專利名稱：一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
龜鹿驢三膠歷經(jīng)千百年，一直為民眾視為補(bǔ)益之珍品，然而純用三膠，不知配合其它藥物以增強(qiáng)療效，或配伍比例不恰當(dāng)，不但易于產(chǎn)生助火生熱，滋膩難化之弊，而且難于堅(jiān)持服用。其次服用不方便，每次需要蒸煮烊化，這對于現(xiàn)代生活節(jié)奏加快的人們來說，繁瑣的服藥方式，已顯得越來越不適應(yīng)。因此本類產(chǎn)品也就應(yīng)運(yùn)而生，發(fā)明人開發(fā)了具有古方特色、制劑新穎、服用方便的制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物及其制備方法，克服了上述藥物的缺點(diǎn)，具有療效顯著、無毒副作用的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，是由包括以下重量份原料制成的藥劑龜甲膠10-14 枸杞子22-26 女貞子50-70 鹿角膠5-7黃芪22-26黃精50-74阿膠20-40當(dāng)歸20-28丹參50-70陳皮30-42山楂60-84所述原料為以下重量份原料龜甲膠12 枸杞子24女貞子60 鹿角膠6黃芪24 黃精62 阿膠30當(dāng)歸24丹參60 陳皮36 山楂72所述原料還包括適量蔗糖和/或可溶性淀粉。
所述蔗糖、可溶性淀粉優(yōu)選為以下重量份蔗糖650-850和/或可溶性淀粉100-160。
所述蔗糖、可溶性淀粉為最好以下重量份蔗糖750和/或可溶性淀粉130。
所述藥劑可以為多種藥劑學(xué)上的劑型，優(yōu)選為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液，最好為膠囊劑。
本發(fā)明還提供了一種上述補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，包括以下步驟陳皮提取揮發(fā)油；當(dāng)歸、丹參、女貞子乙醇提取，提取液濾過，回收乙醇；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂四味，加水煎煮，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的提取液，濃縮為清膏；取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，與清膏混勻，加入陳皮揮發(fā)油，按常規(guī)制成所述制劑。
所述的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，還包括以下步驟所述取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，加入可溶性淀粉和余量蔗糖細(xì)粉。
所述的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，具體步驟可為陳皮提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；當(dāng)歸、丹參、女貞子用80％乙醇回流提取二次，第一次加乙醇6倍量，回流1.5小時，第二次加乙醇4倍量，回流1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至無醇味，備用；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂四味，加水煎煮二次，第一次加6倍量水，提取1.5小時，第二次加4倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的合并液，濃縮至相對密度為1.32-1.37(80℃)的清膏。取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，加入可溶性淀粉和余量蔗糖細(xì)粉，與清膏混勻，制粒，干燥，噴入陳皮揮發(fā)油，密封放置24小時，分裝，即得顆粒劑。
本發(fā)明的功能主治本發(fā)明藥物是一種純中藥制劑，具有補(bǔ)腎，益氣，養(yǎng)血的功效，適用于脾虛不足引起的頭暈，目眩，疲倦乏力，腰腿酸軟等；也可用于缺鐵性貧血的輔助治療。
本發(fā)明藥物的協(xié)同配伍作用龜板膠、鹿角膠、阿膠為我國傳統(tǒng)的補(bǔ)劑三膠，均收載于國家《藥典》，劑型為固體膠。三膠中龜板膠養(yǎng)陰，鹿角膠壯陽，阿膠補(bǔ)血，功能各有不同。
龜板膠，《藥典》又稱龜甲膠。《本草正源》龜板膠功同龜板，而氣味濃厚，尤屬純陰，能退孤陽?！侗静萸笳妗贰暗么藙t陽得隨陰化，而陽不致獨(dú)旺”。
鹿角膠，《本草匯言》“鹿角膠，壯元陽，補(bǔ)氣血，生精髓，暖腰膝之藥也……此系血屬之精，較草木之無情，更增一籌之力矣。”驢膠，又稱阿膠?！侗静菥V目》“阿膠，大要是滋補(bǔ)血液”《本草經(jīng)疏》“主女子下血，腹內(nèi)崩，腰腹痛，胎不安及丈夫虛勞贏瘦，腳酸不能久立等癥?！鼻宕祆`胎創(chuàng)“龜鹿二仙膏”龜膠配枸杞，養(yǎng)陰生精；鹿膠配人參益氣助陽，為膠劑復(fù)方之始。(見《蘭臺軌苑》)龜鹿二仙膏劑改為稠膏，“功能大補(bǔ)精髓，益氣養(yǎng)神?！睉?yīng)用至今成為傳統(tǒng)名膏。
本產(chǎn)品是在集中古今運(yùn)用三膠經(jīng)驗(yàn)理論的基礎(chǔ)上組合而成的。有兩層含義一是指龜、鹿、驢三膠，為膠劑的瑰寶；二是指人身精氣神三寶。人身三寶，養(yǎng)生防病必須重視的三個方面。三個方面又是密切相關(guān)的，所以任何一個方面有損害，均可相互影響。本方在龜、鹿、驢三膠的基礎(chǔ)上配合枸杞、女貞子、黃芪、黃精、丹參、當(dāng)歸及陳皮、山楂等味，不但可保持三個方面的協(xié)調(diào)平衡，而且具有生精、益氣、安神之功效。
本發(fā)明藥物中龜膠、枸杞、女貞子、養(yǎng)陰生精，為君藥；鹿膠、黃芪、黃精、益氣助陽，為臣藥；驢膠、當(dāng)歸、丹參、補(bǔ)血安神，為佐藥；陳皮、山楂、消脂助化，為使藥。諸藥配合，相互協(xié)同，相得益彰，如龜膠與鹿膠相配，則陰陽協(xié)調(diào)。黃芪與當(dāng)歸同用，則氣血雙補(bǔ)。且丹參功同四物，與當(dāng)歸為伍，既補(bǔ)血又能行血，陳皮與山楂為伍，既行滯又能助化。由于組方配伍之妙，溫而不燥，滋而不膩，具有一般膠(膏)劑所未有的特點(diǎn)。
本發(fā)明所述補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)1、純中草藥制劑，療效好，無毒副作用。
2、本發(fā)明藥物臨床驗(yàn)證結(jié)果表明，對于氣陰兩虛證的證候總顯效率為56.7％，總有效率達(dá)93.3％；對于缺鐵性貧血、慢性疲乏癥的總顯效率、總有效率則分別為33.3％、96.7％、46.7％、90.0％。其證候以及對于缺鐵性貧血的總顯效率與對照藥比較，有顯著性差異(P＜0.05)。對于氣陰兩虛證及其上述證候的缺鐵性貧血和慢性疲乏癥具有較好療效，能顯著改善患者的臨床證候及癥狀，提高缺鐵性貧血患者、血清鐵，增強(qiáng)慢性疲乏癥患者體液免疫功能；療程應(yīng)在1個月以上；觀察過程中沒有發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。該藥是一種較為理想的用于中老年人或病后氣陰兩虛證保健康復(fù)及具有上述見證的缺鐵性貧血、慢性疲乏癥等病輔助治療藥物。
3、能提高氣虛、陽虛小鼠游泳耐力及缺氧環(huán)境下的生存能力，能促進(jìn)失血性血虛小鼠Hb、RBC的生成，能增進(jìn)小鼠非特異性與特異性免疫功能，對小鼠具有較好的鎮(zhèn)靜作用，對小鼠的催眠作用不明顯，能增強(qiáng)雄性大鼠的性欲及交配能力。
4、小鼠1日內(nèi)按120ml/kg的累計(jì)容量IG給予274.6％“三膠”溶液，給藥后均無異常情況發(fā)生，1周內(nèi)無一死亡。該劑量為50kg成人每公斤體重日用量的914.3倍。
大鼠按10ml/kg容量每日IG給予34.32％與137.28％本發(fā)明藥物(“三膠”溶液)56天，每14天稱取體重1次，在實(shí)驗(yàn)第57天取血作血液學(xué)檢查(Hb、RBC、WBC、N、L、Pt)和肝腎功能檢查(ALT、T-BIL、Bun、Crea、TP、T-CHO)，取心、肝、脾、肺、腎稱重，計(jì)算臟器系數(shù)；取心、肝、脾、腎、睪丸作組織切片，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，上述指標(biāo)與空白組比較均無顯著性差異，提示“三膠”顆粒長期服用無毒副作用。
為證明本發(fā)明補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)行了以下臨床試驗(yàn)和藥理試驗(yàn)本發(fā)明藥物組合物由湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院負(fù)責(zé)，組織湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、湖南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院驗(yàn)證人員進(jìn)行了臨床驗(yàn)證，顯著效果。研究結(jié)果總結(jié)如下一、臨床資料共驗(yàn)證觀察160例。其中1∶1對照觀察120例，開放性驗(yàn)證觀察40例。驗(yàn)證組與對照組各60例性別、年齡、職業(yè)、病例來源，病程經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，無顯著性差異(P＜0.05＝，說明兩組間均衡性良好，具有可比性。見表1

