專利名稱：有關(guān)肥胖及2型糖尿病的差異表達(dá)基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及在不同生理?xiàng)l件下使用差異顯示技術(shù)鑒定的至少在胃、下丘腦或肝中表達(dá)的核酸分子。本發(fā)明認(rèn)為該核酸分子編碼與調(diào)節(jié)肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或代謝能量水平有關(guān)的表達(dá)產(chǎn)物。更特別而言，本發(fā)明涉及核酸分子以及利用重組方法從該核酸分子制備或從天然來源中分離的表達(dá)產(chǎn)物，及其在諸如肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡的疾病治療和診斷方案中的用途。本發(fā)明的核酸分子和表達(dá)產(chǎn)物及其衍生物、同系物、類似物和模擬物因而可用作肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡的治療及診斷劑，或者用作設(shè)計(jì)和/或鑒定其活性和/或功能調(diào)節(jié)劑的靶標(biāo)。
背景技術(shù)：
本說明書提供的參考文獻(xiàn)細(xì)節(jié)列于篇末。
本說明書參考的任何現(xiàn)有技術(shù)不是也不應(yīng)視為認(rèn)可或任何形式的暗示該現(xiàn)有技術(shù)構(gòu)成任何國家普通常識的一部分。
重組DNA技術(shù)日益精深，極大促進(jìn)了醫(yī)療、獸醫(yī)及相關(guān)人和動(dòng)物健康領(lǐng)域的研究和開發(fā)。在研究某些疾病相關(guān)的遺傳基礎(chǔ)時(shí)尤其如此。處于發(fā)病及致死起點(diǎn)的一個(gè)特別重要的疾病是肥胖及其并發(fā)2型糖尿病(舊稱非胰島素依賴性糖尿病或NIDDM)和心血管疾病。
肥胖可定義為身體脂肪的病理性超標(biāo)，由能量攝取及消耗的長時(shí)間不平衡造成。肥胖是富裕國家最常見的代謝性疾病。這些國家的肥胖發(fā)生率驚人之高，為10％直至某些種群超過50％(Bouchard，The genetics ofobesity.Boca RatonCRC Press，1994)。特別令人關(guān)注的是，肥胖發(fā)生率似乎在富裕社會中持續(xù)上升，如今較不富裕國家在變得更為富裕或接受了來自更富裕國家的文化習(xí)慣后也迅速上升(Zimmet，Diabetes Care15(2)232-247，1992)。
例如澳大利亞1995年有19％的成年人口肥胖(BMI＞30)。1995年的婦女比1980年平均體重多出4.8kg，男人多出3.6kg(AustralianInstitute of Health and Welfare，Heart，Stroke and Vasculardiseases，Australian facts.AIHW Cat.No.CVD 7 CanberraAIHW andthe Heart Foundation of Australia，1999)。最近，1999-2000年進(jìn)行的AusDiab研究顯示，認(rèn)為年齡介于25-64歲的65％男性和45％女性超重(de Looper and Bhatia，Australia′s Health Trends 2001.AustralianInstitute of Health and Welfare(AIHW)Cat.No.PHE 24.CanberraAIHW，2001)。美國1991-1998的肥胖發(fā)生率也大幅上升，該時(shí)期從12％上升到18％的美國人(Mokdad等人，JAMA.282(16) 1519-1522，1999)。
肥胖發(fā)生率高并日益上升總體上對個(gè)人及社會具有嚴(yán)重影響。肥胖是復(fù)雜的不均一性疾病，由于肥胖增加了許多其它代謝疾病、包括2型糖尿病和心血管疾病的危險(xiǎn)，因而被認(rèn)定是可預(yù)防性發(fā)病率和致死率的主要危險(xiǎn)指標(biāo)(Must等人，JAMA.282(16)1523-1529，1999；Kopelman，Nature404635-643，2000)。糖尿病的患病率伴隨肥胖持續(xù)快速升高。據(jù)估計(jì)1995年澳大利亞有約700,000名糖尿病人，美國糖尿病的患病率從1990年的4.9％升高到1999年的6.9％(Mokdad，Diabetes Care 24(2)412，2001)。在澳大利亞，保守估計(jì)1992-3年糖尿病及其它疾病相關(guān)的肥胖每年花費(fèi)約AU$810百萬(National Health and Medical Research Council，Acting on Australia′s weightA strategy for the prevention ofoverweight and obesity.CanberraNational Health and MedicalResearch Council，1996)。在美國，國家健康訪問調(diào)查中心(the NationalHealth Interview Survey，NHIS)估計(jì)1995年肥胖的經(jīng)濟(jì)耗費(fèi)約US$990億，從而占美國當(dāng)年總健康費(fèi)用的5.7％(Wolf和Colditz，Obes Res.697-106，1998)。
在雙胞胎研究、領(lǐng)養(yǎng)研究以及基于群體的分析中特別揭示了肥胖病原學(xué)的遺傳基礎(chǔ)，提示遺傳作用影響一般人群體重變化的25-80％(Bouchard，1994，同上；Kopelman等人，Jut J Obesity 18188-191，1994；Ravussin，Metabolism 44(Suppl 3)12-14，1995)。據(jù)認(rèn)為基因決定個(gè)體體重的可能范圍，環(huán)境則在某一特定時(shí)期影響個(gè)體在該范圍內(nèi)所處的位置(Bouchard，1994，同上)。然而，盡管大量研究深入到據(jù)認(rèn)為與肥胖發(fā)病機(jī)理有關(guān)的基因，但意外的是，該領(lǐng)域的重大發(fā)現(xiàn)很少。此外，在各種群體組中進(jìn)行基因組范圍掃描，沒有得到對肥胖具有主要影響的染色體區(qū)域的確切證明。
肥胖及2型糖尿病的病理生理學(xué)涉及許多器官/組織，特別關(guān)注下丘腦、胃和肝。長期公認(rèn)下丘腦是調(diào)節(jié)能量攝取的關(guān)鍵腦區(qū)(Stellar，Psychol Rev 615-22，1954)，目前普遍接受下丘腦在能量體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、整合并協(xié)調(diào)下丘腦產(chǎn)生和/或作用于下丘腦的大量因子中具有重要作用。已經(jīng)研究了其中許多因子在能量平衡和體重調(diào)節(jié)中的作用，包括神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y)、促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(corticotropin-releasinghormone)、黑色素聚集激素(melanin-concentrating hormone)、瘦素(leptin)和胰島素。已經(jīng)提出，干擾下丘腦調(diào)節(jié)能量平衡的代謝途徑的遺傳變化，導(dǎo)致發(fā)生肥胖、進(jìn)而糖尿病。因此，理解下丘腦調(diào)節(jié)動(dòng)物代謝功能的重要步驟需要鑒定這些激素的靶標(biāo)。該靶標(biāo)可能是整個(gè)器官以及通過這些激素的存在來調(diào)節(jié)其表達(dá)的基因。
據(jù)認(rèn)為胃在調(diào)節(jié)食物攝取的作用涉及兩種信號類型胃擴(kuò)張程度以及胃腸壁化學(xué)受體的活化(Koopmans，Experimental studies on thecontrol of food intake.InHandbook of Obesity，Eds.GA Bray，CBouchard，WPT James pp 273-312，1998)。腸是體內(nèi)最大的內(nèi)分泌器官，在餐后釋放大量胃腸激素。一些例子有胃泌素(gastrin)、生長抑素(somatostatin)、膽囊收縮素(cholecystokinin)、胃抑制性多肽(gastricinhibitory polypeptide)和神經(jīng)降壓素(neurotensin)。盡管普遍同意胃提供了限制一餐中食物攝取的部分信號，但仍待確定該信號的性質(zhì)及其如何傳遞到腦。最有可能通過神經(jīng)或激素將有關(guān)胃擴(kuò)張程度以及胃腸壁存在營養(yǎng)物的信息傳遞到腦。迄今鑒定的胃腸激素在調(diào)節(jié)食物攝取中的作用尚待大致確定。
肝在許多重要生理途徑中也具有重要作用。它具有調(diào)節(jié)葡萄糖、氨基酸和脂肪代謝的主要作用。此外，肝是通過門靜脈與大量攝取吸收的食物直接接觸的唯一器官(除胃腸以外)，因此肝能夠″感覺″或監(jiān)控進(jìn)入體內(nèi)的營養(yǎng)物水平，特別是蛋白質(zhì)和糖類的量。已經(jīng)提出肝通過傳遞有關(guān)胃腸營養(yǎng)吸收和全身代謝變化的未知信號中繼信息到腦，可能還具有攝食調(diào)節(jié)的作用(Russek，Nature 200176，1963)。肝還通過調(diào)節(jié)諸如糖異生和糖原分解途徑，而具有維持循環(huán)中葡萄糖濃度的重要作用。葡萄糖體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的改變是葡萄糖耐量降低以及發(fā)生2型糖尿病的病理生理學(xué)的重要因素。
根據(jù)本發(fā)明，尋找特定脊椎動(dòng)物組織或器官中在進(jìn)食、再進(jìn)食或禁食條件之間、或糖尿病與非糖尿病條件之間差異表達(dá)的遺傳序列。鑒定在上述一種或兩種條件下，至少于胃、肝和/或下丘腦中差異表達(dá)的新基因。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明人已經(jīng)分離了提示關(guān)聯(lián)與疾病狀態(tài)(例如但不限于肥胖、厭食、糖尿病或能量平衡)有關(guān)的一種或多種生物學(xué)功能的基因。
發(fā)明概述貫穿本說明書，除非上下文需要，否則單詞包含(comprise)或其變體(例如comprises或comprising)應(yīng)當(dāng)理解為是指包含所述成分或整體、或者成分或整體組，而不排除任何其它的成分或整體、或者成分或整體組。
根據(jù)序列識別編號(SEQ ID NO)提及核苷酸和氨基酸序列。SEQ ID NOs以編號對應(yīng)于序列標(biāo)識符<400>1(SEQ ID NO1)、<400>2(SEQ ID NO2)等。表1提供了序列標(biāo)識符總覽。序列表提供于權(quán)利要求書之后。
使用胃、下丘腦和肝組織的遺傳物質(zhì)分析，來鑒定與健康狀態(tài)或生理?xiàng)l件(例如肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或代謝能量水平)有關(guān)的候選遺傳序列。使用包含以色列沙鼠(Israeli Sand Rat，(Psammomysobesus))的動(dòng)物模型。使用3組動(dòng)物，根據(jù)代謝表型命名為以下A、B和C組A組消瘦動(dòng)物(血糖正常；胰島素正常)；B組肥胖、非糖尿病動(dòng)物(血糖正常；胰島素過多)；以及C組肥胖、糖尿病動(dòng)物(血糖過多；胰島素過多)。
使用的技術(shù)包括胃、肝或下丘腦組織mRNA的差異顯示PCR分析、抑制消減雜交(SSH)以及擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析，來鑒定在進(jìn)食(fed)、再進(jìn)食(refed)和禁食(fasted)哺乳動(dòng)物、或糖尿病和非糖尿病哺乳動(dòng)物中差異表達(dá)的遺傳序列。發(fā)現(xiàn)以色列沙鼠(Psammomys obesus)特別適用于這種分析。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，鑒定了7條差異表達(dá)序列，此處命名為AGT-119[SEQ ID NO1]、AGT-120[SEQ ID NO2]、AGT-121[SEQID NO3]、AGT-122[SEQ ID NO5]、AGT-422[SEQ ID NO6]、AGT-123[SEQ ID NO7]以及AGT-504[SEQ ID NO8和SEQ ID NO9]。SEQ ID NO9是AGT-504的基因組形式，也如SEQ ID NO8所示。
使用差異顯示PCR最初在胃組織中檢測到AGT-119，與禁食或再進(jìn)食動(dòng)物相比，它在進(jìn)食動(dòng)物中的表達(dá)升高。使用差異顯示PCR最初在胃組織中檢測到AGT-120，與禁食或再進(jìn)食動(dòng)物相比它在進(jìn)食動(dòng)物中的表達(dá)升高。使用差異顯示PCR最初在下丘腦中鑒定出AGT-121，當(dāng)根據(jù)基因型分離時(shí)，與進(jìn)食動(dòng)物相比，它在禁食的糖尿病、非糖尿病以及消瘦動(dòng)物中的表達(dá)水平升高。使用差異顯示PCR最初在肝中鑒定出AGT-122，顯示與進(jìn)食的糖尿病或非糖尿病動(dòng)物相比在禁食動(dòng)物中的表達(dá)水平升高。使用抑制消減雜交在肝組織中鑒定出AGT-422，與進(jìn)食的糖尿病動(dòng)物相比它在進(jìn)食的消瘦動(dòng)物中的表達(dá)水平升高，與禁食的消瘦動(dòng)物相比進(jìn)食的消瘦動(dòng)物升高，進(jìn)食的非糖尿病動(dòng)物高于禁食的非糖尿病動(dòng)物，進(jìn)食的糖尿病動(dòng)物高于禁食的糖尿病動(dòng)物。使用差異顯示PCR在下丘腦組織中鑒定出AGT-123，發(fā)現(xiàn)它在禁食的消瘦、非糖尿病動(dòng)物和糖尿病動(dòng)物中的表達(dá)高于進(jìn)食動(dòng)物。使用擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析在基因組DNA中鑒定出AGT-504，它在糖尿病動(dòng)物肝組織中的表達(dá)高于消瘦或非糖尿病動(dòng)物。表1提供了AGT基因總覽。
表1
實(shí)施例3中制備的催化劑對乙烯(C2＝)、丙烯(C3＝)、有4個(gè)碳原子的烴類產(chǎn)品和有5個(gè)碳原子的烴類產(chǎn)品的選擇性示于

圖1中，實(shí)施例1中制備的催化劑的該選擇性示于圖2中。
實(shí)施例7在500℃和25psig下在配有在線氣相色譜分析的活塞流反應(yīng)器中測試實(shí)施例1至5中制備的催化劑。催化劑選擇性數(shù)據(jù)示于表2中，其中E意指乙烯選擇性，P意指丙烯選擇性，丙烷意指丙烷選擇性。
表2
本發(fā)明還提供了分離的表達(dá)產(chǎn)物或其衍生物、同系物、類似物或模擬物，該表達(dá)產(chǎn)物由在進(jìn)食或不進(jìn)食或糖尿病或非糖尿病條件下，于胃、肝或下丘腦一種或多種組織中差異表達(dá)的核苷酸序列編碼。
更特別而言，本發(fā)明涉及分離的表達(dá)產(chǎn)物或其衍生物、同系物、類似物或模擬物，其中該表達(dá)產(chǎn)物由基本上如SEQ ID NO1或SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ IDNO8或SEQ ID NO9所示、或是與全部或部分的SEQ ID NO1或SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ IDNO8或SEQ ID NO9具有至少約30％相似性的核苷酸序列、和/或能夠在42℃低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ ID NO8或SEQ ID NO9的一種或多種或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
本發(fā)明優(yōu)選的遺傳序列是指此處AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504編碼的表達(dá)產(chǎn)物分別是指此處AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。表達(dá)產(chǎn)物可能是RNA(例如mRNA)或蛋白質(zhì)。表達(dá)產(chǎn)物是RNA時(shí)，本發(fā)明擴(kuò)展到與其有關(guān)的RNA相關(guān)分子，例如其RNAi或內(nèi)含子或外顯子序列。
本發(fā)明另一方面涉及一種組合物，其包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物或模擬物或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的激動(dòng)劑或拮抗劑連同一種或多種藥物可接受的載體和/或稀釋劑。
本發(fā)明另一方面包括治療受試者的方法，其包含在足以有效治療的時(shí)間和條件下，給予該受試者治療有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物或模擬物或其編碼遺傳序列、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504基因表達(dá)的激動(dòng)劑或拮抗劑。
根據(jù)本發(fā)明這一方面以及其它方面，此處包括的治療包括但不限于肥胖、厭食、特征維持、能量失衡和糖尿病?？赡芡ㄟ^給予藥物組合物或通過基因治療給予遺傳序列進(jìn)行治療。治療預(yù)期用于人類受試者以及動(dòng)物，例如家畜工業(yè)的重要?jiǎng)游铩?br> 本發(fā)明更深一方面涉及用于監(jiān)控或診斷諸如但不限于肥胖、厭食、體重維持、能量失衡和/或糖尿病等疾病的診斷劑，所述診斷劑選自AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物或模擬物的抗體以及包含特別用于PCR、雜交、RFLP分析或AFLP分析的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504相關(guān)的核苷酸鏈或能夠與其退火的遺傳序列。
表2提供了本說明書通篇所用序列標(biāo)識符的總覽。
表2
附圖簡述圖1是顯示進(jìn)食、禁食和再進(jìn)食的以色列沙鼠(Psammomys obesus)中AGT-119胃基因的表達(dá)的圖形。
圖2是顯示進(jìn)食、禁食和再進(jìn)食的以色列沙鼠中AGT-120胃基因的表達(dá)的圖形。
圖3是顯示AGT-121表達(dá)的組織分布的圖形。
圖4是顯示(1)心；(2)腦；(3)胎盤；(4)肺；(5)肝；(6)骨骼?。?7)腎以及(8)胰臟中AGT-121表達(dá)的Northern分析的照片。
圖5是顯示能量受限的下丘腦中AGT-121的表達(dá)的圖形。
圖6是顯示AGT-121隨體重水平的表達(dá)的圖形。
圖7是顯示AGT-121隨葡萄糖水平變化的表達(dá)的圖形。
圖8是顯示AGT-121隨scap脂肪的表達(dá)的圖形。
圖9是顯示A、B和C組進(jìn)食和禁食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因的表達(dá)的圖形。
圖10是顯示進(jìn)食和禁食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因的表達(dá)(混合數(shù)據(jù))的圖形。
圖11是顯示進(jìn)食的以色列沙鼠中AGT-122肝基因表達(dá)與體重的關(guān)系圖。
圖12是顯示A、B和C組進(jìn)食和禁食的以色列沙鼠中AGT-422肝基因的表達(dá)數(shù)據(jù)圖。
圖13是顯示所有進(jìn)食和禁食的以色列沙鼠中AGT-422肝基因的表達(dá)(混合數(shù)據(jù))圖。
圖14是顯示A、B和C組進(jìn)食和禁食的以色列沙鼠中AGT-123肝基因的表達(dá)圖。
圖15是顯示A、B和C組以色列沙鼠中AGT-504肝基因的表達(dá)圖。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述本發(fā)明部分基于與肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或代謝能量水平調(diào)節(jié)特別相關(guān)的新基因的鑒定。在進(jìn)食、再進(jìn)食與禁食的哺乳動(dòng)物、或糖尿病與非糖尿病的哺乳動(dòng)物中差異篩選胃、肝或下丘腦組織一種或多種的mRNA以后，鑒定了這些基因。選擇胃、肝或下丘腦并非意在暗示其它組織中不存在差異表達(dá)。
因此，本發(fā)明一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物或其衍生物、同系物、類似物或模擬物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核酸分子在進(jìn)食(或再進(jìn)食)或不進(jìn)食、或糖尿病或非糖尿病條件下，于胃、肝或下丘腦組織一種或多種中差異表達(dá)。
術(shù)語″差異表達(dá)″使用其最廣義，包括一種組織相比另一組織、或同一組織在不同條件下的表達(dá)產(chǎn)物水平提高，例如mRNA、或蛋白質(zhì)、或次級產(chǎn)物例如cDNA。不同條件的例子包括在進(jìn)食、再進(jìn)食和禁食動(dòng)物或糖尿病和非糖尿病動(dòng)物的組織中差異表達(dá)。利用包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)如實(shí)時(shí)PCR在內(nèi)的技術(shù)，可以方便測定差異表達(dá)。其它技術(shù)包括抑制消減雜交(SSH)和擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)分析。
可以利用動(dòng)物模型方便地研究不同條件下動(dòng)物組織中基因表達(dá)的差異。特別而言，本發(fā)明使用飲食誘導(dǎo)肥胖和2型糖尿病的Psainmoinysobesus(以色列沙鼠)動(dòng)物模型來舉例說明。在其天生的沙漠棲息地，活躍的生活方式和鹽生灌木食物確保其保持消瘦和血糖正常(Shafrir和Gutman，J.Basic Clin.Physiol.Pharm.483-99，1993)。但在給予隨意(ad libitum chow)食物的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中(其中許多其它動(dòng)物種類保持健康)，觀察到許多病理生理學(xué)反應(yīng)(Barnett等人，Diabetologia 37671-676，1994a；Barnett等人，Int.J.Obesity 18789-794，1994b；Barnett等人，Diabete Nutr.Metab.842-47，1995)。至16周齡，半數(shù)以上的動(dòng)物變得肥胖，約三分之一形成2型糖尿病。只有多食動(dòng)物繼續(xù)形成高血糖癥，提示過度能量攝取在以色列沙鼠肥胖和2型糖尿病中的重要性(Collier等人，Ann.New York Acad.Sci.82750-63，1997a；Walder等人，Obesity Res.5193-200，1997a)。發(fā)現(xiàn)的其它表型包括胰島素過多、血脂障礙以及葡萄糖耐量降低(Collier等人，1997a，同上；Collier等人，Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes 10536-37，1997b)。以色列沙鼠顯示的各種體重、血糖及胰島素水平形成了連續(xù)曲線，與在人群中發(fā)現(xiàn)的模式極其類似，包括血糖和胰島素之間的倒U型關(guān)系，稱為″胰腺Starling′s曲線″(Barnett等人，1994a，同上)。以色列沙鼠表型反應(yīng)的異質(zhì)性使其成為研究肥胖和2型糖尿病病原學(xué)和病理生理學(xué)的理想模型。
將動(dòng)物方便地分為3組，命名為A、B和C組。
A組動(dòng)物消瘦；B組動(dòng)物肥胖、非糖尿??；以及C組動(dòng)物肥胖、糖尿病。
