專利名稱：用于異種移植的用豬支持細胞培養(yǎng)的豬胰島的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及豬胰腺胰島細胞用于治療糖尿病的用途。更特別地但非唯一地，本發(fā)明涉及豬胰腺胰島細胞連同支持細胞(Sertoli cells)通過異種移植用于治療糖尿病的用途。
背景技術：
豬胰島細胞異種移植的背景和基本原理1型(胰島素依賴型)糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌紊亂，其導致相當大的發(fā)病率和死亡率，并對于個體患者和衛(wèi)生保健系統(tǒng)具有嚴重的經(jīng)濟影響。盡管用胰島素進行治療挽救了生命，但通常不能對血液葡萄糖提供足夠的控制以防止該疾病的縮短生命的并發(fā)癥的產(chǎn)生，這引起了關于獲得并維持血糖量正常的更佳的方法的廣泛研究。在被提出的較新的治療策略中，從他人或動物所獲得的胰腺β胰島細胞的移植受到了全世界范圍內(nèi)的最大關注。這是因為胰島細胞移植不僅能修復胰島素分泌單元，還能恢復對應答于胰島內(nèi)和胰島外產(chǎn)生的多種神經(jīng)和激素信號的胰島素釋放的精確微調(diào)。
由于人胰島細胞移植(異體移植)受到人胰島組織短缺的限制，豬胰島細胞的應用目前被視為最有前途的替代方式，因為(a)豬胰島素和人胰島素具有密切的結(jié)構(gòu)和生物學相似性；(b)豬體內(nèi)與人體內(nèi)的生理葡萄糖水平相似；和(c)豬細胞的供應可以通過最優(yōu)化供體動物的供應而容易地被擴增。
這一治療方法(被稱為“異種移植”)的基本原理是被植入的豬胰島在1型糖尿病中具有模仿正常生理胰島素應答的潛力，使得可以在不需要胰島素或?qū)σ葝u素的需求降低的情況下獲得接近正常的血液葡萄糖水平。其結(jié)果是可以防止長期的糖尿病并發(fā)癥，而且與接受當前被推薦的“加強的”胰島素治療的患者相比會較少出現(xiàn)低血糖。
推廣豬胰島細胞異種移植的障礙和所采用的克服措施任一新的治療策略在其可被施行之前都存在問題和缺陷，豬胰島細胞的異種移植也不例外。該方法的施行存在眾多的科學和倫理/政治障礙，但是隨著該領域的知識的發(fā)展，這些障礙已經(jīng)不斷地減退。已經(jīng)出現(xiàn)的問題包括1.受體的免疫系統(tǒng)對胰島細胞的排斥被移植的胰島對于受體的免疫系統(tǒng)的易損性已經(jīng)成為成功的胰島細胞移植的一個主要的科學障礙。被用于克服該問題的策略包括a)同時施用免疫抑制藥物-盡管其被成功地應用于近期的一些異體移植研究中，但產(chǎn)生了對被移植的胰島(即，損傷它們的植入和功能并降低它們的胰島素分泌應答)和受體(即，將患者暴露給患上多種嚴重的并發(fā)癥的風險，包括中毒性腎損害、神經(jīng)毒性、高血壓、對感染的易感性增加和骨質(zhì)疏松癥)兩者的副作用的雙重缺陷。此外，這有方法在改變排斥的進程和發(fā)生頻率方面不總是有效的。
b)新的、非藥物的“免疫保護”策略的開發(fā)以保護被移植的胰島細胞免遭受體的免疫系統(tǒng)的破壞，從而防止局部炎癥反應和長期排斥，同時仍使得它們通過分泌胰島素和控制體內(nèi)的葡萄糖代謝而發(fā)揮作用。在各種“免疫保護”策略中，已經(jīng)被研究的有●管狀擴散室和灌注裝置(人工胰腺)。至今沒有跡象表明這一方法是臨床上有用的。
