專利名稱：一種預(yù)防禽流感的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防雞、鴨等家禽禽流感的內(nèi)服中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
禽流感是A型禽流感病毒所引起的禽類的一種急性高度致死性傳染病。雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽及野鳥、水禽、海鳥等均可感染，但以雞和火雞為主。豬、貓、猴等多種動物和人類也可感染。
禽流感最早于1878年發(fā)生在意大利，歷史上曾被稱為雞瘟或真性雞瘟。一百多年來，禽流感不斷地侵襲著整個世界的養(yǎng)禽業(yè)，并直接威脅人類的健康和生命。1997年，香港爆發(fā)的禽流感導(dǎo)致家禽大規(guī)模死亡，并先后有18人感染禽流感病毒，其中6人死亡；2003年12月至2004年3月在東南亞爆發(fā)的H5N1型禽流感波及幾乎所有的東南亞國家和地區(qū)，造成數(shù)千萬只家禽染病死亡，及20余人感染禽流感病毒而死亡。
雖然禽流感被發(fā)現(xiàn)已有100多年的歷史，但至今人類尚未掌握完全有效的預(yù)防、治療和控制技術(shù)。禽流感疫苗是預(yù)防禽流感爆發(fā)的主要手段。如果使用的疫苗與侵襲的病毒的亞型一致，則疫苗對家禽的保護率可達到90％以上。但目前已分離出的禽流感具有15種H抗原和9種N抗原，兩種抗原的不同組合可以形成上百個血清亞型，而且流行的病毒亞型不穩(wěn)定，產(chǎn)生“漂移”，這給疫苗的研制及禽流感的診斷和防治帶來很大困難。
病毒是寄生于宿主活細胞內(nèi)的微生物，凡對病毒有抑制或殺滅作用的藥物，對宿主細胞也有一定毒性，這給抗病毒藥物的研制帶來很大困難。目前針對流感和禽流感病毒的化療藥物主要是金剛烷胺和金剛乙胺。利巴韋林是一種廣譜抗病毒藥物，臨床上也常用于治療流感，但病毒抑制試驗表明，利巴韋林在體外對流感病毒并無抑制作用。金剛烷胺和金剛乙胺在應(yīng)用初期對預(yù)防雞、鴨禽流感具有較好效果，但隨著這類藥物的普遍、長期應(yīng)用，禽流感病毒已對這類藥物產(chǎn)生嚴(yán)重抗藥性，致使這類藥物在臨床上應(yīng)用無明顯效果。1999年上市的抗流感新藥扎那米韋(Zaramivir)和奧司米韋(Oseltamivir)對人流感有確切的防治效果，對家禽禽流感的預(yù)防未見報道。但這兩種藥價格昂貴，即使對禽流感有效也難以用于養(yǎng)禽業(yè)。因此在禽流感的防治中，至今還沒有理想的化療藥物。
在我國，中醫(yī)中藥用于防治人的感冒和流感已有逾千年的歷史，積累了豐富的經(jīng)驗。人醫(yī)用于治療感冒和流感的中藥主要是清熱解毒類中藥和解表類中藥，前者有連翹、金銀花、黃芩、魚腥草、板藍根、大青葉、野菊花、桑葉、牛蒡子、蒲公英、牛黃等，后者有生姜、桂枝、麻黃、柴胡、荊芥、紫蘇、辛夷、薄荷等。此外，黃芪、防風(fēng)等中藥對人體免疫有顯著促進調(diào)節(jié)作用，也是常用的防治感冒藥物。用于防治人感冒的中成藥也品種繁多，較著名的有“銀翹片”、“雙黃連”、“清開靈”、“桂枝麻黃湯”等。
隨著我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展和獸醫(yī)藥研究的不斷深入，中藥在畜禽疾病防治上的應(yīng)用也越來越普遍，對提高畜禽的成活率和健康水平起到了積極作用。但總的來看，目前我國的中獸藥還處于藥物配伍缺少系統(tǒng)研究、產(chǎn)品劑型粗糙、有效成分不明確、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定的低技術(shù)水平。