根據(jù)本發(fā)明，在處于不同飼養(yǎng)方式(即進(jìn)食、再進(jìn)食或禁食)、或糖尿病或非糖尿病條件下的以色列沙鼠的胃、肝或下丘腦組織中，鑒定了許多差異表達(dá)的遺傳序列。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物或其衍生物、同系物、類似物或模擬物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO1(AGT-119)或SEQ ID NO2(AGT-120)或SEQ ID NO3(AGT-121)或SEQ ID NO5(AGT-122)或SEQ IDNO6(AGT-422)或SEQ ID NO7(AGT-123)或SEQ ID NO8(AGT-504基因組)或SEQ ID NO9(AGT-504 cDNA)所示、或是與全部或部分的SEQ IDNO1或SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ ID NO8或SEQ ID NO9具有至少約30％相似性的核苷酸序列、和/或能夠在42℃低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或SEQ IDNO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ ID NO8或SEQ ID NO9或其互補(bǔ)形式的一種或多種雜交，并且其中該核酸分子在進(jìn)食或不進(jìn)食或糖尿病或非糖尿病條件下，于胃、肝或下丘腦一種或多種組織中差異表達(dá)。
本發(fā)明也包括較高的相似性，例如大于約40％或50％或60％或70％或80％或90％或95％或96％或97％或98％或99％或以上。
表達(dá)產(chǎn)物包括RNA分子例如mRNA轉(zhuǎn)錄本以及蛋白質(zhì)。某些基因是非蛋白質(zhì)編碼基因，產(chǎn)生mRNA或其它RNA分子，與調(diào)節(jié)RNA:DNA、RNA:RNA或RNA:蛋白質(zhì)的相互作用有關(guān)。RNA(例如mRNA)可能直接、或通過其它分子例如RNAi的誘導(dǎo)、或通過剪接事件的產(chǎn)物介導(dǎo)(例如外顯子或內(nèi)含子)而起作用。其它基因編碼mRNA轉(zhuǎn)錄本，然后翻譯成蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)包括多肽。差異表達(dá)的核酸分子因而可能只編碼mRNA，或者也編碼蛋白質(zhì)。mRNA和蛋白質(zhì)是″表達(dá)產(chǎn)物″的形式。
此處提及相似性一般在至少15個(gè)連續(xù)或基本連續(xù)核苷酸比較的水平。然而，通過最佳比對后比較總體或完整序列來確定相似性，則特別方便。
此處所用術(shù)語″相似性″包括所比較的序列在核苷酸水平上的完全一致性。在核苷酸水平上具有不一致性時(shí)，″相似性″包括可能編碼不同氨基酸、但在結(jié)構(gòu)、功能、生物化學(xué)和/或構(gòu)象水平上仍然彼此相關(guān)的序列差異。特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在一致性而非相似性水平上進(jìn)行核苷酸序列比較。
用于描述兩個(gè)或多個(gè)多核苷酸之間序列關(guān)系的術(shù)語包括″參考序列″、″比較窗口″、″序列相似性″、″序列一致性″、″序列相似性百分比″、″序列一致性百分比″、″基本相似″和″基本一致″?！鍏⒖夹蛄小鍨殚L度至少12個(gè)、但一般15-18個(gè)、通常至少25個(gè)或以上、例如30個(gè)單體單位。由于兩個(gè)多核苷酸可能各自包含(1)兩個(gè)多核苷酸之間的相似序列(即只是完整多核苷酸序列的一部分)，以及(2)兩個(gè)多核苷酸之間的差異序列，一般通過在″比較窗口″比較兩個(gè)多核苷酸序列來鑒別和比較局部區(qū)域的序列相似性，進(jìn)行兩個(gè)(或多個(gè))多核苷酸之間的序列比較?！灞容^窗口″是指與參考序列比較的、一般12個(gè)連續(xù)殘基的概念性片段。比較窗口與參考序列(其中不包含添加或缺失)相比，可能包含大約20％或更少的添加或缺失(即空位)，用于兩個(gè)序列間的最佳比對。通過計(jì)算機(jī)化執(zhí)行算法(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，575 Science Drive Madison，WI，USA)，或者通過所選任何方法得到校驗(yàn)和最佳比對(即在比較窗口產(chǎn)生最高同源性百分比)，進(jìn)行序列的最佳比對，用于排列比較窗口。也可以參考BLAST程序家族，例如Altschul等人(Nucl.Acids Res.253389，1997)公開的程序。可以在Ausubel等人的19.3單元找到序列分析的詳細(xì)論述(″Current Protocols in Molecular Biology″John Wiley & SonsInc，Chapter 15，1994-1998)。可能使用多種其它算法比較核酸和氨基酸序列，例如但不限于PILEUP、CLUSTALW、SEQUENCHER或VectorNTI。
此處所用術(shù)語″序列相似性″和″序列一致性″是指序列在比較窗口中基于核苷酸對核苷酸的一致程度、或功能或結(jié)構(gòu)上相似的程度。因此，例如″序列一致性百分比″的計(jì)算，是在比較窗口中比較兩個(gè)最佳比對的序列，確定兩個(gè)序列中存在的相同核酸堿基(例如A、T、C、G、I)的位點(diǎn)數(shù)，得到匹配位點(diǎn)數(shù)，將匹配位點(diǎn)數(shù)除以比較窗口中的位點(diǎn)總數(shù)(即窗口大小)，結(jié)果乘以100，得到序列一致性百分比。為了本發(fā)明目的，″序列一致性″應(yīng)當(dāng)理解為是指通過DNASIS計(jì)算機(jī)程序(windows 2.5版；得自Hitachi Software engineering Co.，Ltd.，South San Francisco，California，USA)、采用軟件所附參考手冊中使用的標(biāo)準(zhǔn)缺省值計(jì)算的″匹配百分比″。類似說明適用于有關(guān)序列相似性。
此處提及的低嚴(yán)謹(jǐn)性包括并涵蓋至少約0-15％v/v甲酰胺和至少約1-2M鹽用于雜交以及至少約1-2M鹽用于洗滌條件。一般低嚴(yán)謹(jǐn)性為約25-30℃至約42℃。溫度可能改變，較高溫度用于取代甲酰胺和/或給出另外的嚴(yán)謹(jǐn)性條件。必要時(shí)可應(yīng)用另外的嚴(yán)謹(jǐn)性條件，例如中嚴(yán)謹(jǐn)性，其包括并涵蓋至少約16％-30％v/v甲酰胺和至少約0.5M-0.9M鹽用于雜交以及至少約0.5M-0.9M鹽用于洗滌條件，或高嚴(yán)謹(jǐn)性，其包括并涵蓋至少約31％-50％v/v甲酰胺和至少約0.01M-0.15M鹽用于雜交以及至少約0.01M-0.15M鹽用于洗滌條件。一般在Tm＝69.3+0.41(G+C)％進(jìn)行洗滌(Marmur和Doty，J.Mol.Biol.5109，1962)。但雙鏈DNA的錯(cuò)配堿基對數(shù)目每增加1％，其Tm降低1℃(Bonner和Laskey，Eur.J.Biochena.4683，1974)。在這些雜交條件中，甲酰胺是可選的。因此，如下確定特別優(yōu)選的嚴(yán)謹(jǐn)性水平低嚴(yán)謹(jǐn)性為6xSSC緩沖液、0.1％w/v SDS、25-42℃；中嚴(yán)謹(jǐn)性為2xSSC緩沖液、0.1％w/v SDS、溫度20℃-65℃；高嚴(yán)謹(jǐn)性為0.1xSSC緩沖液、0.1％w/vSDS、溫度至少65℃。
本發(fā)明的核苷酸序列或氨基酸序列可能完全對應(yīng)于天然存在的基因(或相應(yīng)cDNA)、或蛋白質(zhì)、或其它表達(dá)產(chǎn)物的相同序列，或可能攜帶一個(gè)或多個(gè)核苷酸或氨基酸的替換、添加和/或缺失。SEQ ID NO1(AGT-119)、SEQ ID NO2(AGT-120)和SEQ ID NO3(AGT-121)或SEQ IDNO5(AGT-122)或SEQ ID NO6(AGT-422)或SEQ ID NO7(AGT-123)或SEQ ID NO8(AGT-504基因組)或SEQ ID NO9(AGT-504 cDNA)所示核苷酸序列對應(yīng)于括號內(nèi)所指的新基因。相應(yīng)的表達(dá)產(chǎn)物為AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。適當(dāng)時(shí)，此處提及的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504包括涉及的基因組基因或cDNA以及任何天然存在或誘導(dǎo)的衍生物。例如，基因組形式的AGT-504如SEQ ID NO8所示。除核苷酸序列的替換、缺失和/或添加以外，本發(fā)明另外包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504對應(yīng)核苷酸序列的突變、片段、局部或部分。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO1(AGT-119)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO1的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO2(AGT-120)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO2的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO2或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明再一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO3(AGT-121)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO3的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO3或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明再一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO5(AGT-122)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO5的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO5或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明再一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO6(AGT-422)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO6的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO7(AGT-123)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO7的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO7或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO8(AGT-504基因組)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO8的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO8或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明另一方面提供了包含編碼表達(dá)產(chǎn)物的核苷酸序列、或與該編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子或其衍生物、同系物或類似物，其中所述核苷酸序列基本上如SEQ ID NO9(AGT-504 cDNA)所示、或其衍生物、同系物或模擬物、或與SEQ ID NO9的全部或部分具有至少約30％相似性，或者能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO9或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
特別測定了AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的表達(dá)模式，以表明與肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量代謝的一種或多種的調(diào)節(jié)有關(guān)。除了AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在進(jìn)食與禁食、或糖尿病與非糖尿病動(dòng)物的胃、肝或下丘腦一種或多種組織中差異表達(dá)之外，這些基因也可能在其它組織中表達(dá)，包括但不限于腦、肌肉、脂肪組織、胰腺和胃腸道。編碼每種AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504的核酸分子優(yōu)選是DNA，例如cDNA序列或基因組DNA?；蚪M序列也可能包含外顯子和內(nèi)含子。基因組序列也可能包括啟動(dòng)子區(qū)或其它調(diào)節(jié)區(qū)。
同系物被認(rèn)為是與AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504之一具有相同或大于30％相似性和/或具有類似功能的其它動(dòng)物種類的基因。此處舉例說明上述來自以色列沙鼠的胃、肝或下丘腦的基因。然而本發(fā)明擴(kuò)展到根據(jù)核苷酸序列和/或功能確定的、來自人、靈長類、家畜類動(dòng)物(例如牛、羊、豬、馬、猴)、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(例如小鼠、豚鼠、倉鼠、兔)、伴侶動(dòng)物(例如貓、狗)以及捕獲的野生動(dòng)物(例如嚙齒動(dòng)物、狐貍、鹿、袋鼠)的同源基因。
本發(fā)明的核酸、特別是AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物和同系物可能處于分離或純化形式和/或連接到載體例如表達(dá)載體中?？赡茉谡婧思?xì)胞系(例如哺乳動(dòng)物、昆蟲或酵母細(xì)胞)或原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)或兩者中表達(dá)?！宸蛛x的″是指經(jīng)歷至少一次純化步驟的核酸分子，例如可方便定義為通過分子量、編碼活性、核苷酸序列、堿基組成或其它方便方法測定，相對于其它組分，包含至少約10％目的核酸分子、優(yōu)選至少約20％、更優(yōu)選至少約30％、再優(yōu)選至少約40-50％、另優(yōu)選至少約60-70％、再優(yōu)選至少約80-90％或更多的目的核酸分子的組合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，也可能認(rèn)為本發(fā)明的核酸分子是生物純。核酸分子可能連接到能夠在原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)或真核細(xì)胞(例如酵母細(xì)胞、真菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞)中表達(dá)的表達(dá)載體。核酸分子也可能與編碼另一實(shí)體例如信號肽的核酸分子連接或融合或結(jié)合。也可能包含在3′或5′端部分、或3′和5′兩端部分與其融合、連接或結(jié)合的另外的核苷酸序列信息。核酸分子也可能是部分載體例如表達(dá)載體。
本發(fā)明核酸分子的衍生物包括寡核苷酸、PCR引物、反義分子、適用于共同抑制的分子以及融合核酸分子。本發(fā)明也包括針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其mRNA的核酶和DNA酶。能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1、SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ IDNO8或SEQ ID NO9或其互補(bǔ)形式的一種或多種雜交的核苷酸序列方便地包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的衍生物和同系物。
衍生物包括來自天然、合成或重組來源包括融合核酸分子的片段、局部、部分、突變體、變體和模擬物。衍生物可能來源于核苷酸的插入、缺失或替換。
本發(fā)明另一方面提供了分離的表達(dá)產(chǎn)物或其衍生物、同系物、類似物或模擬物，它在肥胖動(dòng)物中與消瘦動(dòng)物相比、或進(jìn)食(包括再進(jìn)食)動(dòng)物與禁食動(dòng)物相比、或糖尿病與非糖尿病狀態(tài)動(dòng)物相比，于胃、肝或下丘腦一種或多種組織中產(chǎn)生的量較多或較少。
上述表達(dá)產(chǎn)物可能是RNA或蛋白質(zhì)。產(chǎn)物是蛋白質(zhì)的情況下，衍生物包括氨基酸插入性衍生物例如氨基和/或羧基端融合以及單個(gè)或多個(gè)氨基酸的序列內(nèi)插入。插入性氨基酸序列變體是將一種或多種氨基酸殘基引入蛋白質(zhì)的預(yù)定位點(diǎn)，盡管通過適當(dāng)篩選所得產(chǎn)物也可能隨機(jī)插入。缺失性變體的特征在于從序列中去除了一個(gè)或多個(gè)氨基酸。替換性氨基酸變體是去除序列中至少一個(gè)殘基并在其位置插入一個(gè)不同殘基。替換性氨基酸變體的例子有保守性氨基酸替換。保守性氨基酸替換一般包括下列組的替換甘氨酸和丙氨酸；纈氨酸、異亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；絲氨酸和蘇氨酸；賴氨酸和精氨酸；苯丙氨酸和酪氨酸。添加氨基酸序列包括與其它肽、多肽或蛋白質(zhì)融合。
表達(dá)產(chǎn)物AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504蛋白質(zhì)形式的化學(xué)和功能性等價(jià)物應(yīng)當(dāng)理解為顯示這些分子的任何一種或多種功能活性的分子，并可能來源于任何來源，例如化學(xué)合成、或通過篩選方法鑒定，例如天然產(chǎn)物篩選或篩選化學(xué)文庫。
衍生物包括具有特定表位的片段或融合肽、多肽或其它蛋白質(zhì)性或非蛋白質(zhì)性分子的完整蛋白質(zhì)部分。
此處提及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504包括提及分離的或純化的天然存在的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504及其任何衍生物、同系物、類似物和模擬物。衍生物包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的部分、片段和局部，若表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的單個(gè)和多個(gè)氨基酸替換、缺失和/或添加。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504的衍生物方便地包括于能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或SEQ ID NO2或SEQ ID NO3或SEQ ID NO5或SEQ ID NO6或SEQ ID NO7或SEQ ID NO8或SEQ IDNO9雜交的核苷酸序列所編碼的分子中。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的其它衍生物包括化學(xué)類似物。此處涵蓋的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的類似物包括但不限于側(cè)鏈修飾、引入非天然氨基酸和/或其肽、多肽或蛋白質(zhì)合成中的衍生物，以及使用交聯(lián)劑及其它方法給予蛋白質(zhì)性分子或其類似物構(gòu)象限制。
本發(fā)明涵蓋的側(cè)鏈修飾的例子包括氨基修飾，例如通過與乙醛反應(yīng)然后經(jīng)NaBH4還原進(jìn)行還原性烷基化；利用methylacetimidate氨基化；利用乙酸酐?；?；利用氰酸酯進(jìn)行氨基的氨甲?；?；利用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)進(jìn)行氨基的三硝基芐基化；利用琥珀酸酐和四氫鄰苯二甲酸酐進(jìn)行氨基的?；焕眠炼呷?5-磷酸然后經(jīng)NaBH4還原進(jìn)行賴氨酸的吡醇羥乙酯化。
可能利用試劑例如2，3-丁二酮、苯乙二醛和乙二醛形成雜環(huán)縮合產(chǎn)物來修飾精氨酸殘基的胍基?？赡芡ㄟ^形成O-acylisourea進(jìn)行碳二亞胺活化、然后衍生為例如對應(yīng)的酰胺來修飾羧基。
可能利用許多方法修飾Sulphydryl基，例如利用碘乙酸或碘乙酰胺進(jìn)行羧甲基化；過氧甲酸氧化為半胱磺酸；與其它巰基化合物形成混合的二硫化物；與馬來酰亞胺、馬來酸酐或其它取代的馬來酰亞胺反應(yīng)；使用4-氯汞苯甲酸、4-氯汞苯磺酸、氯化苯汞、2-氯汞-4-硝基酚及其它汞制劑形成汞衍生物；在堿性pH下利用氰酸酯進(jìn)行氨甲?；?。
色氨酸殘基的修飾可能通過例如利用N-溴代琥珀酰亞胺氧化、或利用2-羥-5-硝芐基溴或sulphenyl halides進(jìn)行吲哚環(huán)的烷基化。另一方面，可能通過利用四硝基甲烷硝化形成3-硝基酪氨酸衍生物而改變酪氨酸。
可能通過利用吲哚乙酸衍生物進(jìn)行烷基化、或利用焦碳酸二乙酯進(jìn)行N-乙酯基化進(jìn)行組氨酸咪唑環(huán)的修飾。
在肽合成過程中引入非天然氨基酸及衍生物的例子包括但不限于使用正亮氨酸、4-氨基丁酸、4-氨基-3-羥基-5-苯戊酸、6-氨基己酸、t-丁基甘氨酸、正纈氨酸、苯基甘氨酸、鳥氨酸、肌氨酸、4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸、2-噻吩基丙氨酸和/或氨基酸的D-異構(gòu)體。此處包括的非天然氨基酸列表如表3所示。
表3非常見氨基酸代碼非常見氨基酸 代碼 非常見氨基酸 代碼α-氨基丁酸 Abu L-N-甲基丙氨酸 Nmalaα-氨基-α-甲基丁酸酯MgabuL-N-甲基精氨酸 Nmarg氨基環(huán)丙烷羧酸酯 Cpro L-N-甲基天冬酰胺 NmasnL-N-甲基天冬氨酸 Nmasp氨基異丁酸 Aib L-N-甲基半胱氨酸 Nmcys氨基正冰片基羧酸酯 Norb L-N-甲基谷氨酰胺 NmglnL-N-甲基戊二酸 Nmglu丙氨酸環(huán)己酯 ChexaL-N甲基組氨酸Nmhis丙氨酸環(huán)戊酯 Cpen L-N-甲基異亮氨酸 NmileD-丙氨酸 Dal L-N-甲基亮氨酸 NmleuD-精氨酸 Darg L-N-甲基賴氨酸 NmlysD-天冬氨酸 Dasp L-N-甲基甲硫氨酸 NmmetD-半胱氨酸 Dcys L-N-甲基正亮氨酸 NmnleD-谷氨酰胺 Dgln L-N-甲基正纈氨酸 NmnvaD-谷氨酸 Dglu L-N-甲基鳥氨酸 NmornD-組氨酸 Dhis L-N-甲基苯丙氨酸 NmpheD-異亮氨酸 Dile L-N-甲基脯氨酸 NmproD-亮氨酸 Dieu L-N-甲基絲氨酸 NmserD-賴氨酸 Dlys L-N-甲基蘇氨酸 NmtrrD-甲硫氨酸 Dmet L-N-甲基色氨酸 NmtrpD-鳥氨酸 Dorn L-N-甲基酪氨酸 NmtyrD-苯丙氨酸 Dphe L-N-甲基纈氨酸 NmvalD-脯氨酸 Dpro L-N-甲基乙基甘氨酸 NmetgD-絲氨酸 Dser L-N-甲基-t-丁基甘氨酸Nmtbug