●被移植的胰島在藻酸鹽微膠囊中的包囊化(encapsulation)。已經(jīng)在糖尿病實驗模型中對這一方法進行了詳細的研究，在先前的實驗性研究中申請人已經(jīng)證實與未包囊化的胰島相比該方法賦予了被移植的胰島顯著更長的功能持續(xù)期。已經(jīng)在由鏈脲霉素引起糖尿病的CD1小鼠、NOD(非肥胖型糖尿病)小鼠、由四氧嘧啶引起糖尿病的新西蘭白兔和自發(fā)性糖尿病狗中，通過藻酸鹽包囊化的豬胰島的異種移植實現(xiàn)了糖尿病狀態(tài)的逆轉(zhuǎn)。此外，用藻酸鹽包囊化的豬胰島在兩位1型糖尿病患者中進行的初步臨床研究提供了令人振奮的結(jié)果，兩位患者都表現(xiàn)出對胰島素的需求降低。移植后的第14個月，該胰島在兩位患者中都持續(xù)發(fā)揮功能，而沒有產(chǎn)生副作用或豬逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的跡象。
●胰島與分離自雄性供體動物的睪丸的支持細胞的共移植。這一方法已經(jīng)被證明保護了胰島免受免疫介導的排斥并增強了它們的功能和壽命。
2.可能的傳染性疾病的傳播這一潛在的問題集中于豬的疾病傳播到受體的風險，和細胞操作過程中帶入微生物的風險。
3.有關異種移植的倫理問題這包括使用動物組織用于移植在倫理上是否可接受的問題、供體動物的福利問題、從被選擇用于臨床試驗的患者獲得知情同意的問題和該過程對他們的影響。這些問題已經(jīng)通過一些團體例如英國的納菲爾德生物道德委員會(Nuffield Council on Bioethics)得到了解決，且已經(jīng)提出了許多保護未來人類研究的道德完整性不受損害的建議。這些包括將豬組織用于異種移植的“倫理可接受性”；避免或最小化對供體動物的傷害的需要；當獲得患者的知情同意的過程中，對患者提供成功的可能性、伴隨的風險、可預期的生活質(zhì)量的詳細解釋的要求；并告知患者他們對該過程的同意包括對移植后進行微生物檢測的同意。
發(fā)明目的本發(fā)明的一個目的是提供一種治療糖尿病的方法；和/或一種輔助治療糖尿病的裝置，其對上述的方法和/或裝置進行了改進或提供了一種替代的方式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個方面提供了一種制備豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體(aggregate)的方法，該團聚體植入受體體內(nèi)能在體內(nèi)產(chǎn)生胰島素，該方法包括以下步驟1)從供體小豬的胰腺分離豬胰島細胞；2)從供體小豬的睪丸分離豬支持細胞；3)將所述支持細胞與所述胰島細胞一起培養(yǎng)；4)形成團聚體。
優(yōu)選該組合采用從1∶20,000至1∶100(胰島細胞支持細胞)的預定比率，更優(yōu)選該比率在1∶2,000至1∶4,000之間。
優(yōu)選所述培養(yǎng)步驟持續(xù)3-7天的一段時期，更優(yōu)選5天。
優(yōu)選在所述胰島的分離之后繼以對所述胰島進行純化。
優(yōu)選所述胰島的分離和純化共同包括以下步驟a)外科手術切??；b)膠原酶消化；c)洗滌和培養(yǎng)所述胰島。
優(yōu)選所述消化包括Liberase H和賽羅卡因(Xylocaine)消化。
優(yōu)選在所述支持細胞的分離之后繼以對所述支持細胞進行純化。
優(yōu)選所述支持細胞的分離和純化共同包括以下步驟a)外科手術切??；b)用胰蛋白酶、DNA酶進行消化；c)洗滌和培養(yǎng)所述細胞。
優(yōu)選該方法包括以下步驟5)對團聚體和/或其組分進行病毒學和微生物學檢測和/或監(jiān)測。
優(yōu)選地或任選地，該方法包括對所述胰島和支持細胞之一或優(yōu)選對兩者進行病毒學監(jiān)測和/或檢測的預步驟(步驟1之前)。
