專利名稱：用碳酸酐酶活化劑治療抑郁癥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用可改善認(rèn)知和記憶的化合物來治療抑郁癥。具體地說，本發(fā)明涉及碳酸酐酶活化劑、蛋白激酶C活化劑和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子作為藥物治療抑郁癥的領(lǐng)域。本發(fā)明還涉及抑郁癥的動(dòng)物模型領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
A.抑郁癥與傳統(tǒng)療法抑郁癥是最盛行和最普遍的精神疾病形式之一，影響的個(gè)體跨越年齡與性別(Gainotti等，(2001)J.Neural Neurosurg.Psychiatr.71258-261；Wong等，(2001)Nature Rev.Neurosci.2343-351；Nestler等，(2002)Neuron 3413-25)。通常，人一生中患嚴(yán)重抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)，男性約為12％，女性約為25％(Kessler等，(1994)Arch.Gen.Psychiatry 518)。此外，初級(jí)醫(yī)療環(huán)境下，所有患者中約有5-10％存在嚴(yán)重抑郁癥，約3-5％的患者診斷為精神抑郁癥(Barrett等，(1988)Arch.Gen.Psychiatry 451100)。然而，在住院患者中，所有患者中的10-14％診斷為嚴(yán)重抑郁癥(Blackburn等，(1997)Br.J.Psychiatry 171328)。嚴(yán)重抑郁癥是尤其致殘和有害的，部分地因?yàn)樗菑?fù)發(fā)性的。第一次發(fā)作后，嚴(yán)重抑郁癥患者在2年時(shí)間內(nèi)的復(fù)發(fā)率約為40％。診斷為嚴(yán)重抑郁癥第二次發(fā)作后，其在5年時(shí)間內(nèi)的復(fù)發(fā)的發(fā)生率增加至約75％(Solomon等，(2000)Am.J.Psychiatry 157229)。
最常用三種主要類型的化合物來治療抑郁癥1)單胺氧化酶抑制劑；2)雜環(huán)抗抑郁藥；和3)選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)。已知和目前處方的抗抑郁藥存在許多副作用。單胺氧化酶抑制劑是第一類臨床使用的抗抑郁藥。單胺氧化酶抑制劑，包括異卡波肼、苯乙肼和反苯環(huán)丙胺，抑制苯乙胺的代謝以及多巴胺、5-羥色胺和去甲腎上腺素的分解代謝。與使用單胺氧化酶抑制劑有關(guān)的許多飲食限制的結(jié)果是廣泛的副作用，包括高血壓、頭痛、肌陣攣性痙攣、睡眠中斷和胃腸道并發(fā)癥，目前，單胺氧化酶抑制劑不用作一線抗抑郁藥。三環(huán)抗抑郁藥，包括丙米嗪、地昔帕明、nortrypline、阿米替林(amitrypline)、多塞平和protrypline，產(chǎn)生多種抗膽堿能副作用，困倦、直立性低血壓、心律失常和體重增加。雖然通常比單胺氧化酶抑制劑和三環(huán)抗抑郁藥溫和，SSRIs也產(chǎn)生許多副作用。例如，SSRIs，包括氟西汀、帕羅西汀、氟伏沙明、舍曲林和西酞普蘭，與胃腸道刺激、神經(jīng)過敏、精神激動(dòng)和睡眠中斷有關(guān)。
除了與傳統(tǒng)抗抑郁藥有關(guān)的許多副作用之外，這些治療還具有邊緣效力的特征。一些對(duì)抗抑郁藥治療嚴(yán)重抑郁癥的效力的研究表明，治療急性疾病或維持治療具有50-60％響應(yīng)率(Schulberg等，(1998)Arch.Gen.Psychiatry 551121)?？挂钟羲幣c安慰劑之間的平均絕對(duì)響應(yīng)率約為20-25％(Williams等，(2000)Ann.Intern.Med.132743)。因此，目前需要一種新的抗抑郁療法。
由于許多抗抑郁治療有時(shí)嚴(yán)重的不良副作用和邊緣效力，非常需要改進(jìn)的藥物，可有效治療抑郁癥而不會(huì)產(chǎn)生與治療抑郁癥相關(guān)的副作用。本發(fā)明描述了可提高或改善認(rèn)知和記憶的化合物，作為治療抑郁癥的一類新療法。
B.碳酸酐酶碳酸酐酶是一種含鋅的酶，催化二氧化碳與碳酸氫根離子間的相互轉(zhuǎn)化，它存在于整個(gè)身體中，包括腦(Sun等，(2002)Trends in Phann.Sci.23(2)；其內(nèi)容包括在此作為參考)。碳酸酐酶II在7種人同工酶中最有活力，是主要存在于紅細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和腦神經(jīng)元中的23.9kDa的酶(同上)。除了參與pH調(diào)節(jié)、碳酸氫鹽重吸收和二氧化碳放出之外，碳酸酐酶在信號(hào)處理、長(zhǎng)期突觸轉(zhuǎn)化和記憶儲(chǔ)存的注意力門控中起關(guān)鍵作用(同上)。
碳酸酐酶功能障礙與精神發(fā)育遲緩、阿爾茨海默病和認(rèn)識(shí)受損有關(guān)。相反，已表明碳酸酐酶活化可改善認(rèn)知和記憶(同上；美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)PCT/US02/13784；PCT/US03/07102；60/287,721；60/362,081；10/172,005和10/476,459；各自的內(nèi)容包括存在此作為參考)。但是，在本公開之前，尚未將碳酸酐酶介導(dǎo)的認(rèn)知和記憶的改善視作治療抑郁癥的機(jī)制。雖然最近的生物化學(xué)研究利用分離的碳酸酐酶鑒定了三種SSRIs，氟西汀、舍曲林和西酞普蘭，作為碳酸酐酶的活化劑，這些實(shí)驗(yàn)并沒有指出，碳酸酐酶活化是緩解抑郁癥癥狀的機(jī)制(Casini等，(2003)Bioorg.Med.Chem.Lett.132765-2768)。
通過信號(hào)途徑如雷諾定(ryanodine)受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑來調(diào)節(jié)碳酸酐酶的活性。例如，通過雷諾定受體的鈣的細(xì)胞內(nèi)釋放與GABA-介導(dǎo)的突觸交換有關(guān)(Sun等，(2002)Trends in Pharmacol.Sci.23(2)83-89)。CA1錐體細(xì)胞中雷諾定受體的活化，結(jié)合去極化誘導(dǎo)的鈣負(fù)荷，轉(zhuǎn)化GABA-介導(dǎo)的反應(yīng)，這種作用被雷諾定受體拮抗劑或碳酸酐酶抑制劑所阻斷(Sun等，(2000)Proc.Natl Acad.Sci USA 9712300-12305)。但是，鈣對(duì)碳酸酐酶的作用是間接的。例如，早期研究表明，鈣通過組胺或其它介質(zhì)可增強(qiáng)純化的碳酸酐酶或胃粘膜碳酸酐酶的活性(Puscas等，(1996)J.Pharmacol.Exp.Ther.2771464-1466)。此外，維拉帕米對(duì)碳酸酐酶的劑量依賴性抑制也包涵鈣對(duì)碳酸酐酶的活化。而且，在人骨髓單核細(xì)胞株中，碳酸酐酶II的合成被蛋白激酶C激活(Sun等，(2002)Trends inPharmacol.Sci.23(2)-83-89)。因此，PKC-介導(dǎo)的碳酸酐酶合成的增加可增加碳酸酐酶的活性，結(jié)果產(chǎn)生抗抑郁作用。
C.蛋白激酶C已將PKC鑒定為最大的非受體絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶基因家族之一。由于八十年代早期Nishizuka及其同事發(fā)現(xiàn)了PKC(Kikkawa等，(1982)J.Biol.Chem.25713341)，并將其鑒定為佛波酯的主要受體(Ashendel等，(1983)CancerRes.，434333)，已將許多生理信號(hào)機(jī)制歸因?yàn)榇嗣?。?duì)PKC的強(qiáng)烈興趣來源于其在體外被鈣和二酰甘油(及其佛波酯模擬物)激活的獨(dú)特能力，這種效應(yīng)的形成與生長(zhǎng)和分化因子作用導(dǎo)致的磷脂翻轉(zhuǎn)相偶聯(lián)。
已顯示，PKC的活化可改善認(rèn)知與記憶(美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)PCT/US02/13784；PCT/US03/07102；60/287,721；60/362,081；10/172,005和10/476,459；各申請(qǐng)的內(nèi)容包括在此作為參考)。但是，在本發(fā)明之前，尚未將PKC-介導(dǎo)的認(rèn)知和記憶的改善視作治療抑郁癥的機(jī)制。并且，尚未將本文所述PKC活化劑，尤其是可改善認(rèn)知與記憶的那些化合物視作具有抗抑郁活性。
D.成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-18(FGF-18)已顯示成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-18(FGF-18)可改善認(rèn)知和記憶(美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/429,321和PCT/IB03/05408，它們的內(nèi)容都包括在此作為參考)。FGF-18結(jié)合同源受體，激活包涵PKC和碳酸酐酶的PKC-介導(dǎo)的信號(hào)途徑。但是，在本發(fā)明之前，尚未將FGF-18-介導(dǎo)的認(rèn)知和記憶的改善視作治療抑郁癥的機(jī)制。并且，尚未將FGF-18視作具有抗抑郁活性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供一類可促進(jìn)或改善認(rèn)知與記憶的新的治療劑、化合物和組合物，用于治療抑郁癥。本發(fā)明提供治療抑郁癥的方法，所述方法包括給予含有可促進(jìn)或改善認(rèn)知與記憶的化合物的組合物。