注治療組與對照組比較*P＞0.05。
二、病例選擇標(biāo)準(zhǔn)采用以證為主，證病結(jié)合方式選擇觀察對象。
2.1辯證診斷標(biāo)準(zhǔn)2.1.1氣陰兩虛證辯證標(biāo)準(zhǔn)參照“中醫(yī)虛證辯證參考標(biāo)準(zhǔn)”(全國中西醫(yī)結(jié)合虛證與老年病研究專業(yè)委員會)制訂。
主癥①神疲乏力；②少氣或懶言；③手足心熱；④咽燥口干；⑤舌質(zhì)淡或紅，少苔或苔花剝；⑥脈虛無力，或脈細(xì)數(shù)無力。
次癥①頭暈眼花；②耳鳴耳聾；③腰腿酸軟；④心悸；⑤健忘；⑥失眠或多夢；⑦肢體麻木；⑧食欲減退；⑨性功能減退。
辯證主癥必備，次癥具備2項(xiàng)(含2項(xiàng))以上。
2.1.2缺鐵性貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(張之南主編，天津科學(xué)技術(shù)出版社)①紅細(xì)胞低色素性貧血男性Hb＜120g/L，女性Hb＜110g/L，孕婦Hb＜100g/L；MCV＜80fl，MCH＜26pg，MCHC＜0.31；紅細(xì)胞形態(tài)有明顯低色素表現(xiàn)。
②有明確的缺鐵病因和臨床表現(xiàn)。
③血清鐵＜8.95mol/L，總鐵結(jié)合力＞64.44umol/L④轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度＜0.15。
⑤骨髓鐵染色顯示骨髓小?？扇捐F消失，鐵幼粒紅細(xì)胞＜15％。
⑥紅細(xì)胞游離原卟啉＞0.9umol/L(＞50ug/dl)(全血)，或血液鋅原卟啉＞60ug/dl(全血)，或FEP/Hb＞4.5ug/gHb。
⑦血清鐵蛋白(SF)＜14ug/L。
⑧鐵劑治療有效。
符合第①條和②~⑧條中任何二條以上者可診斷為缺鐵性貧血。
2.1.3慢性疲乏癥診斷標(biāo)準(zhǔn)。
慢性疲乏癥是因體質(zhì)虛弱，勞倦思慮過度及病后失調(diào)所致，以較長時期肢體疲乏，精神不振為突出表現(xiàn)和就診動因的一組癥征，臨床上較為常見，但目前中西醫(yī)均無確切病名和診斷標(biāo)準(zhǔn)。該癥臨床上與西醫(yī)慢性疲勞綜合癥有一定相似之處，但二者的發(fā)病原因完全不同，從其發(fā)病原因及臨床特征分析，似應(yīng)歸于中醫(yī)“虛勞”，然無論病程和病情程度均叫“虛勞”為輕。茲參考中醫(yī)“虛勞”病診要點(diǎn)(方藥中等主編、實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科學(xué)、上?？茖W(xué)技術(shù)出版社和西醫(yī)“慢性疲勞綜合癥診斷標(biāo)準(zhǔn)”(The Medial Clinics of North America Vol74.NO.5.1990.1130)”以及“神經(jīng)癥臨床工作診斷標(biāo)準(zhǔn)(中華神經(jīng)精神科雜志編委制訂)制訂如下標(biāo)準(zhǔn)①病因?qū)W標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)素弱，房室、勞倦、思慮過度；或長期飲食、起居失節(jié)；或患急性病、慢性病急性發(fā)作后，但有所患疾病已痊愈或緩解的依據(jù)。至少必須具備其中之一項(xiàng)。
②癥狀學(xué)標(biāo)準(zhǔn)以肢體疲乏無力，精神不振為突出癥狀和就診主要動因，常伴有飲食、睡眠失調(diào)，注意難集中，焦慮不安等癥。
③嚴(yán)重程度標(biāo)準(zhǔn)對工作、學(xué)習(xí)和生活產(chǎn)生不利影響，按常規(guī)休息后不能和持續(xù)消除和緩解，主動要求治療。
④病程標(biāo)準(zhǔn)與上述病因有直接因果聯(lián)系，持續(xù)時間至少在半個月以上。
⑤應(yīng)排除病癥急性感染，惡性腫瘤，重癥肌無力，中、重度貧血，重度營養(yǎng)不良，慢性消耗疾病伴惡病質(zhì)，免疫性肌病等。
2.2納入標(biāo)準(zhǔn)2.2.1驗(yàn)證用藥前1周內(nèi)四診辯證符合上述兩虛辨證標(biāo)準(zhǔn)。
2.2.2驗(yàn)證用藥前2周內(nèi)檢查符合上述疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)之一；若兼有多種疾病，必須以上述疾病之一為第一診斷。
2.2.3年齡20~65歲。
2.2.4觀察前半個月內(nèi)未服過以上述病證為主要適應(yīng)癥的中西藥物及采用過針對上述病證的其他治療方法。
2.2.5自愿作為受試對象，并能接受觀察藥物劑型，保證完成療程。
三、驗(yàn)證方法本方案采用分層隨機(jī)、陽性藥物對照、單盲觀察設(shè)計(jì)方案。
3.1病例來源臨床驗(yàn)證參加單位的住院或門診病例。若為門診病例，觀察者應(yīng)嚴(yán)格控制干擾因素，保證受試對象單純服用試驗(yàn)用藥。
3.2觀察例數(shù)根據(jù)中藥新藥臨床驗(yàn)證例數(shù)的規(guī)定及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有關(guān)樣本量的要求，擬觀察160例，其中1∶1對照觀察120例，開放性擴(kuò)大驗(yàn)證40例；病種中缺鐵性貧血和慢性疲乏癥各80例。
3.3分組方法按病種分為缺鐵性貧血病(Q)、慢性疲乏癥(M)兩層，分別將各層內(nèi)編號Q01~80、M0~80，然后將各層01~60號用隨機(jī)數(shù)字表法分為驗(yàn)證組與對照組，每組倒數(shù)相等；兩病其余60~80號分入開放性驗(yàn)證組。驗(yàn)證時先將納入觀察病例按病種確定層次，再按就診先后排序確定編號并分入相應(yīng)組別。
3.4服藥方法3.4.1試驗(yàn)藥品①受試藥本發(fā)明實(shí)施例1藥物組合物(以下稱三膠顆粒)，規(guī)格15g/包，10包/盒。
②對照藥驢膠補(bǔ)血顆粒，規(guī)格20g/包，10包/盒。
對照藥為國內(nèi)有正式批準(zhǔn)文號和收入部頒標(biāo)準(zhǔn)，并有一定影響的補(bǔ)血藥物，其功能滋陰補(bǔ)血，健脾益氣，調(diào)經(jīng)活血，用于久病體虛、血虧氣虛。與受試藥作用與用途相似，劑型、用法用量相同，基本符合中藥新藥有關(guān)陽性對照藥的要求。
3.4.2用量用法①受試藥每次1包，1日3次，溫開水沖服。
②對照藥每次1包，1日2次，溫開水沖服。
3.4.3療程驗(yàn)證組與對照組均以15天為一療程，連服兩個療程。
3.4.4并用療法控制觀察過程中，受試者不得服用以氣陰兩虛型缺鐵性貧血和慢性疲乏為主要適應(yīng)癥的中西藥物及采用針對上述病證的其他治療方法。
3.5觀測方法3.5.1盲法選擇采用單盲法觀察。
3.5.2觀測指標(biāo)(1)證病主癥及分級計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)見表2。
表2證病主癥及分級計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)