應(yīng)用中藥防治家禽禽流感的研究報道很少，未見有系統(tǒng)深入的研究報道，獸藥市場也未見對禽流感有很好防治效果的中獸藥產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種對雞、鴨等家禽禽流感有顯著預(yù)防效果的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案本發(fā)明預(yù)防禽流感的中藥組合物，它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的載體組成，其中所述的有效成分是由下列原料制成的連翹90-110重量份、金銀花40-60重量份、北板蘭根25-45重量份、黃芩40-60重量份、綿馬貫眾40-60重量份、黃芪70-90重量份。
優(yōu)選地，連翹100重量份、金銀花50重量份、北板蘭根35重量份、黃芩50重量份、綿馬貫眾50重量份、黃芪80重量份。更優(yōu)選為連翹1000g、金銀花500g、北板蘭根350g、黃芩500g、綿馬貫眾500g、黃芪800g。
本發(fā)明的中藥組合物劑型是散劑、飲水劑或顆粒沖劑。
本發(fā)明中藥組合物的制備方法，包括如下步驟(1)將連翹、金銀花、北板蘭根、黃芩、綿馬貫眾、黃芪分別粉碎成粗粉；(2)取步驟(1)連翹粗粉用乙醇水溶液作溶劑進行滲漉提取，收集滲漉液；(3)取步驟(1)制得的金銀花粗粉、北板蘭根粗粉、黃芩粗粉、綿馬貫眾粗粉，用乙醇水溶液作溶劑，進行滲漉提取，收集滲漉液；(4)取經(jīng)步驟(1)制得的黃芪粗粉用蒸餾水作溶劑，進行滲漉提取，收集滲漉液；(5)合并(2)、(3)、(4)步驟的滲漉液，靜置，過濾，減壓蒸餾回收乙醇，剩余藥液在溫度65-75℃、真空度0.02-0.04Mpa下減壓濃縮成稠膏，加入輔料制成所需劑型。
本發(fā)明的中藥組合物的又一種制備方法，包括如下步驟按權(quán)利要求1所述百分比用量稱取連翹、金銀花、北板蘭根、黃芩、綿馬貫眾、黃芪，并分別粉碎成粗粉，按水煎煮法煎煮，收集各次煎出液，沉降過濾后，在溫度65-75℃、真空度0.02-0.04Mpa下減壓濃縮至藥液的重量為中藥原材料總重量的1.0±0.1倍，往濃縮藥液中加入0.1％的苯甲酸鈉和0.05％的尼泊金作防腐劑，即得飲水劑。
本發(fā)明的中藥組合物在制備用于預(yù)防禽流感的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明首先利用“禽流感病毒雞胚攻毒試驗”(以下簡稱“雞胚試驗”)對40余種清熱解毒和解表類中藥進行篩選，發(fā)現(xiàn)綿馬貫眾、連翹、金銀花、黃芩、魚腥草、板藍根、大青葉、甘草、貫葉連翹、柴胡等十余種中藥對雞胚內(nèi)禽流感病毒有顯著抑制作用。然后利用篩選出的上述藥物進行不同的組方，分別用水煮和醇提兩種方法提取藥效成分。最后對復(fù)方進行雞胚試驗和人工發(fā)病禽流感雞治療試驗，篩選出效果較好的復(fù)方。根據(jù)試驗結(jié)果，最終確定以連翹、金銀花、北板蘭根、黃芩、綿馬貫眾、黃芪等6味中藥為原料進行組方，該方對雞、鴨禽流感有顯著防治效果。方中前5味藥均為清熱解毒之要藥，對禽流感病毒都有較強抑制作用；各味藥協(xié)同作用，不僅加強了對病毒、細菌的抑制作用，而且減少了單味藥的毒性及病毒耐藥性的產(chǎn)生。其中，連翹主含苯乙醇咖啡酸甙類化合物，綿馬貫眾主含綿馬素、三叉厥酚，金銀花主含綠原酸，板藍根主含靛藍、靛玉紅，黃芩主含黃芩甙、漢黃芩素，這些成分對細菌及病毒均有不同程度的抑制活性。黃芪含黃芪多糖，黃芪多糖對人和動物的免疫活性有顯著的促進作用，能明顯增強巨噬細胞的吞噬功能，增加TNF分泌，促進病毒抗體的生成。
具體實施例方式
