專利名稱：一種抗粘連隔離物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗粘連隔離物，該隔離物抑制手術區(qū)域流血(止血效果)，并能顯著地防止手術區(qū)域中組織之間粘連(抗粘連效果)。
實際上，據(jù)報道腹部手術后會引起粘連，其發(fā)生頻率為70～95％(Eur.J.Surg.，1997，Suppl.，577，10-16，24-31，32-39)。尤其是腹部手術中器官間的相互粘連，諸如會發(fā)生腹腔壁和腸之間的粘連，從而更為不利。
為了解決這些問題，人們已進行了大量研究去積極嘗試發(fā)展抗粘連隔離物，該隔離物能夠在體內降解、無毒并且能短期或長期防止器官之間粘連。
抗粘連隔離物應該具有以下特征諸如良好的粘附性，實用性，組織親合性，抗菌特性和類似性能以及抑制器官相互粘連和防止流血的能力。
最近，進行了各種研究去努力嘗試發(fā)展抗粘連隔離物，該隔離物能阻滯與手術部位接觸。在這種抗粘連隔離物中，使用高分子量的含有羧基端基的生物吸附聚合物，其在體內可被水合。這樣，在治療時期手術部位便能與相鄰組織分開，從而阻止粘連發(fā)生。
而且，治療完成后，抗粘連隔離物可以自然吸收和清除，且不影響正常組織。
美國專利No.4,141,973已經公開了生物可降解聚合物，諸如透明質酸(HA)能夠在這種方法中使用。不幸的是，HA實際上不能應用作抗粘連隔離物，這是因為它在體內會以較高速度降解和吸收。
與此同時，羧甲基纖維素鈉(NaCMC)作為一種抗粘連試劑已在各種事例中報道(Fertil.Steril.，1984，June，Gynecol.，1986，1553，667-670)。然而為人熟知的是，羧甲基纖維素鈉用作抗粘連隔離物是困難的，因為其在體內的吸收和清除相當快速，因而沒有抗粘連作用。
正如上面所述，為了解決現(xiàn)有技術的問題，針對粘連效果的影響進行了大量嘗試，結果表明要達到要求十分困難，這是由于抗粘連隔離物中的材料降解和清除的速度過快。具體地，生物可降解聚合物間形成連接已經得到闡明。準確地說，EP 507,604已經證明含有羧基終端的聚糖可與多價金屬離子結合在一起，從而減少了其溶解性，使其能夠用作抗粘連隔離物。此外US 5,318,780已經闡明抗粘連隔離物可以用原位凝膠法制備。
然而，這些方法總的來說不適合于抗粘連隔離物，這是因為盡管它們可以采用成膜聚合物(羥丙基甲基纖維素，HPMC)在人體內成膜具有有利之處，但是它們減少了組織粘連強度，并且對于手術來說過程復雜。
另一方面，US 5,017,229；US 5,527,893；US 5,760,200等已經公開了聚糖諸如透明質酸(HA)和羥甲基纖維素(CMC)可用于防止粘連。但這些方法在清除制備過程中產生的生物有毒材料也存在一些問題。進行水合作用以高速制備凝膠，這在治療和手術中引起了一些困難，也就是說，在分開它們后不能再次進行手術(Surg.Clin.Nor.Am.，1997，773，671-688)。
通常親水性生物聚合物對于人體組織的粘連大多受到水合作用的影響，但是含有與組織鍵合的羧基終端的聚合物卻適合于這種用途。而且，如果作為凝膠形態(tài)，聚合物本身的粘連性是更為重要的因素，因為它已經被水飽和。