(2)不良反應(yīng)及臨床分度主要觀察服藥后觀察對象新出現(xiàn)的癥狀和體征，應(yīng)注意與病癥癥狀相區(qū)別。不良反應(yīng)按以下標(biāo)準(zhǔn)分度輕度服藥過程中偶而出現(xiàn)，癥狀輕微，持續(xù)時間不超半小時；中度服藥后或一段時間后間斷出現(xiàn)，癥狀較輕，持續(xù)時間不超過半天；重度服藥后即出現(xiàn)，癥狀重且經(jīng)常發(fā)生，常持續(xù)半天以上。
(3)檢測指標(biāo)血常規(guī)，大便常規(guī)，小便常規(guī)，血清鐵及總鐵結(jié)合力(限于缺鐵性貧血)，免疫球蛋白IgA、G、M(限于慢性疲乏癥)，肝、腎功能。
3.6資料統(tǒng)計(jì)處理方法組間均衡性分析、療效中總顯效率(臨床控制加顯效率)比較采用X2檢驗(yàn)(前者若為計(jì)量資料采用T檢驗(yàn))，組間等級療效比較采用Ridit分析，主癥積分、血色素、血清鐵等計(jì)量資料采用T檢驗(yàn)。
四、驗(yàn)證結(jié)果4.1療效判斷標(biāo)準(zhǔn)療程結(jié)束后，即按下述標(biāo)準(zhǔn)評定療效。
4.1.1證候療效判斷標(biāo)準(zhǔn)臨床控制用藥后主癥積分較用藥前減少91％以上；顯效用藥后主癥積分較用藥前減少70～90％；有效用藥后主癥積分較用藥前減少36～69％；無效用藥后主癥積分較用藥前減少小于35％。
4.1.2缺鐵性貧血療效判斷標(biāo)準(zhǔn)參考《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(張之南主編，天津科學(xué)技術(shù)出版社)。
臨床控制Hb恢復(fù)正常，即男性≥120g/L，女性≥110g/L；血清鐵和總鐵結(jié)合力正常；貧血主癥消失；缺鐵的病因消除。以上4項(xiàng)同時具備。顯效以上治愈4項(xiàng)具備2項(xiàng)；或用藥后Hb上升≥30g/L，貧血主癥積分減少≥70％。有效用藥后Hb上升≥15g/L，貧血主癥積分減少≥40％。無效達(dá)不到以上有效標(biāo)準(zhǔn)。
4.1.3慢性疲乏癥療效判斷標(biāo)準(zhǔn)臨床控制用藥后神疲乏力及其兼癥消失，工作、學(xué)習(xí)和生活恢復(fù)正常。顯效用藥后神疲乏力及其兼癥積分減少≥70％，工作、學(xué)習(xí)和生活基本恢復(fù)正常。有效用藥后神疲乏力及其兼癥積分減少≥40％，工作和學(xué)習(xí)效率有一定提高。無效達(dá)不到以上有效標(biāo)準(zhǔn)。
4.2結(jié)果與分析4.2.1證候療效見表3表3 三組證候療效及其比較 注驗(yàn)證組與對照組組間比較*P＞0.05；**P＜0.05；驗(yàn)證組與開放組組間比較ΔP＞0.05。(以下表4、表5同)4.2.2病種療效見表4、表5。
表4 缺鐵性貧血三組療效及其比較 表5 慢性疲乏癥三組療效及其比較 4.2.3療效分析(1)缺鐵性貧血三組治療前后血常規(guī)、血清鐵及總鐵結(jié)合力檢查結(jié)果及其比較見表6、表7、表8。
表6 缺鐵性貧血三組血色素檢查結(jié)果及其比較(X±SD)

注驗(yàn)證組與對照組組間比較*P＞0.05；**P＜0.05；驗(yàn)證組與開放組組間比較ΔP＞0.05。
表7 缺鐵性貧血三組白細(xì)胞及血小板檢查結(jié)果及其比較(X±SD)