本發(fā)明提供一種方法，所述方法包括以下步驟a)識(shí)別患抑郁癥的對(duì)象；和b)對(duì)所述對(duì)象給予有效量的含有碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述碳酸酐酶活化劑選自下組(I)結(jié)構(gòu)I 其中，R1是H或OH；R2和R3獨(dú)立地是H、COOH或低級(jí)烷基，例如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；Ar是苯基、咪唑基、或被一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基、氨基或低級(jí)烷基如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6基團(tuán)或C1-C4烷基取代的苯基或咪唑基；(2)結(jié)構(gòu)II 其中，R1和R2獨(dú)立地是H或低級(jí)烷基，例如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；
(3)結(jié)構(gòu)III 其中，n是1或2；R2是H或低級(jí)烷基，例如，直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；及藥學(xué)上可接受的I、II、III的鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，活化劑具有結(jié)構(gòu)I，其中，R1是H或OH；R2是H、CH3或COOH；R3是H或CH3；Ar是苯基或被取代的苯基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，取代的苯基是4-羥苯基、4-氟苯基、4-氨基苯基、3-氨基-4-羥苯基或3，4-二羥苯基。
本發(fā)明還提供了使用本文所述碳酸酐酶活化劑的衍生物和類似物的方法，其中，所述衍生物和類似物可增加碳酸酐酶激活作用的效力，相對(duì)于其它靶點(diǎn)增加對(duì)碳酸酐酶的特異性，降低毒性，改善口服劑型的穩(wěn)定性，和/或提高化合物穿過血腦屏障的能力(前藥)。衍生物指從所列出的化合物加入或除去側(cè)鏈而形成的化合物。類似物指，在碳酸酐酶的結(jié)合位點(diǎn)方面，具有增強(qiáng)的類似物理和/或化學(xué)性質(zhì)的化合物的結(jié)構(gòu)變體。按照本發(fā)明的衍生物和類似物指能夠?qū)⒈景l(fā)明活化劑化合物遞送至對(duì)象的腦的那些物質(zhì)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，碳酸酐酶活化劑提供神經(jīng)元碳酸酐酶活性，至少約為丙氨酸的110、115、125、135、150、170、180、190、200、210、220、220、230、240和250％。
在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明活化劑是結(jié)構(gòu)I、II或III的芳胺或芳香族氨基酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，活化劑激活神經(jīng)元內(nèi)碳酸酐酶。在另一個(gè)實(shí)施方式中，活化劑體外激活碳酸酐酶II超過丙氨酸1.5到2倍。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，活化劑具有結(jié)構(gòu)I，其中，R1是H或OH；R2是H、CH3或COOH；R3是H或CH3；Ar是咪唑或取代的咪唑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，取代的咪唑是咪唑-4-基-、或5-甲基咪唑-4-基-。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，活化劑選自下組咪唑、苯丙氨酸、取代的乙胺、苯乙胺、組胺、組氨酸、連接的二-咪唑、三唑、及其藥學(xué)上可接受的鹽。更優(yōu)選地，活化劑是組氨酸；組胺；苯丙氨酸；4-羥基苯丙氨酸；4-氟代苯丙氨酸；3，4-二羥基苯丙氨酸；3-氨基-4-羥基苯丙氨酸；4-氨基苯丙氨酸；酪氨酸；多巴胺；去甲腎上腺素；腎上腺素或5-甲基組胺。
本發(fā)明還提供一種方法，該方法包括以下步驟a)識(shí)別患有抑郁癥的對(duì)象；和b)給予所述對(duì)象有效量的含有碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)II，其中R1是H、甲基，乙基或苯基；R2是H或甲基。在一個(gè)實(shí)施方式中，活化劑體外激活碳酸酐酶II，超過丙氨酸1.5到2倍。
本發(fā)明還提供一種方法，該方法包括以下步驟a)識(shí)別患有抑郁癥的對(duì)象；和b)給予所述患者有效量的含有碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)III，其中n是1或2；R2是H或甲基。在一個(gè)實(shí)施方式中，活化劑體外激活碳酸酐酶II，超過丙氨酸1.5到2倍。
本發(fā)明還在需要這種治療的對(duì)象中提供治療抑郁癥的方法，該方法包括給予有效量的含有碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑選自芳胺或芳香族氨基酸，其中，所述芳胺或芳香族氨基酸含有單個(gè)芳香基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方式中，芳胺或芳香族氨基酸激活碳酸酐酶II，超過丙氨酸1.5到2倍。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，活化劑是選自下組的芳香族氨基酸苯丙氨酸、取代的苯丙氨酸、組氨酸、取代的組氨酸、取代的苯丙氨酸咪唑、取代的咪唑、連接的二咪唑以及連接的取代二咪唑。優(yōu)選地，活化劑是選自下組的芳胺多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、組胺和5-甲基組胺。
本發(fā)明提供一種方法，該方法包括以下步驟a)識(shí)別患有抑郁癥的對(duì)象；和b)給予所述患者有效量的含有蛋白激酶C活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述PKC活化劑選自FGF-18、大環(huán)內(nèi)酯、苯并內(nèi)酰胺、吡咯烷酮或其組合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，大環(huán)內(nèi)酯是苔蘚抑素(bryostatin)或索立抑素(neristatin)。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，苔蘚抑素選自苔蘚抑素-1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。更優(yōu)選地，苔蘚抑素是苔蘚抑素-1，索立抑素是索立抑素-1。
本發(fā)明還在需要這種治療的對(duì)象中提供治療抑郁癥的方法，該方法包括給予有效量的含有蛋白激酶C活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑選自FGF-18、大環(huán)內(nèi)酯、苯并內(nèi)酰胺、吡咯烷酮或其組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，大環(huán)內(nèi)酯是苔蘚抑素或索立抑素。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，苔蘚抑素選自苔蘚抑素-1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。更優(yōu)選地，苔蘚抑素是苔蘚抑素-1，索立抑素是索立抑素-1。
本發(fā)明還在需要這種治療的對(duì)象中提供治療抑郁癥的方法，該方法包括給予有效量的含有一種多種以下物質(zhì)的組合物他克林(以商品名COGNEX銷售)、維吖啶、多奈哌齊(以商品名ARICEPT銷售)、加蘭他敏(以商品名REMINYL銷售)、美金剛(以商品名NAMENDA銷售)，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明還提供篩選具有抗抑郁活性的試劑的方法，該方法包括以下步驟a)將在藥學(xué)上可接受的載體中的試劑給予受試對(duì)象，并將藥學(xué)上可接受的載體給予對(duì)照對(duì)象；b)分別將所述受試對(duì)象和對(duì)照對(duì)象置于水池中，測(cè)定試驗(yàn)期間游泳的距離和/或持續(xù)時(shí)間；和c)將受試對(duì)象與對(duì)照對(duì)象的游泳距離或持續(xù)時(shí)間進(jìn)行比較，其中，與對(duì)照對(duì)象相比，受試對(duì)象增加的游泳距離或持續(xù)時(shí)間是抗抑郁活性的指標(biāo)。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，水池的圓形的。優(yōu)選地，水池直徑為100-200厘米之間。更優(yōu)選地，水池直徑150厘米。優(yōu)選地，水池提供防逃逸。