實施例1本發(fā)明散劑的制備方法，包括如下步驟(1)稱取連翹10000g、金銀花5000g、北板蘭根3500g、黃芩5000g、綿馬貫眾5000g、黃芪8000g，并分別粉碎成粗粉；(2)取連翹粗粉用80％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，2.5ml/kg.min，收集滲漉液；(3)取經(jīng)步驟(1)制得的金銀花粗粉、北板蘭根粗粉、黃芩粗粉、綿馬貫眾粗粉，用60％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，3ml/kg.min，收集滲漉液；(4)取經(jīng)步驟(1)制得的黃芪粗粉用蒸餾水作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，3ml/kg.min，收集滲漉液；(5)合并(2)、(3)、(4)步驟中的滲漉液，靜置，過濾，減壓蒸餾回收乙醇，剩余藥液在溫度65℃、真空度0.02Mpa下減壓濃縮成稠膏，噴霧干燥或減壓干燥，粉碎過60目篩，得干燥細粉；(6)往步驟(5)干燥細粉中加入1.5％的白炭黑，即得散劑。其中白炭黑的作用在于改善流散性，減少吸潮性。本發(fā)明的散劑為流散性良好的粉末或粉末狀顆粒，呈棕色或棕褐色，味苦。
實施例2本發(fā)明顆粒沖劑的制備方法，包括如下步驟(1)稱取連翹9000g、金銀花5000g、北板蘭根3500g、黃芩5000g、綿馬貫眾5000g、黃芪7000g，并分別粉碎成粗粉；(2)取連翹粗粉用70％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，2.5ml/kg.min，收集滲漉液；(3)取經(jīng)步驟(1)制得的金銀花粗粉、北板蘭根粗粉、黃芩粗粉、綿馬貫眾粗粉，用50％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，2.5ml/kg.min，收集滲漉液；(4)取經(jīng)步驟(1)制得的黃芪粗粉用蒸餾水作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，3ml/kg.min，收集滲漉液；(5)合并(2)、(3)、(4)步驟的滲漉液，靜置，過濾，減壓蒸餾回收乙醇，剩余藥液在溫度75℃、真空度0.03Mpa下減壓濃縮成相對密度為1.37的稠膏；(6)向步驟(5)的稠膏加入蔗糖粉適量，蔗糖占顆粒劑成品重量的28％，混勻，制成顆粒，烘箱干燥即得顆粒沖劑。
實施例3本發(fā)明飲水劑的制備方法，包括如下步驟(1)稱取連翹1100g、金銀花500g、北板蘭根300g、黃芩600g、綿馬貫眾400g、黃芪800g，并分別粉碎成粗粉；(2)取連翹粗粉用70％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，2.5ml/kg.min，收集滲漉液；(3)取經(jīng)步驟(1)制得的金銀花粗粉、北板蘭根粗粉、黃芩粗粉、綿馬貫眾粗粉，用50％乙醇作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，2.5ml/kg.min，收集滲漉液；(4)取經(jīng)步驟(1)制得的黃芪粗粉用蒸餾水作溶劑，照流浸膏劑滲漉法進行滲漉，3.0ml/kg.min，收集滲漉液；(5)合并滲漉液，靜置，過濾，減壓蒸餾回收乙醇，剩余藥液在溫度65℃、真空度0.02Mpa下減壓濃縮得重量為3700g的濃縮藥液；(6)往步驟(5)的濃縮藥液中加入0.1％的苯甲酸鈉和0.05％的尼泊金作防腐劑，即得飲水劑。
實施例4本發(fā)明飲水劑的又一種制備方法，包括如下步驟稱取連翹1050g、金銀花400g、北板蘭根450g、黃芩400g、綿馬貫眾600g、黃芪700g，并分別粉碎成粗粉；按水煎煮法煎煮，收集各次煎出液，沉降過濾后，在溫度72℃、真空度0.04Mpa下減壓濃縮至藥液的重量為3600g，該濃縮藥液的重量在3240g-3960g范圍內(nèi)都是可行的。往濃縮藥液中加入0.1％的苯甲酸鈉和0.05％的尼泊金作防腐劑，即得飲水劑。