D-蘇氨酸 Dthr L-正亮氨酸 NleD-色氨酸 Dtrp L-正纈氨酸 NvaD-酪氨酸 Dtyr α-甲基-氨基異丁酸 MaibD-纈氨酸 Dval α-甲基-γ-氨基丁酸MgabuD-α-甲基丙氨酸Dmalaα-甲基環(huán)己基丙氨酸MchexaD-a-甲基精氨酸 Dmargα-甲基環(huán)戊基丙氨酸McpenD-α-甲基天冬酰胺 Dmasnα-甲基-α-萘基丙氨酸 ManapD-α-甲基天冬氨酸 Dmaspα-甲基青霉胺 MpenD-α-甲基半胱氨酸 DmcysN-(4-氨基丁基)甘氨酸 NgluD-α-甲基谷氨酰胺 DmglnN-(2-氨基乙基)甘氨酸 NaegD-α-甲基組氨酸DmhisN-(3-氨基丙基)甘氨酸 NornD-α-甲基異亮氨酸 DmileN-氨基-α-甲基丁酸 NmaabuD-α-甲基亮氨酸Dmleuα-萘基丙氨酸 AnapD-α-甲基賴氨酸DmlysN-芐基甘氨酸 NpheD-α-甲基甲硫氨酸 DmmetN-(2-氨甲酰乙基)甘氨酸 NglnD-α-甲基鳥氨酸DmornN-(氨甲酰甲基)甘氨酸 NasnD-α-甲基苯丙氨酸 DmpheN-(2-羧乙基)甘氨酸 NgluD-α-甲基脯氨酸DmproN-(羧甲基)甘氨酸 NaspD-α-甲基絲氨酸DmserN-環(huán)丁基甘氨酸 NcbutD-α-甲基蘇氨酸DmthrN-環(huán)庚基甘氨酸 NchepD-α-甲基色氨酸DmtrpN-環(huán)己基甘氨酸 NchexD-α-甲基酪氨酸Dmty N-環(huán)癸基甘氨酸 NcdecD-α-甲基纈氨酸DmvalN-環(huán)十二烷基甘氨酸 NedodD-N-甲基丙氨酸 Dnmala N-環(huán)辛基甘氨酸 NcoctD-N-甲基精氨酸 Dnmarg N-環(huán)丙酯基甘氨酸 NcproD-N-甲基天冬酰胺 Dnmasn N-環(huán)十一烷基基甘氨酸 NcundD-N-甲基天冬氨酸 Dnmasp N-(2，2-聯(lián)苯乙基)甘氨酸NbhmD-N-甲基半胱氨酸 Dnmcys N-(3，3-聯(lián)苯丙基)甘氨酸NbheD-N-甲基谷氨酰胺 Dnmgln N-(3-胍基丙基)甘氨酸 NargD-N-甲基谷氨酸 Dnmglu N-(1-羥乙基)甘氨酸 Nthr
D-N-甲基組氨酸 DnmhisN-(羥乙基)甘氨酸 NserD-N-甲基異亮氨酸 DnmileN-(咪唑乙基)甘氨酸 NhisD-N-甲基亮氨酸 DnmleuN-(3-吲哚乙基)甘氨酸 NhtrpD-N-甲基賴氨酸 DnmlysN-甲基-γ-氨基丁酸 NmgabuN-甲基環(huán)己基甘氨酸 Nmchexa D-N-甲基甲硫氨酸 DnmmetD-N-甲基鳥氨酸 DnmornN-甲基環(huán)戊基甘氨酸 NmcpenN-甲基甘氨酸 Nala D-N-甲基苯丙氨酸 DnmpheN-甲基氨基異丁酸 Nmaib D-N-甲基脯氨酸 DnmproN-(1-甲基丙基)甘氨酸 Nile D-N-甲基絲氨酸 DnmserN-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nleu D-N-甲基蘇氨酸 DmnthrD-N-甲基色氨酸 DnmtrpN-(1-甲基乙基)甘氨酸 NvalD-N-甲基酪氨酸 DnmtyrN-甲基α-萘基丙氨酸NmanapD-N-甲基纈氨酸 DnmvalN-甲基青霉胺 Nmpenγ-氨基丁酸Gabu N-(p-羥苯基)甘氨酸 NhtyrL-t-丁基甘氨酸 Tbug N-(硫甲基)甘氨酸 NcysL-乙基甘氨酸 Etg 青霉胺 PenL-同型苯丙氨酸 Hphe L-α-甲基丙氨酸MalaL-α-甲基精氨酸Marg L-α-甲基天冬酰胺 MasnL-α-甲基天冬氨酸 Masp L-α-甲基-t-丁基甘氨酸 MtbugL-α-甲基半胱氨酸 Mcys L-甲基乙基甘氨酸 MetgL-α-甲基谷氨酰胺 Mgln L-α-甲基谷氨酸MgluL-α-甲基組氨酸Mhis L-α-甲基同型苯丙氨酸 MhpheL-α-甲基異亮氨酸 Mile N-(2-甲基硫乙基)甘氨酸 NmetL-α-甲基亮氨酸Mleu L-α-甲基賴氨酸MlysL-α-甲基甲硫氨酸 Mmet L-α-甲基正亮氨酸 MnleL-α-甲基正纈氨酸 Mnva L-α-甲基鳥氨酸MomL-α-甲基苯丙氨酸 Mphe L-α-甲基脯氨酸MproL-α-甲基絲氨酸Mser L-α-甲基蘇氨酸MthrL-α-甲基色氨酸Mtrp L-α-甲基酪氨酸MtyrL-α-甲基纈氨酸Mval L-N-甲基同型苯丙氨酸 NmhpheN-(N-(2，2-聯(lián)苯乙基) Nnbhm N-(N-(3.3-聯(lián)苯丙基)氨甲Nnbhe氨甲酰甲基)甘氨酸酰甲基)甘氨酸1-羧基-1-(2，2-聯(lián)苯-Nmbc乙氨基)環(huán)丙烷可以使用交聯(lián)劑，例如，為穩(wěn)定3D構(gòu)象，使用同源雙功能交聯(lián)劑例如具有(CH2)n(n＝1-6)間隔基團(tuán)的雙功能亞胺酯、戊二醛、N-羥基琥珀酰亞胺酯以及通常包含氨基反應(yīng)性基團(tuán)(例如N-羥基琥珀酰亞胺)以及另一基團(tuán)特異反應(yīng)性基團(tuán)(例如maleimido或二硫基團(tuán)(SH)或碳二亞胺(COOH))的異源雙功能試劑。此外，可以對肽進(jìn)行構(gòu)象限制，例如通過摻入Cα和Nα-甲基氨基酸、在氨基酸的Cα和Cβ原子之間引入雙鍵以及通過引入共價(jià)鍵形成環(huán)肽或類似物，例如在N和C端之間、兩條側(cè)鏈之間或側(cè)鏈和N或C端之間形成酰氨鍵。
所有這些修飾也可能有益于穩(wěn)定AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504分子，用于體內(nèi)給藥方案或診斷目的。
如上所述，表達(dá)產(chǎn)物可能是RNA或蛋白質(zhì)。
術(shù)語″蛋白質(zhì)″應(yīng)當(dāng)理解為包括肽、多肽和蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可能糖基化或非糖基化和/或可能包含許多融合、連接、結(jié)合或聯(lián)合到蛋白質(zhì)的其它分子，例如氨基酸、酯類、糖類或其它肽、多肽或蛋白質(zhì)。此處提及的″蛋白質(zhì)″包括包含氨基酸序列的蛋白質(zhì)以及結(jié)合其它分子例如氨基酸、酯類、糖類或其它肽、多肽或蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO1的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO1具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO2的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO2具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO2或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO3的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO3具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO3或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO5的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO5具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO5或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO6的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO6具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO7的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO7具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO7或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO8的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO8具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO8或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該表達(dá)產(chǎn)物由包含SEQ ID NO9的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物編碼，包括與SEQ ID NO9具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO9或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
本發(fā)明也包括較高的相似性，例如大于約40％或50％或60％或70％或80％或90％或95％或96％或97％或98％或99％或以上。
本發(fā)明另一方面涉及選自以下的分離的表達(dá)產(chǎn)物(i)新核酸分子編碼的mRNA或蛋白質(zhì)或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物，該分子在進(jìn)食或禁食條件下的以色列沙鼠動(dòng)物、或糖尿病或非糖尿病動(dòng)物的胃、肝或下丘腦一種或多種組織中差異表達(dá)；(ii)新核酸分子編碼的mRNA或蛋白質(zhì)或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物，該分子在進(jìn)食或禁食條件下的以色列沙鼠動(dòng)物、或糖尿病或非糖尿病動(dòng)物的胃、肝或下丘腦一種或多種組織中差異表達(dá)；(iii)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(iv)由包含SEQ ID NO1的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(vi)基本如包含SEQ ID NO2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(vii)基本包含SEQ ID NO3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(viii)包含基本如SEQ ID NO4所示氨基酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(ix)基本包含SEQ ID NO5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(x)基本包含SEQ ID NO6的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xi)基本包含SEQ ID NO7的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xii)基本包含SEQ ID NO8的核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xiii)基本包含SEQ ID NO9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xiv)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO1的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xv)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO2的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xvi)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO3的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xvii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO5的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xviii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO6的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xix)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO7的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xx)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO8的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xxi)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與包含SEQ ID NO9的核苷酸序列或其互補(bǔ)形式、或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；表達(dá)產(chǎn)物的例子是SEQ ID NO4所示氨基酸序列(AGT-121)。
本發(fā)明的蛋白質(zhì)優(yōu)選處于分離形式?！宸蛛x″是指蛋白質(zhì)分子經(jīng)歷至少一次純化步驟，例如可方便定義為通過分子量、氨基酸序列或其它方便方法測定，相對于其它組分，包含至少約10％目的蛋白質(zhì)、優(yōu)選至少約20％、更優(yōu)選至少約30％、再優(yōu)選至少約40-50％、另優(yōu)選至少約60-70％、再優(yōu)選至少約80-90％或更多的目的蛋白質(zhì)的組合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，也可能認(rèn)為本發(fā)明的蛋白質(zhì)是生物純。
不限制理論或本發(fā)明的作用模式，認(rèn)為AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的表達(dá)與調(diào)節(jié)體重和葡萄糖穩(wěn)態(tài)有關(guān)。據(jù)認(rèn)為這些基因的表達(dá)調(diào)節(jié)特別通過作用于能量攝取以及糖/脂代謝而調(diào)節(jié)能量平衡。能量攝取作用很可能由中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)，但對糖和脂代謝的外周作用也有可能。這些基因的表達(dá)也可能受禁食和進(jìn)食調(diào)節(jié)。因此，調(diào)節(jié)這些基因或其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)和/或活性提供了調(diào)節(jié)體重和能量代謝、包括糖和脂代謝的機(jī)制。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的鑒定使得可以得到很多能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)或能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的治療性分子。本發(fā)明涵蓋的調(diào)節(jié)劑包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)的激動(dòng)劑和拮抗劑。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)的拮抗劑包括反義分子、核酶和共抑制分子(包括誘導(dǎo)RNAi的任何分子)。激動(dòng)劑包括提高啟動(dòng)子活性或干擾負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制的分子。AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的拮抗劑包括抗體和抑制劑肽片段。這類分子首先可能需要修飾，以使其穿透細(xì)胞膜。另外，可能利用病毒劑引入遺傳元件，來調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的表達(dá)。就AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504與其它基因例如編碼瘦素的ob基因聯(lián)合作用而言，該治療性分子可能靶向AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504以及ob基因或其翻譯產(chǎn)物。
因此，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在哺乳動(dòng)物中表達(dá)的方法，所述方法包含在足以上調(diào)或下調(diào)或調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和AGT-504表達(dá)的時(shí)間和條件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-423和AGT-504接觸有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-123和AGT-504表達(dá)的調(diào)節(jié)劑。
例如，可能將編碼AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-423和AGT-504或其衍生物或同系物的核酸分子引入細(xì)胞中，以增強(qiáng)該細(xì)胞產(chǎn)生AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-5 04的能力，反之，引入AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504正義和/或反義序列例如寡核苷酸，以便在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后或翻譯水平上降低基因表達(dá)。正義序列優(yōu)選編碼發(fā)夾RNA分子或雙鏈RNA分子。
本發(fā)明另一方面包括調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504在哺乳動(dòng)物中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的時(shí)間和條件下，給予所述哺乳動(dòng)物調(diào)節(jié)有效量的一種分子。該分子可能是蛋白質(zhì)性分子或化學(xué)體，也可能是AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其配基的衍生物。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504的表達(dá)、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的活性或功能的調(diào)節(jié)水平，在許多疾病例如肥胖、厭食、能量失衡、糖尿病、代謝綜合癥、血脂障礙、高血壓和胰島素耐受的治療中很重要。也可能用于農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)，以幫助產(chǎn)生瘦肉型動(dòng)物，或需要時(shí)產(chǎn)生更為肥胖的動(dòng)物。因此，本發(fā)明涵蓋的哺乳動(dòng)物包括但不限于人類、靈長類、家畜動(dòng)物(例如豬、羊、牛、馬、驢)、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、兔)、伴侶動(dòng)物(例如狗、貓)以及捕獲的野生動(dòng)物(例如狐貍、袋鼠、鹿)。特別優(yōu)選的宿主是人類、靈長類或家畜動(dòng)物。
因此，本發(fā)明包括AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的表達(dá)產(chǎn)物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和AGT-504的遺傳突變體和/或其激動(dòng)劑或拮抗劑的治療性和預(yù)防性用途。
本發(fā)明因而包括調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504在哺乳動(dòng)物中表達(dá)的方法，所述方法包含在足以上調(diào)、下調(diào)或調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)的時(shí)間和條件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和/或AGT-504基因接觸有效量的一種試劑。
本發(fā)明另一方面包括調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504在受試者中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或功能的時(shí)間和條件下，給予所述受試者調(diào)節(jié)有效量的一種物質(zhì)。
通過給予哺乳動(dòng)物一種物質(zhì)來調(diào)節(jié)活性可以利用若干技術(shù)之一來實(shí)現(xiàn)，包括但不限于將蛋白質(zhì)性或非蛋白質(zhì)性分子引入哺乳動(dòng)物，該分子可以(i)調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-123、AGT-422和/或AGT-504的表達(dá)；(ii)作為AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的拮抗劑起作用；和/或(iii)作為AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504的激動(dòng)劑起作用。
根據(jù)本發(fā)明可能給予哺乳動(dòng)物的分子也可能連接到靶向物質(zhì)例如單克隆抗體，它提供了這些分子到靶細(xì)胞的特異性傳遞。
本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明有關(guān)哺乳動(dòng)物疾病的用途。例如，本發(fā)明特別用于治療性或預(yù)防性治療肥胖、厭食、糖尿病或能量失衡。
因此，本發(fā)明另一方面涉及治療遭受以肥胖、厭食、糖尿病和/或能量失衡中一種或多種癥狀為特征的疾病的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含在足以調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504表達(dá)或足以調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性的時(shí)間和條件下，給予所述哺乳動(dòng)物有效量的一種笏質(zhì)。
另一方面，本發(fā)明涉及治療遭受以肥胖、厭食、糖尿病或能量失衡中一種或多種癥狀為特征的疾病的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含給予所述哺乳動(dòng)物有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504。
物質(zhì)包括蛋白質(zhì)性或非蛋白質(zhì)性分子，例如抗體、天然產(chǎn)物、化學(xué)體或核酸分子(包括反義分子、正義分子、核酶、ds-RNA分子或DNA靶向分子)。
″有效量″是指至少部分獲得理想的免疫應(yīng)答(例如針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123或AGT-504)、或延遲特定疾病發(fā)作、或抑制其發(fā)展、或完全阻止其發(fā)作或發(fā)展所需的量。
按照這些方法，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504、或能夠調(diào)節(jié)所述分子表達(dá)或活性的物質(zhì)可能與一種或多種其它化合物或其它分子共同給藥?！骞餐o藥″是指通過相同或不同途徑在同一制劑或兩種不同制劑中同時(shí)給藥、或通過相同或不同途徑順序給藥。″順序″給藥是指在給予兩種分子之間秒、分、小時(shí)或天的時(shí)間差異。這些分子可能按任何順序給藥。
另一方面，本發(fā)明涉及能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物表達(dá)的物質(zhì)的用途，用于制備供治療以肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物。
再一方面，本發(fā)明涉及能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物活性的物質(zhì)的用途，用于制備供治療以肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物。