注組間比較*P＞0.05。
表8 缺鐵性貧血三組血清鐵及總鐵結(jié)合力檢查結(jié)果及其比較(X±SD)

注用藥前后比較ΔΔP＜0.05；組間比較*P＞0.05。
(2)缺鐵性貧血療效與療程關(guān)系分析見表9。
表9 缺鐵性貧血不同療效血常規(guī)檢查結(jié)果及其比較(X±SD)

注不同療程與用藥前比較*P＞0.05；**P＜0.05。
(3)慢性疲乏癥治療前后免疫球蛋白檢查結(jié)果及其比較見表10。
表10 慢性疲乏癥三組免疫球蛋白檢查結(jié)果及其比較(X±SD)


注驗(yàn)證組與對照組組間比較*P＞0.05；**P＜0.05。
(4)驗(yàn)證藥對不同病種療效比較；見表11。
表11 驗(yàn)證藥對不同病種療效比較

注組間比較*P＞0.05；**P＜0.05。
(5)不同驗(yàn)證單位驗(yàn)證藥證候療效及其比較；見表12。
表12 各驗(yàn)證參加單位證候療效及其比較

注組間比較*P＞0.05。
(6)驗(yàn)證組與對照組用藥前后病證主癥積分變化；見表13。
表13 兩組用藥前后主癥積分(X±SD)變化及其比較


注組間用藥前后病證主癥積分均值差比較*P＞0.05；**P＜0.05。
4.2.4不良反應(yīng)觀察過程中，驗(yàn)證組有1例出現(xiàn)輕度口渴，未作任何處理于兩天后自行消失，其余驗(yàn)證組及全部對照組觀察對象驗(yàn)證觀察過程中都沒有發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。用藥前后小便、大便常規(guī)，肝、腎功能及慢性疲乏癥患者血常規(guī)，缺鐵性貧血患者白細(xì)胞、血小板等各項(xiàng)安全性指標(biāo)檢測，結(jié)果均在正常范疇。
5.臨床驗(yàn)證結(jié)果5.1臨床驗(yàn)證結(jié)果表明，三膠顆粒驗(yàn)證組對于氣陰兩虛證的證候總顯效率為56.7％，總有效率達(dá)93.3％；對于缺鐵性貧血、慢性疲乏癥的總顯效率、總有效率則分別為33.3％、96.7％、46.7％、90.0％。其證候以及對于缺鐵性貧血的總顯效率與對照藥比較，有顯著性差異(P＜0.05)。開放組證候及病種療效與驗(yàn)證組比較以及表12所示各驗(yàn)證參加單位驗(yàn)證藥證候療效比較無明顯差異，說明該藥療效重復(fù)性良好。
5.2療效的進(jìn)一步分析表明，對于缺鐵性貧血患者，兩藥均有較好的提高血色素、血清鐵，降低總鐵結(jié)合力作用，而三膠顆粒在提高血色素方面優(yōu)于對照藥，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。該藥能增強(qiáng)慢性疲乏癥患者的體液免疫功能。表9證實(shí)，三膠顆粒提高缺鐵性貧血患者紅細(xì)胞及血色素的作用與療程有較密切的關(guān)系，提示該藥的療程最好在1個月以上。從表11對不同病種療效分析中不難看出，該藥雖對慢性疲乏癥的總顯效率優(yōu)于缺鐵性貧血，但綜合比較則無顯著性差異，提示三膠顆粒是以氣陰兩虛證為主要適應(yīng)癥而與所觀察病種無明顯關(guān)系的藥物。表13說明，兩藥均有較好的改善證病主癥作用，但三膠顆粒對于陰虛癥狀如手足心熱、口干咽燥等的療效優(yōu)于對照藥(P＜0.05)，由此體現(xiàn)出該藥組方的特點(diǎn)。
5.3驗(yàn)證觀察過程中除個別病例出現(xiàn)輕度口渴外，沒有發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)以及用藥前后檢測三大常規(guī)、肝腎功能均無異常改變，與臨床前急性毒性和長期毒性試驗(yàn)結(jié)果一致，說明三膠顆粒按驗(yàn)證計(jì)劃中的服藥方案應(yīng)用是安全的。
為了考察本發(fā)明藥物組合物(以下稱三膠顆粒)的藥效作用，進(jìn)行了以下藥效學(xué)試驗(yàn)如下實(shí)驗(yàn)材料一、藥物“三膠”浸膏，每克浸膏含生藥量為4.29克。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備成3％、5％、9％、25％、27％的浸膏濃度，其生藥濃度分別為12.87％、21.45％、38.61％、107.25％、115.83％。供大、小鼠IG用。
龜鹿補(bǔ)腎液，華天寶藥業(yè)，為陽虛及交配試驗(yàn)陽性對照藥。
驢膠補(bǔ)血顆粒，時代陽光藥業(yè)有限公司，為氣虛、血虛及免疫試驗(yàn)陽性對照藥。
安神補(bǔ)腦液，吉林敖東藥業(yè)，為鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)陽性對照藥。
l00％大黃水煎液，自制，供氣虛造模用。
二、動物NIH小鼠、SD大鼠，均購于湖南中醫(yī)學(xué)院動物室。
三、試劑氫化可的松注射液、苯巴比妥鈉、文齊氏濃縮液、苯甲酸雌二醇注射液、黃體酮注射液。
四、儀器721-分光光度計(jì)、LXJ-II離心機(jī)。
方法與結(jié)果一、抗應(yīng)激實(shí)驗(yàn)1、對氣虛小鼠游泳耐力的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為正常空白、模型空白，12.87％、115.83％“三膠”溶液及30％驢膠補(bǔ)血顆粒共5組。第2-5組按0.2ml/10g容量IG給予100％大黃水煎液，第一組給予等量蒸餾水，連續(xù)7天。于造模的第6天按0.2ml/10g容量IG給予上述藥物，連續(xù)7天。于末次給藥后30分鐘，將負(fù)重10％(體重)小鼠投入容量50kg搪瓷直型桶中，水深25cm，水溫19℃，觀察并記錄小鼠自落水至鼻孔沖不出水面的時間，為小鼠的游泳持續(xù)時間。結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表1。
表1 “三膠”對氣虛小鼠游泳耐力的影響n＝10 X±SD

注各組與模型空白組比較 ※※P＜0.05 ※※※P＜0.01表一表明，模型空白組與正?？瞻捉M比較有顯著性差異，提示氣虛模型復(fù)制成功?！叭z”小、大劑量組與模型空白組比較，均有顯著性差異，提示該品具有提高氣虛小鼠游泳耐力的作用。
2、對氣虛小鼠耐缺氧能力的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半。分組、造模，給藥均同實(shí)驗(yàn)1。末次給藥后30分鐘，將小鼠放入盛有15g鈉石灰的250ml廣口瓶內(nèi)，每瓶2只，以凡士林密封瓶口。觀察并記錄小鼠在常壓缺氧環(huán)境下的生存時間，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表2。
表2“三膠”對氣虛小鼠耐缺氧能力的影響n＝10 X±SD