最近，幾種手術技術被發(fā)展，另外還獲得了防止粘連的益處(Hepato-Gastroenterol.，1991，38，283)。發(fā)展?jié)M足手術技術變化的抗粘連隔離物的趨勢是繼續(xù)開發(fā)溶液或凝膠狀的抗粘連隔離物，盡管溶液、凝膠形態(tài)和膜形態(tài)是大家熟知的抗粘連隔離物形態(tài)(The Adhesion PreventionOpportunity Report from MDI，1998)。
最近，凝膠形態(tài)的抗粘連隔離物引起了注意，因為它能夠以較小的量有效地防止與治療部位的粘連。尤其地，已對可以凝膠形態(tài)限制性地應用在脊椎手術、腱手術以及類似手術中的制劑進行了嘗試(US 5,605,938)。目前，Gliatech公司生產的可商購的磷酸鹽、存在于豬的凝膠形態(tài)抗粘連隔離物以及聚多糖酯(polyglycan ester)(商標ADCON-L)已經得到廣泛應用。
不幸的是，盡管以上描述的典型抗粘連隔離物在抗粘連和止血上取得了成績，但仍舊在功效上受到限制，諸如粘連性、親合性、抗炎性、抗菌性以及再生性能。
準確地說，本發(fā)明的目的是提供一種新型抗粘連隔離物，其中熟知的羧甲基纖維素鈉(NaCMC)的功效具有抗炎、抗菌、再生性、止血性以及顯著的適用性和應該維持的安全性，并且抗粘連隔離物的幾個限制諸如降解和吸附也能滿足，從而使其安全有效。
圖2描述了本發(fā)明中的抗粘連隔離物應用于脂膜手術的抗粘連效果。
圖3描述了本發(fā)明中的抗粘連隔離物應用于脊椎肌肉手術的抗粘連效果。
圖4描述了本發(fā)明中的抗粘連隔離物應用于腹腔手術的抗粘連效果。
圖5描述了本發(fā)明中的抗粘連隔離物應用于背脊肌肉手術的抗粘連效果。
圖6a和6b描述了本發(fā)明中的抗粘連隔離物在體內隨時間延長的吸收狀態(tài)。
具體實施例方式
為了獲得以上提及的本發(fā)明目標，本發(fā)明提供了一種抗粘連隔離物，其包括(1)羧甲基纖維素鈉(NaCMC)，它具有在手術部位的再生功能、止血功能、人體相容性和安全性能；(2)吉蘭糖膠，其控制人體對羧甲基纖維素鈉的吸收，維持其在體內形成的凝膠形狀并增強潤滑性，羧甲基纖維素鈉與吉蘭糖膠的重量比為1∶(0.2～5)。此時，NaCMC和吉蘭糖膠的組成優(yōu)選1∶(0.8～1.25)，也就是說，比例幾乎是相同的。
準確地說，本發(fā)明中羧甲基纖維素鈉(下面稱作NaCMC)扮演了一個能形成具有抗粘連性能凝膠的基質角色。吉蘭糖膠卻扮演了這樣一個角色，其通過給凝膠提供的潤滑性，使身體組織定位在恰當位置的角色，，以及通過防止NaCMC的快速降解和吸附，在要求的時期內維持凝膠的形狀。
應用于本發(fā)明組合物中的組分，其分子量通常并不看作是重要因素，但對于NaCMC，分子量優(yōu)選為約100,000～1000,000Da，而對于吉蘭糖膠，則優(yōu)選為約200,000～1000,000Da。此外，分子量和每一組分的組成都可以恰當控制，這由手術部位和使用目的決定。例如，當在大量損傷和流血位置使用時，NaCMC組成及其分子量應相對較高為好，而在內部器官上使用時，NaCMC組成及其分子量應相對較低更好。
NaCMC組成或分子量太高并不好，因為這樣很可能阻滯手術后器官的恢復。當吉蘭糖膠的分子量或組成過高時，也會妨礙手術后組織回復到先前的狀態(tài)，手術部位的恢復也受到相當大的抑制，這是因為形成的凝膠比要求的時間維持更長的時間。另一方面，如果每一抗粘連隔離物中組分的組成或分子量過低，則抗粘連隔離物沒有功效。
