061003091
公開日2007年4月18日 申請日期2006年9月7日 優(yōu)先權日2006年9月7日
發(fā)明者張衛(wèi)東, 史琪榮, 蘇娟, 張川, 沈云亨 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學