專利名稱：防治母畜不孕癥的中藥灌注液的制作方法
技術領域：
本發(fā)明一種防治母畜不孕癥的中藥灌注液，定名為新型中藥促孕灌注液，屬于防治母畜子宮內膜炎、卵巢靜止和持久黃體性不孕癥的新型中獸藥。
二、技術背景母畜不孕癥，在各種母畜有很高的發(fā)生率，造成巨大的經(jīng)濟損失。尤其是奶牛的不孕癥成為影響奶牛業(yè)發(fā)展的一大障礙，也是奶牛業(yè)經(jīng)營虧損的重要原因，成為一個主要的世界性經(jīng)濟問題。調查結果表明，由子宮內膜炎引起的不孕癥所占的比例最高，其次是卵巢靜止和持久黃體。
對于子宮內膜炎的治療，西獸醫(yī)主要應用抗生素類和防腐消毒類藥物進行子宮沖洗和灌注。這種方法雖有療效，但須反復使用。而且，藥物的刺激會使一些母畜出現(xiàn)疼痛、努責、廢食、發(fā)熱和生產能力下降等現(xiàn)象。同時，頻繁使用抗生素會導致某些細菌產生抗藥性，不但治療效果越來越差，而且導致抗菌素的用量越來越大。長期使用抗生素又會增加畜產品中的殘留量，帶來食品安全問題。
對卵巢靜止和持久黃體性不孕癥的治療，西獸醫(yī)主要采用激素療法。Braun認為，激素方法很難達到預期效果，在發(fā)情周期的不同階段和卵巢發(fā)生囊腫時，垂體前葉對促性腺激素的反應有顯著差異。雌激素類藥品雖然對中樞神經(jīng)及生殖道有直接興奮作用，可以引起母畜表現(xiàn)明顯的外表發(fā)情征象，但對卵巢無刺激作用，不能引起卵泡發(fā)育及排卵；促性腺激素雖然可以促進卵泡發(fā)育和排卵，但對卵泡發(fā)育波產生不好的環(huán)境，使黃體期縮短，發(fā)情表現(xiàn)弱或不發(fā)情。
再者，激素的毒副作用也不可忽視。Meredith認為，激素制劑已廣泛用于治療不發(fā)情，但只是在刺激靜止卵巢方面有作用，如卵巢有功能的時候，應用激素就會產生有害的影響。對牛長期應用雌激素或者一次用量過大，可以引起卵泡囊腫或慕雄狂，有時可以引起卵巢萎縮或發(fā)情周期停止，甚至使骨盆韌帶及其周圍組織松弛，而導致陰道或直腸脫出。Refsal研究發(fā)現(xiàn)，注射雌二醇或重復注射ACTH可誘發(fā)成年不泌乳奶牛的卵巢囊腫，孕酮可引起母犬的子宮蓄膿。
第三，給家畜應用激素制劑，也易造成畜產品中的激素殘留。國外已有實驗證明，乳、肉類等畜產品中含有一定量的激素時，會危害人類的健康，如己烯雌酚有致癌的危險。國家已明文規(guī)定限制某些激素在食品動物中使用。
本課題組1987年研制成功中藥促孕灌注液，每1000ml含益母草400g、淫羊藿400g、紅花200g。見《中國獸藥典·二○○○年版二部》第394頁。該藥治療牛馬卵巢靜止和持久黃體性不孕癥效果較好，而且克服了西藥的諸多弊端。但其不足之處在于不能治療子宮內膜炎，而子宮內膜炎又是不孕癥中發(fā)病率最高的疾病。

發(fā)明內容
技術問題 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中急需綠色藥品和原促孕灌注液治療范圍較窄、不能治療子宮內膜炎的問題，提供一種既能治療和預防母畜子宮內膜炎、又能治療卵巢靜止和持久黃體的新型中藥促孕灌注液。達到藥效可靠，無毒副作用，無藥殘，保障食品安全的目的。