實施例5本發(fā)明的散劑按照實施例1所述的方法，不同之處是選用下列重量的原料連翹9500g、金銀花4500g、北板蘭根3000g、黃芩5500g、綿馬貫眾6000g、黃芪8500g。
實施例6本發(fā)明的顆粒沖劑按照實施例2所述的方法，不同之處是選用下列重量的原料連翹10500g、金銀花5500g、北板蘭根4000g、黃芩4500g、綿馬貫眾5000g、黃芪7500g。
實施例7本發(fā)明的飲水劑按照實施例3所述的方法，不同之處是選用下列重量的原料連翹920g、金銀花420g、北板蘭根260g、黃芩580g、綿馬貫眾520g、黃芪710g。
實施例8本發(fā)明的飲水劑按照實施例4所述的方法，不同之處是選用下列重量的原料連翹1080g、金銀花580g、北板蘭根430g、黃芩430g、綿馬貫眾590g、黃芪870g。
本發(fā)明的藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服中藥制劑。例如，超微粉劑、片劑等。但是為了便于給雞、鴨群體用藥，本發(fā)明優(yōu)選飲水劑、顆粒沖劑、散劑等。散劑作飼料添加用藥，飲水劑和顆粒沖劑作飲水添加用藥。但是這些不能用于限制本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明的中藥組合物預(yù)防禽流感的用量分別是(1)散劑用于預(yù)防雞、鴨禽流感，在飼料中的添加量為每噸飼料1500克至2000克；用于治療雞、鴨禽流感，在飼料中的添加量為每噸飼料2500克至3000克；(2)飲水劑用于預(yù)防雞、鴨禽流感，在適量的飲水中添加量為雞、鴨每1000克體重每天用飲水劑3-5ml；用于治療雞、鴨禽流感，在適量的飲水中添加量為雞、鴨每1000克體重每天用飲水劑6-8ml；(3)顆粒沖劑用于預(yù)防雞、鴨禽流感，在適量的飲水中添加量為雞、鴨每1000克體重每天用沖劑0.4-0.6克；用于治療雞、鴨禽流感，在適量的飲水中添加量為雞、鴨每1000克體重每天用沖劑0.7-0.9克。
以下通過試驗例進一步說明本發(fā)明所述預(yù)防禽流感的中藥復(fù)議制劑的動物急性毒性、藥效以及臨床前對禽流感雞的防治效果。
試驗一中藥組合物的動物急性毒性試驗材料與方法動物昆明種小鼠，體重為20.3±1.2g，雌雄各半。從廣州軍區(qū)后勤部軍事醫(yī)學(xué)研究所購進。
藥品中藥組合物顆粒沖劑，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣東省獸藥研制與安全評價重點實驗室研制提供。
(一)小鼠LD50測定小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，用灌喂法給藥，給藥量與濃度祥見表1，組間劑量比值為1∶0.8，劑距1∶3，一次給藥后小鼠正常，連續(xù)觀察7天，小鼠全部存活，無法測得LD50。
(二)最大耐受量試驗取小鼠30只，觀察三天后進行試驗，試驗前一天禁食不禁水，在室溫25±2℃條件下，灌喂一次，藥物濃度為0.5g/ml(最大混懸濃度)，給藥量為1ml/20g(最大體積)，一日內(nèi)給藥累計為25g/kg，給藥后，飼養(yǎng)觀察二周。
給藥后觀察期間，小鼠飲食、糞便、皮毛正常，生長活動情況良好，無一動物死亡，剖檢觀察主要臟器未見異常。
表1 中藥組合物飲水劑LD50測定結(jié)果

討論與小結(jié)用藥物的最大混懸濃度(0.50g/ml)灌喂給藥(劑量為12.5g/kg)，無法測出LD50，故測定其最大耐受量。在小鼠能夠接受的最大濃度下(0.5g/ml)的最大體積(1ml)進行急性毒性測定，主要觀察給藥兩周內(nèi)的不良反應(yīng)。結(jié)果小鼠在給藥量為25g/kg的最大藥物劑量下，觀察期間未見小鼠有不良反應(yīng)，尸檢也未見主要臟器有異常變化，結(jié)果提示該藥基本無毒性，臨床使用安全。