特別地，如果NaCMC組成或分子量太低會出現(xiàn)一些問題，諸如抗粘連、止血以及類似功效都會降低。
具體地，下面闡述的凝膠形態(tài)抗粘連隔離物可以用在腹腔器官手術后。此時，NaCMC和吉蘭糖膠的濃度(組成)優(yōu)選分別調節(jié)為5.0重量％(采用蒸餾水或少量添加劑)，其中抗粘連隔離物扮演了一種潤滑和然后促使回復最初狀態(tài)的角色?？拐尺B隔離物的足夠粘度賦予其具有手術后的抗粘連效能。
與此同時，為了增強抗粘連功效，本發(fā)明抗粘連隔離物中還含有各種已知對人體無毒的天然物質。
準確地，相對于羧甲基纖維素鈉以1∶(0.2～5)的重量比將一種或多于兩種的物質添加到本發(fā)明的抗粘連隔離物中，所述添加物選自白細胞介素-10，透明質酸鹽，肝素，鹽酸硝苯吡啶，磷脂酰膽堿，醋酸甲羥孕酮，L-精氨酸，一氧化氮，聚乙烯醇(PVA)，蛋白質抑制劑和葡聚糖。此時，蛋白質抑制劑可選自腫瘤壞死因子(TNF)，INF，IL-10，IL-13，IL-1，干擾素以及類似物質。
而且，為了殺死手術過程中感染的微生物，本發(fā)明的抗粘連隔離物還可相對于羧甲基纖維素鈉以1∶(0.02～0.06)的重量比含有抗生素。此時抗生素可以采用青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷、四環(huán)素、氯代安非尼可(chloroamphenicol)、奎寧、多肽體系抗生素等等。這些抗生素可以根據(jù)各自的特性和活性加入到適當?shù)慕M成和方法中。
另一方面，本發(fā)明制備的抗粘連隔離物可具有各種形態(tài)，優(yōu)選泡沫形態(tài)、粉末態(tài)、凝膠形態(tài)等等。
泡沫態(tài)抗粘連隔離物可采用包括下列步驟的方法制備(1)采用以上提及的組分和適量的水形成混合溶液；(2)將該混合溶液注入到具有合適形狀和大小的容器中；(3)通過浸入液氮快速冷凍；和(4)在低于-55℃、減壓下冷凍干燥48小時以上。因此，依據(jù)容器的形狀和大小，泡沫態(tài)的抗粘連隔離物可以制成各種形狀和大小。按照要求，混合溶液可在高壓滅菌鍋中，在溫度120～150℃下滅菌5～20分鐘，滅菌操作在步驟(3)快速冷凍之前。
粉末態(tài)抗粘連隔離物是通過研磨上面制造的泡沫態(tài)抗粘連隔離物制備的，其顆粒半徑為0.2～0.6mm。凝膠態(tài)抗粘連隔離物是采用包括下列步驟的方法制備的(1)添加4-19重量份的已滅菌過的水于上面制備的粉末態(tài)抗粘連隔離物中；(2)攪拌。
為了防止被微生物污染，優(yōu)選在滅菌條件下制備上述抗粘連隔離物。此外，如果是泡沫和粉末態(tài)，抗粘連隔離物多用氧化乙烯氣(EtO氣體)滅菌，當蒸餾水與粉末態(tài)抗粘連隔離物混合制備凝膠態(tài)抗粘連隔離物時，優(yōu)選加入種類和組成適當?shù)目股?。根?jù)實例，制備粉末態(tài)抗粘連隔離物時，在冷凍干燥之前，種類和組成適當?shù)目股乜杉尤氲礁邏簻缇蟮幕旌先芤褐小?br> 本發(fā)明中的每一種抗粘連隔離物扮演著同樣的角色，只是凝膠態(tài)抗粘連隔離物能以凝膠狀態(tài)被用在手術部位上，泡沫和粉末態(tài)的隔離物在被用于手術區(qū)域后靠吸收體液和分泌的血液成分變成凝膠狀。因此，它能在考慮形態(tài)特征情況下恰當?shù)赜糜谑中g。