優(yōu)選該方法額外地或任選地包括對小豬供體進行病毒學監(jiān)測和/或檢測的預步驟。
優(yōu)選所述胰島和支持細胞得自同一畜群，更優(yōu)選得自同一供體小豬。
優(yōu)選所述小豬是一周齡大的供體。
優(yōu)選對所述小豬進行傳染物監(jiān)測和/或檢測。
優(yōu)選該豬群是新西蘭豬群。
優(yōu)選形成團聚體的步驟包括保持所述胰島的固有特性和/或天然結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的另一方面提供了一種根據(jù)上述方法制備到的豬胰島和支持細胞的團聚體。
本發(fā)明的第三方面提供了一種治療患有糖尿病的患者的方法，該方法包括以下步驟1)制備一個或多個根據(jù)上述方法制備到的豬胰島和支持細胞的團聚體。
2)給所述患者植入或施用一個或多個團聚體。
優(yōu)選所述植入或施用所述團聚體的步驟可以通過-將所述團聚體在一種合適的生物相容性材料(更優(yōu)選一種合適的藻酸鹽)中包囊化；-封裝到一合適的裝置(更優(yōu)選例如血管化的管(vascularized tube))中；-基質(zhì)制劑，包括明膠、膠原蛋白、和天然的碳水化合物聚合物的制劑；-血漿凝血酶凝塊一用異源凝血酶制備的自體血漿凝塊。
本發(fā)明的另一個方面提供了一種用于植入到患有糖尿病的受體中的裝置，該裝置包括豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體，該團聚體是前面所描述的團聚體或具有前面所描述的團聚體的特征。
優(yōu)選該包括所述團聚體的裝置可以是以下其中之一-用做膠囊的一種合適的生物相容性材料(更優(yōu)選是一種合適的藻酸鹽)；-一種血管化的管；-基質(zhì)制劑，包括明膠、膠原蛋白和天然的碳水化合物聚合物的制劑。
-血漿凝血酶凝塊—用異源凝血酶制備的自體血漿凝塊。
本發(fā)明的另一個方面提供了一種制備豬胰島和豬支持細胞的團聚體的方法，所述胰島和支持細胞根據(jù)圖1制備。
本發(fā)明的另一個方面提供了一種豬胰島和豬支持細胞的團聚體，其如本文以及圖2-5中的1圖或多圖所述。


圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的團聚體制備方法的流程圖。
圖2-5顯示了根據(jù)本發(fā)明的胰島-支持細胞的團聚體。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及支持細胞和豬胰島的“團聚體”的制備和用途。
現(xiàn)有技術中涉及使用支持細胞和胰島(或其它細胞)的方法通常包括分別單獨對它們進行處理和分離，并在進行移植時將它們放在一起。
申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)以胰島與支持細胞的預定比率制備團聚體并進行共培養(yǎng)使得胰島在移植前在體外有時間生長并利用被認為來自支持細胞的生長因子。申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當用支持細胞層對胰島進行保護時，胰島的功能更強。
理想地，胰島和支持細胞來自同一供體。這簡化了病毒篩查。
本文所用術語“團聚體”特別地是指天然胰島結(jié)構(gòu)的表面上的不連續(xù)的支持細胞層。
支持細胞和胰島共移植的基本原理胰島細胞與分離自供體動物的睪丸的支持細胞的共移植已經(jīng)被作為實現(xiàn)以下目的的一種方式進行了研究(a)免遭免疫排斥；和(b)促進胰島細胞的有絲分裂使得它們在應答葡萄糖刺激時釋放更大量的胰島素并能存活得更久。