注各組與模型空白組比較※※P＜0.05表2表明，模型空白組與正?？瞻捉M比較有顯著性差異，且模型空白組的生存時間均數(shù)較大?！叭z”小、大劑量與模型空白組比較，均有顯著性差異。提示該品對氣虛小鼠具有提高常壓下耐缺氧能力的作用。
3、對陽虛小鼠游泳耐力的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為正?？瞻?、模型空白，12.87％、115.83％“三膠”溶液及12％龜鹿補(bǔ)腎液共5組。每組10只，第2-5組肌注0.5ml/只醋酸氫化可的松，第一組肌注等量生理鹽水，同時按0.2ml/10g容量分別IG給予上述藥物，均連續(xù)7天。于末次給藥后1小時，同實(shí)驗(yàn)1法測定小鼠游泳的持續(xù)時間。結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表3。
表3 “三膠”對陽虛小鼠游泳耐力的影響n＝10 X±SD


注各組與模型空白組比較※※P＜0.05 ※※※P＜0.01表3表明，模型空白組與正?？瞻捉M比較有顯著性差異，提示陽虛模型復(fù)制成功?！叭z”小、大劑量組與模型空白組比較，均有顯著性差異，提示該品有提高陽虛小鼠游泳耐力的作用。
4、對陽虛小鼠耐缺氧能力的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半。分組、造模，給藥均同實(shí)驗(yàn)3。末次給藥后30分鐘，同實(shí)驗(yàn)2法測定小鼠在常壓缺氧環(huán)境下的生存時間，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表4。
表4“三膠”對陽虛小鼠耐缺氧能力的影響n＝10 X±SD

注各組與模型空白組比較※※P＜0.05表4表明，模型空白組與正常空白組比較具有顯著性異，提示模型復(fù)制成功?！叭z”小、大劑量組與模型空白組比較，均具有顯著性差異，提示該品具有增強(qiáng)小鼠常壓下耐缺氧能力的作用。
二、對失血性血虛小鼠Hb、RBC生成的影響取18-22克NIH小鼠72只，雌雄各半。12只右側(cè)眼眶靜脈叢取血測Hb、RBC值，作正?？瞻讓φ战M，余下60只同前法測Hb、RBC值，并目每鼠放血約0.5ml，造成失血性血虛模型。于失血后24小時，同前法測Hb、RBC值，做模型后指標(biāo)。以兩次測的Hb值之差大小隨機(jī)分為模型空白、12.87％、38.61％、115.83％“三膠”溶液及30％驢膠補(bǔ)血顆粒共5組，每組12只。按0.2ml/10g容量分別IG給予上述藥物，每日1次，連續(xù)7天。末次給藥后30分鐘左側(cè)眼眶靜脈叢取血測Hb、RBC值，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表5。
表5 “三膠”對失血性血虛小鼠Hb、RBC的影響n＝12 X±SD


注模型后與正?？瞻捉M比較ΔΔΔP＜0.01藥后與模型空白組比較※※P＜0.05※※P＜0.01表5表明，小鼠失血后血中Hb、RBC值明顯下降，與正?？瞻捉M比較具有顯著性差異，提示失血性血虛模型復(fù)制成功。小鼠IG給予“三膠”各劑量7天后，血中IIb、RBC值均明顯升高，與模型空白組比較，均有顯著性差異。提示該品具有促進(jìn)失血性血虛小鼠Hb、RBC生成的作用。
三、免疫試驗(yàn)1、對小鼠單核吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響取18-22克NIH小鼠48只，雌雄各半。隨機(jī)分為空白、12.87％、115.83％“三膠”溶液及30％驢膠補(bǔ)血顆粒共4組，每組12只。按0.2ml/10g容量分別IG給予上述藥物，每日1次，連續(xù)7天。末次給藥后30分鐘，于鼠尾靜脈注射10％印度墨汁，用量為0.1ml/10g體重。注射后1、5、15分鐘時用吸管分別從眼眶靜脈叢取血20ul，溶于2ml0.1％Na2C03溶液中搖勻，置721-分光光度計(jì)在600nm處比色，測定光密度(OD)。最后將小鼠頸椎脫臼處死。解剖取肝脾稱重。計(jì)算廓清指數(shù)K和校正廓清指數(shù)∝，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表6。
表6 “三膠”對小鼠單核吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響n＝12 X±SD

注各組與空白組比較 ※※P＜0.05 ※※※P＜0.01表6表明，“三膠”小、大劑量組與空白組比較，均有顯著性差異，提示該品能提高小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能。
2、對小鼠血清中溶血素生成的影響取18-22克NIH小鼠40只，雌雄各半。隨機(jī)分為空白、12.87％、115.83％“三膠”溶液及30％驢膠補(bǔ)血顆粒共4組，每組10只。按0.2ml/10g容量分別IG給予上述藥物，每日1次，連續(xù)12天。于實(shí)驗(yàn)第5天，每鼠腹腔注射5％生理鹽水雞紅細(xì)胞混懸液0.2ml進(jìn)行免疫。末次給藥后30分鐘，摘眼球取血，離心，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清1ml，與5％雞紅細(xì)胞混懸液0.5ml，10％補(bǔ)體(豚鼠血清)0.5ml混合，在37℃恒溫箱中保溫30mln后，0℃冰箱中中止反應(yīng)。離心，取上清液于721-分光光度計(jì)500nm處比色，測定光密度(OD)。結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表7。
表7 “三膠”對小鼠血清中溶血素生成的影響n＝10 X±SD

注各組與空白組比較 ※※P＜0.05 ※※※P＜0.01表7表明，“三膠”小、大劑量組與空白組比較，具有顯著性差異，提示“三膠”能提高小鼠血清中溶血素的生成，從而增強(qiáng)小鼠體液免疫功能。
四、鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn)1、對小鼠曠野活動的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半。按體重隨機(jī)分為空白、12.87％、38.61％、115.83％“三膠”溶液及20％安神補(bǔ)腦液共5組，每組10只，按0.2ml/10g容量分別IG給予上述藥物，每日1次，連續(xù)7天。于末次給藥后1小時，將鼠放入100×100×40cm的底部劃分為36個等格的無蓋曠野箱中，箱高100cm處掛150w燈泡，亮燈時進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。觀察并記錄每只小鼠放入箱后2分鐘內(nèi)在箱里活動格數(shù)(小鼠四肢走到同一格才算走動了一格)和站立次數(shù)。結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表8。
表8 “三膠”對小鼠曠野活動的影響n＝10 X±SD