在另一個(gè)實(shí)施方式中，重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)。優(yōu)選地，重復(fù)這些步驟三次。
在本發(fā)明篩選具有抗抑郁活性的試劑的方法中，優(yōu)選通過視頻方式測(cè)定游泳距離和/或持續(xù)時(shí)間。
附圖簡(jiǎn)要說明

圖1描述了在開放空間游泳試驗(yàn)中，三種抗抑郁藥抗抑郁藥，丙米嗪、異丙煙肼和米安色林對(duì)大鼠活動(dòng)性的影響。
圖2描述了在開放空間游泳試驗(yàn)中，阿拉丙酯對(duì)大鼠主動(dòng)游泳的活動(dòng)性和持續(xù)時(shí)間的影響。
圖3比較了在開放空間游泳試驗(yàn)中，丙米嗪和碳酸酐酶活化劑苯丙氨酸對(duì)大鼠活動(dòng)性的影響。
圖4比較了在開放空間游泳試驗(yàn)中，丙米嗪和PKC活化劑苔蘚抑素-1對(duì)大鼠活動(dòng)性的影響。
發(fā)明詳述A.定義如本文所用，組合物的“給予”包括任何給予途徑，例如口服、皮下、腹膜腔內(nèi)和肌內(nèi)。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“芳香族”指環(huán)偶聯(lián)分子實(shí)體，其穩(wěn)定性顯著大于假定局部結(jié)構(gòu)的分子實(shí)體。如本文所用，芳香族化合物包括多環(huán)和雜環(huán)化合物。
如本文所用，“碳酸酐酶活化劑”指通過在鋅-水界面或附近結(jié)合到碳酸酐酶，增加碳酸酐酶催化反應(yīng)速率的物質(zhì)。
如本文所用，“抑郁癥”指嚴(yán)重抑郁癥、心境惡劣、以及非典型抑郁癥或未定性的抑郁癥。
如本文所用，“有效量”指足以降低一種或多種抑郁癥相關(guān)癥狀的量。
如本文所用，“蛋白激酶C活化劑”或“PKC活化劑”指通過結(jié)合到蛋白激酶C，增加蛋白激酶C催化反應(yīng)速率的物質(zhì)。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單一芳香基團(tuán)”表示只有一個(gè)單環(huán)或一個(gè)多環(huán)芳香基團(tuán)。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”指哺乳動(dòng)物。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“取代的咪唑”指咪唑環(huán)上連接有一個(gè)或多個(gè)取代基的咪唑部分。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“取代的苯基”指苯環(huán)上連接有一個(gè)或多個(gè)取代基的苯基部分。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”指可與活性成分結(jié)合，并且在結(jié)合后可用于將活性成分給予對(duì)象的化學(xué)組合物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“生理學(xué)上可接受的”酯或鹽表示與藥物組合物的任何其它成分相容，并且對(duì)于待給予組合物的對(duì)象無害的活性成分的酯或鹽形式。
如本文所用，“藥學(xué)上可接受的載體”還包括但不限于一種或多種以下物質(zhì)賦形劑；表面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；造粒劑和崩解劑；粘合劑；潤(rùn)滑劑；甜味劑；芳香劑；著色劑；防腐劑；生理學(xué)上可降解的組分膠；水性運(yùn)載體或溶劑；油性運(yùn)載體或溶劑；助懸劑；分散或潤(rùn)濕劑；乳化劑，緩和藥；緩沖劑；鹽；增稠劑；填充劑；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑；穩(wěn)定劑；以及藥學(xué)上可接受的聚合物或疏水材料。本發(fā)明組合物中可包含的其它“附加成分”是本領(lǐng)域已知的，例如參見Genaro，編，1985，Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，其內(nèi)容包括從此作為參考。
可通過任何藥學(xué)領(lǐng)域已知或后續(xù)開發(fā)的方法來制備本文所述藥物組合物的制劑。通常，這種制備方法包括以下步驟將活性成分加入到載體或一種或多種其它附加成分中，然后，如果需要或希望的話，將產(chǎn)物定形或包裝成所需的單劑量或多劑量單元形式。
雖然本文所提供的藥物組合物的描述主要針對(duì)倫理上適合給予人的藥物組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，這些組合物通常適合適合給予所有種類的動(dòng)物。對(duì)適合給予人的藥物組合物的改進(jìn)以產(chǎn)生適合給予各種動(dòng)物的組合物是公知的，獸醫(yī)藥理學(xué)普通技術(shù)人員僅僅通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)(如果有的話)，可設(shè)計(jì)和進(jìn)行這種改進(jìn)?？紤]給予本發(fā)明藥物組合物的對(duì)象包括但不限于人和其它靈長(zhǎng)動(dòng)物，以及其它哺乳動(dòng)物。
本發(fā)明藥物組合物中的活性成分、藥學(xué)上可接受的載體以及任何附加成分的相對(duì)量可變化，取決于所治療對(duì)象的身份、大小和狀態(tài)，還取決于組合物的給予途徑。以例子的方式，該組合物可包含約0.1-100％(w/w)活性成分。除了活性成分以外，本發(fā)明藥物組合物還包可含一種或多種附加的藥物活性成分。特別考慮的附加助劑包括鎮(zhèn)吐藥和清除劑如氰化物和氰酸鹽清除劑。采用常規(guī)技術(shù)可制備控釋或緩釋的本發(fā)明藥物組合物制劑。
化合物的給予有效劑量指增強(qiáng)神經(jīng)元信號(hào)途徑細(xì)胞中碳酸酐酶活性的劑量。根據(jù)本說明書，可給予動(dòng)物、優(yōu)選是人的本發(fā)明化合物的典型劑量范圍為每千克動(dòng)物體重約1毫克到100克。而精確的給藥劑量可基于任何以下因素變化，包括但不限于動(dòng)物種類和所治療的疾病狀態(tài)，動(dòng)物年齡和給藥途徑。優(yōu)選地，化合物的劑量為每千克動(dòng)物體重約1毫克到約10克。更優(yōu)選地，劑量為每千克動(dòng)物體重約10毫克到約1克。最優(yōu)選地，劑量為每千克動(dòng)物體重約50-100毫克，并且每天三次口服給予。
從大鼠劑量推斷，預(yù)測(cè)人的劑量，苯丙氨酸(50mM)或咪唑(0.5M)制劑治療人的有效劑量可包括0.1、0.3、1、3或10毫升/千克體重劑量當(dāng)量，每天給予三次。
本發(fā)明包括上述化合物的衍生物和類似物，其增加碳酸酐酶激活作用的效力，相對(duì)于其它靶點(diǎn)增加對(duì)碳酸酐酶的特異性，降低毒性，改善口服劑型的穩(wěn)定性，和/或提高化合物穿過血腦屏障的能力(前藥)。衍生物指從所列出的化合物加入或除去側(cè)鏈而形成的化合物。類似物指，在碳酸酐酶的結(jié)合位點(diǎn)方面，具有提高的類似物理和/或化學(xué)性質(zhì)的化合物的結(jié)構(gòu)變體。按照本發(fā)明的衍生物和類似物指能夠?qū)⒈景l(fā)明活化劑化合物遞送至對(duì)象的腦的那些物質(zhì)。
可以每天幾次的頻率，或較低的頻率，例如每天一次，每周一次，每?jī)芍芤淮?，每月一次，甚至頻率更低，例如每幾個(gè)月一次，或每年一次或更少，將化合物給予動(dòng)物。劑量頻率是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員容易明白的，取決于任何以下因素，例如但不限于記憶的類型和深度，所治療的注意力或認(rèn)知缺乏，動(dòng)物的種類和年齡等。
B.抑郁癥抑郁癥包括診斷為嚴(yán)重抑郁癥、心境惡劣、非典型抑郁癥或尚未定性的抑郁癥(“輕度抑郁癥”)。不同亞型的抑郁癥由精神疾病的診斷和統(tǒng)計(jì)學(xué)手冊(cè)(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)，第四版(DSM-IV)(美國(guó)精神病協(xié)會(huì).精神疾病的診斷和統(tǒng)計(jì)學(xué)手冊(cè)，第4版，初級(jí)醫(yī)療版(Primary CareVersion)(DSM-IV-PC).American Psychiatric Association Press，Washington，DC1995)進(jìn)行分類和定義。根據(jù)DSM-IV，診斷“嚴(yán)重抑郁癥”需要在整個(gè)診斷期間患者存在以下九種癥狀中至少五種1)一天中的大多數(shù)時(shí)間情感低落(早晨最嚴(yán)重)；2)在幾乎所有活動(dòng)中，興趣和快樂明顯減少(興致缺失)；3)體重顯著增加或丟失；4)失眠或睡眠過度；5)精神運(yùn)動(dòng)激動(dòng)或遲緩；6)疲勞或能量喪失；7)負(fù)罪感或價(jià)值缺失感；8)注意力受損或猶豫不決；和9)不斷想到死亡或自殺。為支持嚴(yán)重抑郁癥的診斷，五種觀察的癥狀中必需有一個(gè)是情感低落或興趣缺失(興致缺失)。相對(duì)的，抑郁癥的最常見形式“非典型性抑郁癥”或“未定性的抑郁癥”(也稱為“輕度抑郁癥”)的診斷需要每天或一天中的大多數(shù)時(shí)間存在2-4個(gè)抑郁癥癥狀，持續(xù)至少兩周時(shí)間。心境惡劣是慢性，低強(qiáng)度情感障礙，特征為興致缺失、自尊低下、能量不足，連續(xù)存在兩年以上。認(rèn)為季節(jié)性情感障礙是以季節(jié)性變化為特征的嚴(yán)重抑郁癥的一種形式。