另一方面，本發(fā)明涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物的用途，用于制備供治療以肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物。
本發(fā)明另一方面涉及用于調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物的物質(zhì)。
另一方面涉及用于調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504活性或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物的物質(zhì)。
本發(fā)明另一方面涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物用于治療以肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡的一種或多種癥狀為特征的疾病。
在本發(fā)明的一個(gè)相關(guān)方面，受到治療的哺乳動(dòng)物可能是需要治療性或預(yù)防性治療的人或動(dòng)物。
因此，本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中涵蓋包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的調(diào)節(jié)劑以及一種或多種藥物可接受載體和/或稀釋劑的組合物。在另一實(shí)施方案中，該組合物包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物、類似物或模擬物以及一種或多種藥物可接受載體和/或稀釋劑。該組合物也可能包含瘦素、或瘦素或ob表達(dá)的調(diào)節(jié)劑。
簡言之，該組合物的所有這類組分稱為″活性組分″。
適合注射使用形式的活性組分的組合物包括無菌水溶液(水溶性)以及可即時(shí)制備無菌注射液的無菌粉末。在任何情況下，該形式必須無菌，一定程度上必須是能容易注射的液體。它在生產(chǎn)和貯存條件下必須穩(wěn)定，并必須防止微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用。
載體可以是溶劑或其它基質(zhì)，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其適當(dāng)?shù)幕旌衔镆约爸参镉汀?br> 可以通過各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑例如對羥苯甲酸酯、氯代丁醇、酚、山梨酸、thirmerosal等防止微生物作用。在很多情況下，優(yōu)選包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。通過在組合物中使用延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁和明膠，可以延長注射組合物的吸收。
將所需量的活性組分摻入含有按需任選的其它成分的合適溶劑中，然后通過例如過濾除菌、照射或其它方便方法滅菌，制備無菌注射液。至于供制備無菌注射液的無菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥技術(shù)，從前述無菌過濾的溶液中得到活性成分外加任何其它所需成分的粉末。
如能適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504，它們可以例如與惰性稀釋劑或可吸收的食用載體一起、或裝入硬殼或軟殼膠囊中、或壓成片劑、或直接混入膳食中，經(jīng)口服給藥。對于口服治療給藥，該活性化合物可以與賦形劑混合，以可吸收的片劑、頰含片、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮液、糖漿劑、干膠片等形式使用。這種組合物和制劑應(yīng)當(dāng)包含至少1％以重量計(jì)的活性化合物。該組合物和制劑的百分比當(dāng)然可能改變，可能適當(dāng)?shù)亟橛趩挝恢亓康募s5-80％?；钚曰衔镌谠撝委熡媒M合物中的量應(yīng)使其能夠獲得合適劑量。制備本發(fā)明的優(yōu)選組合物或者制劑，使其口服單位劑型包含約0.1μg-2000mg的活性化合物。
片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等也可能包含下列粘合劑，例如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例如磷酸氫鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；以及甜味劑例如蔗糖、乳糖或可以添加的糖精，或調(diào)味劑例如薄荷油、冬青油、或櫻桃香精。如果單位劑型是膠囊劑，則除上述類型材料之外，還可能包含液體載體。其它各種材料可能以包衣存在，或改變劑量單位的物理形式。例如，可能利用蟲膠、糖或這兩者包被片劑、丸劑、或膠囊劑。糖漿劑或酏劑可能包含活性化合物、甜味劑蔗糖、防腐劑甲基及羥苯丙酯、染料以及香料例如櫻桃或柑桔香料。當(dāng)然，用于制備任何單位劑型的任何材料應(yīng)該是藥學(xué)純，并在所用劑量內(nèi)基本上沒有毒性。此外，可能將活性化合物摻入緩釋制劑和劑型中。
藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑包括任意溶劑、分散劑、包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。為藥學(xué)活性物質(zhì)而使用此類介質(zhì)和試劑為本領(lǐng)域所公知。除非與該活性成分不相容，本發(fā)明包括在治療組合物中使用任何常規(guī)介質(zhì)或試劑。組合物中也可以摻入補(bǔ)充的活性成分。
按便于給藥和一致劑量的單位劑型配制非腸道組合物特別有利。此處所用單位劑型是指物理上的分立單位，適合用作待治療哺乳動(dòng)物受試者的單個(gè)劑量；每個(gè)單位包含產(chǎn)生目的治療效果的預(yù)定量的活性物質(zhì)連同所需的藥用載體。本發(fā)明新單位劑型的特征取決并直接依賴于(a)活性物質(zhì)的獨(dú)特特征以及希望達(dá)到的特定治療效果，以及(b)現(xiàn)有技術(shù)對復(fù)合此類活性物質(zhì)以用于治療患病活受試者疾病所固有的限制，所述受試者如此處詳述身體健康受到損害。
在單位劑型中，主要活性成分可以有效量與藥學(xué)上可接受的合適載體方便混合和有效給藥。例如，一個(gè)單位劑型包含數(shù)量為0.5μg-約2000mg的主要活性化合物。按比例表示，通常每ml載體含活性化合物約0.5μg-2000mg。就包含補(bǔ)充活性成分的組合物而言，參照所述成分的常用劑量和給藥方式，確定其劑量。
一般而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的有效量將是0.01ng/kg/體重至10,000mg/kg/體重以上。其它的量為0.1ng/kg/體重至1000mg/kg/體重以上。根據(jù)所治療的疾病，可能按分鐘、小時(shí)、天、周、月或年給予該活性成分。給藥途徑可能改變，包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、通過栓劑、輸注、滴注、口服或其它常規(guī)方式。
藥物組合物也可能包含遺傳分子，例如能夠轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞的載體，其中該載體攜帶能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504表達(dá)、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504活性的核酸分子。例如，該載體可能是病毒性載體。
在AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504是蛋白質(zhì)的情況下，本發(fā)明另一方面涉及AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物和同系物的抗體。該抗體可能是單克隆或多克隆抗體，可能選自天然存在的針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的抗體，或可能針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物特異性生成。就后者而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物可能首先需要與載體分子結(jié)合。本發(fā)明的抗體和/或重組AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物可特別用作治療劑或診斷劑。″針對″一種分子的抗體包括所述分子的特異性抗體。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504及其衍生物可用于篩選可能存在于某些自身免疫疾病中的針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的天然存在抗體?；蛘?，可以使用特異性抗體篩選AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。用于此類分析的技術(shù)為本領(lǐng)域公知，例如包括夾心分析和ELISA。
本發(fā)明針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的抗體可能是單克隆或多克隆抗體，并可能選自針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的天然存在抗體，或可能針對AGT-119、AGT-120和AGT-121或其衍生物特異性生成。就后者而言，AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504蛋白質(zhì)可能需要首先與載體分子結(jié)合?；蛘?，可能使用抗體片段，例如Fab片段。另外，本發(fā)明擴(kuò)展到重組及合成抗體以及抗體雜合體。此處認(rèn)為″合成抗體″包括抗體片段及雜合體。本發(fā)明這一方面的抗體特別用于免疫治療，可能也用作診斷工具或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的純化手段。
例如，特異性抗體可用于篩選AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504蛋白質(zhì)。后者很重要，例如用于篩選細(xì)胞提取物或其它生物液體中的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的水平，或從培養(yǎng)上清液中純化利用重組方法制備的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。用于此類分析的技術(shù)為本領(lǐng)域公知，例如包括夾心分析和ELISA。
在本發(fā)明范圍內(nèi)包括任何針對上述第一抗體的第二抗體(單克隆、多克隆抗體或片段)。第一和第二抗體均可能用于檢測分析中，或可能使用第一抗體以及可商業(yè)獲得的抗免疫球蛋白抗體。此處涵蓋的抗體包括特異性針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504任何區(qū)域的抗體。
利用酶或蛋白質(zhì)免疫可以獲得多克隆和單克隆抗體，每種類型均可用于免疫分析。獲得兩種類型血清的方法為本領(lǐng)域公知。并不優(yōu)選多克隆血清，但它通過給合適的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物注射有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其抗原性部分，收集動(dòng)物血清，并利用任何已知的免疫吸附技術(shù)分離特異性血清，相對容易制備。盡管此方法產(chǎn)生的抗體實(shí)際上可用于任何類型的免疫分析，但由于產(chǎn)物可能具有不均一性，一般并不喜歡。
由于單克隆抗體能夠大量產(chǎn)生以及產(chǎn)物的均一性，特別優(yōu)選用于免疫分析。利用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)，通過將永生細(xì)胞系與針對免疫原性制劑致敏的淋巴細(xì)胞融合，可以制備用于產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。(參見例如Douillard和Hoffinan，Basic Facts about Hybridomas，in Compendium of Immunology Vol.II，ed.by Schwartz，1981；Kohler和Milstein，Nature 256495-499，1975；Kohler和Milstein，EuropeanJournal of Immunology 6511-519，1976.)本發(fā)明另一方面包括檢測受試者生物樣品中AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物或同系物的方法，所述方法包含在足以形成復(fù)合物的時(shí)間和條件下，使所述生物樣品接觸AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其抗原性衍生物或同系物的特異性抗體，然后檢測該復(fù)合物。
存在該復(fù)合物表示存在AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504。該分析可能是定量或半定量分析，以確定發(fā)展肥胖或其它疾病的傾向或監(jiān)控治療方案。
AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504存在可能通過很多方法、例如Western印跡和ELISA方法進(jìn)行?？衫枚喾N免疫分析技術(shù)，如參見美國專利4,016,043、4,424,279和4,018,653。其中當(dāng)然包括非競爭型的單位點(diǎn)和雙位點(diǎn)或″夾心″分析，以及傳統(tǒng)的競爭性結(jié)合分析。這些分析也包括標(biāo)記的抗體直接結(jié)合靶對象。
夾心分析屬于最有效的常用分析。夾心分析技術(shù)具有很多改變，本發(fā)明意在包括其全部。簡言之，在典型的正向分析中，將未標(biāo)記的抗體固定化于固相基質(zhì)，使待測樣品與結(jié)合的分子相接觸。在適當(dāng)?shù)臏赜谥?，該時(shí)間足以使抗體-AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504復(fù)合物形成，然后加入利用能夠產(chǎn)生可檢測信號的報(bào)告分子標(biāo)記的、特異性針對AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的第二抗體并溫育，使時(shí)間足夠形成另一復(fù)合物，抗體-AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504-標(biāo)記的抗體。洗去任何未反應(yīng)的物質(zhì)，通過觀測該報(bào)告分子產(chǎn)生的信號來確定AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的存在。結(jié)果可能通過簡單觀測可視信號而定性，或可能通過與包含已知量半抗原的對照樣品比較而定量。正向分析的改變包括將樣品和標(biāo)記抗體同時(shí)加入結(jié)合抗體中的同時(shí)分析。這些技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，包括顯而易見的任何微小改變。根據(jù)本發(fā)明，可能包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的樣品包括細(xì)胞提取物、組織活檢或可能有血清、唾液、粘膜分泌物、淋巴液、組織液和呼吸液。因而樣品一般是包含生物液體的生物樣品，但也擴(kuò)展到發(fā)酵液和上清液(例如來自細(xì)胞培養(yǎng)物)。
固相表面一般為玻璃或多聚物，最常用的多聚物為纖維素、聚丙烯酰胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固相支持物可能是管、球、皿或微孔板形式，或適合進(jìn)行免疫分析的任何表面。結(jié)合方法為本領(lǐng)域公知，一般包括交聯(lián)共價(jià)結(jié)合或物理吸附多聚物-抗體復(fù)合物到固相表面，然后在測試樣品制劑中洗滌。然后將一等份待測樣品加入固相復(fù)合物中，在足夠的時(shí)間(例如2-40分鐘、或更合適則過夜)以及合適條件下(例如室溫至約37℃)溫育，使結(jié)合抗體中存在的任何亞基。溫育時(shí)間之后，洗滌抗體亞基固相、干燥，與特異性針對部分AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的第二抗體溫育。第二抗體與報(bào)告分子相連，用于顯示第二抗體與AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504的結(jié)合。
另一方法包括固定化生物樣品中的靶分子，然后使固定化的靶分子暴露于可能標(biāo)記或未標(biāo)記報(bào)告分子的特異性抗體。根據(jù)靶分子的量以及報(bào)告分子信號的強(qiáng)度，可能通過抗體直接標(biāo)記來檢測結(jié)合的靶分子?；蛘?，使特異性針對第一抗體的標(biāo)記的第二抗體接觸靶分子-第一抗體復(fù)合物，形成靶分子-第一抗體-第二抗體三元復(fù)合物。利用報(bào)告分子發(fā)出的信號檢測該復(fù)合物。
本發(fā)明所用″報(bào)告分子″是指通過其化學(xué)本質(zhì)提供可檢測結(jié)合抗原的抗體的分析識別信號的分子。可能定性或定量檢測。此類分析最常使用的報(bào)告分子為酶、包含熒光團(tuán)或放射性核素(即放射性同位素)的分子以及化學(xué)發(fā)光分子。
就酶免疫分析而言，一般利用戊二醛或高碘酸鹽方法將酶綴合到第二抗體。但應(yīng)當(dāng)容易承認(rèn)，存在技術(shù)人員易于獲取的多種不同的綴合技術(shù)。常用的酶包括辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶以及堿性磷酸酶等。一般根據(jù)經(jīng)相應(yīng)酶水解后能產(chǎn)生可檢測的顏色變化，來選擇用于特定酶的底物。合適酶的例子包括堿性磷酸酶和過氧化物酶。也可能利用可產(chǎn)生熒光產(chǎn)物的生熒光底物，而非上述顯色底物。在所有情況下，將酶標(biāo)抗體加入第一抗體半抗原復(fù)合物中，使其結(jié)合，然后洗去過量的試劑。然后將包含合適底物的溶液加入抗體-抗原-抗體復(fù)合物中。底物將與連接第二抗體的酶反應(yīng)，產(chǎn)生定性的可視信號，通常可能利用分光光度計(jì)進(jìn)一步定量，以指示樣品中存在的半抗原的量。″報(bào)告分子″也擴(kuò)展到使用細(xì)胞聚集或聚集抑制，例如在乳膠小球上的血紅細(xì)胞等。
或者，熒光化合物例如熒光素和羅丹明(rhodamine)可能與抗體化學(xué)偶聯(lián)，而不改變其結(jié)合能力。利用特定波長的光照射活化時(shí)，熒光色素標(biāo)記的抗體吸收光能，誘導(dǎo)分子激發(fā)態(tài)，然后發(fā)射特征顏色的光，可利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行視覺檢測。與EIA中一樣，容許熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合第一抗體-半抗原復(fù)合物。洗去未結(jié)合試劑，然后使留下的三元復(fù)合物暴露合適波長的光線。觀察到熒光表示存在目的半抗原。免疫熒光和EIA技術(shù)均為本領(lǐng)域內(nèi)公知，為本發(fā)明方法特別優(yōu)選。然而，也可能使用其它報(bào)告分子例如放射性同位素、化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光分子。
本發(fā)明還涵蓋遺傳分析，例如包括PCR分析，以檢測AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-123和AGT-504或其衍生物。
實(shí)時(shí)PCR也特別用于分析特定的遺傳分子。
本發(fā)明由以下非限制性實(shí)施例進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1以色列沙鼠在以下實(shí)施例中，使用以色列沙鼠進(jìn)行不同條件下的差異表達(dá)研究。根據(jù)代謝表型，將大鼠分為如下3組A組動(dòng)物消瘦B組動(dòng)物肥胖、非糖尿病C組動(dòng)物肥胖、糖尿病實(shí)施例2以色列沙鼠AGT-119的部分序列使用進(jìn)食、禁食和再進(jìn)食以色列沙鼠胃cDNA的差異顯示PCR鑒定AGT-119。
部分核苷酸序列如下AATGAAAGAATTGATTGATACGCAACCAAATTAGCCAGTGAGGTTAGNNNCNGGATTATCGTGACCAGATAGGAGCCTTGGAAAATGACTAAGAAAAATGAAAAACAGCCTAAAATGTCATTAGCCCAACAAGATGCGTTAAAACGCCTGGATCAAGTTAGAANGCAGAAAAGCGAAAGCC[SEQ ID NO1]實(shí)施例3AGT-119基因表達(dá)實(shí)時(shí)PCR分析發(fā)現(xiàn)AGT-119在禁食和再進(jìn)食動(dòng)物中的表達(dá)水平顯著低于進(jìn)食動(dòng)物(圖1)。多數(shù)禁食和再進(jìn)食動(dòng)物的AGT-119水平不可檢測。禁食進(jìn)行16小時(shí)，進(jìn)食動(dòng)物可任意獲取實(shí)驗(yàn)室食物，再進(jìn)食動(dòng)物禁食16小時(shí)后可任意獲取實(shí)驗(yàn)室食物1小時(shí)。利用靶向目的基因的兩套引物證實(shí)這些結(jié)果。
實(shí)施例4
AGT-119序列同源性AGT-119序列未顯示與公共數(shù)據(jù)庫任何序列的顯著同源性(BLASTN版本2.2.1)。
實(shí)施例5以色列沙鼠AGT-120的部分序列使用進(jìn)食、禁食和再進(jìn)食以色列沙鼠胃cDNA的差異顯示PCR鑒定AGT-120。
部分核苷酸序列序列如下GCTGATGGCGATGAATGAACACTGCGTTTGCTGGCCTTATCAATTCCCGCTTTTTCTTGGATGAAAAAGACTAACCATGATCGGGCCCAACGGCGGAAGTCGCTTTTGTCACCAGTAGTGATGGTGCCGGGATCAAGTGCCACGATTGAGCGTTTCAATTCACTGATTGCGATGCTTAATAAAGATTCGCCGCACCCTCACAGTGTGTTAAAGATTAAAGTCATGAAAGATGGCAGTTTAAAATACAAGGGCAGCATTAATCGCGGTGATAATGAACCCTTTATTGTGATTGGTTTTGAAAATAATAAAGATGGCTATAGTAATATTAAGAAGCAAGCAAGCTGGCTAGATATTGCCTTTTATGAGATCTCGCNAACTTATAAATTTAACAACTTTAAGGCCTTTGGCCATTCAAATGGAGGGCTGGTGTGGACATATTGGTTAGAGCATTATTATTCAGAGTATGAGTCAGAAATCAAAATCAAGCGGTTGATGACTTTGGCTTCACCATTTAACTTTGACGAAGACAATCTGAATCACCGGACCCAGATGCTGGCTGACTTTATTAAATATCGGAAACGACTTCCAAAAACGCTCAAAGTTTATTCACTGACTGGTGGCCAGACCTATGAATCTGACGGGATTGTTCCTGAAAATAGTGTAGCCGCAGCCAAGTATATTTTCCAAAATCAAGTGAAGAGCTTTATGGAAATTACGGTTACGGGTAAGCAGCTAATCACTCAGATTTACCGCAAAATGAACAAGTAGTGCTAGTGATGAATCCACCACTCACTAAAGATAATAAAAAAAAAAA[SEQ ID NO2].