注各組與空白組比較 ※※P＜0.05 ※※※P＜0.01表8表明，“三膠”各劑量組的活動格數(shù)及站立次數(shù)均明顯減少，與空白組比較均有顯著性差異，提示該品對小鼠具有較好的鎮(zhèn)靜作用。
2、小鼠戊巴比妥鈉催眠作用的影響取18-22克NIH小鼠50只，雌雄各半。分組、給藥均同上。末次給藥后1小時，每鼠腹腔注射戊巴比妥鈉0.1ml/10g(30mg/kg)。觀察并記錄每組小鼠睡眠只數(shù)，每只小鼠入睡潛伏期和維持睡眠時間，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)處理，見表9。
表9“三膠”對小鼠戊巴比妥鈉催眠作用的影響n＝10 X±SD

注各組與空白組比較 ※※P(0.05 ※※※P(0.01表9表明，“三膠”各劑量組與空白組比較，均無顯著性差異，但入睡潛伏期均數(shù)有所縮短，維持睡眠時間均數(shù)略有延長。提示該品對小鼠有催眠作用，但不明顯。
五、交配試驗(yàn)對雄性大鼠性欲的影響取200-300克SD種性成熟大鼠80只，雌雄各半。雌性大鼠準(zhǔn)備40只雌鼠用0.6％戊巴比妥鈉(45mg/kg)麻醉。于無菌條件下行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，術(shù)后肌注青霉素2萬u/kg，共3天以抗感染，飼養(yǎng)15天后供交配用。實(shí)驗(yàn)前48小時皮下注射苯甲酸雌二醇20ng/只，4小時前再次皮下注射黃體酮注射液500ug/只。
雄鼠按體重隨機(jī)分為空白、21.45％、107.25％“三膠”溶液及50％龜鹿補(bǔ)腎液共4組，每組10只。按10ml/kgIG給予上述藥物，每日1次，連續(xù)15天。于末次給藥后30分鐘，將雄鼠單獨(dú)放入42*26*18cm塑料箱中，5分鐘后加入一只準(zhǔn)備好了雌鼠，觀察并記錄投入雌鼠后雄鼠第一次捕捉雌鼠的時間為捕捉潛伏期，20分鐘內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠的次數(shù)。結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表10
表10“三膠”對雄性大鼠性欲的影響n＝10 X±SD

注各組與空白組比較 ※P＞0.05 ※※P＜0.05表10表明，“三膠”小劑量組與空白組比較無顯著性差異，但“三膠”大劑量組與空白組比較有顯著性差異，提示該品具有促進(jìn)雄性大鼠性欲的作用。
結(jié)論1、“三膠顆?！蹦苊黠@延長氣虛、陽虛小鼠游泳時間與常壓缺氧環(huán)境下的生存時間。提示該品具有提高氣虛、陽虛小鼠的抗疲勞作用和耐缺氧作用。
2、“三膠顆?！蹦苊黠@增加失血性血虛小鼠Hb、RBC值。提示該品具有促進(jìn)血液成分生成的作用。
3、“三膠顆粒”能明顯提高小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能及促進(jìn)血清中溶血素的生成。提示該品具有增強(qiáng)小鼠非特異性及特異性免疫功能的作用。
4、“三膠顆?！蹦苊黠@增強(qiáng)雄性大鼠的交配能力，表現(xiàn)為捕捉雌鼠的潛伏期明顯縮短和捕捉次數(shù)明顯增加。提示該品具有增強(qiáng)雄性大鼠性欲的作用。
為了考察本發(fā)明組合物(以下稱三膠顆粒)毒副作用，進(jìn)行了動物急性毒性和長期毒性試驗(yàn)。
動物急性毒性試驗(yàn)，試驗(yàn)如下實(shí)驗(yàn)材料一、藥物“三膠”浸膏，每克浸膏含生藥量4.29克。
二、藥物制備取“三膠”浸膏64g，加蒸餾水溶解至100ml，浸膏濃度為64％即最大濃度，其生藥含量濃度為274.6％。
三、動物18-22克昆明種小鼠，雌雄各半，由湖南中醫(yī)學(xué)院動物室提供。
方法與結(jié)果取18-22克昆明種小鼠40只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為2組，每組20只。實(shí)驗(yàn)前禁食16小時，按0.4ml/10g容量IG給予蒸餾水與274.6％的“三膠”溶液，當(dāng)日3次，間隔6小時。連續(xù)觀察1周，記錄小鼠活動、飲食、二便及死亡等情況，結(jié)果見下表。
小鼠MTD實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 n＝20 X±SD

注與蒸餾水組比較 ※P＞0.05上表表明，小鼠按最大容量(0.4ml/10g/次)于1日內(nèi)IG給予最大濃度(274.6％)的“三膠”溶液1.2ml/10g后，連續(xù)觀察1周，未見1只動物死亡。所有受試小鼠皮毛光澤，整潔，活動、飲食正常，無稀便及尿血等不良現(xiàn)象，兩組體重經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，無顯著性差異。
結(jié)論小鼠1日內(nèi)IG給予274.6％“三膠”溶液累計(jì)1.2ml/10g后，其用量達(dá)329.50g/kg，為50kg成人每公斤體重日用量(0.36g/日/kg)的915.3倍，未見一只動物死亡及任何不良反應(yīng)，提示三膠顆粒人用量安全無毒。
動物長期毒性試驗(yàn)，試驗(yàn)如下實(shí)驗(yàn)材料一、“三膠”浸膏，每克浸膏含生藥量4.29克。
二、藥物制備取“三膠”浸膏64g，加蒸餾水溶解至200ml，溶液濃度為32％，其生藥含量濃度為137.28％，取此溶液50ml加蒸餾水至200ml，得溶液濃度為8％即生藥含量濃度為34.32％的“三膠”溶液。
三、動物80-120gSD大鼠，雌雄各半，購于湖南中醫(yī)學(xué)院動物室。
四、試劑總膽紅素測定試劑盒、總膽固醇測定試劑盒、血清尿素氮試劑盒、血清肌肝試劑盒五、儀器721-分光光度計(jì)、半自動生化分析儀、日本戶光電血球計(jì)數(shù)儀。
六、試驗(yàn)環(huán)境空調(diào)控制20±3℃。
實(shí)驗(yàn)方法取80-120克SD大鼠60只，雄雌各半，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境1周。按體重隨機(jī)分為空白對照、34.32％、137.27％“三膠”溶液共3組，每組20只，雌雄分籠飼養(yǎng)。按10ml/kg容量分別IG給予上述藥物，空白對照組給予等量蒸餾水，每日1次，連續(xù)56天。實(shí)驗(yàn)期間，每日觀察大鼠行動、活動、飲食、毛發(fā)及大小便等，每14天稱取體重1次，在實(shí)驗(yàn)第57天隨機(jī)斷頭處死一半動物，每組10只，雌雄各半，取血作血液學(xué)檢查(Hb、RBC、WBC、N、L、Pt)和肝腎功能檢查(ALT、T-BIL、Bun、Crea、TP、T-CHO)，取心、肝、脾、肺、腎稱重，計(jì)算臟器系數(shù)；取心、肝、脾、腎、睪丸作組織切片，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、對大鼠體重、行為、活動及體征的影響。
大鼠在實(shí)驗(yàn)期間，其活動、飲食正常，毛色光澤整潔，無皮膚疾患發(fā)生，末見尿血及稀便等不良現(xiàn)象，無1只動物死亡。各組大鼠體重在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)均有增長，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表1。
表1 “三膠”長毒試驗(yàn)對大鼠體重的影響n＝20 X±SD(g)