技術方案 一種防治母畜不孕癥的中藥灌注液，其特征在于，每1000ml藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g。
生產每1000ml藥液的工藝流程為用水提醇沉法。將前四味藥材飲片，加10倍水煎煮兩次，每次1小時，合并煎液，過濾，將濾液濃縮，加入酒精使含醇量達到75％(體積比)，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋至1000ml，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時，精濾，分裝，高壓滅菌。
有益效果1996～1998年，本研究室在江蘇省96農業(yè)科技重點攻關項目的資助下開始研究，根據(jù)中獸醫(yī)學理論和不孕癥的病理，以原促孕灌注液為基本方，添加善清下焦?jié)駸岬狞S柏、消腫止痛的硼砂和元明粉組成新方，通過反復比較、調整處方配比，研制成功新型促孕灌注液。新型促孕灌注液既保留了原促孕灌注液的催情促孕效果和其他優(yōu)點，又增加了防治子宮內膜炎的功效，取得一藥能治三種(子宮內膜炎、卵巢靜止和持久黃體)發(fā)病率最高的不孕癥的效果。
藥效試驗證明(表1～表3)，新型促孕灌注液治療奶牛子宮內膜炎的總有效率達97.3％、受胎率70.3％，與抗菌素和氯前列烯醇的療效接近；治療母豬子宮內膜炎的效果更好，且比用西藥療程短、費用低；預防母豬子宮內膜炎能顯著降低發(fā)病率、縮短發(fā)情間隔；治療奶牛卵巢靜止、持久黃體性不孕癥效果確實。推廣驗證結果表明(表4)，該藥對黃牛、豬、犬、羊等母畜的產后乏情和屢配不孕癥也有較好的療效，并能提高豬、犬的產仔率。藥理試驗證實，該藥具有較強的抑菌作用，以殺滅子宮內病原微生物；能適度興奮子宮，以促進子宮的凈化、復原；能調節(jié)生殖內分泌激素的平衡，以加速炎癥的消退；正是三種作用的協(xié)同，形成消炎促孕之功效。
本發(fā)明已通過江蘇省新獸藥審評，與現(xiàn)有技術相比，優(yōu)點如下1.與原促孕灌注液相比，該藥的治療范圍擴大，既能治療和預防母畜子宮內膜炎、又能治療卵巢靜止和持久黃體，對母畜不明原因的產后乏情和屢配不孕癥也有較好的療效，達到一藥多用，有效地防治多種不孕癥。
2.與同類西藥相比，該藥劑由純中藥制成，無毒副作用，無藥殘隱患，符合綠色藥品要求，保障動物源食品安全，而且功效好，治療費用低；生產無三廢，對環(huán)境無污染，符合綠色環(huán)保的要求。
3.與其他給藥方式相比，該藥通過宮腔灌注法給藥，作用更直接，給藥較方便，對動物不會產生不良應激反應。
綜上所述，本發(fā)明達到了專利中所要求的創(chuàng)新性、科學性和實用性的標準。
具體實施例方式
新型中藥促孕灌注液每1000ml藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g。
生產每1000ml藥液的工藝流程為用水提醇沉法。將前四味藥材飲片，加10倍水煎煮兩次，每次1小時，合并煎液，過濾，將濾液濃縮，加入酒精使含醇量達到75％(體積比)，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋至1000ml，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時，精濾，分裝，高壓滅菌。