實(shí)施例6AGT-120基因表達(dá)進(jìn)食組(n＝8)AGT-120的表達(dá)顯著高于禁食(n＝12)和再進(jìn)食動(dòng)物(n＝8)。禁食和再進(jìn)食動(dòng)物之間沒有差異(圖2)。AGT-120表達(dá)與胃重、胃容量、葡萄糖或胰島素水平之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性。
實(shí)施例7AGT-120基因同源性AGT-120序列顯示與加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)假定蛋白質(zhì)(NZ AAAB01000011)的同源性。人的同源性尚待鑒定。
實(shí)施例8以色列沙鼠AGT-121序列使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠下丘腦cDNA的差異顯示PCR鑒定AGT-121。
AGT-121是最初通過差異顯示鑒定的下丘腦基因。進(jìn)食/禁食下丘腦的主要基因表達(dá)數(shù)據(jù)令人關(guān)注，因?yàn)锽組和C組動(dòng)物的表達(dá)大幅提高，而且動(dòng)物之間信號的不一致性較大。
核苷酸序列如下CAGACTCCTTGGAAATTAAGGAATGCAATTCTGCCACCATGATGGAAGGACTGAAAAAACGTACAAGGAAGGCCTTTGGAATACGGAAGAAAGAAAAAGACACTGACTCTACAGGCTCACCAGATCGAGATGGAATGCAGCCCAGCCCACACGAGCTCCCCTACCATAGCAAAGCAGAGTGTGCCCGAGAAGGAGGGAACAAAGCTTCGAAGAAAAGCAATGGGGCACCAAATGGATTTTATGCGGAAATTGATTGGGAAAGATATAACTCACCTGAGCTGGATGAAGAAGGTTACAGCATCAGACCTGAGGAACCAGGCTCTACCAAAGGAAAGCACTTTTATTCTTCAAGTGAATCCGAAGAGGAGGAAGAATCGCACAAGAAGTTCAATATCAAGATTAAACCCTTGCAGTCCAAGGACATCCTTAAGAATGCTGCAACAGTAGACGAGCTGAAGGCTTCCATAGGCAACATTGCACTTTCCCCTTCGCCTGTGAGGAAAAGTCCGAGGCGCAGCCCGGGTGCAATTAAAAGGAACTTATCCAGTGAAGAAGTCGCAAGACCCAGGCGTTCCACCCCAACTCCAGAACTTACAAGCAAGAAGCCTCTGGACGACACTCTGGCCCTTGCTCCCCTCTTTGGCCCACCGTTAGAATCTGCTTTTGATGGACACAAGACGGAAGTTCTTTTAGATCAGCCTGAGATATGGGGTTCAGGCCAACCAGTTAACCCAAGCATGGAGTCACCAAAGCTAGCAAGACCTTTTCCCACTGGAACCCCTCCACCTCTGCCTCCAAAAACTGTACCAGCCACCCCGCCTCGGACAGGCTCCCCCTTAACAGTGGCGACAGGAAATGACCAGGCAGCCACAGAGGCCAAAATTGAGAAACTACCATCCATCAGTGACCTGGACAGCATTTTTGGCCCCGTGTTGTCCCCCAAGTCTGTTGCTGTTAATACTGAGGAGACGTGGGTCCATTTCTCTGATGCATCCCCGGAACATGTTACTCCAGAGTTGACTCCAAGGGAAAAGGTGGTGACCCCACCAGCTGC
ATCAGACATCCCAGCTGACTCCCCAACTCCAGGCCCGCCTGGCCCCCCAGGCTCGGCAGGTCCCCCAGGGCCTCCTGGTCCTCGCAATGTACCATCTCCGCTCAATTTAGAAGAAGTCCAGAAGAAAGTCGCTGAGCAGACCTTCATTAAAGATGATTACTTAGAAACACTCTCATCTCCTAAAGAGTGTGGGTTGGGACAGAGAGCAACTCCACCTCCCCCACCACCACCCACCTACAGGACTGTGGTTTCGTCCCCCGGACCTGGCTCGGGCAGTGGTACGGGGACCGCCAGTGGTGCATCGTCCCCTGCTCGGCCAGCCACCCCCTTAGTTCCTTGCAGCTGCTCCACTCCGCCTCCACCTCCTCCCCGGCCTCCATCCCGGCCAAAGCTACCTCCAGGAAAGCCTGGAGTTGGAGACGTGTCCAGACCTTTTAGCCCACCCATACACTCCTCCAGCCCTCCTCCAATAGCACCCTTAGCCCGGGCTGAAAGCACTTCTTCAATATCATCAACCAATTCCCTGAGCGCAGCCACCACTCCCACAGTTGAGAATGAACAGSCTTCCCTCGTTTGGTTTGACAGAGGAAAGTTTTATTTGACTTTTGAAGGTTCTTCCAGGGGACCCAGTCCTCTAACTATGGGGGCCCAGGACACCCTCCCGGTTGCAGCAGCATTCACAGAAACTGTCAATGCCTACTTCAAAGGAGCAGATCCAAGCAAATGCATTGTTAAGATCACGGGAGAAATGGTGTTGTCCTTTCCTGCTGGCATCACCAGACACTTTGCCAACAACCCATCCCCAGCTGCTCTGACTTTTCGAGTGATAAATTCCAGCAGGTTAGAGCACGTCCTGCCGAACCCCCAGCTCCTCTGCTGCGATAACACACAAAATGATGCCAATACCAAGGAATTCTGGGTAAACATGCCAAATTTGATGACCCACCTGAAGAAGGTCTCTGAACAAAAACCCCAGGCTACATATTACAATGTGGACATGCTCAAGTATCAGGTGTCAGCCCAGGGCATTCAGTCCACACCTCTGAACTTGGCGGTGAACTGGCGCTGTGAGCCTTCCAGCACTGACCTGCGCATAGATTATAAGTACAACACGGATGCCATGTCCACCGCAGTGGCCCTTAACAACGTGCAGTTCCTGGTCCCCATTGATGGAGGAGTGACCAAGCTCCAGGCTGTCCTTCCTCCAGCAGTCTGGAATGCTGAACAACAAAGAATATTATGGAAGATTCCTGATATCTCCCAGAAGTCAGAAAATGGAGGCGTAGGTTCTTTACTGGCAAGATTTCAATTAGCCGAAGGCCCAAGCAAACCTTCCCCACTGGTCGTGCAGTTCACGAGTGAAGGGAGCACTCTGTCTGGCTGCGACATTGAGCTTGTCGGAGCAGGGTACGGGTTTTCACTCATCAAGAAGAGGTTTGCTGCAGGAAAATACTTGGCCGATAACTAATAAAATGTCATGCAAGGATTTTGAAGATCCATGTCCTGGAGAACTGTTGTCTGAGAGACATATTTTAATCTGGTTTGAGGAAAACAAACCAACCGATGTCTGTACGTGGGCTCTGTCAGCTGGAAGGTCCCGGCTTTCAGCCGTGATTTCCCACACCCAGTACAAGGAGGATCAGTTCTACAGTACTTACTTCTAGGTGTACTATTGTTAATGGTTTTAAAATGTAATTATTGTATTTGTAAACTGTACCTTCATTCCAGTAAGGCAGTTAGACACCTGAGTTTTAGCTTTTTTTTCCATTCCTGAAACGGATGTAATTTAAACTGCGGTATGTAAATTTAATAGTAGTACTGTCGAATGGCACAATGCTTACAGAGATACAGTGCATTTTGTCAATATATAAAATTTAAATATAATGTTGATAGTTACCATAAAGGGGGTGCCACACATCAAGAACCTTAAATGGAACCAGAAACAAGCAAGCAAACAAACAAACAAACAAACAAAACCTTACTTTTCTTCACTCCTTATTACATTTTCCTCTAGAGCTAAAGAAACTTCTAGCTTCGGTTTAGTGGGTTAAATTCAGAAACTATTTCAGAAAAAAAAAAAAATTCTGAAGTTACAGCATATTCAAAGAGAAGCATTAATTACCACTTTTTTAAAAGCTTTTTTTTCAAACCGCAAATTTCATAAAAATGCAAACTGTGTAAACAGGGCCTCTTATTTTTATAACTTGTGTAAAAAGGGAAAATCAATTCATATTTAAAGTTTAAGTAGTATTAAATTATATCCAAGAGTGAAGAGGATGTTGAAATCTTACCTGACCCCATGCCCCTTCTTTGCAGTTTAGCAAATGTTGAGATTGCTAAATCATCAGATTAAAGCCAACTTGATTTTTAAAGTTTCAAGACTTTCTGAAGCTGAACTGGTTAAAACTTTTGCACAATTGCTTGGAACGGAGGGGGAGGGGCCTCTCTGGTCCAGCACAGGTACCTTGTTTCTTCCCTACTCACAAGAATCAAAACAATGAAAGTCAAGAACCACAGAGGGGGGAAATTAGTTCCCTGTTCAGTCCAAAAGGAGAACTTTAAACTTATCATTTACGTCTTTGGGGAAGGAAGAAATAAGCTTTATAAGTGAAATCCTATTCACCTTGTTGTCCTATGAATGTTTTCGGGGTGACTTTAAGATTCATTGTATACATGTGCGAGTCTCTGCTATTCTTGGGGAGTTGAAAGCAGAGCCAGGCCAGTGGCCTTGAAGTTCAGTAAATGCCACAGTTCTGGGGCAAAGGTAGGCATGAGGGTTCTGCCCCTCAGCACAGGAATCAGAGCAGTGTCTTGTAAGGTCTAAAGATTAAGTCTTCCAGTAAGCCACAAGTTATTTTGTAACAGAGTTGGGGAGTTTTGGCACTCGCTGCTGACTTTCATTTTGTATCCACTCAAATGGAGTCTTCAACTCTTTTCAACTTTAGAATCAAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACACAAGGTTTACTCTGTGTAACTGTCCTGGATGTTCTGGAACTCTTTTTGTAGACCAGGCTGGCCTCGAACTCAGAGAGATCCACCTGCCTGTGCTCCCCAAGTGCTGGGATTAAAGGCGTGTGCCACCATGCCTGGCTTAGATTAAATTTTTTAAGTCTTACTTCACCAGTGAGATTGTGATTGGCAGTTGTTTCGAGAGAGCTTTGTAGCTTAATCTATGTTCTCTTCAATCAATGCTTGCTACCAAAAGAATGTCCAAAATGATCTATTTTTCCTGGGAACAATTCATCTATTTAAATAGGCTCTTGCCTAGTTCCCCAAAGCAGCCTGTCTTTGAAGGTTTTTTTGAACAAAATAATTTTTTCACAAAAAGTTTGGTTTTGAAATCAAAATAGAGAAATAAAATGTAAATTTTAAATCTAATGGAACATGAGGAAATGAAAAAACTTAAGCCAATGGAGAGTAAAAGCAGAAAAAAATGAAACTTACCTAGAATGTGATTATATTATGTTTTTAAGTAGTCAATTCATGGAAAAATATTGAATATTAA
CACAAAGCATATTAAAAATATGTAAATATTACTGTTTCTCATGTCTTTCTCTTTATATCTTATTTTATATAGTTTTAGAATGAATTGGTCATTAAATACAGTGTTTCTTTCCAAAGAATAATTTTGTTGATATTGTAAAAATGTAATTAAAGATAGAGACTTGAATAGTCTCTAACATTATCCAAATGTTTCTAGGAACCAAATTCAAAGCTGTGAAGAAAGCTTGCAATCCCTGAATTGGCTTTTGTGAAATGGAATGACGGTGGGTAATCTCAAAATTCAGACTTGAATAGTCAGAGCTGAAGTGGGGAATGGGTGGTTCCTTCTGGTTCAGAAAATAGGTCAAATAACAGCATTTGCTCGCATCAGGGATGGAGATGTTGGTGATGTTTGGTTTTACTCTCGCAGGCTTTCGTCTCCTGTTGAAGGTGTATCTGTAGCCCAGTGGGATAAGAGTTCATGTTCTGAGATGTGGTCCTAGACAAGGCAGGCAAGGTTTCAGTCATCAATACCTATCAGGTCAGGTTCCCTTTTGTCTATACAAAATGGGTTAGCTCATAGCCAGATGGTTTGCAGGACAGTGAGCTAAATTAGGACAAGATTCTGGTTAGCCAAAGAGCTGTTTCCTAAGCACTCTGATTTTTTTTTAAAGCTGATAGAAAGTGTAAATGTTCTATTTTGACGACATGGAAAGTATGTTTTCCTCTTCAAATAAATCCCTTATTTTTATGAAATTTTCAAAAATAAATTCTTGTTTAAAATAGTCTGAATGTTATCATAGTTGGAACTTGGCAATTACTAATTTGAAATTCTATGAGATGTATCTCCAGCTAAAATGGCAATTCCCTGTATGCTATCTGGGGCTCAGTTTACCTCTAAGGAAGACTGTCAGAGTGCAAATGGTTTTGAGTGACGGGAAAGTCAAAGGGCAAATGTTTGTGCTTTTTTCTTTTTCTGTCTTATATACTTCTTCTTGGTCTCAGAATGCAAAGTATCAGAGCCATAGTTACACACATTTCCACTTTTAACGCTTCTTTTGAAGGAAGCAGATCCACTTTTGCCCCGCCACTCATGCCTGCTGTGCAGACTCAGACGAGTCCCTGCCCTCTTCACGCCTTTGGGGTGAGAGGGGAGCCATATGTAAGTAGTTTTCAAGCTTTTCTTAATGGGACTTTTCTTTTTCTAATAAAATCATGCCTGGAATCCTGTAAAGATTGTTGCCTGGCTGTGAAGGGGCTTCTCCAGATCCTGAAATATAGCATCACAATACGTAAATGACTCCCGATGGATCTCCCAGCTCTGAAGACTTGCTCTTCTACTTCACATGTGTAGCCACGACGATCAGCTGGCACACAGTACAATTAGCTGTGTAGTGAGTGCTCCCCAGCTATCAGTCATGAAACATATCACTTTGCTCAACCTGTTTTTAAAAAAGCTCCAAAATGGTAAAAATGCTTTTCAGTCTTTGTTTTCCCAATAATGGTATTGAGGCCTAAGCTGATTAACTTCCCCCAAAGTGGTACCACAGCTGGTAACGACCCCAATGATCCTGAAAAAAATGGAATGAGTACCTTGCTGTTTCRTTTAGTTYATTTTGGGAAAATAATCCATTTGAATGTCAAGATAAAAAGGCACCAGGAAAAGTCCTCATTGGAAGGATTAAAGATGAGCCTGGTAAGATGTTAAGATGTAAGATGTTAAGATGTGTTACTGTAAAAAAAAAAAGCTT[SEQID NO3].
