專利名稱：注射用l－鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及注射用L-鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
L-鹽酸賴氨酸(化學(xué)名稱L-2，6-二氨基乙酸鹽酸鹽；英文名稱Lysine hydrochloridefor Injection)是人體8種必需氨基酸之一，是合成腦神經(jīng)生殖細(xì)胞核蛋白、血紅蛋白不可缺少的成份。進(jìn)入人體內(nèi)可代謝生成乙酰輔酶A。乙酰輔酶A是合成Achc乙酰膽堿的重要條件之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并提高中樞神經(jīng)組織功能的作用，還可抑制單純皰疹病毒的復(fù)制。L-鹽酸賴氨酸在人體內(nèi)不能合成，必須從食物中補(bǔ)充。一旦人體組織細(xì)胞處于失活狀態(tài)、且各種神經(jīng)肽鏈的功能受到抑制時(shí)，如能及時(shí)補(bǔ)充足夠的賴氨酸，就可激活組織細(xì)胞，恢復(fù)神經(jīng)肽的功能。
L-鹽酸賴氨酸是營(yíng)養(yǎng)劑和代謝改善劑，可用于治療蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良等疾病，幼兒給予足夠補(bǔ)充能促進(jìn)生長(zhǎng)，利于智力發(fā)育；妊娠期婦女服用能促進(jìn)胎兒發(fā)育，防止流產(chǎn)。賴氨酸能提高血屏障的通透性，有助于藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，用作配合治療腦病的輔助藥物。臨床上還可用于慢性腦組織缺血、缺氧性疾病的腦保護(hù)劑。若與氯化鈣配成合劑，可治療缺鈣癥。L-鹽酸賴氨酸還對(duì)臨床外傷、燒傷、大手術(shù)病后恢復(fù)、癌癥化療、放療后康復(fù)具有顯著效果。
現(xiàn)有的L-鹽酸賴氨酸注射劑一般為小水針劑和大輸液劑型，其存在的問(wèn)題是1，現(xiàn)有的小水針(10ml3g)由于在略低于常溫的條件下(10℃)有結(jié)晶析出，因此易出現(xiàn)在運(yùn)輸過(guò)程、臨床使用中遇低溫析出結(jié)晶現(xiàn)象。
2，大輸液中藥液由于會(huì)不停地與輸液瓶膠塞接觸，導(dǎo)致溶液澄明度不易合格。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對(duì)上述問(wèn)題提供一種注射用L-鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑及其制備方法，所制備的無(wú)菌粉針劑在儲(chǔ)存、運(yùn)輸、臨床使用中無(wú)結(jié)晶析出、澄明度好。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是注射用L-鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑，每瓶含L-鹽酸賴氨酸0.5-3克。
本發(fā)明還提供了上述無(wú)菌粉針劑的制備方法①將L-鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機(jī)溶劑或水中，用微孔濾膜過(guò)濾除菌，冷卻析出固體；②在析出固體的中加入可藥用的有機(jī)溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。
步驟①、②中所述可藥用的有機(jī)溶劑分別選自低級(jí)醇、低級(jí)酮、醚、乙腈、低級(jí)羧酸酯、低級(jí)鹵代烴和這些溶劑的混合物。
在本發(fā)明的實(shí)例中，低級(jí)醇可包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇或異丁醇，優(yōu)選乙醇；低級(jí)酮可包括丙酮、甲乙酮或戊酮，優(yōu)選丙酮；醚可包括乙醚、二丙基醚、異丙醚、四氫呋喃、1，4二氧六環(huán)或石油醚，異丙醚；低級(jí)羧酸酯可包括甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸乙酯，乙酸乙酯；低級(jí)鹵代烴可包括氯甲烷、二氯甲烷或1，2二氯甲烷。
本發(fā)明的可藥用的有機(jī)溶劑或水的用量?jī)?yōu)選為為50～1000ml/每摩爾L-鹽酸賴氨酸。
本發(fā)明所制備的無(wú)菌粉針劑在儲(chǔ)存、運(yùn)輸、臨床使用中無(wú)結(jié)晶析出、澄明度好。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍中。
