專利名稱：治療炎性疾病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將磷酸二酯酶4抑制劑與前列腺素合成抑制劑例如NSAIDs共同給藥預(yù)防或治療炎性疾病的組合物和方法。
背景技術(shù)：
由于多種介質(zhì)可能都對(duì)肺病的發(fā)展起作用，所以使得鑒別新的肺病治療劑比較困難。這樣，似乎不可能消除單一介質(zhì)可能對(duì)所有三種慢性氣喘的組分具有實(shí)際作用的影響?！敖橘|(zhì)途徑”的另外一種方法是調(diào)節(jié)決定該疾病病理生理的細(xì)胞活性。
這種方法之一是提高cAMP(3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸)的含量。環(huán)狀A(yù)MP已經(jīng)被證實(shí)是調(diào)節(jié)各種激素、神經(jīng)傳遞質(zhì)和藥物生物反應(yīng)的第二信使；[Krebs，第4屆內(nèi)分泌學(xué)進(jìn)展國(guó)際大會(huì)醫(yī)學(xué)摘錄，17-29，1973]。當(dāng)適當(dāng)?shù)募?dòng)劑結(jié)合到特殊的細(xì)胞表面受體上時(shí)，腺苷酸環(huán)化酶就被激活，它會(huì)將Mg+2-ATP加速轉(zhuǎn)化為cAMP。環(huán)狀A(yù)MP能夠調(diào)節(jié)大多數(shù)，但不是全部的對(duì)外源性(過(guò)敏)氣喘的生理病理起作用的細(xì)胞活性。這樣，cAMP的升高將產(chǎn)生有益的作用，包括1)氣道平滑肌松弛，2)抑制肥大細(xì)胞介質(zhì)的釋放，3)抑制中性白細(xì)胞的變性，4)抑制嗜堿性白細(xì)胞的變性和5)抑制單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的激活。所以，激活腺苷酸環(huán)化酶或抑制磷酸二酯酶的化合物應(yīng)當(dāng)會(huì)有效抑制氣道平滑肌不正常的激活和各種炎性細(xì)胞。cAMP失活的主要細(xì)胞機(jī)理是3’-磷酸二酯鍵被一族或多族稱作是環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDEs)的同工酶水解。
已經(jīng)表明獨(dú)特的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)同工酶PDE IV決定了氣道平滑肌和炎性細(xì)胞中的cAMP的破壞。[Torphy，“磷酸二酯酶同工酶新抗氣喘劑的潛在目標(biāo)”，氣喘新藥，Barnes編輯，IBC技術(shù)服務(wù)有限公司，1989]。研究顯示抑制這種酶不僅會(huì)產(chǎn)生氣道平滑肌的松弛，而且還會(huì)阻礙肥大細(xì)胞的變性嗜堿粒細(xì)胞和中性白細(xì)胞，并抑制單核細(xì)胞和中性白細(xì)胞的活化。并且，正如在體內(nèi)的情況那樣，當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞的腺苷酸環(huán)化酶的活性被適當(dāng)激素或自體有效物質(zhì)升高時(shí)，PDE IV抑制劑的有益作用更加顯著。這樣，PDE IV抑制劑在肺中是有效的，其中可以升高前列腺素E2和前列環(huán)素(腺苷酸環(huán)化酶的激活劑)。這類化合物提供一條藥物治療支氣管氣喘的獨(dú)特途徑并具有比目前市場(chǎng)上的藥劑有顯著好的治療優(yōu)點(diǎn)。
另外，根據(jù)許多肺病的病因包括多種介質(zhì)的事實(shí)，應(yīng)當(dāng)使用結(jié)合治療方法。在本發(fā)明中存在PDE 4抑制劑和非甾族抗炎劑的組合治療與前列環(huán)素合成有關(guān)的炎性成分有聯(lián)系的PDE4-選擇性抑制劑可治療的炎性疾病或癥狀。
發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物炎性疾病的方法，包括向需要治療的患者給藥有效量的PDE 4-特異性抑制劑和有效量的非甾族抗炎劑，其中藥物是共同或分開(kāi)并相繼給藥，其中相繼給藥時(shí)間相近或較遠(yuǎn)。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明所涉及的組合療法包括給藥PDE4抑制劑與非甾族抗炎劑來(lái)治療炎性疾病。化合物可以單一劑型一起給藥?；蛘咚鼈円詢煞N不同劑型給藥。為了詳細(xì)說(shuō)明，兩種藥物可以分別作為口服劑型，或者一種藥物是用口服制劑或栓劑或通過(guò)注射或靜脈滴注提供。它們可以同時(shí)給藥?；蛘咚鼈?cè)谳^近的時(shí)間或較遠(yuǎn)的時(shí)間給藥，這樣一種藥物在早晨給藥而第二種藥物在晚上給藥。
用于本發(fā)明的PDE4-特異性抑制劑可以是任何已知抑制PDE4酶的或已經(jīng)發(fā)現(xiàn)起PDE4抑制劑作用的化合物和只是PDE4抑制劑而不抑制其他PDE族成員和PDE4的化合物。一般優(yōu)選使用IC50比為約0.1或更大的PDE4拮抗劑，其中IC50比是以高親合性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的PDE IV催化形式的IC50除以以低親合性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮形式的IC50。
