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可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法

文檔序號:903795閱讀:247來源:國知局

專利名稱::可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及一種可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法。屬于生物醫(yī)學工程領(lǐng)域的骨組織工程材料技術(shù)。
背景技術(shù)
:骨是膠原纖維貫穿于羥基磷灰石形成的生物復合材料。骨組織通過破骨細胞代謝,成骨細胞重建構(gòu)成一種動態(tài)平衡體系。工程化骨就是利用種子細胞種植在多孔支架,經(jīng)體外擴增后,將細胞/支架結(jié)構(gòu)物植入體內(nèi),以修復骨缺損;亦可采用生物相容性良好的生物材料植入體內(nèi),經(jīng)生物過程使骨重建。支架即可預先成型,亦可在體內(nèi)原位形成。殼聚糖是由β(1→4)鍵合的D-葡糖胺殘基和數(shù)目不同分布無規(guī)的N-乙酰葡糖胺組成的線性多糖,其結(jié)構(gòu)中的N-乙酰葡糖胺亦存在于糖胺聚糖(GAGs)中。由于殼聚糖結(jié)構(gòu)類似于GAGs,故具有多重生物活性。它為溶菌酶降解,其生物相容性良好。殼聚糖修飾聚(L,D-乳酸)可改善材料對成骨細胞的親和性(KaiyongCai,KangdeYao,YuanluCui,etal,Surfacemodificationofpoly(D,L-lacticacid)withchitosananditseffectsonthecultureofosteoblastsinvitro,J.BiomedMater.Res.,2002,60(3)398-404)。CheniteA等以甘油磷酸鹽調(diào)控殼聚糖及水分子間相互作用,制備殼聚糖/甘油磷酸鹽水溶性組成物,它可以注射方式植入體內(nèi),原位凝膠化(CheniteA,ChaputC,WangD,etal,Novelinjectableneutralsolutionsofchitosanformbiodegradablegelsinsitu,Biomaterials,2000;212155-2161)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法。按此方法制備的支架材料可在體內(nèi)原位形成,其臨床應(yīng)用方便。為達到上述目的,本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。包括以鹽酸化殼聚糖(CH)與β-甘油磷酸二鈉(GP)和磷酸鈣(TCP)形成三元分散體,制備可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的方法。其特征在于采用分子量為15-30萬,脫乙?;冗_85%以上殼聚糖為原料,溶于0.5-1wt%乙酸水溶液過濾后,用0.2mol/LNaCl水溶液透析,再用去離子水透析,經(jīng)冷凍干燥制得的鹽酸化殼聚糖;再與β-甘油磷酸二鈉和和磷酸鈣按10∶3.0-3.5∶5-15比例混合配制形成三元溶液,溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度范圍30-39℃,pH范圍7.00-7.40,得到可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變體系。上述殼聚糖包括殼聚糖衍生物的羧甲基殼聚糖,磷酸化殼聚糖;上述磷酸鈣包括β-磷酸三鈣,α-磷酸三鈣,羥基磷灰石生物活性陶瓷。本發(fā)明優(yōu)點在于采用鹽酸化殼聚糖,β-甘油磷酸二鈉和β-磷酸三鈣制備的溫度響應(yīng)性可注射型殼聚糖/磷酸鈣溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變體系,通過調(diào)控與水分子間相互作用,實現(xiàn)溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變的溫敏化。復合物體內(nèi)凝膠化特性可調(diào),能適應(yīng)不同形狀骨缺損的修復。組分的優(yōu)化使其適于注射應(yīng)用,按此方法制備的支架材料可通過注射在體內(nèi)原位形成,不僅保留了殼聚糖/磷酸鈣仿生生物材料的生物相容性、生物降解性,且其臨床應(yīng)用方便。殼聚糖結(jié)構(gòu)類似于GAGs,故具有多重生物活性,而磷酸鈣是骨無機成分,在鹽酸化殼聚糖溶液中加入了磷酸鈣形成的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變體系,屬于粒子增強型凝膠,同時增強其對骨組織的仿生程度,使此注射型支架材料更適合于骨重建。