實(shí)施例1用新鮮煮沸的注射用水45ml和55g L-鹽酸賴氨酸頃入反應(yīng)瓶中攪拌溶解，加入0.1克活性炭脫色，趁熱過(guò)濾。再將濾液用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液冷卻1小時(shí)，有結(jié)晶析出。加45mL乙醇，攪拌30分鐘后，-10℃冷卻放置12小時(shí)，結(jié)晶析出，抽濾，結(jié)晶用無(wú)水乙醇洗滌3次，置60℃真空干燥。得49.4g無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸結(jié)晶。經(jīng)粉碎、檢查，合格后，進(jìn)行分裝。
實(shí)施例2向反應(yīng)瓶中投入100g L-鹽酸賴氨酸，加入110mL沸騰的30％乙醇水溶液溶解，加入0.1g活性炭脫色，過(guò)濾，濾液再通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，冷卻待結(jié)晶析出。加入60mL丙二醇，常溫下，攪拌30分鐘，-10℃以下冷卻過(guò)夜。過(guò)濾，結(jié)晶用無(wú)水乙醇洗滌3次。40℃真空干燥。得無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸90.6g.經(jīng)粉碎、檢查，合格后，進(jìn)行分裝。
實(shí)施例3100L乙睛投入到反應(yīng)釜中，加熱至70～75℃，攪拌下加入5kg L-鹽酸賴氨酸。溶解后，加0.01kg活性炭攪拌20分鐘。粗過(guò)濾，再無(wú)菌過(guò)濾。在符合GMP要求的無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境條件下，冷卻，有結(jié)晶析出。加30L丙酮∶乙醇(體積比5∶2)混合液，攪拌1小時(shí)，-15℃冷卻10小時(shí)以上。將無(wú)菌濾液中析出的結(jié)晶抽濾，結(jié)晶用丙酮∶乙醇(體積比5∶2)溶液洗滌3次，減壓干燥，得無(wú)菌L-結(jié)晶鹽酸賴氨酸4.52kg。
實(shí)施例4向反應(yīng)瓶中投入36g L-鹽酸賴氨酸，加入溫度為約40℃的2％二氯甲烷水溶液50ml。攪拌5分鐘后，加藥用活性炭脫色。粗過(guò)濾后，再經(jīng)濾膜過(guò)濾，放置30分鐘。然后，攪拌中加入50ml丙酮。冷卻至-20℃過(guò)夜。結(jié)晶析出，抽濾，結(jié)晶用丙酮洗滌3次。常溫下真空干燥，得無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸結(jié)晶32.8g。
實(shí)施例560℃，向反應(yīng)瓶中投入25.6％L-鹽酸賴氨酸和1，4二氧六環(huán)的水溶液(1∶1)55g，加藥用活性炭0.1g，攪拌10分鐘，趁熱過(guò)濾。冷卻，再用微孔為0.22μm濾膜過(guò)濾，在符合GMP要求的無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境條件下，加入70ml 1，4二氧六環(huán)∶甲醇(1∶1)混合溶液，攪拌1小時(shí)，放置-15℃以下冷卻12小時(shí)。析出結(jié)晶，抽濾，結(jié)晶用1，4二氧六環(huán)洗滌2次，得結(jié)晶無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸47.9g。
實(shí)施例650g L-鹽酸賴氨酸溶在65℃的400ml 15％乙酸乙酯甲醇溶液中，攪拌20分鐘，加藥用活性炭0.1g。保溫10分鐘后，過(guò)濾。濾液經(jīng)濾膜過(guò)濾，除菌。濾液冷卻，結(jié)晶析出，加200ml甲醇攪拌20分鐘。-10℃以下放置12小時(shí)，析晶完全，抽濾，用10ml×3甲醇洗滌。抽干，置60℃真空干燥。得44.76g無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸結(jié)晶。
實(shí)施例750g L-鹽酸賴氨酸加到反應(yīng)瓶中，攪拌中加入70ml熱的異丙醇(約70℃)，溶解后，加藥用活性炭，繼續(xù)攪拌20分鐘。趁熱粗濾，再經(jīng)濾膜過(guò)濾除菌，濾液冷卻30分鐘。加50ml四氫呋喃，攪拌30分鐘后，于-10℃放置過(guò)夜。然后，抽濾，結(jié)晶用四氫呋喃洗滌3次。抽干后，于60℃真空干燥12小時(shí)。得無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸結(jié)晶45.1g。
實(shí)施例8攪拌中，將5kg L-鹽酸賴氨酸加裝有35L50％甲醇水溶液(60℃)反應(yīng)釜中。溶解后，加0.01kg藥用活性炭，繼續(xù)攪拌30分鐘。粗濾，濾液再通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。濾液冷卻1小時(shí)后，加35L無(wú)水乙醇，攪拌30分鐘后，于-15℃放置12小時(shí)。然后，抽濾，結(jié)晶用無(wú)水乙醇洗滌3次。抽干后，于60℃真空干燥12小時(shí)。得結(jié)晶無(wú)菌L-鹽酸賴氨酸4.59kg。粉碎、檢查合格后，進(jìn)行分裝。