也就是說，凝膠態(tài)的抗粘連隔離物可以通過覆蓋所有的手術區(qū)域來施用，只要它不向下流動。當手術區(qū)域形成的空間能精確限制時，泡沫態(tài)抗粘連隔離物可以方便地使用，例如，它可用在脊椎和骨手術中。即，手術部位是骨頭之間形成的裂縫，它能夠被修飾為恰當?shù)男螤畈⒉迦攵褂谩？稍谑中g區(qū)諸如脂膜、子宮、心臟、器官等中，或在凝膠會向下流動的部位通過分散來使用粉末態(tài)抗粘連隔離物。
本發(fā)明中抗粘連隔離物已被確認在體外實驗中能防止細胞之間粘連，而對細胞沒有副作用(毒性)。此外，本發(fā)明中抗粘連隔離物具有顯著的抗炎、抗菌性、手術部位的再生功能、止血性，具有突出的人體相容性、高潤滑性、粘附性、親合性等等，并具有良好的抗細胞組織之間的粘連性和止血效果。
然而，本領域的技術人員應理解，考慮到這些內容，可在本發(fā)明的精神和范圍內進行修改和改進。
在下面的應用實施例中，具有特定形狀的抗粘連隔離物被應用，但實際上它可以按照需要修改成各種形狀，尤其是對于本領域中的技術人員。<制備實施例1>抗粘連隔離物的制備根據(jù)下面標準組制備實施例和制備實施例1～14中指出的組成制備抗粘連隔離物。此時，采用的NaCMC和吉蘭糖膠的平均分子量分別為250,000Da和500,000Da。<表1>

最后使生產的形狀成為在下面(1)中描述的粉末或在(2)中描述的泡沫。
(1)將每種組分溶解在90mL水中，通過將該溶液浸入液氮中快速冷凍，之后在低于-55℃下冷凍干燥48小時以上。隨后生成了固體物質，將其研磨以制備用于抗粘連隔離物的粉末。
(2)將每種組分溶解在90mL水中，然后注入到合適形狀的模子中，接著將該溶液浸入液氮中快速冷凍，之后在低于-55℃下冷凍干燥48小時以上。隨后就生成了用于抗粘連隔離物的泡沫。自然地，它也能研磨成類似(1)的抗粘連隔離物的粉末。
根據(jù)實際情況，在以上(1)和(2)提及的方法中，滅菌步驟可在冷凍干燥溶液之前在120℃下進行10分鐘。<應用實施例1>體外實驗通過使用以上制備實施例生產的產品在實驗水平上研究抗粘連效果。準確地，進行了通過細胞生長防止擴散的實驗。
首先，按照表2所示，將通過上面制備實施例生產的抗粘連隔離物粉末溶解在適量水中以制備凝膠態(tài)。按照需要，添加作為抗生素的青霉素，使其達到0.2重量％。
<表2>

作為實驗細胞，平滑肌細胞和纖維原細胞被采用。這些細胞被注入5×105個并在聚苯乙烯盤子中培養(yǎng)，該盤子用于細胞培養(yǎng)，半徑為10cm，當細胞長到約0.5cm寬時，可以用小鑷子移去。隨后，給予它按照制備實施例制備的抗粘連隔離物。處理后的細胞繼續(xù)培養(yǎng)，在顯微鏡下可以間歇觀察細胞是否能夠穿透覆蓋層和增生擴散，并拍攝了圖片(

圖1)。圖1描述了當抗粘連隔離物給予后，隨著時間一天天延長出現(xiàn)的狀況，圖片上面區(qū)域是細胞層，下面區(qū)域是覆蓋層。
結果表明，直到培養(yǎng)5天后，所有實施例中動物細胞的擴散都被阻止。所有的實驗結果都非常相似，因而只有一組圖片附在圖1中，其顯示了應用實施例1-1的實驗結果。
正如圖1所闡明的，在觀察每一步時，細胞區(qū)域和凝膠應用區(qū)域用邊界線明顯分開，這表明細胞不能穿透凝膠應用區(qū)域。
因此，進一步確認了本發(fā)明的所有抗粘連隔離物在短期內具有抗粘連效果。毒性試驗實施例