圖1為本發(fā)明鹽酸化殼聚糖-β-甘油磷酸二鈉鹽(CH-GP)及鹽酸化殼聚糖-β-甘油磷酸二鈉鹽-β-磷酸三鈣(CH-GP-TCP)溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變時間的溫度依賴性。圖2為本發(fā)明的CH-GP-TCP原位形成支架材料植入Wistar大鼠皮下一個月后,組織切片H&E染色光學顯微鏡照片(×100)。具體實施例方式實施例一用分子量20萬,脫乙酰度87%的殼聚糖溶于1%的乙酸水溶液,形成1wt%的殼聚糖溶液過濾后,用0.2mol/LNaCl水溶液透析,再用去離子水透析,經(jīng)冷凍干燥制得鹽酸化殼聚糖,產(chǎn)率92%。由紅外光譜確認殼聚糖分子吡喃環(huán)上的伯氨基(1599cm-1)特征峰消失,而轉(zhuǎn)變成季銨鹽。X-衍射圖案表明殼聚糖結(jié)晶度明顯降低,形成無定型態(tài)。將鹽酸化殼聚糖按1-20mg/mL濃度添加至2T3成骨細胞培養(yǎng)基中,MTT實驗結(jié)果表明它對成骨細胞的親和性良好。實施例二取0.10g的實施例一方法制備的鹽酸化殼聚糖,加入4.50mL去離子水,完全溶解,冷卻至4℃,攪拌情況下逐滴加入0.70g/mLβ-甘油磷酸二鈉鹽溶液500uL,再加入0.10gβ-磷酸三鈣,充分振蕩使其均勻混合,形成溶膠-凝膠轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。此體系pH值為7.15,在37℃下10分鐘即可可轉(zhuǎn)化成凝膠,4℃下可以穩(wěn)定保存。實施例三取0.10g的實施例一方法制備的鹽酸化殼聚糖,加入4.50mg去離子水,完全溶解,冷卻至4℃,攪拌情況下逐滴加入0.60g/mLβ-甘油磷酸二鈉鹽溶液500mL,再加入0.10gβ-磷酸三鈣,充分振蕩使其均勻混合,形成溶膠-凝膠轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。此體系pH值為7.01,在37℃下13分鐘即可轉(zhuǎn)化成溶膠體系,4℃下可以穩(wěn)定保存。實施例四按實施例二的比例制備鹽酸化殼聚糖-β-甘油磷酸二鈉鹽-β-磷酸三鈣分散體(其中β-磷酸三鈣和實施例一得到的鹽酸化殼聚糖γ射線輻射滅菌,β-甘油磷酸二鈉鹽溶液通過0.20μm的針頭濾器過濾滅菌)通過注射器注射到2月齡Wistar大鼠皮下,一個月后取材,10%的中性甲醛溶液固定,石蠟包埋切片,組織學方法染色。光學顯微鏡下觀察生物相容性良好(參見附圖2)。權(quán)利要求1.一種可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法,該方法采用包括鹽酸化殼聚糖(CH)與β-甘油磷酸二鈉(GP)和磷酸鈣(TCP)形成三元分散體,主要經(jīng)過殼聚糖的鹽酸化和溶液中分子間的疏水相互作用制備而成,其特征在于將分子量為15-30萬,脫乙?;冗_85%以上殼聚糖,溶于0.5-1.0wt%乙酸水溶液過濾后,用0.2mol/LNaCl水溶液透析,再用去離子水透析,經(jīng)冷凍干燥制得的鹽酸化殼聚糖;再與β-甘油磷酸二鈉和和磷酸鈣按10∶3.0-3.5∶5-15比例混合配制形成三元溶液,溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度范圍30-39℃,pH范圍7.00-7.40,得到可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變體系。2.按權(quán)利要求1所述可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法,其特征在于采用的殼聚糖包括殼聚糖的衍生物羧甲基殼聚糖,磷酸化殼聚糖;所述磷酸鈣包括β-磷酸三鈣,α-磷酸三鈣,羥基磷灰石生物活性陶瓷。全文摘要本發(fā)明公開了一種可注射型鹽酸化殼聚糖/磷酸鈣骨修復材料的制備方法,屬于生物醫(yī)學工程領(lǐng)域的骨組織工程材料技術(shù)。該方法采用包括鹽酸化殼聚糖(CH)與β-甘油磷酸二鈉(GP)和磷酸鈣(TCP)形成三元分散體,主要經(jīng)過殼聚糖的鹽酸化和溶液中分子間的疏水相互作用制備而成。本發(fā)明優(yōu)點在于制備的溫度響應(yīng)性可注射型殼聚糖/磷酸鈣溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變體系,通過調(diào)控與水分子間相互作用,實現(xiàn)溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變的溫敏化。組分的優(yōu)化使其適于注射應(yīng)用,在體內(nèi)原位形成,同時增強其對骨組織的仿生程度,使此注射型支架材料更適合于骨重建,且其臨床應(yīng)用方便。文檔編號A61L31/04GK1486753SQ03130550公開日2004年4月7日申請日期2003年8月11日優(yōu)先權(quán)日2003年8月11日發(fā)明者姚康德,趙立國,尹玉姬,崔元璐申請人:天津大學
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