注各組與空白對照組比較 ※P＞0.05表1表明，“三膠”小、大劑量組與空白對照組比較均無顯著性差異，提示大鼠長期服用該品對體重增長無明顯影響。
二、對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響大鼠給藥56天后，各組隨機(jī)選取10只，雌雄各半，斷頭取測定Hb、RBC、WBC、N、L、Pt值，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表2。
表2“三膠”長毒試驗(yàn)對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響n＝10 X±SD

注各組與空白對照組比較 ※P＞0.05表2表明，“三膠”小、大劑量組血液學(xué)指標(biāo)與空白對照組比較均無顯著性差異，提示“三膠”長期服用對正常大鼠血液學(xué)指標(biāo)無明顯毒性作用。
三、對大鼠肝腎功能指標(biāo)的影響大鼠給藥56天后，每組隨機(jī)選取10只，雌雄各半，斷頭取血，分離血清，測定ALT、T-BIL、Bun、Crea、TP、T-CHO，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表3。
表3 “三膠”長毒試驗(yàn)對大鼠肝腎功能指標(biāo)的影響n＝10 X±SD

注各組與空白對照組比較 ※P＞0.05表3表明，“三膠”小、大劑量組與空白對照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異，提示該品長期服用對正常大鼠肝腎功能無明顯毒性作用。
四、大鼠臟器系數(shù)的影響大鼠服藥56天后，每組隨機(jī)選取10只，雌雄各半，斷頭處死，解剖取出心、肝、脾、肺、腎稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，結(jié)果經(jīng)成組t檢驗(yàn)處理，見表4。
表4 “三膠”長毒試驗(yàn)對大鼠臟器系數(shù)的影響n＝10 X±SD