(1)研究了以上應用實施例中生產的組合物，以看其對動物細胞是否具有毒性。根據(jù)ISO 10993-5的要求完成毒性實驗。通過使用MEM介質將L929細胞培養(yǎng)成單層，用胰蛋白酶處理后，檢測細胞濃度為1×10細胞/ml，然后再培養(yǎng)形成單層。隨后，分別加入4ml Gliatech公司生產的可商購的抗粘連隔離物adcon和應用實施例制備的組合物(見表3)，然后在37℃含有5％CO2的培養(yǎng)器中培養(yǎng)，肉汁培養(yǎng)24和48小時后估測細胞濃度。在標準組的毒性試驗實施例中，48小時后細胞濃度被定為100，相對于此值的相對細胞濃度顯示在表3中。
<表3>

如表3所示，本發(fā)明中各種抗粘連隔離物組合物沒有顯示出足以抑制動物細胞生長的高的毒性。另一方面，實驗證明目前可商購的抗粘連隔離物，即Gliatech公司生產的adcon對動物細胞具有相當大的毒性。
(2)作為本發(fā)明各種組合物的代表性實例，準確分析了相應于上述表2中的應用實施例1-1的組合物中的各種毒性水平。分析靠研究其穩(wěn)定性/功效完成，它是在韓國化工測試和研究所進行的。
結果如下表所示，確定指出本發(fā)明組合物在各種毒性試驗中的任何異常情況。
表4

與此同時，已知在應用實施例4～14中添加的物質(分別為白細胞介素-10，透明質酸鹽，肝素，鹽酸硝苯吡啶，磷脂酰膽堿，醋酸甲羥孕酮，L-精氨酸，一氧化氮，PVA，蛋白質抑制劑和葡聚糖)和人體具有相容性，而沒有各種水平的毒性。
因此，根據(jù)毒性試驗，本發(fā)明抗粘連隔離物的各種組合物盡管在人體使用但不會引起副作用。<應用實施例>體內實驗利用上面描述的應用實施例制備的組合物，在動物體內進行實驗，研究其對抗粘連效果的影響。
(1)利用表2中所示的應用實施例1-1，1-2和2制備的凝膠態(tài)抗粘連隔離物組合物，研究其抗粘連效果。為方便實驗，加入作為微生物抗生素的青霉素，其量為0.2重量％。
在年齡8～24周(重量220～450g，雄性)的小鼠背部割開，因此脂膜將通過引起肌肉中血管周圍的少量損傷流血。然后用凝膠態(tài)抗粘連隔離物去密封以使其回復到最初狀態(tài)。
在手術一個月后，胡亂打開以上提及的手術部位，然后進行研究，并將抗粘連和止血效果以圖片顯示在圖2中。該圖中，符號C，A1-1，A1-2和A2分別表示了使用標準組應用實施例、應用實施例1-1、應用實施例1-2和2制備的抗粘連隔離物凝膠的狀態(tài)。
如圖中的圖片所示，當應用含有NaCMC和吉蘭糖膠的本發(fā)明抗粘連隔離物時(A1-1，A1-2和A2)，第一次手術中的縫合部位沒有發(fā)現(xiàn)引起粘連，以及縫合手術后發(fā)炎或流血等癥狀也沒有發(fā)現(xiàn)。相反地，當采用大家熟知的常用抗粘連隔離物(只含有NaCMC，C)時，在第一次手術中的縫合部位引起粘連，并且在縫合手術后有流血或發(fā)炎等癥狀發(fā)生。
(2)在如下的表5中顯示了一些組合物，其抗粘連效果得到了研究。
年齡8周(SD鼠280～400g，雄性)的小鼠背部被胡亂割開，并將其脊椎周圍的肌肉割去一塊，其深約0.5cm，長為1cm。然后使用凝膠態(tài)抗粘連隔離物密封以讓其回復到最初狀態(tài)。
在手術8周后，胡亂打開以上提及的手術部位進行研究，測定粘連嚴重程度，并拍攝圖片(見圖3)。在關于脊椎的應用實施例1-1～14中，外觀幾乎類似，因此只附上代表性的圖片。在該圖中，C1，C2和SA 10分別從下列相應于脊椎標準組應用實施例2和脊椎應用實施例10的樣品中觀測得到。