試驗二中藥組合物口服液藥效學(xué)試驗1.試驗材料1.1試驗雞50天齡優(yōu)質(zhì)黃雞。1天齡時從廣東省家禽研究所粵禽公司購進，飼養(yǎng)至50天齡開始試驗。在雞40天齡采用紅細胞凝集抑制試驗(HI)測定禽流感病毒(AIV)為陰性。
1.2飼料從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院試驗雞場購進，不添加任何藥物。
1.3藥物所用中藥材原料均從廣州市藥材公司購進，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣東省獸藥研制與安全評價重點實驗室提取并配制中藥組合物飲水劑(口服液)。每毫升口服液相當(dāng)于1g生藥。金剛烷胺購自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)華天公司，金剛乙胺購自浙江?？抵扑幱邢薰?，兩種藥物均經(jīng)熔點測定和質(zhì)譜分析與文獻值一致。金剛烷胺和金剛乙胺用蒸餾水直接溶解，配成質(zhì)量濃度為0.2％的藥液。
1.4攻毒毒株H5血清亞型禽流感病毒(半數(shù)感染濃度1.0×10-6)，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院禽病研究室保存。
2.試驗方法試驗分組50天齡優(yōu)質(zhì)黃雞90只，雌雄各半，隨機分為5組，正常對照組10只，其余各組均為20只，詳細分組情況見表2。
攻毒將含禽流感病毒的雞胚尿囊液稀釋為0.5×10-5濃度，每只雞腹部肌肉注射0.2ml接種。
給藥試驗給藥各組在接種AIV當(dāng)天，灌喂給藥，給藥各組均灌喂5ml，健康對照組和感染對照組灌喂生理鹽水，每天灌喂1次，連續(xù)灌喂7天。
藥效評價標(biāo)準(zhǔn)試驗持續(xù)21天，每天觀察雞的死亡情況和臨床表現(xiàn)，病死雞進行尸體剖檢，試驗前后每只雞進行稱重。按下列標(biāo)準(zhǔn)對藥效進行評價(1)死亡凡在試驗期間，出現(xiàn)禽流感典型癥狀并死亡，尸體剖檢有典型病變特征的即判定為感染死亡。(2)有效試驗結(jié)束后，所有經(jīng)給藥后仍存活的雞均判定為有效，試驗結(jié)束時每組存活的雞數(shù)占試驗雞數(shù)的百分率為有效率。(3)增重根據(jù)試驗開始時和試驗結(jié)束時每只雞的體重，計算每只雞的增重、每組試驗雞的平均體重和標(biāo)準(zhǔn)差。相對增重率是按各用藥治療組與健康對照組的平均增重之比計算，其中健康對照組設(shè)為100％。
3.動物試驗結(jié)果3.1感染對照組20只感染雞中有17只在接種禽流感病毒15天內(nèi)死亡，存活的3只至第21天仍健康存活。其中接種病毒后第3天死亡2只，第4天死亡3只，第4天死亡5只，第5天至第10天死亡5只，第11天至第15天死亡2只。主要癥狀精神沉郁，食欲下降或廢絕；羽毛松亂，眼流淚液；排水樣糞便；不愿走動，嚴(yán)重者臥地不起，有彎頸、打轉(zhuǎn)、蹦跳等神經(jīng)癥狀。尸體剖檢特征口腔有粘液，肝、腎、膽等多個器官腫大并有出血點，出血點通常呈紫黑色。
3.2給藥組感染雞經(jīng)給藥治療后，中藥組合物組只有1只死亡，成活率為95％，大部分雞只未出現(xiàn)臨床癥狀，個別雞只出現(xiàn)眼流淚、羽毛松亂等輕度病癥，但在試驗第21天癥狀完全消失。金剛烷胺組雞只死亡18只，金剛乙胺組雞只死亡15只。具體見表2。
表2 三種藥物對禽流感病毒感染雞的防治效果