已知支持細胞在多種生理活動中具有非常關鍵的作用，例如某些生長因子(例如，胰島素樣生長因子1和2(IGF-1，IGF-2)和表皮生長因子(EGF))的合成，免疫調(diào)節(jié)(可能是轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)分泌增加的結(jié)果)和抗細胞程序死亡(細胞死亡抑制)功能。
申請人近期在實驗動物模型中的研究已經(jīng)表明支持細胞的存在改善了胰島的體外功能，在糖尿病大鼠、兔和NOD小鼠中進行的胰島-支持細胞團聚體的異種移植延長了胰島細胞的存活，導致糖尿病狀態(tài)的逆轉(zhuǎn)。支持細胞保護胰島細胞移植不被免疫排斥的精確機制目前還未準確地獲知，但看來似乎與支持細胞刺激生長和分化因子的產(chǎn)生相關。
因此，本發(fā)明將支持細胞與胰島以團聚體的形式進行共移植使得支持細胞可以用做胰島的“保育(nursing)”細胞系統(tǒng)，提供有效的免疫保護并增強它們的功能和壽命。
這一方法與其他方法互補或協(xié)同以對被移植的胰島細胞提供免疫保護和功能持續(xù)期。
特別地，本發(fā)明涉及胰島-支持細胞團聚體的以下用途-藻酸鹽包囊化形式—對被移植的胰島提供額外的免疫保護。支持細胞與分離自大鼠的胰島的共-微包囊化的可行性已經(jīng)在申請人所進行的研究中得到了證實。申請人在實驗室中研究了藻酸鹽包囊化的支持-胰島細胞團聚體在實驗動物中進行腹膜內(nèi)移植的有效性和安全性。
-皮下移植裝置—使得形成預血管化的自體膠原蛋白蓄積器用于放置胰島-支持細胞團聚體。這一方法已經(jīng)被臨床應用于1型糖尿病患者。
-基質(zhì)制劑—其中胰島-支持細胞團聚體被培養(yǎng)在明膠、膠原蛋白和/或添加有天然碳水化合物多聚體的其它基質(zhì)中。目前正在移植了胰島-支持細胞團聚體的動物中以這一方法進行研究，該胰島與支持細胞間的比率介于1∶2,000和1∶4,000之間。
-血漿凝血酶凝塊—用異源凝血酶制備的自體血漿凝塊，用做生物相容性包裝裝置。
申請人已經(jīng)測定了提供胰島抗免疫排斥的最佳保護和最大功能持續(xù)期的胰島細胞與支持細胞的比例可以從1∶20,000以提供最大胰島素釋放降至至少1∶2,000。這一范圍是基于申請人與Perugia大學和新加坡國立大學協(xié)作在實驗室中以胰島-支持細胞團聚體所進行的實驗研究的結(jié)果得到的。
優(yōu)選的以1∶2,000-1∶4,000的比率存在的胰島-支持細胞團聚體的制備獲取用于組合本發(fā)明的胰島-支持細胞團聚體的豬胰島和支持細胞的豬群包括飼養(yǎng)在嚴格的生物安全條件下的無特定病原(SPF)NZ大白豬。在畜群、產(chǎn)仔前1個月的母豬、供體小豬和所使用的組織中監(jiān)測人獸互傳傳染可能的來源。新西蘭沒有朊病毒介導的疾病和許多在世界上其它地方所發(fā)現(xiàn)的病毒感染。
本領域技術人員可以預期世界上其它地方的豬群如果在合適的條件下進行繁育，也可以被用于本發(fā)明。
經(jīng)過標準(Ricordi’s)膠原酶消化程序的主要修飾將胰島細胞分離自7日齡小豬的胰腺。所有的外科手術過程和細胞操作在嚴格的無菌措施下進行。在進行分離和純化后，所述胰島被放置于RPMI培養(yǎng)基中的培養(yǎng)組織中，所述培養(yǎng)基富含2％的人血清白蛋白和10mmol/L的尼克酰胺。然后，在空氣與5％CO2的混合物中于37℃培養(yǎng)48小時，并頻繁更換培養(yǎng)基。