(一)新型中藥促孕灌注液(簡稱新促孕液)藥效試驗1.新促孕液治療奶牛子官內膜炎試驗試驗方法 按家畜產科學診斷標準，選擇子宮分泌物呈粘液膿性或膿性，直腸檢查子宮膨大或敏感性差，卵巢硬小或有黃體，發(fā)情遲緩或雖發(fā)情但屢配不孕，綜合診斷為急、慢性子宮內膜炎者列入試驗。先后選擇47頭病牛進行4批對照試驗，實驗組37頭，按直腸把握法每次向子宮內灌注新促孕液30～50ml，隔天用藥1次，連用3次為一療程。對照組10頭，分別為空白對照(不用任何藥物)2頭、等體積生理鹽水灌注對照3頭、等體積長效抗菌劑(新型氧四環(huán)素，江西民星獸藥廠生產)灌注對照2頭和氯前列烯醇(上海市計劃生育科學研究所產品)0.2mg肌肉注射對照2頭，用藥者均與實驗組同步。在每次灌藥前先抽取少量子宮分泌物觀察其肉眼變化(并進行細菌計數(shù)佐證療效)，同時直腸檢查卵巢、子宮的狀態(tài)。以后連續(xù)觀察3個情期，記錄發(fā)情配種受孕情況。按以下標準綜合判定其臨床療效。
最終有效(/痊愈并受孕)用藥后病牛子宮粘液變清，子宮位置、大小和敏感性恢復正常，卵巢活動，黃體消退，明顯發(fā)情，經(jīng)配種后在3個情期內受胎。
臨床痊愈臨床癥狀顯著改善，發(fā)情明顯，配種，但因其他疾病或條件的影響在3個情期內未能受胎。
總有效率＝最終有效率+臨床痊愈率無效臨床癥狀無明顯改善，或休情時間超過3個情期。
試驗結果 實驗組37頭，用藥后子宮粘液和子宮的大小、位置、敏感性較快恢復正常，卵巢活動，有黃體的一般在用藥1～2次后消退，發(fā)情配種。37頭病牛痊愈并受胎26頭，占70.3％；臨床痊愈10頭，占27.0％，總有效率97.3％(子宮分泌物細菌計數(shù)結果證實細菌數(shù)很快下降動近零)。空白對照組2頭均無效。生理鹽水對照組3頭(用藥前癥狀稍輕，生產單位為減少損失)，用藥后2頭無效、1頭臨床痊愈?？咕貙φ战M3頭，用藥后2頭痊愈并受胎、1頭臨床痊愈。氯前列烯醇對照組2頭，用藥后痊愈并受胎、臨床痊愈各1頭。由此表明新促孕液對奶牛子宮內膜炎有較好的療效，與抗菌素和氯前列烯醇接近。(表1)。
2.新促孕液治療母豬子宮內膜炎試驗試驗方法 動物選自連云港市禽蛋開發(fā)公司種豬場3～5胎次經(jīng)產種母豬，品種有二花臉、新梅山、純長白、長約克。選擇子宮分泌物呈粘液膿性或膿性，并有明顯的全身癥狀(體溫升高，少食或不食)的12頭病豬列入試驗。隨機分出9頭為實驗組，每次向子宮內灌注新促孕液10～15ml，隔天灌藥一次，連用三次為一療程。
給藥方法將試驗豬前低后高保定，用0.1％新潔爾滅溶液清洗外陰后，將消毒后的橡皮導管插入子宮頸內，用無菌注射器抽取新促孕液10～15ml，接上導管注入子宮，然后注入適量生理鹽水以沖洗注射器和導管中殘留的藥液。然后抽出導管，堵住豬外陰部讓其站立活動5分鐘以上，使藥液充分充滿子宮腔，最后解除保定。
3頭為對照組，按本地區(qū)常規(guī)方法用西藥治療，即先用0.3％高錳酸鉀溶液沖洗子宮，排盡消毒液后，灌入青霉素320萬單位、鏈霉素200萬單位，隔兩天沖洗、灌藥一次，同時每天兩次肌肉注射青霉素800萬～1200萬單位、鏈霉素600萬～800萬單位，逐日觀察癥狀的變化，比較兩組康復時間和治療成本。