對應(yīng)氨基酸序列如下MMEGLKKRTRKAFGIRKKEKDTDSTGSPDRDGMQPSPHELPYHSKAECAREGGNKASKKSNGAPNGFYAEIDWERYNSPELDEEGYSIRPEEPGSTKGKHFYSSSESEEEEESHKKFNIKIKPLQSKDILKNAATVDELKASIGNIALSPSPVRKSPRRSPGAIKRNLSSEEVARPRRSTPTPELTSKKPLDDTLALAPLFGPPLESAFDGHKTEVLLDQPEIWGSGQPVNPSMESPKLARPFPTGTPPPLPPKTVPATPPRTGSPLTVATGNDQAATEAKIEKLPSISDLDSIFGPVLSPKSVAVNTEETWVHFSDASPEHVTPELTPREKVVTPPAASDIPADSPTPGPPGPPGSAGPPGPPGPRNVPSPLNLEEVQKKVAEQTFIKDDYLETLSSPKECGLGQRATPPPPPPPTYRTVVSSPGPGSGSGTGTASGASSPARPATPLVPCSCSTPPPPPPRPPSRPKLPPGKPGVGDVSRPFSPPIHSSSPPPIAPLARAESTSSISSTNSLSAATTPTVENEQASLVWFDRGKFYLTFEGSSRGPSPLTMGAQDTLPVAAAFTETVNAYFKGADPSKCIVKITGEMVLSFPAGITRHFANNPSPAALTFRVINSSRLEHVLPNPQLLCCDNTQNDANTKEFWVNMPNLMTHLKKVSEQKPQATYYNVDMLKYQVSAQGIQSTPLNLAVNWRCEPSSTDLRIDYKYNTDAMSTAVALNNVQFLVPIDGGVTKLQAVLPPAVWNAEQQRILWKIPDISQKSENGGVGSLLARFQLAEGPSKPSPLVVQFTSEGSTLSGCDIELVGAGYGFSLIKKRFAAGKYLADN[SEQ ID NO4].
實(shí)施例9AGT-121 Taqman組織分布利用Taqman PCR在以色列沙鼠多種組織中研究AGT-121的組織分布(圖3)。發(fā)現(xiàn)腦中水平最高，脾中也有很低水平。
實(shí)施例10AGT-121-Clontech MTN人RNA印跡還利用Clontech多組織RNA印跡的Northern分析檢測了AGT-121在人組織中的組織分布。在腦中觀察到約6kb的特異性條帶(圖4)。認(rèn)為AGT-121具有腦特異性。
實(shí)施例11AGT-121等位基因與肥胖有關(guān)原始專利中所述插入和缺失等位基因與肥胖有關(guān)。對8只消瘦和肥胖的以色列沙鼠個(gè)體存在缺失、或插入、或這兩者進(jìn)行基因分型。不考慮糖尿病動(dòng)物。基因型與以色列沙鼠所見肥胖表型顯著相關(guān)。結(jié)果如表4和5所示。
表4 結(jié)果總結(jié)
表5 卡方檢驗(yàn)
實(shí)施例12能量受限下丘腦中的AGT-121基因表達(dá)在以色列沙鼠AGT-121編碼區(qū)設(shè)計(jì)寡核苷酸引物。在能量受限的下丘腦中分析AGT-121的表達(dá)。觀察到對照動(dòng)物的體重、所有動(dòng)物的葡萄糖變化以及所有動(dòng)物肩胛下脂肪量的正相關(guān)(圖5-8)。
實(shí)施例13AGT-121序列同源性
AGT-121ISR蛋白質(zhì)在核苷酸及蛋白質(zhì)水平均顯示與人假定蛋白質(zhì)DKFZp761D221(DKFZp761D221)[登錄號NP_115667]具有很強(qiáng)同源性。該蛋白質(zhì)預(yù)計(jì)包含pfam00928.5，Adap_comp_sub結(jié)構(gòu)域，被鑒定為接頭復(fù)合物介質(zhì)亞基家族(adaptor complexes medium subunit family)。該家族也包含cocatomer亞基成員。該基因已被定位于人染色體1p31.2。
實(shí)施例14以色列沙鼠AGT-122的部分序列使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠肝cDNA的差異顯示PCR鑒定AGT-122。
部分核苷酸序列如下TCGCGGATCCAGACGCTGCGTTTGCTGGCTTTGATGAAATTTTTAATTTTTCAATATCAGGAATGTTTAACTATGCCATGAATTTATGGTAGTCAAGGTTGGAAGGCAGGGGAGAGGACACAGGGAGTAAAGGCACTTGCCCCCAAGCCTTACAACCTGAATTCCATCCCAGAGTGCCTAATGGTTGAAGGACGGAACTGAATATCTCTAGCTGTCCTCTATCCTCCACAGATACACAGTGAATGCATCAACGTAAAAAATTACAGCTAGAAATAATGTCGTGCCATTCATTGTATTTTACATTNGTNCATCTTNGNTTTTCCATANTAAAAATGTCTNAGACATACCACTTAAAAAAAAAAGCTT[SEQ ID NO5].
實(shí)施例15AGT-122基因表達(dá)與B組(p＝0.001)和C組(p＝0.005)動(dòng)物相比，A組進(jìn)食狀態(tài)的AGT-122基因表達(dá)具有顯著差異(圖9)。在禁食狀態(tài)下，組間沒有顯著差異。各動(dòng)物組內(nèi)，只在B組禁食動(dòng)物(p＝0.009)中觀察到表達(dá)顯著提高?；旌细鹘M數(shù)據(jù)，未見顯著差異(圖10)。
分組的禁食動(dòng)物的AGT-122表達(dá)顯示與體重、葡萄糖或胰島素?zé)o關(guān)。進(jìn)食動(dòng)物的AGT-122表達(dá)顯示與體重(p＝0.005；圖11)、葡萄糖(p＝0.003)和胰島素(p＝0.015)顯著負(fù)相關(guān)。
實(shí)施例16AGT-122序列同源性AGT-122序列顯示與不同小鼠染色體很多區(qū)域具有顯著同源性。在公共數(shù)據(jù)庫中沒有同源序列(BLASTN版本2.2.1)。
實(shí)施例17以色列沙鼠AGT-422的部分序列利用糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠肝cDNA的抑制消減雜交(SSH)[也稱為代表性差異分析(RDA)]鑒定AGT-422。
部分核苷酸序列如下CCCTATCCGCTACCCCTGGGAGGGACACAAAAACACATTTTGTGTTTTTGAAAAAACTGAGGTCACCAGACTCTTGTATTGTCTTCTTGGACTTCTCTCAGGAACACTCAGGACTCTCCCCACACAACACCGTTCTTGAACCGTTCTAACAAATGTTTAAAGTGGTTTCCTTTGAACCACATTAAATTTAGTTTAAGCAGTCACCAGTGGGCTAGCAGTTCTGGGTTGGGCAGCACATCTTGTACAAGCTCTTCCATCTGCCAGGATCACCACCTCTCTGACTTGCACATTTGTGGGTTCCCCACAGACGAATGGGATGAGTGAAAGAGTGAGTATGTTCTGTTGGGCCTTCAGTAACAGAAGACTGATTCAGAAAGTAGCACACGTCACATTTTTCTGTAGGTTGGTTTGTTTAGTTTCATTTTTGATTTGTGGAACAAAA[SEQ ID NO6].
實(shí)施例18AGT-422基因表達(dá)AGT-422正常分布。帶有LSD析因檢驗(yàn)(post hoc test)的一元方差分析(one way ANOVA)發(fā)現(xiàn)進(jìn)食A組動(dòng)物的基因表達(dá)趨向高于進(jìn)食C組(p＝0.068)。進(jìn)食A組動(dòng)物的基因表達(dá)顯著高于禁食A組(p＝0.002)，進(jìn)食B組動(dòng)物顯著高于禁食B組(p＝0.014)，進(jìn)食C組動(dòng)物顯著高于禁食C組(p＝0.039)[圖12]。獨(dú)立樣品T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，合并組數(shù)據(jù)時(shí)，進(jìn)食動(dòng)物的AGT-422基因表達(dá)高于禁食動(dòng)物(p＜0.001；圖13)。
實(shí)施例19AGT-422序列同源性AGT-422序列顯示與褐鼠(Rattus norvegicus)克隆CH230-213K1的序列同源性。全基因及開放閱讀框架尚待鑒定，人同系物也尚未確定。
實(shí)施例20以色列沙鼠AGT-123的部分序列使用糖尿病和非糖尿病以色列沙鼠下丘腦cDNA的差異顯示PCR鑒定AGT-123。
部分核苷酸序列如下TGAGAGTCCATCTCAGCTTATTTCATTGAGATGTTTTGATTAAGAAGTATGACTAGATTAAAAAATTCTATATAGCTTGGCATTGTTGATAGTTTATATATTTCACTGATTTCTGGTCCCTTGAAAGTTACTTGGTGATCAACATAGTGTAGTGAAAGGATTGGGATGGACATTAAAAAAAAAAAGCTT[SEQ ID NO7]實(shí)施例21AGT-123基因表達(dá)A組動(dòng)物(p＝0.06)趨向隨禁食提高下丘腦AGT-123的表達(dá)，B組和C組動(dòng)物則隨禁食顯著提高(分別p＝0.02以及p＝0.01)[圖14]。合并所有進(jìn)食及禁食動(dòng)物時(shí)，禁食動(dòng)物比進(jìn)食動(dòng)物顯著提高表達(dá)(p＝0.001)[圖14]。AGT-123的表達(dá)與葡萄糖或胰島素濃度不相關(guān)。AGT-123的表達(dá)與體重之間的關(guān)系存在傾向性，盡管統(tǒng)計(jì)學(xué)不顯著(p＝0.08)。
實(shí)施例22AGT-123序列同源性AGT-123序列匹配3種小鼠已表達(dá)序列標(biāo)志(gb|BG797393.1|BG797393 icl4h03.xl Kaestner ngn3 wt小鼠(Musmusculus)；gb|AI661150.1|AI661150 vaOlaO2.xl Soares小鼠淋巴結(jié)NbMLN；dbj|BB257743.1|BB257743 BB257743 RIKEN全長富集，7d)，但相應(yīng)基因尚未鑒定(BLASTN版本2.2.1)。
實(shí)施例23以色列沙鼠AGT-504的部分序列使用糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠基因組DNA的擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)篩選來鑒定AGT-504。發(fā)現(xiàn)其在糖尿病及非糖尿病以色列沙鼠肝中表達(dá)。
部分核苷酸序列如下基因組DNATGGNTACTCTTGNAAGCACCTTGAAAGTTCAGCCTGCTAACTTACCTTTTTAGCTTTAGATTGCTTAGATATTCAAATGAGAGTGTGGTGCAAATCCTGATTACAAGGAGTTTGAGTTTGGAGTGATTGGCAATGCACTTGTGAGGCTGTGTGCCTATGGTCCTAGGACTTAGGAGGCAGGGATAGAAGGACCAGGTGCTGAAAGACAGCCTTGGCTAGTTAGTGGACAGATACATAAATGTACTGCATGAGATTCTTTCAGAATAACAACCTCCTTTTAAAGAAGTTACTTCTGACATGGAATCTGTTGCCTGCTTTTGGATCACTACCCCCTGGTGGGACACCTTTGCCAGACCATGGAGGAAGAACTGTCTTGAT[SEQ ID NO8].
cDNAAACGTGAGCTTTTTGGAAGGCCCAGANAATTTAAGGAAAGTGTCCCGGCAAATCCTGATTACAAGGAGTTTGAGTTTGGAGTGATTGGCAATGCACTTGTGAGGCTGTGTGCCTATGGTCCTAGGACTTAGGAGGCAGGGATAGAAGGACCAGGTGCTGAAAGACAGCCTTGGCTAGTTAGTGGACAGATACATAAATGTACTGCATGAGATTCTTTCAGAATAACAACCTCCTTTTAAAGAAGTTACTTCTGACATGGAATCTGTTGCCTGCTTTTGGATCACTACCCCCTGGTGGGACACCTTTGCCAGACCATGGAGGAAGAACTGTCTTGATGGGANN[SEQ ID NO9]實(shí)施例24AGT-504基因表達(dá)肝AGT-504的表達(dá)正常分布，帶有LSD析因(LSD post hoc)分析的方差分析(ANOVA)顯示C組動(dòng)物的AGT-504基因表達(dá)顯著高于A組(p＝0.014)和B組(p＝0.02)(圖15)。
實(shí)施例25擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)技術(shù)AFLP技術(shù)是基于使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的基因組限制性片段亞群的擴(kuò)增。利用限制性酶(EcoRI和MseI)切割DNA，將雙鏈接頭連接到DNA片段末端，產(chǎn)生用于擴(kuò)增的模板DNA。接頭序列及鄰近限制性位點(diǎn)作為引物結(jié)合位點(diǎn)，用于隨后的限制性片段擴(kuò)增。PCR引物的3’端包含選擇性核苷酸，因而只引發(fā)限制性片段亞群的DNA擴(kuò)增。該方法將鑒定與肥胖/糖尿病表型有關(guān)的限制性位點(diǎn)中的序列差異。
使用GibcoBRL″AFLP分析系統(tǒng)I″和″AFLP起始引物″試劑盒，按廠家說明書進(jìn)行AFLP。
在256種引物對的AFLP篩選中使用每組以色列沙鼠(n＝15)的6種基因組DNA混合物，等于按約1.4cM的密度進(jìn)行基因組掃描。動(dòng)物按性別分開，然后分成3組，對應(yīng)于消瘦(A組)、肥胖(B組)和肥胖/糖尿病(C組)。
在下列條件下于20μl中進(jìn)行PCR94℃、30秒；65℃、30秒；以及72℃、60秒的一個(gè)循環(huán)，然后每一連續(xù)循環(huán)的退火溫度下降0.7℃，進(jìn)行12個(gè)循環(huán)。這產(chǎn)生13個(gè)循環(huán)的touchdown期。后接94℃30秒、56℃30秒和72℃60秒的23個(gè)循環(huán)。
一經(jīng)擴(kuò)增，便利用6％(w/v)聚丙烯酰胺凝膠分離片段，以觀察(一般)50-150個(gè)條帶。從膠中切下?lián)J(rèn)為動(dòng)物組間差異的條帶。使用以下PCR條件重新擴(kuò)增目的條帶94℃2分鐘、40個(gè)(94℃30秒；54℃30秒；72℃60秒)循環(huán)、72℃5分鐘以及下列引物F 5′-GTA GAC TGC GTACCA ATT C-3′[SEQ ID NO10]和R 5′-GAC GAT GAG TCC TGA GTA A-3′[SEQID NO11]。擴(kuò)增的條帶利用Applied Biosystems Big Dye測序試劑盒測序。
實(shí)施例26引物用于擴(kuò)增并分析每個(gè)基因的引物和探針(按5′-3′方向顯示)。
SYBR Green分析
AGT-119組合1正向ggattatcgtgaccagataggagc [SEQ ID NO12]反向acgcatcttgttgggctaatg [SEQ ID NO13]組合2正向cgcaaccaaattagccagtg [SEQ ID NO14]反向gcatcttgttgggctaatgacat[SEQ ID NO15]AGT-120正向acccagatgctggctgact[SEQ ID NO16]反向ctggccaccagtcagtgaataa [SEQ ID NO17]AGT-121正向(插入)aaaacatgagagaagccatactaattca [SEQ ID NO18]正向(缺失)cacaaaacatgagatactaattcataagtga [SEQ ID NO19]反向tgaaaccaagatagcacaaacgaa [SEQ ID NO20]AGT-122正向catcccagagtgcctaatggtt [SEQ ID NO21]反向acgttgatgcattcactgtgtatct [SEQ ID NO22]AGT-422正向cagtcaccagtgggctagca [SEQ ID NO23]反向cctggcagatggaagagctt [SEQ ID NO24]AGT-123正向gcttggcattgttgatagtttatatatttc [SEQ ID NO25]反向cactacactatgttgatcaccaagtaactt [SEQ ID NO26]AGT-504正向gaatctgttgcctgcttttgg [SEQ ID NO27]反向ctccatggtctggcaaaggt [SEQ ID NO28]Taqman分析β-肌動(dòng)蛋白正向gcaaagacctgtatgccaacac [SEQ ID NO29]β-肌動(dòng)蛋白反向gccagagcagtgatctctttctg [SEQ ID NO30]
探針FAM-tccggtccacaatgcctgggaacat-TAMRA [SEQ ID NO31]親環(huán)蛋白正向cccaccgtgttcttcgaca [SEQ ID NO32]親環(huán)蛋白反向ccagtgctcagagcacgaaa [SEQ ID NO33]探針FAM-cgcgtctccttcgagctgtttgc-TAMRA[SEQ ID NO34]本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，此處所述本發(fā)明容許所明確描述之外的變化和修改。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有此類變化和修改。本發(fā)明也包括本說明書涉及或表明的所有步驟、特征、組合物和化合物，不論單個(gè)或全體，以及任何兩個(gè)或多個(gè)所述步驟或特征的任意及全部組合。
參考書目Altschul et al.，Nucl.Acids Res.253389，1997.