注各組與空白對照組比較 ※P＞0.05表3表明，“三膠”小、大劑量組心、肝、脾、肺、腎臟器系數(shù)與空白對照組比較，均無顯著性差異，提示該品長期服用對正常大鼠五臟重量無明顯毒性作用。
五、對大鼠心、肝、脾、腎、睪丸的組織學(xué)影響大鼠服藥56天后，每組隨機(jī)選取10只，雌雄各半，斷頭處死，解剖取出心、肝、脾、腎、睪丸，切片135張，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，見附(三膠)長毒試驗(yàn)的病理組織學(xué)觀察報(bào)告。結(jié)果表明，“三膠”大、小劑量組大鼠心、肝、脾、腎、睪丸的病理組織學(xué)檢查與空白對照組比較，均無顯著性差異。提示該品對正常大鼠的心、肝、脾、腎、睪丸無明顯的毒性損傷作用。
結(jié)論按50kg成人每日生藥用量18g計(jì)算，大鼠IG“三膠”溶液的劑量分別為3.432g/kg和13.728g/kg，相當(dāng)于50kg成人每公斤體重的9.53倍和38.13倍。按3.432g/kg與13.7288g/kg給藥56天后，結(jié)果表明“三膠”小、大劑量組大鼠的體重增長度，血液學(xué)指標(biāo)檢查、肝腎功能指標(biāo)檢查、臟器系數(shù)及病理組織學(xué)檢查，與空白對照組比較均無顯著性差異。提示該品長期服用基本安全無毒。
本發(fā)明藥物組合物(三膠顆粒)的長期毒性試驗(yàn)的病理組織學(xué)觀察報(bào)告實(shí)驗(yàn)大白鼠，雌雄各半，分空白對照組、三膠顆粒小劑量組和大劑量組各10只。觀察心、肝、脾、腎、睪丸。石蠟包埋、HE染色，光鏡下觀察。結(jié)果心空白組、三膠顆粒小劑量組和大劑量組大白鼠的心肌橫紋清楚，肌漿豐富，核染色質(zhì)細(xì)致。
脾空白組和實(shí)驗(yàn)各組大白鼠的脾白髓、紅髓結(jié)構(gòu)正常。
肝空白組、小劑量組和大劑量組大白鼠均見肝細(xì)胞濁腫或空泡變性，病變程度平均積分分別為1.2、1.3和1.2。實(shí)驗(yàn)各組與空白組比較，其差別在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著意義。(P＞0.05)腎空白組、小劑量組和大劑量組各有8只大白鼠可見腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，病變程度平均積分分別為0.8、0.9和0.8。實(shí)驗(yàn)各組與空白組比較，其差別在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著意義。(P＞0.05)睪丸空白組和實(shí)驗(yàn)各組大白鼠的睪丸曲細(xì)精管飽滿、生精上皮厚度與層次結(jié)構(gòu)正常。
結(jié)論本觀察未發(fā)現(xiàn)三膠顆粒對實(shí)驗(yàn)大白鼠的心、肝、脾、腎、睪丸有明顯的毒性損傷作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物顆粒劑，是由以下原料制成的(重量kg)龜甲膠12 枸杞子24女貞子60 鹿角膠6黃芪24 黃精62 阿膠30當(dāng)歸24丹參60 陳皮36 山楂72蔗糖750可溶性淀粉130制備方法陳皮提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；當(dāng)歸、丹參、女貞子用80％乙醇回流提取二次，第一次加乙醇6倍量，回流1.5小時，第二次加乙醇4倍量，回流1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至無醇味，備用；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂等四味，加水煎煮二次，第一次加6倍量水，提取1.5小時，第二次加4倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的合并提取液，濃縮至相對密度為1.32-1.37(80℃)的清膏。取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成80目，加入可溶性淀粉和余量80目蔗糖粉，與清膏混勻，制粒，于燥，噴入陳皮揮發(fā)油，密封放置24小時，分裝，即得。
性狀本品為棕黃色至棕色的顆粒；氣香，味甜。
鑒別1)取本品1g，加水20ml使溶解，濾過，取濾液點(diǎn)于濾紙上，噴以茚三酮試液，105℃加熱數(shù)分鐘，顯紫色。
(2)取本品40g，研細(xì)，加乙醇100ml，置水浴上加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材1g，加20ml同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙脂(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取齊墩果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述對照品溶液及[鑒別](2)項(xiàng)下的供試品溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙脂(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取本品50g，研細(xì)，加甲醇50ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨洗液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗滌1次，棄去水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加入已處理好的中性氧化鋁柱(100-200目，5g，柱內(nèi)徑10-15mm)上，用40％甲醇溶液100ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干。殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典200年版一部附錄VIB)試驗(yàn)吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(5)取本品10g，研細(xì)，加甲醇20ml，置于水浴上回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙脂-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑，展開約3cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙脂-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展開約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國藥典2000年版一部附錄IC)。
含量測定橙皮苷照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅為填充劑；甲醇-醋酸-水(34∶4∶62)為流動相；檢測波長為283nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。
對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含橙皮苷20ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉約2g，精密稱定，加水2ml使溶解，加醋酸乙脂30ml，超聲處理20分鐘，靜置，分取醋酸乙酯液；反復(fù)提取4次，合并醋酸乙酯液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，移?0ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每袋含橙皮苷(C28H34O15)不得少于0.73mg。
總氮量取本品4g，精密稱定，置干燥的500ml凱氏燒瓶中，然后依次加入硫酸鉀(或無水硫酸鈉)10g和硫酸銅粉末0.5g，再沿瓶壁緩緩加硫酸30ml，在凱氏燒瓶口放一小漏斗并使燒瓶成45℃斜置，用直火緩緩加熱，使溶液的溫度保持在沸點(diǎn)以下，等泡沸停止，加熱至沸騰，俟溶液成澄明的綠色后，繼續(xù)加熱30分鐘，放冷，沿瓶壁緩緩加水250ml，振搖使混合，放冷后，加40％氫氧化鈉溶液100ml，注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液層。按氮測定法第一法(中國藥典2000年版，一部附錄IXL)，從“加鋅粒數(shù)粒，用氮?dú)馇驅(qū)P氏瓶與冷凝管連接……”起，依法測定。
本品含總氮量不得少于0.5％。
貯藏密封，陰涼干燥處。
實(shí)施例2
一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物顆粒劑，是由以下原料制成的(重量kg)龜甲膠10 枸杞子22 女貞子50 鹿角膠5黃芪22黃精50 阿膠20當(dāng)歸20丹參50陳皮30 山楂60蔗糖650可溶性淀粉100制備方法同實(shí)施例1。陳皮提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；當(dāng)歸、丹參、女貞子用80％乙醇回流提取二次，第一次加乙醇4倍量，回流2小時，第二次加乙醇3倍量，回流1.5小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至無醇味，備用；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂等四味，加水煎煮二次，第一次加7倍量水，提取2小時，第二次加5倍量水，提取1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的合并提取液，濃縮至相對密度為1.32-1.37(70℃)的清膏。取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的蔗糖，粉碎成60目，加入可溶性淀粉和余量60目蔗糖粉，與清膏混勻，制粒，干燥，噴入陳皮揮發(fā)油，密封放置24小時，分裝，即得。
實(shí)施例3一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物膠囊劑，是由以下原料制成的(重量kg)龜甲膠14 枸杞子26女貞子70鹿角膠7黃芪26黃精74 阿膠40 當(dāng)歸28丹參70陳皮42 山楂84 蔗糖82制備方法同實(shí)施例1，不同在于取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的蔗糖，粉碎成80目，不再加入可溶性淀粉和蔗糖粉，制粒后進(jìn)一步裝膠囊，制成膠囊劑。
實(shí)施例4一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物片劑，是由以下原料制成的(重量kg)龜甲膠14 枸杞子26女貞子70 鹿角膠7黃芪26黃精74 阿膠40 當(dāng)歸28丹參70陳皮42 山楂84 蔗糖61制備方法同實(shí)施例1，不同在于細(xì)粉為100目；取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的蔗糖，粉碎成100目，不再加入可溶性淀粉和蔗糖粉，還加入硬脂酸鎂2kg，按常規(guī)壓成片劑，制成片劑。
實(shí)施例5一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物口服液，是由以下原料制成的(重量g)龜甲膠14 枸杞子26 女貞子70 鹿角膠7黃芪26黃精74 阿膠40當(dāng)歸28丹參70陳皮42 山楂84蜜糖50蒸餾水余量制備方法同實(shí)施例1，不同在于細(xì)粉為100目；取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入蜜糖，溶解。不再加入可溶性淀粉和蔗糖粉，還加入蒸餾水余量制成1000ml，滅菌，分裝10ml/支，制成口服液。
權(quán)利要求
1.一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，是由包括以下重量份原料制成的藥劑黃芪22-26 黃精50-74 阿膠20-40當(dāng)歸20-28丹參50-70 陳皮30-42 山楂60-84
2.根據(jù)權(quán)利要求1的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述原料為以下重量份原料龜甲膠12 枸杞子24 女貞子60 鹿角膠6黃芪24 黃精62 阿膠30當(dāng)歸24丹參60 陳皮36 山楂72
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述原料還包括適量蔗糖和/或可溶性淀粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述蔗糖、可溶性淀粉為以下重量份蔗糖650-850和/或可溶性淀粉100-160。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述蔗糖、可溶性淀粉為以下重量份蔗糖750和/或可溶性淀粉130。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物，所述藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液。
8.一種權(quán)利要求1-7之一的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，包括以下步驟陳皮提取揮發(fā)油；當(dāng)歸、丹參、女貞子乙醇提取，提取液濾過，回收乙醇；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂四味，加水煎煮，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的提取液，濃縮為清膏；取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，與清膏混勻，加入陳皮揮發(fā)油，按常規(guī)制成所述制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，還包括以下步驟所述取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，加入可溶性淀粉和余量蔗糖細(xì)粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物的制備方法，具體步驟為陳皮提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；當(dāng)歸、丹參、女貞子用80％乙醇回流提取二次，第一次加乙醇6倍量，回流1.5小時，第二次加乙醇4倍量，回流1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至無醇味，備用；藥渣與其余枸杞子、黃芪、黃精、山楂四味，加水煎煮二次，第一次加6倍量水，提取1.5小時，第二次加4倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液與陳皮蒸餾后的水溶液及回收乙醇后的合并液，濃縮至相對密度為1.32-1.37(80℃)的清膏。取龜甲膠、鹿角膠、阿膠加入該三組分總量的等量蔗糖，粉碎成細(xì)粉，加入可溶性淀粉和余量蔗糖細(xì)粉，與清膏混勻，制粒，干燥，噴入陳皮揮發(fā)油，密封放置24小時，分裝，即得顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種補(bǔ)氣養(yǎng)血藥物組合物及其制備方法，是由包括以下重量份原料制成的藥劑龜甲膠10－14、枸杞子22－26、女貞子50－70、鹿角膠5－7、黃芪22－26、黃精50－74、阿膠20－40、當(dāng)歸20－28、丹參50－70、陳皮30－42、山楂60－84。本品具有明顯治療體虛的作用，特別適合于亞健康狀態(tài)的人群服用，對于消除疲勞、增加體質(zhì)也有顯著作用。
文檔編號A61P1/00GK1663597SQ200510005200
公開日2005年9月7日 申請日期2005年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月2日
發(fā)明者馮上舒 申請人:馮上舒