試驗結果 12頭子宮內膜炎病豬治療前體溫在38.7～40.8℃之間，少食或不食；其中4頭子宮分泌物呈粘液膿性，8頭呈膿性。實驗組9頭用中藥灌注一次后癥狀明顯減輕，體溫下降到38.5～39.5℃，停食者開始吃食，少食者食量增加；子宮分泌物開始減少、性狀改善。用藥兩次后2頭病豬康復，療程3天；其余7頭體溫基本恢復正常，食量增加，子宮分泌物很少。用藥三次后病豬全部康復，療程5天。9頭病豬均在康復后17～48天內發(fā)情、配種，總有效率100％，其中7頭均在一情期受胎，受胎率77％。西藥對照組3頭隨著用藥次數(shù)的增加癥狀逐步減輕，共子宮沖洗、抗菌素灌注2次，肌肉注射抗菌素5天，6～7天后康復，療程6～7天，其中2頭在一情期受胎，受胎率66％(表2)。從治療成本來看，用中藥花費15元左右，西藥需70元左右。由此可見，新促孕液對子宮內膜炎有較好的療效，且比西藥治療療程縮短，省時省力省錢。
3.新促孕液預防母豬子官內膜炎的效果觀察試驗方法 選擇上一胎次有發(fā)情延遲和子宮內膜炎病史的12頭母豬，于產后12小時第一次灌藥，以后隔天灌藥一次，連續(xù)給藥三次，觀察用藥后子宮內膜炎的發(fā)生率、發(fā)情間隔(分娩至發(fā)情時間)和受孕情況，并與自身上一胎次的發(fā)病率和發(fā)情間隔進行比較。
試驗結果 預防給藥的12頭母豬，僅1例在用藥一次后出現(xiàn)子宮內膜炎癥狀，但此例經(jīng)后兩次用藥結束后迅速康復；而往常本地母豬產后子宮內膜的發(fā)病率大多在25％以上，可見新促孕液能夠明顯降低子宮內膜炎的發(fā)病率，有較好的預防子宮內膜炎的效果。12頭母豬前一胎次的發(fā)情間隔在16～130天，平均50.75±34.57天；用藥后的發(fā)情間隔除1頭延長4天外，其余11頭均縮短到10～49天，總平均縮短到24.7±12.58天；后者較前者極顯著(P＜0.01)提前，平均提前26.58±27.88天。對黑豬，一般可提早10～15天；而對純長白豬或長約雜交一代，提前效果尤為明顯，最好的可提早94天。12頭母豬均在一情期配種受孕，受胎率100％。表明新促孕液能夠顯著縮短母豬的發(fā)情間隔，具有顯著的催情促孕效果(表3)。
4 新促孕液治療奶牛卵巢靜止、持久黃體的效果驗證選擇4頭空懷、乏情8～9個月的卵巢靜止病牛和3頭空懷8～10個月、乏情4～10個月的持久黃體病牛，按促孕灌注液的治療方案給予新促孕液，即一次向子宮內灌注新促孕液30～50ml，觀察10天未見發(fā)情者再灌注1～2次，記錄配種受孕情況，驗證新促孕液治療奶牛卵巢靜止、持久黃體的療效。
試驗結果 4頭卵巢靜止病牛用藥后均發(fā)情配種受孕。其中2頭僅用藥1次，分別在用藥后第4、6天發(fā)情；1頭用藥2次，在第二次用藥后第5天發(fā)情，這3頭經(jīng)配種后在第一情期受胎；另1頭用藥4次，在第四次用藥后40天發(fā)情，第一情期配種后出現(xiàn)返情，再次配種后在第二情期受胎。3頭持久黃體病牛用藥前空懷8～10個月，分別乏情4、8、10個月，均用藥2次，分別在用藥后第6、10、18天發(fā)情，經(jīng)配種后均在第一情期受胎。此結果表明，新促孕液對卵巢靜止、持久黃體的療效亦較確實。