粘連程度通過雙眼遮視法進行客觀評價。詳細地，進行裸眼觀察，通過決定粘連部位的韌性來測定灰色霍爾茨(holtz)等級。完成了五個等級的評價，沒有發(fā)現(xiàn)粘連效果的樣品被定義為0，拉伸強度大、粘連強烈的樣品被定義為4。表5顯示了10個樣品的平均灰色霍爾茨等級。
<表5>

*應用了20個樣品，其余采用10個樣品。
(1)通過使用說明書應用Gliatech公司生產和出售的抗粘連隔離物adcon。
如表5所示，當應用含有各種組成的本發(fā)明抗粘連隔離物時，很少看到組織之間的粘連。相反地，當使用熟知的傳統(tǒng)抗粘連隔離物時(脊椎標準組1的應用實施例1和脊椎標準組的應用實施例2)，發(fā)現(xiàn)有相當大比例的粘連。尤其是采用只含有NaCMC的傳統(tǒng)抗粘連隔離物(脊椎標準組的應用實施例1)時，組織間有嚴重的粘連。
如圖片所示，當使用含有NaCMC和吉蘭糖膠的本發(fā)明抗粘連隔離物(SA 10)時，第一次手術中的縫合部位沒有發(fā)現(xiàn)引起的粘連，以及縫合手術后也沒有發(fā)現(xiàn)發(fā)炎和流血等癥狀。相反地，當采用大家熟知的典型抗粘連隔離物(只含有NaCMC和adcon；圖中C1和C2)時，縫合部位會引起粘連，并有流血和發(fā)炎等癥狀發(fā)生。
因此，當只含有NaCMC時，該聚合物被人體吸收太快以致沒有足夠的抗粘連效果(Fertil.Steril.，1984，June，416，926-928；Fertil.Steril.，1984，June，416，929-932；Am.J.Obstet.Gynecol.，1986，1553，667-670)。此外，本發(fā)明中的抗粘連隔離物，其中吉蘭糖膠的添加是為了控制人體吸收NaCMC，可維持凝膠的形狀和潤滑以彌補典型的只含NaCMC時的缺點。
而且，本發(fā)明中抗粘連隔離組合物已經證明，比熟知的可商購的抗粘連隔離物adcon有更加明顯的抗粘連效果。
(3)另外，利用應用實施例1的組合物(即，含有NaCMC的抗粘連隔離物)和本發(fā)明中的一個組合物詳細研究了抗粘連效果。
年齡8周(SD鼠280～400g，雄性)的小鼠腹部被胡亂割開，在腹部皮膚和器官之間的血管有小量傷害并流血。然后應用標準組應用實施例1的組合物和應用實施例1-1的組合物密封以使其回復到最初狀態(tài)。每一組合物，樣品數(shù)量為3。
在手術2，4和8周后，打開以上提及的手術部位，然后研究粘連是否存在(見圖4)。圖4表明，1-1表示應用實施例1-1，標準組表示標準組應用實施例1。如附圖所示，當采用本發(fā)明中的抗粘連隔離物時，在8周后沒有觀察到腹部皮膚和器官之間發(fā)生粘連。相反地，當使用標準組應用實施例1的抗粘連隔離物(即，只含有NaCMC的抗粘連隔離物)時，2周后觀察到腹部皮膚和器官之間發(fā)生了非常強烈的粘連。
因此，添加到本發(fā)明組合物中的吉蘭糖膠對于組織間的粘連再次被驗證具有阻止效果，因為它能控制NaCMC被人體吸附，并且增加凝膠的潤滑能力。
(4)另外，利用傳統(tǒng)的可商購的抗粘連隔離物adcon(Gliatech公司生產的產品)和本發(fā)明中的一個組合物(應用實施例1-1中的組合物)詳細研究了抗粘連效果。