象茶堿和己酮可可堿的PDE抑制劑無(wú)差別地抑制全部或大多數(shù)所有組織中的PDE同工酶。這些化合物具有副作用，明顯因?yàn)樗鼈兎沁x擇性地抑制所有組織中的全部PDE同工酶類。目標(biāo)疾病可以被這類化合物有效治療，但是可能具有不希望的副作用，如果將這些副作用避免或降到最小，就會(huì)增加這種治療某些疾病方法的總體治療作用。例如，用已經(jīng)開(kāi)發(fā)為抗抑郁藥的選擇性PDE4抑制劑環(huán)戊苯吡酮的臨床研究表明它有親精神的活性并產(chǎn)生胃腸影響，例如胃灼熱、惡心和嘔吐。
對(duì)于本發(fā)明的目的來(lái)說(shuō)，將以低親合性結(jié)合R和S的環(huán)戊苯吡酮的cAMP催化部位命名為“低親合性”結(jié)合部位(LPDE4)并將以高親合性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的這種其他形式催化部位命名為“高親合性”結(jié)合部位(HPDE4)。這個(gè)術(shù)語(yǔ)“HPDE4”不要和用于表示人的PDE4的術(shù)語(yǔ)“hPDE4”混淆。
進(jìn)行初始試驗(yàn)來(lái)建立和證實(shí)[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合測(cè)定。下面實(shí)施例1中將給出這些工作的細(xì)節(jié)。
為了測(cè)定出存在于相同基因產(chǎn)物上的高親合結(jié)合活性和低親合結(jié)合活性，用已知方法轉(zhuǎn)化酵母并接著在6小時(shí)發(fā)酵期進(jìn)行重組PDE4的表達(dá)。用針對(duì)抗PDE4抗體的蛋白質(zhì)印跡分析法表明所表達(dá)的PDE4的量隨時(shí)間而增加，生長(zhǎng)3小時(shí)后達(dá)到最大值。另外，90％以上的免疫反應(yīng)產(chǎn)物存在于酵母溶胞產(chǎn)物的高速(100,000×g)的上清液中。隨著蛋白質(zhì)的表達(dá)監(jiān)控[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合和PDE活性。用環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合活性共同表達(dá)PDE4活性，表明兩種功能存在于同一基因產(chǎn)物上。用蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果相似，85％以上的環(huán)戊苯吡酮-可抑制的PDE活性和[3H]R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合活性都發(fā)現(xiàn)存在于酵母上清液部分。
總之，在該系統(tǒng)中所表達(dá)的大多數(shù)重組體PDE4以LPDE4形式存在并且只有少部分以HPDE4形式存在。所以，重組體PDE4催化活性的抑制主要反映出化合物在LPDE4的作用。這樣，PDE4催化活性的抑制能夠用作化合物在LPDE4功效的指標(biāo)?；衔镌贖PDE4的功效能夠通過(guò)檢測(cè)它們與[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的競(jìng)爭(zhēng)能力來(lái)評(píng)價(jià)。為了開(kāi)發(fā)低親合性和高親合性的環(huán)戊苯吡酮結(jié)合部位的SARs，所選化合物的功效可以用兩種測(cè)定系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。使用標(biāo)準(zhǔn)化合物的試驗(yàn)結(jié)果列表表示。正如所預(yù)期的，某些化合物在與[3H]R-環(huán)戊苯吡酮在證實(shí)有高親合性的結(jié)合部位比環(huán)戊苯吡酮是低親合性結(jié)合劑的其他部位的競(jìng)爭(zhēng)有明顯更強(qiáng)的功效。在高親合性結(jié)合和低親合性結(jié)合之間的SAR關(guān)系較差，結(jié)論是高親合性[3H]R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合抑制的SAR不同于低親合性環(huán)戊苯吡酮結(jié)合部位結(jié)合的SAR。
現(xiàn)在已知在可與抑制劑相互作用的人單核細(xì)胞重組體PDE4(hPDE4)上有至少兩種結(jié)合形式。對(duì)這些觀察的一種解釋是hPDE4存在兩種不同形式。一種能夠高親合性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮和denbufylline類似物而另外一種能夠低親合性地結(jié)合這些化合物。用于本發(fā)明的優(yōu)選的PDE4抑制劑是那些具有有益治療比的化合物，即，優(yōu)選抑制cAMP催化活性的化合物，其中該酶是低親合性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的形式，由此降低明顯與抑制可高親合性結(jié)合環(huán)戊苯吡酮形式有關(guān)的副作用。另外一種描述方法是優(yōu)選的化合物具有大約0.1或更高的IC50比，其是高親合性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的PDE催化形式的IC50除以可低親合性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的IC50。