C.動(dòng)物模型雖然開發(fā)新型治療劑和獲得動(dòng)物模型取得了一些進(jìn)展，仍然急切需要用于篩選候選化合物抗抑郁活性的改進(jìn)的動(dòng)物模型(Cryan等，2002 TrendsPharmacol 23238-45)。目前，使用最廣泛的抑郁癥動(dòng)物模型包括強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)、尾巴懸垂試驗(yàn)和嗅球切除法(Cryan等，(2002)Trends Pharmacol.23238-45)。強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)在一個(gè)不能逃逸的水筒中進(jìn)行15分鐘預(yù)試驗(yàn)后24小時(shí)，在同一水筒中測(cè)定動(dòng)物的不動(dòng)性(immobility)。這是臨床前預(yù)測(cè)抗抑郁活性的使用最廣泛的動(dòng)物模型，但需要研究者判斷和評(píng)分。該試驗(yàn)不能可靠地預(yù)測(cè)選擇性5-羥色胺-再攝取抑制劑的抗抑郁活性(Porsolt(1990)Behavioral DespairPresent Statusand Future Perspectives，InAntidepressantsThirty Years On，CNS Publishers85-94；Porsolt等，(1991)Pharmacological Models of Depression，InAnimalModels in Psychopharmacology，Advances in Pharmacological Sciences.BaselBirkhauser 137-59；Takamori等，(2001)Pharmacology 73147-53；Cryan等，(2002)Trends Pharmacol.23238-45)，并要求修正計(jì)分以改善檢測(cè)(Detke等，(1995)Psychopharmacology 12166-72；Detke等，(1996)Behav.Brain Res.7343-46；Cryan等，(2002)Trends Pharmacol.23238-245)。尾巴懸垂試驗(yàn)誘導(dǎo)絕望缺失狀態(tài)，特征為不再努力或掙扎逃脫，通過抗抑郁藥可快速逆轉(zhuǎn)。然而，一些動(dòng)物卻會(huì)沿其尾巴向上爬。另一方面，嗅球切除法摘除兩側(cè)嗅球，導(dǎo)致與抑郁變化相關(guān)的行為改變。相反，通過抗抑郁治療，在新的光照明亮的開放式裝置中的活動(dòng)過度反應(yīng)是慢性而非急性的(Kelly等，(1997)Pharmacol.Ther.74299-316)。然而，該試驗(yàn)基于與抑郁癥行為的類似性上。不太理解其作用機(jī)制。對(duì)各種動(dòng)物模型的更詳細(xì)描述，讀者可參考兩份最新綜述文章(Cryan等，2000Trends Pharmacol.23238-245；Nestler等，(2002)Neuron 3413-25)。
為促進(jìn)對(duì)抑郁癥產(chǎn)生機(jī)制的理解，我們需要復(fù)制患者狀態(tài)的動(dòng)物模型(Cryan等，2000 Trends Pharmacol.23238-245)。人抑郁癥與標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)迫游泳模型(也稱為行為絕望模型)之間的一個(gè)差異是，人抑郁癥表現(xiàn)為在大多數(shù)病例中缺乏動(dòng)力(缺乏希望)，沒有直接對(duì)應(yīng)于強(qiáng)迫游泳模型主要特征(“物理空間”的缺乏作為抑郁癥的誘導(dǎo)因素)。
本發(fā)明提供改進(jìn)的抑郁癥動(dòng)物模型，其具有提高的預(yù)測(cè)能力。為闡明開放空間游泳模型是否具有“預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性”，用所有三種主要的抗抑郁藥處理大鼠。與未處理的動(dòng)物相比，這些實(shí)驗(yàn)顯示行為參數(shù)的時(shí)間依賴性恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)中使用三環(huán)抗抑郁藥丙米嗪(5-羥色胺抑制劑和去甲腎上腺素再攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體)，單胺氧化酶抑制劑異丙煙肼，和非典型性抗抑郁藥米安色林，因?yàn)樗鼈兣R床上有效并且是各類的代表。通常通過檢測(cè)所有三種原型抗抑郁藥的有效性來評(píng)價(jià)抑郁癥動(dòng)物模型的適合性。與強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)不同，在開放空間游泳試驗(yàn)中，空間限制不再是決定性因素，無需人判斷和評(píng)價(jià)即可直接測(cè)定活動(dòng)性。我們的結(jié)果表明，試驗(yàn)對(duì)抗抑郁藥包括SSRI具有高度預(yù)測(cè)性，并且對(duì)抗抑郁藥治療的靈敏度提高。移動(dòng)的距離測(cè)定了試驗(yàn)期間動(dòng)物主動(dòng)游泳狀態(tài)。此外，它對(duì)SSRIs靈敏而不需要任何計(jì)分修正。可作為揭示抑郁癥病理生理學(xué)機(jī)制和尋找新型抗抑郁藥的抑郁癥模型的一種選擇。
動(dòng)物模型是探索新型抗抑郁藥和闡明抑郁癥病理生理學(xué)機(jī)制所必不可少的。另一方面，臨床活性抗抑郁藥的獲得也使得可以開發(fā)和驗(yàn)證許多在動(dòng)物模型中研究抑郁癥樣表型的行為試驗(yàn)。在我們的開放空間模型中，大鼠很快且可重復(fù)地不動(dòng)，在整個(gè)試驗(yàn)期間顯示“漂浮的”不活動(dòng)性。通過測(cè)定用已知抗抑郁藥處理的動(dòng)物獲得的結(jié)果，證實(shí)了開放空間游泳試驗(yàn)預(yù)測(cè)抑郁癥的準(zhǔn)確性。本研究中所有三種主要類型的抗抑郁藥如下所示三環(huán)抗抑郁藥丙米嗪(5-羥色胺抑制劑或去甲腎上腺素再攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體)；單胺氧化酶抑制劑異丙煙肼；和非典型性抗抑郁藥米安色林，和SSRI阿拉丙酯。我們的研究中所應(yīng)用的劑量與不誘導(dǎo)非特異性運(yùn)動(dòng)活力改變的大鼠抗抑郁藥研究所采用的劑量相似/等價(jià)(Bai等，(2001)Pharmacol.Biochem.Behav.70187-192；Kroczka等，(2001)Brain Res.Bull.55297-300；Takamori等，(2001)Pharmacology 63147-153；Kitamura等，(2002)Pharmacol.Biochem.Behav.7163-69)。
將可開放空間游泳試驗(yàn)的結(jié)果與過去已報(bào)道的數(shù)據(jù)(Porsolt等，(1977)Nature 266730-730-732；Porsolt等，(1978)Eur J.Pharmacol.47379-391)進(jìn)行比較，在過去的數(shù)據(jù)中，將三個(gè)這些傳統(tǒng)抗抑郁藥與強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中類似的腹膜內(nèi)注射劑量(15mg/kg)應(yīng)用于相同年齡的大鼠。對(duì)于丙米嗪、異丙煙肼和米安色林組來說，在我們的研究中第三天移動(dòng)距離降低的百分比(將對(duì)照組的降低視作100％)分別為49.8±7.6％(n＝8)，44.0±7.7％(n＝8)和33.3±6.3％(n＝8)，而強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中相對(duì)于對(duì)照的不動(dòng)性％分別為61.5±6.5％，(n＝5；每天15mg/kg×3次；P＜0.01；Porsolt等，(1977)Nature 266730-730-732)；87.6±7.3％(n＝5，每天15mg/kg×3次；P＜0.01；Porsolt等，(1978)Eur J.Pharmacol.47379-391)，和6.5±7.0％(n＝5，每天15mg/kg×3次；P＜0.01；Porsolt等，(1977)Nature 266730-730-732)。因此，與過去報(bào)道的數(shù)據(jù)相比，使用開放空間游泳試驗(yàn)的大鼠對(duì)異丙煙肼抗抑郁藥治療更敏感，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(F1，12＝11.65；P＜0.01)。