Australian Institute of Health and Welfare(AIHW)，Heart，Stroke and Vascular diseases，Australian facts.AIHW Cat.No.CVD 7 CanberraAIHW and the Heart Foundation ofAustralia，1999.
Ausubel et al.，“Current Protocols in Molecular Biology”John Wiley & Sons Inc，Chapter15，1994-1998.
Barnett et al.，Diabetologia 37671-676，1994a.
Barnett et al.，Int.J.Obesity 18789-794，1994b.
Barnett et al.，Diabete Nutr.Metab.842-47，1995.
Bonner and Laskey，Eur.J.Biochem.4683，1974.
Bouchard，The genetics of obesity.Boca RatonCRC Press，1994.
Collier et al.，Ann.New York Acad.Sci.82750-63，1997a.
Collier et al.，Ex.p Clin.Endocrinol.Diabetes 10536-37，1997b.
De Looper，M and Bhatia K，Australia’s Health Trends 2001.Australian Institute ofHealth and Welfare(AIHW)Cat.No.PHE 24.CanberraAIHW，2001.
Douillard and Hoffman，Basic Facts about Hybridomas，in Compendium of ImmunologyVol.II，ed.by Schwartz，1981.
Kohler and Milstein，Nature 256495-499，1975.
Kohler and Milstein，European Journal of Immunology 6511-519，1976.
Koopmans，Experimental studies on the control of food intake.InHandbook of Obesity，Eds.GA Bray，C Bouchard，WPT James pp 273-312，1998.
Kopelman et al.，Int.J.Obesity 18188-191，1994.
Kopelman，Nature 404635-643，2000.
Marmur and Doty，J.Mol.Biol.5109，1962.
Mokdad et al.，JAMA.282(16)1519-1522，1999.
Mokdad，Diabetes Care 24(2)412，2001.
Must et al.，JAMA.282(16)1523-1529，1999.
National Health and Medical Research Council，Acting on Australia’s weightA strategyfor the prevention of overweight and obesity.CanberraNational Health and MedicalResearch Council，1996.
Ravussin，Metabolism 44(Suppl 3)12-14，1995.
Russek，M.，A hypothesis on the participation of hepatic glucoreceptors in the control offood intake.Nature 200176，1963.
Shafrir and Gutman，J.Basic Clin.Physiol.Pharm.483-99，1993.
Stellar，Psychol.Rev.615-22，1954.
Walder et al.，Obesity Res.5193-200，1997a.
Wolf and Colditz，Obes.Res.697-106，1998.
Zimmet，Diabetes Care 15(2)232-247，1992.
序列表<110>Autogen Research Pty Ltd(all other states other than US)International Diabetes Institute(all other states other than US)Deakin University(all other states other than US)Collier，Greg(US only)Zimmet，Paul(US only)ZWalder，Ken(US only)McMillan，Janine(US only)de Silva，Andrea(US only)MWindmill，Kelly(US only)<120>有關(guān)肥胖和2型糖尿病的差異表達(dá)基因<130>2574822/EJH<140>International<141>2002-10-16<150>US 60/330,149<151>2001-10-16<160>34<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>181<212>DNA<213>以色列沙鼠(Psammomys obesus)<220>
<221>misc-特征<222>(48)..(50)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(52)..(52)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(164)..(164)<223>n＝任意核苷酸<400>1aatgaaagaa ttgattgata cgcaaccaaa ttagccagtg aggttagnnn cnggattatc 60gtgaccagat aggagccttg gaaaatgact aagaaaaatg aaaaacagcc taaaatgtca120ttagcccaac aagatgcgtt aaaacgcctg gatcaagtta gaangcagaa aagcgaaagc180c181
<210>2<211>814<212>DNA<213>以色列沙鼠<220>
<221>misc-特征<222>(374)..(374)<223>n＝任意核苷酸<400>2gctgatggcg atgaatgaac actgcgtttg ctggccttat caattcccgc tttttcttgg 60atgaaaaaga ctaaccatga tcgggcccaa cggcggaagt cgcttttgtc accagtagtg120atggtgccgg gatcaagtgc cacgattgag cgtttcaatt cactgattgc gatgcttaat180aaagattcgc cgcaccctca cagtgtgtta aagattaaag tcatgaaaga tggcagttta240aaatacaagg gcagcattaa tcgcggtgat aatgaaccct ttattgtgat tggttttgaa300aataataaag atggctatag taatattaag aagcaagcaa gctggctaga tattgccttt360tatgagatct cgcnaactta taaatttaac aactttaagg cctttggcca ttcaaatgga420gggctggtgt ggacatattg gttagagcat tattattcag agtatgagtc agaaatcaaa480atcaagcggt tgatgacttt ggcttcacca tttaactttg acgaagacaa tctgaatcac540cggacccaga tgctggctga ctttattaaa tatcggaaac gacttccaaa aacgctcaaa600gtttattcac tgactggtgg ccagacctat gaatctgacg ggattgttcc tgaaaatagt660gtagccgcag ccaagtatat tttccaaaat caagtgaaga gctttatgga aattacggtt720acgggtaagc agctaatcac tcagatttac cgcaaaatga acaagtagtg ctagtgatga780atccaccact cactaaagat aataaaaaaa aaaa814<210>3<211>6317<212>DNA<213>以色列沙鼠<400>3cagactcctt ggaaattaag gaatgcaatt ctgccaccat gatggaagga ctgaaaaaac 60gtacaaggaa ggcctttgga atacggaaga aagaaaaaga cactgactct acaggctcac120cagatcgaga tggaatgcag cccagcccac acgagctccc ctaccatagc aaagcagagt180gtgcccgaga aggagggaac aaagcttcga agaaaagcaa tggggcacca aatggatttt240
atgcggaaat tgattgggaa agatataact cacctgagct ggatgaagaa ggttacagca 300tcagacctga ggaaccaggc tctaccaaag gaaagcactt ttattcttca agtgaatccg 360aagaggagga agaatcgcac aagaagttca atatcaagat taaacccttg cagtccaagg 420acatccttaa gaatgctgca acagtagacg agctgaaggc ttccataggc aacattgcac 480tttccccttc gcctgtgagg aaaagtccga ggcgcagccc gggtgcaatt aaaaggaact 540tatccagtga agaagtcgca agacccaggc gttccacccc aactccagaa cttacaagca 600agaagcctct ggacgacact ctggcccttg ctcccctctt tggcccaccg ttagaatctg 660cttttgatgg acacaagacg gaagttcttt tagatcagcc tgagatatgg ggttcaggcc 720aaccagttaa cccaagcatg gagtcaccaa agctagcaag accttttccc actggaaccc 780ctccacctct gcctccaaaa actgtaccag ccaccccgcc tcggacaggc tcccccttaa 840cagtggcgac aggaaatgac caggcagcca cagaggccaa aattgagaaa ctaccatcca 900tcagtgacct ggacagcatt tttggccccg tgttgtcccc caagtctgtt gctgttaata 960ctgaggagac gtgggtccat ttctctgatg catccccgga acatgttact ccagagttga1020ctccaaggga aaaggtggtg accccaccag ctgcatcaga catcccagct gactccccaa1080ctccaggccc gcctggcccc ccaggctcgg caggtccccc agggcctcct ggtcctcgca1140atgtaccatc tccgctcaat ttagaagaag tccagaagaa agtcgctgag cagaccttca1200ttaaagatga ttacttagaa acactctcat ctcctaaaga gtgtgggttg ggacagagag1260caactccacc tcccccacca ccacccacct acaggactgt ggtttcgtcc cccggacctg1320gctcgggcag tggtacgggg accgccagtg gtgcatcgtc ccctgctcgg ccagccaccc1380ccttagttcc ttgcagctgc tccactccgc ctccacctcc tccccggcct ccatcccggc1440caaagctacc tccaggaaag cctggagttg gagacgtgtc cagacctttt agcccaccca1500tacactcctc cagccctcct ccaatagcac ccttagcccg ggctgaaagc acttcttcaa1560tatcatcaac caattccctg agcgcagcca ccactcccac agttgagaat gaacagsctt1620ccctcgtttg gtttgacaga ggaaagtttt atttgacttt tgaaggttct tccaggggac1680ccagtcctct aactatgggg gcccaggaca ccctcccggt tgcagcagca ttcacagaaa1740ctgtcaatgc ctacttcaaa ggagcagatc caagcaaatg cattgttaag atcacgggag1800aaatggtgtt gtcctttcct gctggcatca ccagacactt tgccaacaac ccatccccag1860ctgctctgac ttttcgagtg ataaattcca gcaggttaga gcacgtcctg ccgaaccccc1920agctcctctg ctgcgataac acacaaaatg atgccaatac caaggaattc tgggtaaaca1980
tgccaaattt gatgacccac ctgaagaagg tctctgaaca aaaaccccag gctacatatt2040acaatgtgga catgctcaag tatcaggtgt cagcccaggg cattcagtcc acacctctga2100acttggcggt gaactggcgc tgtgagcctt ccagcactga cctgcgcata gattataagt2160acaacacgga tgccatgtcc accgcagtgg cccttaacaa cgtgcagttc ctggtcccca2220ttgatggagg agtgaccaag ctccaggctg tccttcctcc agcagtctgg aatgctgaac2280aacaaagaat attatggaag attcctgata tctcccagaa gtcagaaaat ggaggcgtag2340gttctttact ggcaagattt caattagccg aaggcccaag caaaccttcc ccactggtcg2400tgcagttcac gagtgaaggg agcactctgt ctggctgcga cattgagctt gtcggagcag2460ggtacgggtt ttcactcatc aagaagaggt ttgctgcagg aaaatacttg gccgataact2520aataaaatgt catgcaagga ttttgaagat ccatgtcctg gagaactgtt gtctgagaga2580catattttaa tctggtttga ggaaaacaaa ccaaccgatg tctgtacgtg ggctctgtca2640gctggaaggt cccggctttc agccgtgatt tcccacaccc agtacaagga ggatcagttc2700tacagtactt acttctaggt gtactattgt taatggtttt aaaatgtaat tattgtattt2760gtaaactgta ccttcattcc agtaaggcag ttagacacct gagttttagc ttttttttcc2820attcctgaaa cggatgtaat ttaaactgcg gtatgtaaat ttaatagtag tactgtcgaa2880tggcacaatg cttacagaga tacagtgcat tttgtcaata tataaaattt aaatataatg2940ttgatagtta ccataaaggg ggtgccacac atcaagaacc ttaaatggaa ccagaaacaa3000gcaagcaaac aaacaaacaa acaaacaaaa ccttactttt cttcactcct tattacattt3060tcctctagag ctaaagaaac ttctagcttc ggtttagtgg gttaaattca gaaactattt3120cagaaaaaaa aaaaaattct gaagttacag catattcaaa gagaagcatt aattaccact3180tttttaaaag cttttttttc aaaccgcaaa tttcataaaa atgcaaactg tgtaaacagg3240gcctcttatt tttataactt gtgtaaaaag ggaaaatcaa ttcatattta aagtttaagt3300agtattaaat tatatccaag agtgaagagg atgttgaaat cttacctgac cccatgcccc3360ttctttgcag tttagcaaat gttgagattg ctaaatcatc agattaaagc caacttgatt3420tttaaagttt caagactttc tgaagctgaa ctggttaaaa cttttgcaca attgcttgga3480acggaggggg aggggcctct ctggtccagc acaggtacct tgtttcttcc ctactcacaa3540gaatcaaaac aatgaaagtc aagaaccaca gaggggggaa attagttccc tgttcagtcc3600aaaaggagaa ctttaaactt atcatttacg tctttgggga aggaagaaat aagctttata3660
agtgaaatcc tattcacctt gttgtcctat gaatgttttc ggggtgactt taagattcat3720tgtatacatg tgcgagtctc tgctattctt ggggagttga aagcagagcc aggccagtgg3780ccttgaagtt cagtaaatgc cacagttctg gggcaaaggt aggcatgagg gttctgcccc3840tcagcacagg aatcagagca gtgtcttgta aggtctaaag attaagtctt ccagtaagcc3900acaagttatt ttgtaacaga gttggggagt tttggcactc gctgctgact ttcattttgt3960atccactcaa atggagtctt caactctttt caactttaga atcaaattaa tttttttttt4020tttttttttt tttttacaca aggtttactc tgtgtaactg tcctggatgt tctggaactc4080tttttgtaga ccaggctggc ctcgaactca gagagatcca cctgcctgtg ctccccaagt4140gctgggatta aaggcgtgtg ccaccatgcc tggcttagat taaatttttt aagtcttact4200tcaccagtga gattgtgatt ggcagttgtt tcgagagagc tttgtagctt aatctatgtt4260ctcttcaatc aatgcttgct accaaaagaa tgtccaaaat gatctatttt tcctgggaac4320aattcatcta tttaaatagg ctcttgccta gttccccaaa gcagcctgtc tttgaaggtt4380tttttgaaca aaataatttt ttcacaaaaa gtttggtttt gaaatcaaaa tagagaaata4440aaatgtaaat tttaaatcta atggaacatg aggaaatgaa aaaacttaag ccaatggaga4500gtaaaagcag aaaaaaatga aacttaccta gaatgtgatt atattatgtt tttaagtagt4560caattcatgg aaaaatattg aatattaaca caaagcatat taaaaatatg taaatattac4620tgtttctcat gtctttctct ttatatctta ttttatatag ttttagaatg aattggtcat4680taaatacagt gtttctttcc aaagaataat tttgttgata ttgtaaaaat gtaattaaag4740atagagactt gaatagtctc taacattatc caaatgtttc taggaaccaa attcaaagct4800gtgaagaaag cttgcaatcc ctgaattggc ttttgtgaaa tggaatgacg gtgggtaatc4860tcaaaattca gacttgaata gtcagagctg aagtggggaa tgggtggttc cttctggttc4920agaaaatagg tcaaataaca gcatttgctc gcatcaggga tggagatgtt ggtgatgttt4980ggttttactc tcgcaggctt tcgtctcctg ttgaaggtgt atctgtagcc cagtgggata5040agagttcatg ttctgagatg tggtcctaga caaggcaggc aaggtttcag tcatcaatac5100ctatcaggtc aggttccctt ttgtctatac aaaatgggtt agctcatagc cagatggttt5160gcaggacagt gagctaaatt aggacaagat tctggttagc caaagagctg tttcctaagc5220actctgattt ttttttaaag ctgatagaaa gtgtaaatgt tctattttga cgacatggaa5280agtatgtttt cctcttcaaa taaatccctt atttttatga aattttcaaa aataaattct5340tgtttaaaat agtctgaatg ttatcatagt tggaacttgg caattactaa tttgaaattc5400
tatgagatgt atctccagct aaaatggcaa ttccctgtat gctatctggg gctcagttta5460cctctaagga agactgtcag agtgcaaatg gttttgagtg acgggaaagt caaagggcaa5520atgtttgtgc ttttttcttt ttctgtctta tatacttctt cttggtctca gaatgcaaag5580tatcagagcc atagttacac acatttccac ttttaacgct tcttttgaag gaagcagatc5640cacttttgcc ccgccactca tgcctgctgt gcagactcag acgagtccct gccctcttca5700cgcctttggg gtgagagggg agccatatgt aagtagtttt caagcttttc ttaatgggac5760ttttcttttt ctaataaaat catgcctgga atcctgtaaa gattgttgcc tggctgtgaa5820ggggcttctc cagatcctga aatatagcat cacaatacgt aaatgactcc cgatggatct5880cccagctctg aagacttgct cttctacttc acatgtgtag ccacgacgat cagctggcac5940acagtacaat tagctgtgta gtgagtgctc cccagctatc agtcatgaaa catatcactt6000tgctcaacct gtttttaaaa aagctccaaa atggtaaaaa tgcttttcag tctttgtttt6060cccaataatg gtattgaggc ctaagctgat taacttcccc caaagtggta ccacagctgg6120taacgacccc aatgatcctg aaaaaaatgg aatgagtacc ttgctgtttc rtttagttya6180ttttgggaaa ataatccatt tgaatgtcaa gataaaaagg caccaggaaa agtcctcatt6240ggaaggatta aagatgagcc tggtaagatg ttaagatgta agatgttaag atgtgttact6300gtaaaaaaaa aaagctt 6317<210>4<211>827<212>PRT<213>以色列沙鼠<400>4Met Met Glu Gly Leu Lys Lys Arg Thr Arg Lys Ala Phe Gly Ile Arg1 5 10 15Lys Lys Glu Lys Asp Thr Asp Ser Thr Gly Ser Pro Asp Arg Asp Gly20 25 30Met Gln Pro Ser Pro His Glu Leu Pro Tyr His Ser Lys Ala Glu Cys35 40 45Ala Arg Glu Gly Gly Asn Lys Ala Ser Lys Lys Ser Asn Gly Ala Pro50 55 60
Asn Gly Phe Tyr Ala Glu Ile Asp Trp Glu Arg Tyr Asn Ser Pro Glu65 70 75 80Leu Asp Glu Glu Gly Tyr Ser Ile Arg Pro Glu Glu Pro Gly Ser Thr85 90 95Lys Gly Lys His Phe Tyr Ser Ser Ser Glu Ser Glu Glu Glu Glu Glu100 105 110Ser His Lys Lys Phe Asn Ile Lys Ile Lys Pro Leu Gln Ser Lys Asp115 120 125Ile Leu Lys Asn Ala Ala Thr Val Asp Glu Leu Lys Ala Ser Ile Gly130 135 140Asn Ile Ala Leu Ser Pro Ser Pro Val Arg Lys Ser Pro Arg Arg Ser145 150 155 160Pro Gly Ala Ile Lys Arg Asn Leu Ser Ser Glu Glu Val Ala Arg Pro165 170 175Arg Arg Ser Thr Pro Thr Pro Glu Leu Thr Ser Lys Lys Pro Leu Asp180 185 190Asp Thr Leu Ala Leu Ala Pro Leu Phe Gly Pro Pro Leu Glu Ser Ala195 200 205Phe Asp Gly His Lys Thr Glu Val Leu Leu Asp Gln Pro Glu Ile Trp210 215 220Gly Ser Gly Gln Pro Val Asn Pro Ser Met Glu Ser Pro Lys Leu Ala225 230 235 240Arg Pro Phe Pro Thr Gly Thr Pro Pro Pro Leu Pro Pro Lys Thr Val245 250 255Pro Ala Thr Pro Pro Arg Thr Gly Ser Pro Leu Thr Val Ala Thr Gly260 265 270Asn Asp Gln Ala Ala Thr Glu Ala Lys Ile Glu Lys Leu Pro Ser Ile275 280 285Ser Asp Leu Asp Ser Ile Phe Gly Pro Val Leu Ser Pro Lys Ser Val
290 295 300Ala Val Asn Thr Glu Glu Thr Trp Val His Phe Ser Asp Ala Ser Pro305 310 315 320Glu His Val Thr Pro Glu Leu Thr Pro Arg Glu Lys Val Val Thr Pro325 330 335Pro Ala Ala Ser Asp Ile Pro Ala Asp Ser Pro Thr Pro Gly Pro Pro340 345 350Gly Pro Pro Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Arg Asn355 360 365Val Pro Ser Pro Leu Asn Leu Glu Glu Val Gln Lys Lys Val Ala Glu370 375 380Gln Thr Phe Ile Lys Asp Asp Tyr Leu Glu Thr Leu Ser Ser Pro Lys385 390 395 400Glu Cys Gly Leu Gly Gln Arg Ala Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro405 410 415Thr Tyr Arg Thr Val Val Ser Ser Pro Gly Pro Gly Ser Gly Ser Gly420 425 430Thr Gly Thr Ala Ser Gly Ala Ser Ser Pro Ala Arg Pro Ala Thr Pro435 440 445Leu Val Pro Cys Ser Cys Ser Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Arg Pro450 455 460Pro Ser Arg Pro Lys Leu Pro Pro Gly Lys Pro Gly Val Gly Asp Val465 470 475 480Ser Arg Pro Phe Ser Pro Pro Ile His Ser Ser Ser Pro Pro Pro Ile485 490 495Ala Pro Leu Ala Arg Ala Glu Ser Thr Ser Ser Ile Ser Ser Thr Asn500 505 510Ser Leu Ser Ala Ala Thr Thr Pro Thr Val Glu Asn Glu Gln Ala Ser515 520 525
Leu Val Trp Phe Asp Arg Gly Lys Phe Tyr Leu Thr Phe Glu Gly Ser530 535 540Ser Arg Gly Pro Ser Pro Leu Thr Met Gly Ala Gln Asp Thr Leu Pro545 550 555 560Val Ala Ala Ala Phe Thr Glu Thr Val Asn Ala Tyr Phe Lys Gly Ala565 570 575Asp Pro Ser Lys Cys Ile Val Lys Ile Thr Gly Glu Met Val Leu Ser580 585 590Phe Pro Ala Gly Ile Thr Arg His Phe Ala Asn Asn Pro Ser Pro Ala595 600 605Ala Leu Thr Phe Arg Val Ile Asn Ser Ser Arg Leu Glu His Val Leu610 615 620Pro Asn Pro Gln Leu Leu Cys Cys Asp Asn Thr Gln Asn Asp Ala Asn625 630 635 640Thr Lys Glu Phe Trp Val Asn Met Pro Asn Leu Met Thr His Leu Lys645 650 655Lys Val Ser Glu Gln Lys Pro Gln Ala Thr Tyr Tyr Asn Val Asp Met660 665 670Leu Lys Tyr Gln Val Ser Ala Gln Gly Ile Gln Ser Thr Pro Leu Asn675 680 685Leu Ala Val Asn Trp Arg Cys Glu Pro Ser Ser Thr Asp Leu Arg Ile690 695 700Asp Tyr Lys Tyr Asn Thr Asp Ala Met Ser Thr Ala Val Ala Leu Asn705 710 715 720Asn Val Gln Phe Leu Val Pro Ile Asp Gly Gly Val Thr Lys Leu Gln725 730 735Ala Val Leu Pro Pro Ala Val Trp Asn Ala Glu Gln Gln Arg Ile Leu740 745 750