4.結(jié)論試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥組合物對人工感染禽流感病毒的雞具有很好的保護效果，感染雞只的存活率達95％，而傳統(tǒng)的抗流感病毒藥物“金剛烷胺”、“金剛乙胺”的有效率分別只有10％和25％，差異極顯著。中藥組合物組雞只的增重與健康對照組相當(dāng)，顯著優(yōu)于“金剛烷胺”和“金剛乙胺”組，表明中藥組合物不僅對雞禽流感具有良好的防治效果，而且對雞的生長無不良影響。
試驗三中藥組合物飲水劑對同居感染禽流感雞的防治效果試驗1.試驗材料1.1試驗雞50天齡優(yōu)質(zhì)黃雞。1天齡時從廣東省家禽研究所粵禽公司購進，飼養(yǎng)至50天齡開始試驗。在雞40天齡采用紅細胞凝集抑制試驗(HI)測定禽流感病毒(AIV)為陰性。
1.2飼料從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院試驗雞場購進，不添加任何藥物。
1.3藥物所用中藥材原料均從廣州市藥材公司購進，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣東省獸藥研制與安全評價重點實驗室提取并配制中藥組合物飲水劑。每毫升飲水劑相當(dāng)于1g生藥。金剛乙胺購自浙江?？抵扑幱邢薰荆埸c測定和質(zhì)譜分析結(jié)果與文獻值一致。金剛乙胺用蒸餾水直接溶解，配成質(zhì)量濃度為1％的藥液。
1.4攻毒毒株H5血清亞型禽流感病毒(半數(shù)感染濃度1.0×10-6)，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院禽病研究室保存。
2.試驗方法人工感染禽流感雞只45天齡優(yōu)質(zhì)黃雞50只，雌雄各半，將含禽流感病毒的雞胚尿囊液稀釋為0.5×10-5濃度，每只雞腹部肌肉注射0.2ml接種。接種后第3天開始發(fā)病，每日將有明顯臨床癥狀的發(fā)病雞只做好標(biāo)記，并平均分配至各試驗雞群中，直至接種后第10天。
試驗分組45天日齡優(yōu)質(zhì)黃雞110只，雌雄各半，隨機分為6組，正常對照組10只，其余各組均為20只，詳細分組情況見表3。
給藥在有人工感染禽流感雞只轉(zhuǎn)入試驗欄的當(dāng)天開始飲水給藥。飲水給藥前斷水3小時。中藥組合物飲水劑分別按每只雞5ml、10ml的份量，1％的金剛乙胺分別按每只雞1ml、2ml的份量加入裝有600ml自來水的飲水器中，每天1次，供雞只自由飲水。加入藥物的水飲完后，給自來水供雞飲用。對照組供飲自來水。
藥效評價標(biāo)準(zhǔn)試驗持續(xù)28天，每天觀察雞的死亡情況和臨床表現(xiàn)，病死雞進行尸體剖檢，試驗前后每只雞進行稱重。藥效評價標(biāo)準(zhǔn)同試驗二。
人工感染的供毒源雞只與同居試驗雞只分別記錄、統(tǒng)計處理。
3.動物試驗結(jié)果3.1同居感染對照組
20只同居感染雞中有13只在轉(zhuǎn)入人工發(fā)病禽流感雞只后28天內(nèi)死亡。其中第3天死亡1只，第4天死亡2只，第5天死亡4只，第5天至第10天死亡4只，第11天至第28天死亡2只。
3.2給藥組同居感染雞經(jīng)給藥治療后，中藥組合物5ml劑量組全部存活，10ml劑量組有1只死亡，存活率為95％。金剛乙胺10mg和20mg劑量組雞只分別死亡9只和11只。具體見表3。人工感染供毒源雞只全部死亡。
表3 中藥組合物和金剛乙胺對同居感染禽流感雞的防治效果

4.結(jié)論同居感染的藥物防治試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥組合物對同居感染禽流感雞只具有良好的保護效果，每只每天供5ml和10ml飲水劑的存活率分別達100％和95％，顯著優(yōu)于金剛乙胺的保護效果。此外，同居感染對照組的雞只并未全部發(fā)病，存活率為35％。