使用標準(Rajotte’s)的分離方法將支持細胞分離自7日齡小豬的睪丸細胞，所述方法經(jīng)過修飾以確保最大的細胞產(chǎn)量。在對胰島和支持細胞進行眾多的質(zhì)量控制檢測后(以確保他們的最佳純度，成活力和不受微生物污染，進一步參見下述)，對支持細胞和胰島都進行計數(shù)，并將后者調(diào)節(jié)為直徑150μm的胰島等價物(IEQ)。然后以1∶2,000-1∶4,000的比率，將胰島與支持細胞混合，培養(yǎng)24小時，并刮下以形成團聚體。再培養(yǎng)24小時，然后檢測胰島-支持細胞團聚體的成活力和被釋放用于移植前的胰島素分泌量。
用于本發(fā)明的胰島-支持團聚體的制備方法優(yōu)選包括嚴格的感染監(jiān)測程序包括病毒學監(jiān)測(進一步參見下述)，細菌、真菌和支原體篩查以及細菌內(nèi)毒素檢測(LAT檢測)。任一微生物污染的存在或細胞不符合申請人設定的任以嚴格的質(zhì)量控制標準都將導致特定批次的細胞被廢棄。
團聚體制劑圖1顯示了優(yōu)選的制備方法的流程圖，圖2-5顯示了根據(jù)這一方法制備的團聚體。特別地，圖2顯示了于培養(yǎng)基中3天的團聚體(未染色，×10)；圖3顯示了于培養(yǎng)基中3天的團聚體(未染色，×20)；圖4顯示了于培養(yǎng)基中6天的團聚體(DTZ染色；純度＞85％；10×)，以及圖5顯示了于培養(yǎng)基中6天的團聚體(AO/PI染色；成活力＞95％；10×)。
1)支持細胞a)支持細胞的采集-在無菌條件下從供體切取睪丸；-將該腺體切碎成小片(大約1mm大小)；-通過沉降將被切碎的組織用HBSS洗滌兩遍以除去紅細胞。
b)支持細胞的第一次消化-將被切碎的組織放置于40ml的消化液中；-將人血清白蛋白、Liberase H和利多卡因添加到含有鈣和鎂的Hanks溶液中；-以120rmp將瓶子保持在37℃的水浴中18-20分鐘；-用Hanks溶液洗滌所述組織3遍，并于4℃以1500rpm離心10分鐘。
c)第二次消化-加入胰蛋白酶和DNA酶；-以120rmp，于37℃進行溫育，直至白色的團聚體產(chǎn)生；-取出所述白色團聚體；-將細胞接種到皮氏培養(yǎng)皿中。
2)胰腺胰島細胞胰腺胰島細胞根據(jù)本申請人在WO01/52871(該專利的內(nèi)容在此處通過引用被并入本申請)中所公開的方法制備。
3)支持/胰島團聚體-培養(yǎng)1天后，洗滌培養(yǎng)皿，并以胰島∶支持細胞為1∶2,000的比率將胰島(10,000IEQ)添加到每一培養(yǎng)皿中；-培養(yǎng)24小時；-將細胞刮下并覆蓋于胰島上以形成團聚體，然后在培養(yǎng)基中放置24小時；-這一時間后，胰島/支持團聚體被備好用于移植或用于包囊化；-用臺盼藍、蘇丹III和抑制素染色以用于檢測支持細胞成活力和計數(shù)。
病毒學監(jiān)測如上面所指出的那樣，使用為了檢測移植材料是否存在PERV(內(nèi)源逆轉(zhuǎn)錄病毒)這一目的而開發(fā)的高特異性和高靈敏度的檢測對移植材料中是否存在PERV進行檢測優(yōu)選是本發(fā)明的胰島/支持細胞團聚體制備方法所必需的一部分。除了PERV，注意力還被集中在其它能引起動物傳染病和xenoses的潛在的傳染性病原，包括豬巨細胞病毒(PCMV)、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)、豬嗜淋巴細胞皰疹病毒(PLHV)、腦心肌炎病毒(EMCV)和豬E型肝炎病毒。優(yōu)選這種多水平病毒篩查策略作為本發(fā)明的方法的一部分被進行，包括-對畜群進行是否存在上述病毒的常規(guī)監(jiān)測。
-對供體年齡組(1周齡的新生豬)進行是否存在病毒的常規(guī)檢測。