這種標(biāo)準(zhǔn)更明確的表達(dá)是其中PDE4抑制劑具有大約0.1或更大的IC50比；該比率是可高親合性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的PDE4形式競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合1nM的[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的IC50值與使用1mM[3H]-cAMP作底物抑制低親合性地結(jié)合環(huán)戊苯吡酮的形式的PDE IV催化活性的IC50值的比。該試驗(yàn)進(jìn)一步的綜述可以在同時(shí)待審的美國(guó)專利5,998,428的說(shuō)明書(shū)中找到，在此，將其全文的內(nèi)容引用作為參考對(duì)實(shí)施本發(fā)明是必要的。
最優(yōu)選的是那些具有大于0.5的IC50比的PDE4抑制劑，特別是那些具有1.0以上比值的化合物。優(yōu)選的化合物是順式-4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸(Ariflo)。另外，下列PDE4抑制劑可以用于本發(fā)明的實(shí)施中來(lái)自Astra的AWD-12-281(Hofgen，N.等，藥物化學(xué)的第15屆EFMC國(guó)際研討會(huì)(9月6-10日，Edinburgh)1998，摘要，第98頁(yè))；命名為NCS-613的9-芐基腺嘌呤衍生物(INSERM)；來(lái)自Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；命名為CI-1018的苯并二吖庚因PDE4抑制劑(PD-168787；Parke-Davis/Warner-Lambert)；Kyowa Hakko在WO 9916766中所公開(kāi)的苯并間二氧雜環(huán)戊烯衍生物；來(lái)自Napp的V-11294A(Landells，L.J.等，Eur Resp J[Annu Cong Eur Resp Soc(9月19-23日，日內(nèi)瓦)1998)1998，12(增刊，28)摘要，第2393頁(yè))；roflumilast(CAS參考號(hào)162401-32-3)和來(lái)自Byk-Gulden的pthalazinone(WO 9947505)；或者命名為T(mén)-440的化合物(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等，J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1)162)。
可用于本發(fā)明的非甾族抗炎藥物(NSAIDs)是那些能夠抑制前列腺素合成的藥物。可以認(rèn)為NSAIDs通過(guò)抑制環(huán)加氧酶-1(COX-1)和環(huán)加氧酶-2(COX-2)起作用。許多藥物屬于這一類。例如，本發(fā)明可以使用下列一種或多種NSAIDs阿斯匹林、卡絡(luò)芬、膽堿水楊酸鹽、酮絡(luò)酚、水楊酸鎂、水楊酰胺、雙水楊酸酯、水楊酸鈉、硫代水楊酸鈉、甲氯滅酸鈉、羥基保泰松、保泰松、吲哚美辛、吡羅昔康、舒林酸、托美丁、甲苯酰吡酸鈉、甲滅酸、苯酰吡酸鈉、布洛芬、非諾洛芬、萘普生、萘普生鈉、雙氯酚酸、氟比洛芬、酮洛芬、酮絡(luò)酸、氨基丁三醇、celecoxib、二氟尼酸和萘丁美酮。所有這些藥物都可以從商業(yè)來(lái)源獲得或者它們?cè)卺t(yī)學(xué)和其他科學(xué)文獻(xiàn)中都有清楚的描述。
組合NSAIDs和PDE4-特異性抑制劑的止痛和抗炎作用可以使得這種組合尤其用于疼痛和/或炎癥疾病的癥狀緩解，這些疾病包括風(fēng)濕性疾病如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和脊椎關(guān)節(jié)病，也包括關(guān)節(jié)周圍的疾病和軟組織風(fēng)濕病。該組合也可以用于治療帶有炎癥的肺病。
可以考慮將兩種活性劑同時(shí)或在非常近的時(shí)間給藥。另外一種方法，一種藥物早晨給藥而后一種藥物白天給藥?；蛘吡硗庖环N方案，一種藥物每天給藥兩次，另外一種或者在每日兩次給藥中的一次的同時(shí)或者分開(kāi)給藥一次。優(yōu)選兩種藥物同時(shí)給藥。