Trp Lys Ile Pro Asp Ile Ser Gln Lys Ser Glu Asn Gly Gly Val Gly755 760 765Ser Leu Leu Ala Arg Phe Gln Leu Ala Glu Gly Pro Ser Lys Pro Ser770 775 780Pro Leu Val Val Gln Phe Thr Ser Glu Gly Ser Thr Leu Ser Gly Cys785 790 795 800Asp Ile Glu Leu Val Gly Ala Gly Tyr Gly Phe Ser Leu Ile Lys Lys805 810 815Arg Phe Ala Ala Gly Lys Tyr Leu Ala Asp Asn820 825<210>5<211>366<212>DNA<213>以色列沙鼠<220>
<221>misc-特征<222>(305)..(305)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(308)..(308)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(315)..(315)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(317)..(317)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(327)..(327)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(339)..(339)<223>n＝任意核苷酸<400>5tcgcggatcc agacgctgcg tttgctggct ttgatgaaat ttttaatttt tcaatatcag 60gaatgtttaa ctatgccatg aatttatggt agtcaaggtt ggaaggcagg ggagaggaca120cagggagtaa aggcacttgc ccccaagcct tacaacctga attccatccc agagtgccta180atggttgaag gacggaactg aatatctcta gctgtcctct atcctccaca gatacacagt240gaatgcatca acgtaaaaaa ttacagctag aaataatgtc gtgccattca ttgtatttta300cattngtnca tcttngnttt tccatantaa aaatgtctna gacataccac ttaaaaaaaa360aagctt 366<210>6<211>442<212>DNA<213>以色列沙鼠<400>6ccctatccgc tacccctggg agggacacaa aaacacattt tgtgtttttg aaaaaactga 60ggtcaccaga ctcttgtatt gtcttcttgg acttctctca ggaacactca ggactctccc120cacacaacac cgttcttgaa ccgttctaac aaatgtttaa agtggtttcc tttgaaccac180attaaattta gtttaagcag tcaccagtgg gctagcagtt ctgggttggg cagcacatct240tgtacaagct cttccatctg ccaggatcac cacctctctg acttgcacat ttgtgggttc300cccacagacg aatgggatga gtgaaagagt gagtatgttc tgttgggcct tcagtaacag360aagactgatt cagaaagtag cacacgtcac atttttctgt aggttggttt gtttagtttc420atttttgatt tgtggaacaa aa 442<210>7<211>189<212>DNA<213>以色列沙鼠<400>7tgagagtcca tctcagctta tttcattgag atgttttgat taagaagtat gactagatta 60aaaaattcta tatagcttgg cattgttgat agtttatata tttcactgat ttctggtccc120ttgaaagtta cttggtgatc aacatagtgt agtgaaagga ttgggatgga cattaaaaaa180aaaaagctt189
<210>8<211>378<212>DNA<213>以色列沙鼠<220>
<221>misc-特征<222>(4)..(4)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(13)..(13)<223>n＝任意核苷酸<400>8tggntactct tgnaagcacc ttgaaagttc agcctgctaa cttacctttt tagctttaga 60ttgcttagat attcaaatga gagtgtggtg caaatcctga ttacaaggag tttgagtttg120gagtgattgg caatgcactt gtgaggctgt gtgcctatgg tcctaggact taggaggcag180ggatagaagg accaggtgct gaaagacagc cttggctagt tagtggacag atacataaat240gtactgcatg agattctttc agaataacaa cctcctttta aagaagttac ttctgacatg300gaatctgttg cctgcttttg gatcactacc ccctggtggg acacctttgc cagaccatgg360aggaagaact gtcttgat 378<210>9<211>342<212>DNA<213>以色列沙鼠<220>
<221>misc-特征<222>(27)..(27)<223>n＝任意核苷酸<220>
<221>misc-特征<222>(341)..(342)<223>n＝任意核苷酸<400>9aacgtgagct ttttggaagg cccaganaat ttaaggaaag tgtcccggca aatcctgatt 60acaaggagtt tgagtttgga gtgattggca atgcacttgt gaggctgtgt gcctatggtc120
ctaggactta ggaggcaggg atagaaggac caggtgctga aagacagcct tggctagtta180gtggacagat acataaatgt actgcatgag attctttcag aataacaacc tccttttaaa240gaagttactt ctgacatgga atctgttgcc tgcttttgga tcactacccc ctggtgggac300acctttgcca gaccatggag gaagaactgt cttgatggga nn 342<210>10<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>10gtagactgcg taccaattc 19<210>11<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>11gacgatgagt cctgagtaa 19<210>12<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-119(set1)正向引物<400>12ggattatcgt gaccagatag gagc 24<210>13<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-119(set1)反向引物<400>13acgcatcttg ttgggctaat g 21
<210>14<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-119(set2)正向引物<400>14cgcaaccaaa ttagccagtg20<210>15<211>23<212>DNA<213>人工序列<223>AGT-119(set2)反向引物<400>15gcatcttgtt gggctaatga cat23<210>16<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-120正向引物<400>16acccagatgc tggctgact 19<210>17<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-120反向引物<400>17ctggccacca gtcagtgaat aa 22<210>18<211>28<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-121正向(插入)引物<400>18
aaaacatgag agaagccata ctaattca 28<210>19<211>31<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-121反向(缺失)引物<400>19cacaaaacat gagatactaa ttcataagtg a 31<210>20<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-121反向引物<400>20tgaaaccaag atagcacaaa cgaa 24<210>21<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-122正向引物<400>21catcccagag tgcctaatgg tt 22<210>22<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-122反向引物<400>22acgttgatgc attcactgtg tatct 25<210>23<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-422正向引物<400>23cagtcaccag tgggctagca20<210>24<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-422反向引物<400>24cctggcagat ggaagagctt20<210>25<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-123正向引物<400>25gcttggcatt gttgatagtt tatatatttc 30<210>26<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-123反向引物<400>26cactacacta tgttgatcac caagtaactt 30<210>27<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>AGT-504正向引物<400>27gaatctgttg cctgcttttg g 21<210>28<211>20<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>AGT-504反向引物<400>28ctccatggtc tggcaaaggt20<210>29<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>β-肌動(dòng)蛋白正向引物<400>29gcaaagacct gtatgccaac ac 22<210>30<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>β-肌動(dòng)蛋白反向引物<400>30gccagagcag tgatctcttt ctg23<210>31<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>β-肌動(dòng)蛋白探針<400>31tccggtccac aatgcctggg aacat 25<210>32<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>親環(huán)蛋白正向引物<400>32cccaccgtgt tcttcgaca 19
<210>33<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>親環(huán)蛋白反向引物<400>33ccagtgctca gagcacgaaa20<210>34<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>親環(huán)蛋白探針<400>34cgcgtctcct tcgagctgtt tgc2權(quán)利要求
1.一種核酸分子，其包含編碼表達(dá)蛋白質(zhì)或其衍生物或同系物的核苷酸序列、或與編碼表達(dá)蛋白質(zhì)或其衍生物或同系物的序列互補(bǔ)的核苷酸序列，其中所述核酸分子在肥胖動(dòng)物中與消瘦動(dòng)物相比、或在禁食動(dòng)物與進(jìn)食動(dòng)物相比、或在糖尿病動(dòng)物與非糖尿病動(dòng)物相比，于胃、肝和/或下丘腦組織中差異表達(dá)。
2.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO1所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
3.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO2所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO2或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
4.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO3所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO3或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
5.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO5所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO5或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
6.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO6所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
7.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO7所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
8.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO8所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
9.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO9所示核苷酸序列、或與其具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列。
10.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO1所示核苷酸序列。
11.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO2所示核苷酸序列。
12.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO3所示核苷酸序列。
13.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含編碼SEQ IDNO4所示氨基酸序列的核苷酸序列。
14.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO5所示核苷酸序列。
15.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO6所示核苷酸序列。
16.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO7所示核苷酸序列。
17.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO8所示核苷酸序列。
18.權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ ID NO9所示核苷酸序列。
19.包含由一種核酸分子編碼的核苷酸或氨基酸序列的分離的分子，該核酸分子在肥胖動(dòng)物中與消瘦動(dòng)物相比、或在禁食動(dòng)物與進(jìn)食動(dòng)物相比、或在糖尿病動(dòng)物與非糖尿病動(dòng)物相比，于胃、肝和/或下丘腦組織中差異表達(dá)。
20.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO1所示核酸分子、或與SEQID NO1具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
21.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO2所示核酸分子、或與SEQID NO2具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO2或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
22.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO3所示核酸分子、或與SEQID NO3具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO3或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
23.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO5所示核酸分子、或與SEQID NO5具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO5或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
24.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO6所示核酸分子、或與SEQID NO6具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
25.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO7所示核酸分子、或與SEQID NO7具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO7或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
26.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO8所示核酸分子、或與SEQID NO8具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO8或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
27.權(quán)利要求19的分離的分子，由SEQ ID NO9所示核酸分子、或與SEQID NO9具有至少約30％相似性的核苷酸序列、或能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO9或其互補(bǔ)形式雜交的核苷酸序列編碼。
28.權(quán)利要求19的分離的分子，其中該分子是蛋白質(zhì)。
29.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO1所示核苷酸序列編碼。
30.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO2所示核苷酸序列編碼。
31.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO3所示核苷酸序列編碼。
32.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO4所示核苷酸序列編碼。
33.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO5所示核苷酸序列編碼。
34.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO6所示核苷酸序列編碼。
35.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO7所示核苷酸序列編碼。
36.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO8所示核苷酸序列編碼。
37.權(quán)利要求28的分離的蛋白質(zhì)，由SEQ ID NO9所示核苷酸序列編碼。
38.分離的蛋白質(zhì)，選自(i)在肥胖動(dòng)物中與消瘦動(dòng)物相比差異表達(dá)于下丘腦或肌肉組織中的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(ii)在禁食動(dòng)物中與進(jìn)食動(dòng)物相比差異表達(dá)于肝組織中的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(iii)基本如SEQ ID NO1所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(iv)基本如SEQ ID NO2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(v)基本如SEQ ID NO3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(vi)基本如SEQ ID NO4所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(vii)基本如SEQ ID NO5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(viii)基本如SEQ ID NO6所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(ix)基本如SEQ ID NO7所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(x)基本如SEQ ID NO8所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xi)基本如SEQ ID NO9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物、或編碼與該序列具有至少約30％相似性的氨基酸序列的序列編碼的蛋白質(zhì)，或所述蛋白質(zhì)的衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物；(xii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO1所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xiii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO2所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xiv)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO3所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xv)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO5所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xvi)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO6所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xvii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO7所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xviii)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO8所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xix)能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件下與SEQ ID NO9所示核苷酸序列或其衍生物、同系物或類似物雜交的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)；(xx)段落(i)-(xix)中任一項(xiàng)定義的同源二聚體形式的蛋白質(zhì)；以及(xxi)段落(i)-(xix)中任一項(xiàng)定義的異源二聚體形式的蛋白質(zhì)。
39.調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504中一種或多種在哺乳動(dòng)物中表達(dá)的方法，所述方法包含在足以上調(diào)或下調(diào)或調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表達(dá)的時(shí)間和條件下，使AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504接觸有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表達(dá)的調(diào)節(jié)劑。
40.調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504在哺乳動(dòng)物中活性的方法，所述方法包含在足以升高或降低AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性的時(shí)間和條件下，給予所述哺乳動(dòng)物調(diào)節(jié)有效量的一種分子。
41.治療遭受以肥胖、厭食、糖尿病和/或能量失衡中的一種或多種癥狀為特征的疾病的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含在足以調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表達(dá)或足以調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性的時(shí)間和條件下，給予所述哺乳動(dòng)物有效量的一種因子。
42.治療遭受以肥胖、厭食、糖尿病或能量失衡中的一種或多種癥狀為特征的疾病的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含給予所述哺乳動(dòng)物有效量的AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504。
43.能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物表達(dá)的物質(zhì)在制備用于治療以肥胖、厭食、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物中的用途。
44.能夠調(diào)節(jié)AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物活性的物質(zhì)在制備用于治療以肥胖、厭食、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物中的用途。
45.AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物或類似物、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物、同系物、類似物、化學(xué)等價(jià)物或模擬物在制備用于治療以肥胖、厭食、糖尿病和/或能量失衡為特征的疾病的藥物中的用途。
46.包含AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504表達(dá)、或AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504活性調(diào)節(jié)劑以及一種或多種藥物可接受載體和/或稀釋劑的組合物。
47.檢測受試者生物樣品中AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其衍生物或同系物的方法，所述方法包含在足以形成復(fù)合物的時(shí)間和條件下，使所述生物樣品接觸AGT-119、AGT-120、AGT-121、AGT-122、AGT-422、AGT-423和/或AGT-504或其抗原性衍生物或同系物的特異性抗體，然后檢測該復(fù)合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及編碼與調(diào)節(jié)肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或代謝能量水平有關(guān)的表達(dá)產(chǎn)物的核酸分子。本發(fā)明的核酸分子和表達(dá)產(chǎn)物由重組方法制備或分離自天然來源。本發(fā)明的核酸分子和表達(dá)產(chǎn)物及其衍生物、同系物、類似物和模擬物可用作肥胖、厭食、體重維持、糖尿病和/或能量失衡的治療及診斷劑，或者用作設(shè)計(jì)和/或鑒定其活性和/或功能調(diào)節(jié)劑的靶標(biāo)。本發(fā)明核酸分子和表達(dá)產(chǎn)物通過使用差異顯示技術(shù)進(jìn)行鑒定。
文檔編號A61P3/10GK1596264SQ02823611
公開日2005年3月16日 申請日期2002年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月16日
發(fā)明者K·溫德米爾, G·克萊爾, P·Z·齊默特, K·沃爾德, J·麥克米蘭, A·M·德希爾瓦 申請人:奧托根研究股份有限公司, 國際糖尿病研究院, 迪金大學(xué)