用法與用量成人每日一次，每次1-3克。在使用時(shí)，需用5％或10％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液稀釋后注射。20次為一個(gè)療程。
本發(fā)明藥物質(zhì)量對(duì)本發(fā)明藥物的質(zhì)量進(jìn)行了性狀、鑒別、檢查(pH值、澄清度、有關(guān)物質(zhì)、干燥失重、澄明度、無(wú)菌、熱原)及含量測(cè)定。采用高效液相色譜法對(duì)樣品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查及L-鹽酸賴氨酸含量測(cè)定，并進(jìn)行了線性關(guān)系、回收率、精密度等試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果符合一般分析試驗(yàn)要求。根據(jù)本發(fā)明試制的三批樣品含量測(cè)定結(jié)果分別為L(zhǎng)-鹽酸賴氨酸為標(biāo)示量的98.4％、99.2％、99.8％。因此規(guī)定本品的標(biāo)示含量限度為95.0～105.0％。L-鹽酸賴氨酸的有關(guān)物質(zhì)不超過(guò)1.5％。
結(jié)果表明本發(fā)明的藥物的質(zhì)量符合藥用要求。
穩(wěn)定性試驗(yàn)影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物在高溫(60℃)條件下放置10天，有關(guān)物質(zhì)呈上升趨勢(shì)，其它項(xiàng)目均無(wú)明顯變化；在光照(4500LX)條件下，各項(xiàng)目無(wú)明顯變化，符合藥用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明本發(fā)明藥物在此條件下基本穩(wěn)定。
加速試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物經(jīng)40℃考察6個(gè)月，六個(gè)批號(hào)的樣品其性狀，澄明度、pH值、含量與0個(gè)月相比，均無(wú)明顯變化。有關(guān)物質(zhì)略有增加。因此，注射用L-鹽酸賴氨酸在40℃條件下還是比較穩(wěn)定的，可將其有效期定為二年。
長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物在25℃RH60％的條件下放置18個(gè)月，六個(gè)批號(hào)的樣品其性狀、澄明度、PH值、有關(guān)物質(zhì)、含量與0個(gè)月相比，均無(wú)明顯變化。6個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月細(xì)菌內(nèi)毒素和無(wú)菌檢查均符合規(guī)定。
本發(fā)明藥物在0℃條件下放置18個(gè)月，六個(gè)批號(hào)的樣品其性狀、澄明度、PH值、有關(guān)物質(zhì)、含量與0個(gè)月相比，均無(wú)明顯變化。6個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月細(xì)菌內(nèi)毒素和無(wú)菌檢查均符合規(guī)定。
藥理試驗(yàn)結(jié)果北京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理系等研究單位通過(guò)用大鼠腦中動(dòng)脈阻斷模型對(duì)其腦保護(hù)作用進(jìn)行觀察并與鈣拮抗劑尼莫地平進(jìn)行比較，用此模型研究藥物對(duì)腦缺血、特別是腦梗塞的影響。結(jié)果通過(guò)試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明L-鹽酸賴氨酸兩個(gè)劑量組(612.5mg.kg-1及310.8mg.kg-1)均能減少梗塞面積，且與它降低半影區(qū)變性壞死神經(jīng)元所占百分比呈正相關(guān)。據(jù)此說(shuō)明L-鹽酸賴氨酸可以挽救瀕危的急性缺血區(qū)神經(jīng)元，抑制半影區(qū)的進(jìn)行性退化，減少半影區(qū)轉(zhuǎn)化為梗塞區(qū)，為受損神經(jīng)元功能恢復(fù)提供機(jī)會(huì)。L-鹽酸賴氨酸的這種作用可能是通過(guò)非增加缺血區(qū)血流的途徑實(shí)現(xiàn)的。