年齡8周(SD鼠280～400g，雄性)的小鼠腹部被胡亂割開，在脊椎周圍的肌肉中血管有小傷害并流血。然后參照使用說明書使用adcon，和應用實施例1-1的凝膠組合物去密封使其回復到最初狀態(tài)。在每一組合物中，樣品數(shù)量為2。
在手術4和8周后，再打開以上提及的手術部位，然后研究粘連程度和流血情況(見圖5)。在圖5中，1-1指應用實施例1-1，adcon指應用adcon時的情況。正如附圖所示，當使用本發(fā)明的抗粘連隔離物時，盡管在4周后也沒有觀察到腹部皮膚和器官之間發(fā)生粘連，在分開組織過程中也沒有流血發(fā)生。但，利用adcon時，結果證明在2周后皮膚組織和肌肉組織之間就有粘連發(fā)生，并且皮膚組織和肌肉組織之間的粘連變得更強，以致當其與組織分開時會引起流血。
因此，本發(fā)明的抗粘連隔離物組合物比傳統(tǒng)的可商購的抗粘連隔離物adcon有更加顯著的效果?？拐尺B隔離物在體內的降解實驗研究了本發(fā)明中抗粘連隔離物在人體應用時隨時間的降解和機理。
15只年齡8周(SD鼠280～400g，雄性)的小鼠腹部被胡亂割開，在腹部皮膚和脂膜之間開有半徑約5cm的傷處。然后讓脊椎周圍肌肉的血管有小傷害并流血。隨后，將10ml以上描述的腹部區(qū)域中采用的應用實施例1-1的組合物應用到打開的腹部皮膚和脂膜之間的間隔中，從而密封手術部分以使其回復到皮膚最初狀態(tài)。
在手術2，4和8周后，分別從5只老鼠中采集上述部位，根據(jù)動物組織的典型樣品方法處理和染色。隨后，在顯微鏡下采用80倍和200倍觀察并拍攝圖片(見圖6a和圖6b)。圖6a描述了應用兩周后的結果，圖6b為應用4周后的結果。圖6b中，F(xiàn)(+)表示纖維化現(xiàn)象被誘發(fā)時的外觀；F(-)表示纖維化現(xiàn)象被抑制時的外觀；D，表示抗粘連隔離物降解時的外觀。在該圖中，白色表示抗粘連隔離物；紅色表示抗粘連隔離物和分泌的血液結合的凝膠；黑點指纖維化和殘留部分，即身體組織。
如圖所示，盡管時間延遲2周和4周，在手術部位腹部皮膚的組織間沒有觀察到粘連發(fā)生。然后，手術4周后，相當多的抗粘連隔離物降解和吸收，但組織之間根本沒有引起粘連。如圖表示，手術6周后幾乎不再發(fā)現(xiàn)抗粘連隔離物。
詳細地，當應用本發(fā)明的組合物時，手術部位上的組織間沒有發(fā)生粘連，相反地，能進一步確認的是其能維持一段足夠時期以使手術部位回復到最初狀態(tài)，且能被降解和吸收。工業(yè)應用正如以上的闡述和確認，本發(fā)明中隔離物有顯著的抗粘連和止血效果，這是因為其主要成分羧甲基纖維素鈉(NaCMC)具有非凡的抗炎效果、抗菌特性、手術部位可再生效果、止血效果等等和顯著的人體安全適用性。此外，本發(fā)明中抗粘連隔離物是凝膠態(tài)，其含有能增強潤滑(流動)的吉蘭糖膠和抗生素，因而有高粘附性、透明性、流動性、應用性、親合性等等。
本領域中的技術人員將能夠理解，可容易地以前面說明書中公開的概念和具體實施方案為技術，去修飾和設計其它實施方案以完成本發(fā)明的同樣目的。
本領域中的技術人員也能理解，這些等同的實施方案不脫離如后附的權利要求所提出的本發(fā)明的精神和范圍。
權利要求
1.一種抗粘連隔離物，包括羧甲基纖維素鈉(NaCMC)，它具有使手術部位再生的功能、止血功能、人體相容性和安全性能；和吉蘭糖膠，其控制人體對所述羧甲基纖維素鈉的吸收，羧甲基纖維素鈉與吉蘭糖膠的的重量比為1∶(0.2～5)。