開放空間游泳試驗(yàn)滿足抑郁癥動(dòng)物模型四個(gè)最低要求中的三個(gè)(McKinney等，(1969)Arch GenPsychiatr Vol.21，240-8；Cryan等，(2002)TrendsPlzarmacol23238-45)。這些對(duì)合適的動(dòng)物模型的要求包括(1)表現(xiàn)或癥狀上與人類病癥適當(dāng)類似；(2)可客觀監(jiān)測(cè)行為改變的存在；(3)通過人類有效的相同治療對(duì)行為改變的可逆轉(zhuǎn)性；和(4)研究者間的可重現(xiàn)性。還需試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室間的可靠性。通常，將使用很多年的大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)視作可高度預(yù)測(cè)抗抑郁藥在人類抑郁癥中有效性的試驗(yàn)(Porsolt等，(1977)Nature 266730-730-732)。其用于探索新型有效藥物的價(jià)值尚不清楚。
開放空間游泳試驗(yàn)具有以下優(yōu)點(diǎn)。第一，該試驗(yàn)超過強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)的一個(gè)明顯優(yōu)點(diǎn)是，與強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中的時(shí)間-取樣判斷和評(píng)分(Kroczka等，(2001)Brain Res Bull 55297-300；Rénéric等，(2002)Eur.Neuropsychopharmacol.12159-71)不同，該試驗(yàn)中不涉及人判斷和評(píng)分，使得監(jiān)測(cè)更加客觀。第二，客觀的監(jiān)測(cè)提供了改善不同實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性的可能。第三，強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)不能反映行為的深度或程度，例如強(qiáng)烈、中等或輕度游泳活動(dòng)。相反，在開放空間游泳試驗(yàn)中可直接測(cè)定這些特征。此外，開放空間模型中沒有觀察到攀爬行為，很可能是因?yàn)榭墒褂么蟮目臻g。這就排除了另一個(gè)人為判斷，即在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中，是否攀爬代表了超越或相當(dāng)于主動(dòng)游泳。第四，該試驗(yàn)并不限制由于空間限制造成的動(dòng)物運(yùn)動(dòng)，更接近地模擬人類病癥。在很大程度上(雖然不是絕對(duì)的)，是動(dòng)力(機(jī)會(huì)或希望)的缺失而不是“物理空間”受限限定了這種人類疾病。
D.碳酸酐酶碳酸酐酶是一種含鋅的酶，催化二氧化碳與碳酸氫根離子間的相互轉(zhuǎn)化，它存在于整個(gè)身體中，包括腦(Sun等，(2002)Trends in Phann.Sci.23(2)；其內(nèi)容包括在此作為參考)。碳酸酐酶II在7種人同工酶中最有活力，是主要存在于紅細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和腦神經(jīng)元中的23.9kDa酶(同上)。除了參與pH調(diào)節(jié)、碳酸氫鹽重吸收和二氧化碳排放之外，碳酸酐酶在信號(hào)處理、長(zhǎng)期突觸轉(zhuǎn)化和記憶儲(chǔ)存的注意力門控中起關(guān)鍵作用(同上)。碳酸酐酶功能障礙與精神發(fā)育遲緩、阿爾茨海默病和認(rèn)識(shí)受損有關(guān)，已表明碳酸酐酶活化可改善認(rèn)知和記憶(同上；美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)PCT/US02/13784；PCT/US02/14378；PCT/US03/07102；60/287,271；60/289,137；60/362,081；10/172,005；10/476,459和10/477,121；其各自的內(nèi)容包括在此作為參考)。
碳酸酐酶催化水合CO2與脫水HCO3-之間的可逆反應(yīng)。近來研究表明，該酶的活化提供了在記憶相關(guān)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)中增加HCO3-濃度的快速有效機(jī)制。通過突觸GABAA受體通道的HCO3-通量的增加改變了突觸后神經(jīng)元對(duì)GABA的反應(yīng)，從而改變了神經(jīng)元對(duì)各種信號(hào)輸入的反應(yīng)。以這種方式，碳酸酐酶起著有效的注意力門控作用，控制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)。海馬CA1神經(jīng)元中碳酸酐酶活性的改變提供了GABA釋放突觸處各操作狀態(tài)之間的轉(zhuǎn)換機(jī)制，從而門控通過海馬網(wǎng)絡(luò)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
通過雷諾定受體(Rye)，細(xì)胞內(nèi)釋放Ca2+，可至少部分激活碳酸酐酶的活性。例如，RyR參與GABA-介導(dǎo)的突觸轉(zhuǎn)換。Ca2+對(duì)碳酸酐酶的作用是間接的。在人骨髓單核細(xì)胞細(xì)胞株中，碳酸酐酶II的合成由蛋白激酶C活化，這種作用被0.1μm十字孢堿所阻斷。激素也可通過cAMP調(diào)節(jié)碳酸酐酶的活性。因此，茶堿可提高紅細(xì)胞中腎上腺素和雙丁酰-cAMP誘導(dǎo)的碳酸酐酶活性的增加，并且cAMP-依賴性蛋白激酶的磷酸化可激活碳酸酐酶。
人體中存在至少七種碳酸酐酶的同工酶(Lindskog(1997)Phannacol.Ther.74(1)P1-20)。已知乙酰唑胺和一些其它抑制劑的CAII結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)。這些知識(shí)使得可以合理設(shè)計(jì)本文所述化合物的衍生物和類似物。
基于結(jié)構(gòu)、生物化學(xué)和藥物化學(xué)的研究，已確定了碳酸酐酶的藥理學(xué)特征并開發(fā)了具體的活化劑。碳酸酐酶活化劑提供了治療遺傳性碳酸酐酶缺陷和記憶病癥的重要工具。許多胺和氨基酸(例如，多巴胺、5-羥色胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、組胺、組氨酸、咪唑、苯丙氨酸或其衍生物(參見WO 00/56760，其內(nèi)容包括在此作為參考))是碳酸酐酶活化劑。具體地說，碳酸酐酶活化劑通過直接作為質(zhì)子接受體，增加二氧化碳與碳酸氫根離子間的相互轉(zhuǎn)換速率(反應(yīng))EZn2+--OH2+活化劑[EZn2+--OH2--活化劑H+][EZn2+--OH----活化劑H+]EZn2+--OH-+活化劑H+] (反應(yīng)I)本發(fā)明包括的碳酸酐酶活化劑以及通過各種人碳酸酐酶II激活的活性(相對(duì)于丙氨酸激活的該酶的活性)如表I所示。
表1碳酸酐酶活化劑
E.蛋白激酶C(PKC)目前，PKC基因家族目前包括11種基因，分成四個(gè)亞型1)經(jīng)典PKCα，β1，β2(β1和β2是相同基因的可選接合形式)和γ，2)新型PKδ，ε，η和θ，3)非典型PKCζ，λ，η和i以及4)PKCμ。PKCμ類似新型PKC亞型但具有推定的跨膜區(qū)(參見Blohe等，(1994)Cancer Metast.Rev.13411；Ilug等，(1993)Biochem J.291329；Kikkawa等，(1989)Ann.Rev.Biochem.5831)。α，β1，β2和γ亞型是Ca2+、磷脂和二?；视?依賴性的，代表經(jīng)典PKC亞型，而其它亞型由磷脂和二?；视突罨灰蕾囉贑a2+。所有亞型包括5個(gè)可變區(qū)(V1-V5)，α，β和γ亞型包含四個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)區(qū)(C1-C4)。除PKCα，β和γ以外，所有亞型缺少C2區(qū)，λ和η亞型還缺少結(jié)合二?；视偷腃1中兩個(gè)富含半胱氨酸的鋅狀指區(qū)的九個(gè)(氨基酸)。C1區(qū)還包含假底物序列，假底物序列在所有亞型中都是高度保守的，通過阻斷底物結(jié)合位點(diǎn)以產(chǎn)生酶的無活性構(gòu)象而起到自身調(diào)節(jié)作用(House等，(1987)Science 238，1726)。
因?yàn)檫@些結(jié)構(gòu)特征，認(rèn)為各種PKC亞型在響應(yīng)生理刺激(Nishizuka(1989)Cancer 101892)，以及新生物轉(zhuǎn)化和分化(Glazer(1994)Protein Kinase C，J.F.Kuo編，Oxford U.Press第171-198頁(yè))，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有高度特異的作用。對(duì)于已知PKC調(diào)節(jié)因子的描述參見PCT/US97/08141，美國(guó)專利5,652,232；6,080,784；5,891,906；5,962,498；5,955,501；5,891,870和5,962,504(其各自的內(nèi)容包括在此作為參考)。
PKC的活化劑的抗抑郁效果是由PKC活性和/或PKC活化后觀察到的碳酸酐酶合成的增加直接介導(dǎo)的。