(二)推廣驗證新促孕液研制期間，先后在江蘇、安徽等地試用驗證。據(jù)98年3月到98年9月反饋資料表統(tǒng)計，用新促孕液治療各種經(jīng)產母畜不孕癥244例，其中奶牛87頭，黃牛35頭，豬113頭，羊4只，犬7只。牛的受胎率在75％以上，豬的受胎率稍高于牛(部分結果見表4)。其中有用其他藥治療近3年未愈的膿性子宮內膜炎病牛、連配3次未孕的母豬，用新促孕液治療后均治愈。有三個單位反映能明顯提高豬和犬的產仔率。
此后，應用戶要求，該藥在廣東省農科院種豬場、寧夏巴浪湖農場、四川成都鳳凰山奶牛場、安徽濉溪縣獸醫(yī)院、南京農業(yè)大學種公牛站、江蘇無錫市獸醫(yī)站、常州、江陰、蘇州等地進一步試用示范，普遍反映效果可靠。
(三)新型中藥促孕灌注液藥效總結經(jīng)過臨床試驗和多年多點推廣驗證，證明新型中藥促孕灌注液藥效可靠、適應癥較廣、適用母畜種類較多，既能治療和預防母畜子宮內膜炎，又能治療卵巢靜止和持久黃體，治療奶牛子宮內膜炎的總有效率達97.3％、受胎率70.3％，與抗菌素和氯前列烯醇的療效接近；治療母豬子宮內膜炎的效果更好，且比用西藥療程短、費用低；預防母豬子宮內膜炎能顯著降低發(fā)病率、縮短發(fā)情間隔；對奶牛的卵巢靜止和持久黃體性不孕癥、以及黃牛、豬、犬、羊等母畜的產后乏情和屢配不孕癥也有較好的療效，并能提高豬、犬的產仔率。本藥劑經(jīng)過多年的示范應用，其效果得到了各地使用者的肯定。
表1 新促孕液治療奶牛子宮內膜炎的療效

表2 新促孕液治療豬子宮內膜炎的療效

*第一次用藥當天記為d0，以后類推，第二、三次用藥分別在d2、d4。
表3 母豬產后預防灌注新促孕液前后兩胎次的發(fā)情間隔(天)

*與用藥前相比P＜0.01。
表4. 98年3月到98年9月部分反饋資料表統(tǒng)計

權利要求
1.一種防治母畜不孕癥的中藥灌注液，其特征在于，每1000ml藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g。
2.權利要求1所述一種防治母畜不孕癥的中藥灌注液的制備方法，其特征在于，將前四味藥材飲片加10倍水煎煮兩次，每次1小時，合并煎液，過濾，將濾液濃縮，加入酒精使含醇量達到75％(體積比)，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時以上，精濾，分裝，高壓滅菌。
全文摘要
本發(fā)明為一種防治母畜不孕癥的中藥灌注液，定名為新型中藥促孕灌注液。組分藥主要有黃柏，益母草、淫羊藿、紅花、硼砂和元明粉等。臨床試驗證明，本方治療奶牛子宮內膜炎的總有效率97.3％，受胎率70.3％，與抗菌素和氯前列烯醇的效果接近；治療母豬子宮內膜炎的效果更好，且比用西藥療程短、費用低；預防母豬子宮內膜炎，能顯著降低發(fā)病率、縮短發(fā)情間隔；對奶牛的卵巢靜止和持久黃體性不孕癥、以及黃牛、豬、犬、羊等母畜的產后乏情和屢配不孕癥也有較好的療效，并能提高豬、犬的產仔率。該藥無毒副作用，無食品安全隱患，符合綠色藥品要求，已通過江蘇省新獸藥審評。
文檔編號A61P15/08GK1544004SQ20031010627
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月13日 優(yōu)先權日2003年11月13日
發(fā)明者胡元亮, 張寶康, 劉家國, 劉建禮, 宋大魯 申請人:南京農業(yè)大學