中藥組合物組雞只的增重比健康對照組稍差，但差異不顯著，相對健康組分別為94.32％和94.07％。金剛乙胺對雞的生長有明顯影響，10mg和20mg劑量組增重比健康對照組分別下降12％和24％。同居感染試驗表明本發(fā)明的中藥組合物對自然感染禽流感雞具有良好的防治效果。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防禽流感的中藥組合物，它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的載體組成，其特征在于所述的有效成分是由下列原料制成的連翹90-110重量份、金銀花40-60重量份、北板蘭根25-45重量份、黃芩40-60重量份、綿馬貫眾40-60重量份、黃芪70-90重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述的有效成分是由下列原料制成的連翹100重量份、金銀花50重量份、北板蘭根35重量份、黃芩50重量份、綿馬貫眾50重量份、黃芪80重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述的有效成分是由下列原料制成的連翹1000g、金銀花500g、北板蘭根350g、黃芩500g、綿馬貫眾500g、黃芪800g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于其劑型是散劑、飲水劑或顆粒沖劑。
5.一種制備權(quán)利要求1所述的中藥組合物的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將連翹、金銀花、北板蘭根、黃芩、綿馬貫眾、黃芪分別粉碎成粗粉；(2)取步驟(1)連翹粗粉用乙醇水溶液作溶劑進行滲漉提取，收集滲漉液；(3)取步驟(1)制得的金銀花粗粉、北板蘭根粗粉、黃芩粗粉、綿馬貫眾粗粉，用乙醇水溶液作溶劑，進行滲漉提取，收集滲漉液；(4)取經(jīng)步驟(1)制得的黃芪粗粉用蒸餾水作溶劑，進行滲漉提取，收集滲漉液；(5)合并(2)、(3)、(4)步驟的滲漉液，靜置，過濾，減壓蒸餾回收乙醇，剩余藥液在溫度65-75℃、真空度0.02-0.04Mpa下減壓濃縮成稠膏，加入輔料制成所需劑型。
6.一種制備權(quán)利要求1所述的中藥組合物的方法，其特征在于包括如下步驟按權(quán)利要求1所述百分比用量稱取連翹、金銀花、北板蘭根、黃芩、綿馬貫眾、黃芪，并分別粉碎成粗粉，按水煎煮法煎煮，收集各次煎出液，沉降過濾后，在溫度65-75℃、真空度0.02-0.04Mpa下減壓濃縮至藥液的重量為中藥原材料總重量的1.0±0.1倍，往濃縮藥液中加入0.1％的苯甲酸鈉和0.05％的尼泊金作防腐劑，即得飲水劑。
7.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備用于預(yù)防禽流感的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種預(yù)防雞、鴨禽流感的中藥組合物，它是由有效成分和/或藥學(xué)上可接受的載體組成，其特征在于所述的有效成分是由下列原料制成的連翹90－110重量份、金銀花40－60重量份、北板蘭根25－45重量份、黃芩40－60重量份、綿馬貫眾40－60重量份、黃芪70－90重量份。上述組方可以是任何一種獸用藥內(nèi)服劑型。本發(fā)明藥物對家禽禽流感防治效果顯著，使用安全、方便。
文檔編號A61P31/16GK1682843SQ20051001143
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月15日
發(fā)明者曾振靈, 陳建新, 陳杖榴, 王林川, 郭仁東, 方炳虎, 孫永學(xué) 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)