越來越多的證據(jù)表明，各個(gè)PKC同工酶在生物加工中起著不同，有時(shí)相反的作用，提供了藥理學(xué)利用的兩個(gè)不同方向。一個(gè)方向是設(shè)計(jì)特異性(優(yōu)選同工酶特異性)PKC抑制劑。該方法通過催化區(qū)域不是主要負(fù)責(zé)同種型PKC特異性的區(qū)域的作用而實(shí)現(xiàn)的。另一種方法是開發(fā)同工酶選擇性、調(diào)節(jié)位點(diǎn)介導(dǎo)的PKC活化劑。這提供了一種方式，搶占了具有相反生物學(xué)效應(yīng)的其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑?；蛘撸ㄟ^誘導(dǎo)急劇活化后PKC的下調(diào)，PKC活化劑。這提供了一種方式，搶占了具有相反生物效應(yīng)的其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑?；蛘撸ㄟ^誘導(dǎo)急劇活化后PKC的下調(diào)，PKC活化劑可引起長(zhǎng)期拮抗作用。目前，苔蘚抑素在臨床試驗(yàn)中用作抗癌藥。已知苔蘚抑素結(jié)合了PKC的調(diào)節(jié)區(qū)域，并激活該酶。苔蘚抑素是PKC同工酶選擇性活化劑的一個(gè)例子。已發(fā)現(xiàn)了除苔蘚抑素以外的化合物來調(diào)節(jié)PKC(例如，參見WO 97/43268；其內(nèi)容包括在此作為參考)。對(duì)于已知PKC添調(diào)節(jié)劑的描述參見PCT/US97/08141，美國(guó)專利5,652,232；6,043,270；6,080,784；5,891,906；5,962,498；5,955,501；5,891,870和5,962,504(其各自的內(nèi)容包括在此作為參考)。
已鑒定了幾類PKC活化劑。但是，由于佛波酯的促腫瘤活性，該類化合物不適于最終藥物開發(fā)(Ibarreta等，(1999)Neuro Report 10(5&6)1035-40)。尤其感興趣的是大環(huán)內(nèi)酯(例如，苔蘚抑素類和索立抑素類)，用于刺激PKC。在苔蘚抑素類化合物中，已顯示苔蘚抑素-1可激活PKC，并且已證明沒有腫瘤促進(jìn)活性。苔蘚抑素-1作為PKC活化劑，也是特別有用的，因?yàn)樘μ\抑素-1的劑量反應(yīng)曲線是雙相的。此外，苔蘚抑素-1顯示出對(duì)PKC同工酶，包括PKCα，PKCδ和PKCε的不同的調(diào)節(jié)作用。已在動(dòng)物和人中進(jìn)行了苔蘚抑素-1的毒性和安全性研究，并積極研究苔蘚抑素-1作為抗癌藥。研究中使用苔蘚抑素-1確定了人體的主要副作用是肌痛，限制最大劑量為40mg/m2。
美國(guó)專利4,560,774描述了大環(huán)內(nèi)酯類，尤其是苔蘚抑素-1(其內(nèi)容包括在此作為參考)。大環(huán)內(nèi)酯類及其衍生物的描述參見美國(guó)專利6,187,568、美國(guó)專利6,043,270、美國(guó)專利5,393,897、美國(guó)專利5,072,004、美國(guó)專利5,196,447、美國(guó)專利4,833,257和美國(guó)專利4,611,066(其內(nèi)容包括在此作為參考)。上述專利描述了大環(huán)內(nèi)酯類的各種化合物及各種應(yīng)用，包括用作抗炎藥或抗腫瘤藥(Szallasi等，(1994)Journal of Biological Chemistry 269(3)Zhang等，(1996)Caner Research 56802-808；Hennings等，(1987)Carcinogenesis 8(9)Varterasian等，(2000)Clinical Cancer Research 6825-828；Mutter等，(2000)Bioorganic &Medicinal Chemistry 81841-1860)(其各自的內(nèi)容包括在此作為參考)。
如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，大環(huán)內(nèi)酯類化合物及其衍生物，尤其是苔蘚抑素類適用組合性化學(xué)合成技術(shù)，因此，可形成化合物庫(kù)來優(yōu)化藥理學(xué)參數(shù)，包括但不限于組合物的效力和安全性。此外，可分析這些化合物庫(kù)，以確定可較佳地調(diào)節(jié)α-分泌酶和/或PKC的成員。
天然產(chǎn)物和發(fā)酵液的組合庫(kù)高通量篩選已導(dǎo)致一些新型藥物的發(fā)現(xiàn)。目前，廣泛采用化學(xué)多樣性的產(chǎn)生和篩選作為發(fā)現(xiàn)主導(dǎo)化合物的主要技術(shù)，這當(dāng)然也是藥物開發(fā)領(lǐng)域的主要根本的的進(jìn)展。此外，即使在鑒定了“主導(dǎo)”化合物之后，組合化學(xué)技術(shù)提供了優(yōu)化所需生物學(xué)活性的有價(jià)值的工具。如將要的理解的那樣，對(duì)象的反應(yīng)容易將其歸入化合物組合化學(xué)庫(kù)的建立中，用于篩選藥理學(xué)、或其它生物學(xué)或藥學(xué)相關(guān)活性或原料相關(guān)質(zhì)量。以本發(fā)明為目的的組合化學(xué)庫(kù)是化學(xué)相關(guān)化合物的混合物，一起篩選所需性質(zhì)；所述的庫(kù)可以是溶液或共價(jià)結(jié)合于固體支持物。單一反應(yīng)中許多相關(guān)化合物的制備可大大降低和簡(jiǎn)化需要進(jìn)行的篩選過程的次數(shù)?？赏ㄟ^常規(guī)方法進(jìn)行合適的生物學(xué)性質(zhì)的篩選。因此，本發(fā)明還提供用于確定一種或多種本發(fā)明化合物的結(jié)合，以有效調(diào)節(jié)α-分泌酶和/或PKC的能力的方法。
下面描述了許多本領(lǐng)域中可使用的產(chǎn)生組合化學(xué)庫(kù)的技術(shù)，但應(yīng)理解，本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例和描述(例如，參見Blondelle等，(1995)Trends Anal.Chem.1483；美國(guó)專利5,359,115；5,362,899；U.S.5,288,514PCT公開WO94/08051；Chen等，(1994)JACCS 162661Kerr等，(1993)JACCS I 1 5252；PCT公開WO92/10092，WO93/09668；WO91/07087；and WO93/20242；其各自的內(nèi)容包括在此作為參考)。據(jù)此，有許多庫(kù)在其序列中具有約16-1,000,000或更多變體，可供合成和篩選特定活性或性質(zhì)。
F.成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18(FGF-18)在動(dòng)物中，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(“FGF”)屬于在控制動(dòng)物胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)、形態(tài)發(fā)生和組織修復(fù)過程中起關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)之一(Hu等，(1999)Oncogene，18(16)2635-42)。FGF-18是該蛋白質(zhì)家族成員之一；它是由207個(gè)氨基酸構(gòu)成的肽，由與空間認(rèn)知有關(guān)的單一記憶相關(guān)記憶編碼。主要在肺和腎中表達(dá)，在心臟、睪丸、脾、骨骼肌和腦中低水平表達(dá)(Hu等，(1998)MolecularCellular Biology，18(10)6063-6074)。序列比較研究表明，F(xiàn)GF-18在人和小鼠間高度保守，在FGF家族成員中與FGF-8最同源。在發(fā)現(xiàn)FGF-18在細(xì)胞和組織發(fā)育過程中全部作用的持續(xù)研究中，已深刻認(rèn)識(shí)到FGF-18在成人肺和發(fā)育的組織增殖中作為信號(hào)分子，且它還與癌變細(xì)胞有關(guān)。
本發(fā)明考慮使用FGF-18、各自保持改善認(rèn)知和記憶能力的FGF-18的修飾形式和FGF-18的片段，如美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)60/429,321和PCT/IB03/05408所述，其內(nèi)容包括在此作為參考。
所有圖書、文章、專利或其它出版物和參考文獻(xiàn)的內(nèi)容包括在此作為參考。本文所參考的任何化合物包括外消旋化合物以及單一對(duì)映體。