-對待用于異種移植的胰島和支持細胞的常規(guī)檢測。
胰島-支持細胞團聚體臨床使用前的研究在Diatranz的實驗室進行的一項研究中，將藻酸鹽包囊化的胰島-支持細胞團聚體(比率1∶4,000)和藻酸鹽包囊化的不含支持細胞的胰島的移植物的效力和安全性在新西蘭白兔與實驗誘導的糖尿病中進行了比較(每組5個動物)。
兩組都經(jīng)腹腔注射接受劑量為10,000IEQ/kg的胰島細胞。在移植后5周的隨診期間，兩組中的周平均血液葡萄糖水平均下降，每一組中有兩只兔被認為已經(jīng)對移植成功地進行了應答。在隨后的尸檢中，在任一組的受體動物的腹腔器官中都沒有發(fā)現(xiàn)異常的組織學結(jié)果。
在NOD(非肥胖型糖尿病)小鼠進行的一項研究中也獲得了相似的結(jié)果，所述小鼠接受了劑量為10,000IEQ/kg的澡酸鹽包囊化胰島的腹腔內(nèi)移植物，所述胰島含或不含支持細胞。接受了胰島-支持細胞團聚體(比率1∶4,000)的5只鼠中的2只和只接受了胰島的6只鼠中的2只有部分應答，每一組中有1個動物呈現(xiàn)出正常的血液葡萄糖水平達5周。
盡管在這些研究中使用了1∶4,000的比率，本領域技術人員將清楚其它比率在不偏離本發(fā)明的范圍內(nèi)也可以被使用。
胰島-支持細胞團聚體臨床研究申請人對胰島-支持細胞團聚體進行了大量的臨床研究。在一個實驗中，用皮下不銹鋼移植裝置將胰島-支持細胞團聚體移植到12位青少年1型糖尿病患者體內(nèi)，該裝置形成(外科手術除去特氟隆棒)血管化的膠原蛋白蓄積器，被導入該蓄積器中的細胞由鋼網(wǎng)管機械保護。最初，在每位患者的上腹壁上形成了兩個這種血管化的膠原蛋白蓄積器，6個月以后再形成兩個蓄積器。每位患者以對應于250,000胰島等價物(IEQs)的劑量接受胰島-支持細胞團聚體(比率范圍從1∶30至1∶100)被注射到各蓄積器中，6個月后在第二次形成的兩個蓄積器的每一個中重復該劑量。
12位患者中的5位順利地對這一治療產(chǎn)生應答。在持續(xù)約8周的一段時期后，這5位患者對胰島素的需求開始下降并且通常在第二次移植后進一步地下降。12個月后，平均日胰島素劑量的減少超過50％，其中一位患者在該時間后不再需要胰島素。平均日血液葡萄糖水平和糖基化血紅蛋白(HbA1C)的改善也被記錄。在12位患者中的任一患者中都未檢測到副作用的產(chǎn)生，且12個月后的PERV監(jiān)測測試仍保持陰性。
權利要求
1.一種制備豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體的方法，該團聚體經(jīng)植入受體體內(nèi)能在體內(nèi)產(chǎn)生胰島素，該方法包括以下步驟1)從供體小豬的胰腺分離豬胰島細胞；2)從供體小豬的睪丸分離豬支持細胞；3)將所述支持細胞與所述胰島細胞一起培養(yǎng)；4)形成所述團聚體。
2.權利要求1的方法，其中所述團聚體是預定比率為從1∶20,000至1∶100的胰島支持細胞的混合物。
3.權利要求2的方法，其中所述比率介于1∶2,000至1∶4,000之間。
4.上述權利要求中任一項的方法，其中的培養(yǎng)步驟的時間為3至7天。
5.權利要求4的方法，其中所述時間是5天。
6.上述權利要求中任一項的方法，其中在分離所述胰島后繼以對所述胰島進行純化。
7.權利要求6的方法，其中所述胰島的分離和純化共同包括以下步驟a)外科手術切??；b)膠原酶消化；c)洗滌和培養(yǎng)所述胰島。
8.權利要求7的方法，其中所述膠原酶消化包括Liberase H和賽羅卡因消化。
9.上述權利要求中任一項的方法，其中在分離所述支持細胞后繼以對所述支持細胞進行純化。