從文獻(xiàn)報(bào)道的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，L-鹽酸賴氨酸612.5mg.kg-1，ip，能明顯改善神經(jīng)功能缺失，恢復(fù)肌體降低行為評(píng)分，這種功能除與其神經(jīng)元的保護(hù)作用有關(guān)外，可能還與其參加體內(nèi)的某些代謝有關(guān)。研究證明補(bǔ)充賴氨酸可以被充分吸收，在肝臟代謝成乙酰輔酶A，結(jié)合有賴氨酸的蛋白質(zhì)可轉(zhuǎn)化成肉毒堿，這兩種物質(zhì)均有助于能量產(chǎn)生和肌力的恢復(fù)本發(fā)明對(duì)L-鹽酸賴氨酸對(duì)腦損傷后大鼠的胰高血糖素，胰島素及血糖含量的影響的進(jìn)行試驗(yàn)采用落體法致大鼠損傷；傷后立刻一次腹腔注射L-鹽酸賴氨酸，24h后斷頭處死，用免疫組織化學(xué)ABC法結(jié)合圖像分析技術(shù)，觀察L-鹽酸賴氨酸(612.5mg.kg-1及310.8mg.kg-1)及310.8mg.kg-1)對(duì)腦損傷后大鼠胰島A細(xì)胞內(nèi)高血糖素(Glu)及B細(xì)胞內(nèi)胰島素(Ins)免疫反應(yīng)強(qiáng)度和光密度值的影響；用生化分析儀器測(cè)定血糖含量。結(jié)果L-鹽酸賴氨酸能顯著增強(qiáng)A細(xì)胞內(nèi)Glu免疫反應(yīng)強(qiáng)度，提高平均光密度值，增加Glu的含量，并降低血糖水平，但對(duì)B細(xì)胞內(nèi)Ins的免疫反應(yīng)強(qiáng)度及光密度值無(wú)明顯影響。結(jié)論L-鹽酸賴胺酸可抑制Glu的釋放并產(chǎn)生顯著的降血糖作用。
根據(jù)文獻(xiàn)提示L-鹽酸賴氨酸具有中樞作用。能明顯對(duì)抗小鼠斷頭后乳酸的升高及ATP、磷酸肌酸的降低，延長(zhǎng)人工呼吸停止后腦電消失的時(shí)間，降低局灶腦缺血大鼠的腦梗死面積并減少相關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元變性、壞死數(shù)目，改善缺血后的癥狀，減輕腦外傷后大鼠的腦水腫并能降低死亡率。
本發(fā)明藥物進(jìn)行血管刺激性、過(guò)敏性、溶血性試驗(yàn)，結(jié)果未見(jiàn)顯著血管刺激性反應(yīng)，對(duì)受試動(dòng)物無(wú)致敏作用，也未見(jiàn)溶血現(xiàn)象。
試驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物質(zhì)量穩(wěn)定，安全有效，制備工藝合理。
權(quán)利要求
1.注射用L-鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑。
2.按照權(quán)利要求1所述的無(wú)菌粉針劑，其特征是每瓶含L-鹽酸賴氨酸0.5-3克。
3.權(quán)利要求1所述注射用L-鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑的制備方法，其特征是①將L-鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機(jī)溶劑或水中，用微孔濾膜過(guò)濾除菌，冷卻析出固體；②在析出的固體中加入可藥用的有機(jī)溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是步驟①、②中所述可藥用的有機(jī)溶劑分別選自低級(jí)醇、低級(jí)酮、醚、乙腈、低級(jí)羧酸酯、低級(jí)鹵代烴和這些溶劑的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是低級(jí)醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇或異丁醇；低級(jí)酮為丙酮、甲乙酮或戊酮；醚為乙醚、二丙基醚、異丙醚、四氫呋喃、1，4二氧六環(huán)或石油醚；低級(jí)羧酸酯為甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸乙酯；低級(jí)鹵代烴為氯甲烷、二氯甲烷或1，2二氯甲烷。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4或5所述的制備方法，其特征是可藥用的有機(jī)溶劑或水的用量為10～10000ml/每摩爾L-鹽酸賴氨酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及注射用L－鹽酸賴氨酸無(wú)菌粉針劑，其制備方法為①將L－鹽酸賴氨酸溶解于可藥用的有機(jī)溶劑或水中，用微孔濾膜過(guò)濾除菌，冷卻析出固體；②在析出固體的中加入可藥用的有機(jī)溶劑或水，攪拌，冷卻析出固體；③析出固體用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，真空包裝。本發(fā)明所制備的無(wú)菌粉針劑在儲(chǔ)存、運(yùn)輸、臨床使用中無(wú)結(jié)晶析出、澄明度好。
文檔編號(hào)A61K31/185GK1650852SQ20041006116
公開(kāi)日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2004年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月23日
發(fā)明者周恩惠, 王紅, 曾藝, 黃毅 申請(qǐng)人:武漢同源藥業(yè)有限公司