實(shí)施例下面的實(shí)施例是為了進(jìn)一步解釋本發(fā)明，而不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1抑郁癥的開放空間游泳試驗(yàn)試驗(yàn)之前，將成年Wistar大鼠(180-200g)飼養(yǎng)在控溫(20-24℃)房間中至少一周，允許自由進(jìn)食和進(jìn)水，并保持12小時(shí)晝/夜循環(huán)。將它們隨機(jī)分組(每組8只)，并且在試驗(yàn)之前至少1小時(shí)，將其置于飼養(yǎng)籠中移至試驗(yàn)房間。將大鼠單獨(dú)置于直徑152厘米、高60厘米且填充有40厘米水(22±1℃)的圓形水池中。房間和水池是用于空間水迷宮任務(wù)的起始設(shè)置的一部分(Sun等，(2002)J.Pharmacol.Exp.Ther.300408-416)。不同藥物處理的試驗(yàn)組和對(duì)照組是均衡順序。試驗(yàn)中沒有逃逸。大鼠可自由選擇游泳(或不游泳)15分鐘，然后取出，干燥后回到飼養(yǎng)籠中。試驗(yàn)期間觀察者肉眼看不清大鼠，但能夠在視頻監(jiān)視器上觀察試驗(yàn)期間的動(dòng)物行為。24小時(shí)后重復(fù)相同過程(每天進(jìn)行15分鐘)，再持續(xù)3天。將藥物溶解在鹽水溶液中，用于試驗(yàn)組，而對(duì)照組僅使用鹽水。分別在第二、第三和第四次試驗(yàn)過程之前23、2和1小時(shí)處的游泳試驗(yàn)過程之間給予丙米嗪(每天10mg/kg×3次，i.p.)，異丙煙肼(每天10 mg/kg×3次，i.p.)，米安色林(每天10mg/kg×3次，i.p.)，阿拉丙酯(每天10mg/kg×3次)，或鹽水。與單劑量相比，試驗(yàn)之前三次劑量的原理更符合預(yù)測(cè)結(jié)果(Porsolt等，(1977)Nature 266730-730-732；Porsolt等，(1978)Eur J.Pharmacol.47379-391；Poncelet等，(1986)Psychopharmacology 90139-141)。采用視頻跟蹤系統(tǒng)記錄游泳/漂流途徑，視頻跟蹤系統(tǒng)在其它試驗(yàn)中也用于空間水迷宮任務(wù)(Sun等，2002；Sun and Alkon，2002a)。該系統(tǒng)通過在水池中(取樣時(shí)間0.055秒)記錄觸發(fā)事件的連續(xù)x/y坐標(biāo)(示蹤水平以上的視頻信號(hào))并計(jì)算距離來跟蹤動(dòng)物的位置，并且累加每個(gè)試驗(yàn)期間預(yù)設(shè)定間期(15分鐘)內(nèi)的距離。但是，跟蹤系統(tǒng)不能辨別或確定任何活動(dòng)或不動(dòng)期間的持續(xù)時(shí)間。為評(píng)價(jià)跟蹤系統(tǒng)記錄的移動(dòng)距離是否反映了主動(dòng)游泳的持續(xù)時(shí)間，研究者還通過視頻監(jiān)視器在線記錄了主動(dòng)游泳的持續(xù)時(shí)間用于直接比較兩組參數(shù)。
實(shí)施例2開放空間游泳試驗(yàn)在大鼠中誘導(dǎo)不動(dòng)性注射鹽水的大鼠(每組8只)顯示活動(dòng)性(移動(dòng)的距離)顯著降低(圖1)(F3，31＝49.717；P＜0.001)。移動(dòng)的距離包括整個(gè)15分鐘期間移動(dòng)的所有距離，在全部活動(dòng)中，有主動(dòng)游泳/探索以及緩慢漂流(腿的明顯非探索性運(yùn)動(dòng)引起)引起的。主動(dòng)游泳被定義為，當(dāng)大鼠進(jìn)行主動(dòng)游泳運(yùn)動(dòng)，表現(xiàn)為圍繞水池移動(dòng)。與強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(例如，Rénéric等，2002)報(bào)道的行為模式不同，沒有觀察到沿壁攀爬，很可可能是因?yàn)榇笫罂色@得大的空間。隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，對(duì)照組大鼠顯示逐漸減少和較短暫的間斷的主動(dòng)游泳時(shí)段。在這些對(duì)照大鼠中，第三次試驗(yàn)時(shí)活動(dòng)性降低達(dá)到最大(圖1)。典型地，除了正好足以將其頭部保持在水面以上之外(不動(dòng)性；未示出)，對(duì)照大鼠不進(jìn)行任何運(yùn)動(dòng)，在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中將這種特征性行為視作抑郁癥的指標(biāo)。
實(shí)施例3誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)傳統(tǒng)抗抑郁治療的敏感性與對(duì)照組相比，用抗抑郁藥治療可顯著降低試驗(yàn)期間移動(dòng)距離的減少(圖1)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析揭示兩組的顯著作用，表明注射抗抑郁藥的大鼠的活動(dòng)性顯著高于僅注射運(yùn)載劑的大鼠(F3，16＝25,071；P＜0.001)。以游泳的距離度量，這些大鼠顯示更多、更久的主動(dòng)游泳/探索，雖然本試驗(yàn)中沒有單獨(dú)定量主動(dòng)游泳持續(xù)時(shí)間。而且，回顧性分析可見從第二次到第四次試驗(yàn)之間的顯著性差異(P＜0.05)，證實(shí)接受抗抑郁藥治療的大鼠組具有較高的活動(dòng)性。在三個(gè)藥物組中，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，組間沒有顯著性差異(F2，12＝4.199；P＜0.05)，雖然在給定劑量下，異丙煙肼似乎在降低不動(dòng)性方面比米安色林和丙米嗪更有效(圖1)。本發(fā)明結(jié)果與過去報(bào)道的采用強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)間的比較表明，總的來說，本發(fā)明試驗(yàn)顯示改善的抗抑郁作用。
實(shí)施例4誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)SSRI-抗抑郁治療的敏感性與對(duì)照組相比，SSRI阿拉丙酯可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性(圖2A)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析產(chǎn)生組間顯著性差異(F1，8＝32.60；P＜0.001)，表明注射阿拉丙酯的大鼠的活性性顯著高于僅注射運(yùn)載劑的大鼠。
通過記錄大鼠明顯地進(jìn)行主動(dòng)游泳，即進(jìn)行明顯的運(yùn)動(dòng)以圍繞水池游泳的持續(xù)時(shí)間，評(píng)價(jià)觀察到的移動(dòng)距離的差異是否反映了主動(dòng)游泳的不同持續(xù)時(shí)間。不同組間結(jié)果的比較如圖2B所示。阿拉丙酯組主動(dòng)游泳的持續(xù)時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(組差異F1，8＝31.51；P＜0.001)。移動(dòng)距離的％變化(將對(duì)照組的相應(yīng)變化視作100％)與主動(dòng)游泳持續(xù)時(shí)間的％變化(將對(duì)照組對(duì)應(yīng)的變化視作100％)沒有顯著差異(P＞0.05，非配對(duì)t檢驗(yàn))。因此，結(jié)果表明，參數(shù)“移動(dòng)的距離”可真實(shí)地反映試驗(yàn)期間活動(dòng)的持續(xù)時(shí)間。
實(shí)施例5誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)苯丙氨酸的敏感性如本文所述，每天每次試驗(yàn)，將動(dòng)物置于開放空間游泳裝置中15分鐘，在大鼠中誘導(dǎo)抑郁行為。在三天的過程內(nèi)，將動(dòng)物進(jìn)行三次試驗(yàn)。動(dòng)物分成三組對(duì)照大鼠(8)；苯丙氨酸大鼠(10)；和丙米嗪大鼠(10)。第二次試驗(yàn)之前3.5小時(shí)，對(duì)照大鼠接受單次尾靜脈注射鹽水。第二次試驗(yàn)之前3.5小時(shí)，苔蘚抑素-1組的大鼠接受單次尾靜脈注射苯丙氨酸。分別在第一、第二和第三次試驗(yàn)之前23、2和1小時(shí)，丙米嗪組的大鼠接受3次腹膜腔內(nèi)注射(10mg/kg)。
與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，碳酸酐酶活化劑苯丙氨酸可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性(圖3)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示苯丙氨酸、丙米嗪和對(duì)照組之間的顯著性差異，因而表明注射苯丙氨酸的大鼠的活動(dòng)性顯著高于接受丙米嗪或鹽水的大鼠。
實(shí)施例6誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)苔蘚抑素-1的敏感性如本文所述，每天每次試驗(yàn)，將動(dòng)物置于開放空間游泳裝置中15分鐘，在大鼠中誘導(dǎo)抑郁行為。在三天的過程內(nèi)，將動(dòng)物進(jìn)行三次試驗(yàn)。動(dòng)物分成三組對(duì)照大鼠(8)；苔蘚抑素-1大鼠(10)；和丙米嗪大鼠(10)。在第二次試驗(yàn)之前3.5小時(shí)，對(duì)照大鼠接受單次尾靜脈注射鹽水。第二次試驗(yàn)之前3.5小時(shí)，苔蘚抑素-1組的大鼠接受單次尾靜脈注射苔蘚抑素-1(80μg/kg)。分別在第一、第二和第三次試驗(yàn)之前23、2和1小時(shí)，丙米嗪組的大鼠接受3次腹膜內(nèi)注射(10mg/kg)。
與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，PKC活化劑苔蘚抑素-1可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性(圖4)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示苯丙氨酸、丙米嗪和對(duì)照組之間的顯著性差異，因而表明注射苔蘚抑素-1的大鼠的活動(dòng)性顯著高于接受丙米嗪或鹽水的大鼠(F2，27＝6.168；P＝0.007)。苔蘚抑素-1和丙米嗪組之間沒有觀察到顯著性差異(F2，27＝10.128；P＝0.724).