2.根據(jù)權利要求1的抗粘連隔離物，其中羧甲基纖維素鈉和吉蘭糖膠的重量比為1∶(0.8～1.25)。
3.根據(jù)權利要求1或權利要求2的抗粘連隔離物，其中相對于所述的羧甲基纖維素鈉以1∶(0.2～5)的重量比還含有一種或多于兩種的物質，所述物質選自白細胞介素-10，透明質酸鹽，肝素，鹽酸硝苯吡啶，磷脂酰膽堿，醋酸甲羥孕酮，L-精氨酸，一氧化氮，聚乙烯醇(PVA)，蛋白質抑制劑和葡聚糖。
4.根據(jù)權利要求1或權利要求2的抗粘連隔離物，其中相對于羧甲基纖維素鈉以1∶(0.02～0.06)的重量比還含有抗生素。
5.根據(jù)權利要求1或權利要求2的抗粘連隔離物，其中所述的抗粘連隔離物為泡沫態(tài)、粉末態(tài)或凝膠態(tài)。
6.根據(jù)權利要求5的抗粘連隔離物，其中所述的泡沫態(tài)抗粘連隔離物是通過包括下列步驟的方法制備的(1)將含有組分和適量水的混合溶液注入到具有合適形狀和大小的容器中；(2)通過浸入到液氮中快速冷凍；和(3)在-55℃、減壓下冷凍干燥48小時以上。
7.根據(jù)權利要求6的抗粘連隔離物，其中在快速冷凍所述混合溶液之前增加一個步驟，該步驟是在120℃～150℃下高壓滅菌5～20分鐘。
8.根據(jù)權利要求5的抗粘連隔離物，其中所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物是通過研磨權利要求6所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物至粒徑達到0.2～0.6毫米來制備的。
9.根據(jù)權利要求5的抗粘連隔離物，其中所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物是通過研磨權利要求7所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物至粒徑達到0.2～0.6毫米來制備的。
10.根據(jù)權利要求5的抗粘連隔離物，其中所述的凝膠態(tài)抗粘連隔離物是通過包括下列步驟的方法制備的(1)添加1重量份權利要求8中所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物于4-19重量份的蒸餾水中；(2)攪拌。
11.根據(jù)權利要求5的抗粘連隔離物，其中所述的凝膠態(tài)抗粘連隔離物是通過包括下列步驟的方法制備的(1)添加1重量份權利要求9中所述的粉末態(tài)抗粘連隔離物于4-19重量份的蒸餾水中；(2)攪拌。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗粘連隔離物，其能防止手術部位組織間的粘連且具有各種形狀，它包括重量比為1∶(0.1～10)的羧甲基纖維素鈉(NaCMC)和吉蘭糖膠。本發(fā)明中抗粘連隔離物比傳統(tǒng)的抗粘連隔離物能防止手術部位的粘連，或在自身移植和完全密封后能更有效地防止流血部位和組織間的粘連，比傳統(tǒng)的抗粘連隔離物更有效，并且其具有顯著的止血作用、抗炎粘附性和實用效果。
文檔編號A61K38/46GK1429559SQ02158809
公開日2003年7月16日 申請日期2002年12月25日 優(yōu)先權日2001年12月26日
發(fā)明者金大植, 金度勛, 李廷權 申請人:阿米帶有限公司