10.權利要求9的方法，其中所述支持細胞的分離和純化共同包括以下步驟a)外科手術切取；b)用胰蛋白酶、DNA酶進行消化；c)洗滌和培養(yǎng)所述細胞。
11.上述權利要求中任一項的方法，該方法進一步包括以下額外步驟5)對所述團聚體和/或其組分進行病毒學檢測和微生物學檢測和/或監(jiān)測。
12.上述權利要求中任一項的方法，其中該方法額外地或任選地包括在步驟1之前對胰島和支持細胞之一或兩者進行病毒學監(jiān)測和/或檢測的預步驟。
13.上述權利要求中任一項的方法，其中該方法額外地或任選地包括對小豬供體進行病毒學監(jiān)測和/或檢測的預步驟。
14.上述權利要求中任一項的方法，其中所述胰島和支持細胞來自同一畜群或來自同一供體小豬。
15.權利要求14的方法，其中所述小豬是約1周齡的供體。
16.上述權利要求中任一項的方法，其中對所述小豬進行傳染物監(jiān)測和/或檢測。
17.上述權利要求中任一項的方法，其中所述小豬來自新西蘭豬群。
18.上述權利要求中任一項的方法，其中所述形成團聚體的步驟額外地或任選地包括保持所述胰島的固有特性和/或天然結(jié)構(gòu)。
19.基本上根據(jù)權利要求1-18中任一項的方法制備的豬胰島和支持細胞的團聚體。
20.一種治療糖尿病患者的方法，該方法包括以下步驟1)制備一個或多個基本上根據(jù)權利要求1-18中任一項的方法制備的豬胰島和支持細胞的團聚體，2)給所述患者植入或施用一個或多個團聚體。
21.權利要求20的方法，其中植入或施用所述團聚體的步驟可以通過-將所述團聚體在一種合適的生物相容性材料中進行包囊化；-封裝到一合適的裝置中；-基質(zhì)制劑，包括明膠、膠原蛋白和天然的碳水化合物聚合物的制劑；-血漿凝血酶凝塊—用異源凝血酶制備的自體血漿凝塊。
22.權利要求21的方法，其中所述生物相容性材料是一種合適的藻酸鹽。
23.權利要求21或22的方法，其中所述合適的裝置是一種血管化的管。
24.一種用于植入到患有糖尿病的受體中的裝置，該裝置包括豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體，該團聚體是權利要求19的團聚體或具有權利要求19的團聚體的特征。
25.權利要求24的裝置，其中包括所述團聚體的裝置可以是以下其中之一-用做膠囊的一種合適的生物相容性材料；-一種血管化的管；-一種基質(zhì)制劑，其包括明膠、膠原蛋白和天然的碳水化合物聚合物的制劑；-血漿凝血酶凝塊—用異源凝血酶制備的自體血漿凝塊。
26.權利要求25的裝置，其中所述生物相容性材料是一種合適的藻酸鹽。
27.基本上根據(jù)圖1制備豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體的方法。
28.基本上如說明書和圖1-5中任一圖所述的豬胰腺胰島和豬支持細胞的團聚體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種適于植入受體體內(nèi)以在體內(nèi)產(chǎn)生胰島素的團聚體及其制備方法。該方法包括用來自供體小豬的睪丸的分離的支持細胞培養(yǎng)分離自供體小豬的胰腺的胰島細胞。優(yōu)選培養(yǎng)期為5天，并可繼以一純化程序。
文檔編號A61K35/39GK1791670SQ03826689
公開日2006年6月21日 申請日期2003年6月24日 優(yōu)先權日2003年6月24日
發(fā)明者斯蒂芬·約翰·馬丁·斯金納, 羅伯特·巴特利特·埃利奧特, 利維亞·德爾·卡門·埃斯科巴爾·奧雷利亞納 申請人:戴伯塞爾有限公司