實(shí)施例7誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)咪唑的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，碳酸酐酶活化劑咪唑可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例8誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)連接的雙咪唑的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，碳酸酐酶活化劑連接的雙咪唑(結(jié)構(gòu)III，其中R2是H，n＝1或2)可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例9誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)酪氨酸的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，碳酸酐酶活化劑酪氨酸可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例10誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)4-氟-苯丙氨酸的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，碳酸酐酶活化劑4-氟-苯丙氨酸可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例11誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)碳酸酐酶活化劑的敏感性，該活化劑提供碳酸酐酶活性是丙氨酸中觀察到的150-250％與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，是丙氨酸中觀察到的活性的150-250％的活化碳酸酐酶II的化合物可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例12誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)索立抑素的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，PKC活化劑索立抑素可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
實(shí)施例13誘導(dǎo)的不動(dòng)性對(duì)FGF-18的敏感性與對(duì)照組和用抗抑郁藥丙米嗪處理的組相比，PKC活化劑FGF-18可有效降低開放空間游泳試驗(yàn)中的不動(dòng)性。
權(quán)利要求
1.一種方法，所述方法包括以下步驟a)識(shí)別患有抑郁癥的對(duì)象；和b)給予所述對(duì)象有效量的含有碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑選自下組(I)結(jié)構(gòu)I 其中，R1是H或OH；R2和R3獨(dú)立地是H、COOH或低級(jí)烷基，例如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；Ar是苯基、咪唑基、或被一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基、氨基或低級(jí)烷基如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6基團(tuán)或C1-C4烷基取代的苯基或咪唑基；(2)結(jié)構(gòu)II 其中，R1和R2獨(dú)立地是H或低級(jí)烷基，例如直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；(3)結(jié)構(gòu)III 其中，n是1或2；R2是H或低級(jí)烷基，例如，直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C6烷基或C1-C4烷基；及藥學(xué)上可接受的I、II、III的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)I，其中，R1是H或OH；R2是H、CH3或COOH；R3是H或CH3；Ar是苯基或取代的苯基。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述取代的苯基是4-羥苯基、4-氟苯基、4-氨基苯基、3-氨基-4-羥苯基或3，4-二羥苯基。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)I，其中，R1是H或OH；R2是H、CH3或COOH；R3是H或CH3；Ar是咪唑或取代的咪唑。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述取代的咪唑是咪唑-4-基-或5-甲基咪唑-4-基-。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)II，其中，R1是H、甲基、乙基或丙基；R2是H或甲基。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑具有結(jié)構(gòu)III，其中，n是1或2；R2是H或甲基。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑選自下組咪唑、苯丙氨酸、取代的乙胺、苯乙胺、組胺、組氨酸、連接的雙咪唑、三唑和它們藥學(xué)上可接受的鹽。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是組氨酸。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是組胺。
11.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是苯丙氨酸。
12.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是4-羥基苯丙氨酸。
13.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是4-氟代苯丙氨酸。
14.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是3，4-二羥基苯丙氨酸。
15.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是3-氨基-4-羥基苯丙氨酸。
16.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是4-氨基苯丙氨酸。
17.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是酪氨酸。
18.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是多巴胺。
19.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是去甲腎上腺素。
20.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是腎上腺素。
21.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是組胺。
22.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述活化劑是5-甲基組胺。
23.一種在需要治療的對(duì)象中治療抑郁癥的方法，所述方法包括給予有效量的包含碳酸酐酶活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑選自芳胺或芳香族氨基酸，其中，所述芳胺或芳香族氨基酸含有單個(gè)芳香基團(tuán)。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述活化劑選自苯丙氨酸、取代的苯丙氨酸、組氨酸、取代的組氨酸、取代的苯丙氨酸咪唑、取代的咪唑、連接的雙咪唑乙基連接的取代雙咪唑。
25.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑是芳胺或芳香族氨基酸，其中，所述芳胺或芳香族氨基酸含有單個(gè)芳香基團(tuán)。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，所述芳胺選自多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、組胺和5-甲基組胺。
27.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述芳胺選自多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、組胺和5-甲基組胺。
28.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化劑激活神經(jīng)元內(nèi)碳酸酐酶。
29.一種方法，所述方法包括以下步驟a)識(shí)別患有抑郁癥的對(duì)象；和b)給予所述對(duì)象有效量的含有蛋白激酶C活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述PKC活化劑選自FGF-18、大環(huán)內(nèi)酯、苯并內(nèi)酰胺、吡咯烷酮或其組合。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征在于，所述大環(huán)內(nèi)酯是苔蘚抑素或索立抑素。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述苔蘚抑素選自苔蘚抑素-1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述苔蘚抑素是苔蘚抑素-1。
33.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述索立抑素是索立抑素-1。
34.一種在需要治療的對(duì)象中治療抑郁癥的方法，所述方法包括給予有效量的含有蛋白激酶C活化劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中，所述活化劑選自FGF-18、大環(huán)內(nèi)酯、苯并內(nèi)酰胺、吡咯烷酮或其組合。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，大環(huán)內(nèi)酯是苔蘚抑素或索立抑素。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述苔蘚抑素選自苔蘚抑素-1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其特征在于，所述苔蘚抑素是苔蘚抑素-1。
38.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述索立抑素是索立抑素-1。
39.一種篩選抗抑郁活性試劑的方法，所述方法包括以下步驟a)將在藥學(xué)上可接受的載體中的試劑給予受試對(duì)象，并將藥學(xué)上可接受的載體給予對(duì)照對(duì)象；b)分別將所述受試對(duì)象和對(duì)照對(duì)象置于水池中，測(cè)定試驗(yàn)期間游泳的距離和/或持續(xù)時(shí)間；以及c)比較受試對(duì)象與對(duì)照對(duì)象的游泳距離或持續(xù)時(shí)間，其中，與對(duì)照對(duì)象相比，受試對(duì)象增加的游泳距離或持續(xù)時(shí)間是抗抑郁活性的指標(biāo)。
40.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述水池為圓形。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，所述水池的直徑為100-200厘米。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，所述水池的直徑為150厘米。
43.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述水池提供防逃逸。
44.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，重復(fù)步驟(a)、(b)和(c)。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述步驟重復(fù)三次。
46.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，通過視頻方式測(cè)量所述游泳距離和/或持續(xù)時(shí)間。
全文摘要
本發(fā)明提供碳酸酐酶活化劑；蛋白激酶C活化劑和FGF－18的使用，以治療抑郁癥。本發(fā)明還涉及用于篩選和鑒定治療抑郁癥的化合物的改進(jìn)的動(dòng)物模型和方法。
文檔編號(hào)A61K31/196GK101060885SQ200580016109
公開日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2005年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月18日
發(fā)明者M·－K·孫, D·L·阿爾康 申請(qǐng)人:布朗歇特洛克菲勒神經(jīng)科學(xué)研究所