口服給藥時(shí)具有活性的本發(fā)明化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽可以配制成糖漿、片劑、膠囊、控制釋放制劑或錠劑。糖漿劑一般由化合物或其鹽在液體載體例如乙醇、花生油、橄欖油、甘油或水以及矯味劑或著色劑中的懸浮液或溶液組成。當(dāng)組合物為片劑時(shí)，任何藥學(xué)上制備固體劑型的常用載體都可以使用。這些載體的實(shí)例包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石粉、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。當(dāng)組合物為膠囊時(shí)，任何常用的包囊都是適合的，例如在硬明膠膠囊殼中使用前面提到的載體。當(dāng)組合物為軟膠囊時(shí)，可以考慮使用任何制備分散液或懸浮液所常用的藥學(xué)載體，例如含水樹(shù)膠、纖維素、硅酸鹽或油類，并且可以將其摻入到軟明膠囊殼中。
一般的胃腸外組合物由化合物或其鹽在無(wú)菌水或非水載體中的溶液或懸浮液組成，其任選含有胃腸外可接受的油例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油。
一般吸入組合物是可以干粉給藥的溶液、懸浮液或乳濁液的形式，或者使用常規(guī)拋射劑如氟化烴如三氯氟甲烷的氣霧劑形式。
PDE4抑制劑的優(yōu)選組合物是如片劑或膠囊或控制釋放制劑的單位劑型。當(dāng)NSAIDs一般通過(guò)口腔給藥時(shí)，其中一些例如雙氯酚酸、酮洛芬、酮洛酸、吡羅昔康和替諾昔康可以通過(guò)肌肉內(nèi)注射給藥。酮洛酸和替諾昔康也可以通過(guò)靜脈注射給藥。
這些活性成分可以每日給藥1到6次，足以具有所需活性。優(yōu)選，這些活性成分每日給藥大約1到2次，更優(yōu)選每日兩次。
至于給藥量，可以認(rèn)為PDE4抑制劑可以每日每個(gè)成人1到200微克的量給藥。NSIADs按照批準(zhǔn)標(biāo)示給藥。
實(shí)施例1——磷酸二酯酶和環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合測(cè)定實(shí)施例1A對(duì)分離出的人單核細(xì)胞PDE4和hrPDE(人重組體PDE4)進(jìn)行測(cè)定主要存在的低親合形式。所以，使用1mM[3H]cAMP作底物的PDE4催化活性的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法能夠評(píng)價(jià)測(cè)試化合物抗低親合形式的PDE4的活性(Torphy等，J.Of Biol.Chem.，第267卷，第3期，第1798-1804頁(yè)，1992)。
用鼠腦高速離心上清液作蛋白源并且將兩種[3H]-環(huán)戊苯吡酮的同分異構(gòu)體制備成25.6Ci/mmol的特異活性。從公布的方法中改良標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件，使其與PDE測(cè)定條件相同，除了最后的cAMP50mM Tris HCl(pH7.5)，5mMMgCl2和1nM的[3H]-環(huán)戊苯吡酮(torphy等，J.Of Biol.Chem.，第267卷，第3期，第1798-1804頁(yè)，1992)。在30℃進(jìn)行1小時(shí)的測(cè)定。終止反應(yīng)并用Brandel細(xì)胞收獲器將結(jié)合的配體與游離配體分離。在與那些用來(lái)測(cè)定低親合性PDE活性的相同條件下測(cè)定高親合性結(jié)合部位的競(jìng)爭(zhēng)，除了[3H]-cAMP和5’AMP不存在。
實(shí)施例1B磷酸二酯酶活性的測(cè)定使用提供者(Amersham Life Science)所述的[3H]cAMP SPA或[3H]cGMP閃爍鄰近分析(SPA)酶測(cè)定法測(cè)定PDE活性。在室溫下96-孔平皿中的0.1ml反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行反應(yīng)，其中反應(yīng)緩沖液含有(最終濃度)50mM Tris-HCl，pH7.5，8.3mM MgCl2，1.7mM EGTA，[3H]cAMP或[3H]cGMP(大約2000dpm/pmol)，酶和各種濃度的抑制劑。使這些測(cè)定進(jìn)行1小時(shí)并在硫酸鋅存在下加入50μl的SPA硅酸釔珠終止反應(yīng)。振蕩平皿并在室溫放置20分鐘。用閃爍光譜測(cè)定法測(cè)定放射性標(biāo)記的產(chǎn)物形成。用0.05μM[3H]cAMP測(cè)定PDE3和PDE7的活性，而用1μM[3H]cAMP作底物測(cè)定PDE4。用1μM[3H]cGMP作底物測(cè)定PDE1B、PDE1C、PDE2和PDE5的活性。R-環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合測(cè)定用Schneider和同事的改良方法，參見(jiàn)Nicholson等，Trends Pharmacol.Sci.，第12卷第19-27頁(yè)(1991)和McHale等，Mol.Pharmacol.，第39卷，第109-113頁(yè)(1991)，進(jìn)行[3H]R-環(huán)戊苯吡酮的結(jié)合測(cè)定。R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合到PDE4的催化部位，參見(jiàn)Torphy等，Mol.Pharmacol.，第39卷第376-384頁(yè)(1991)。所以，對(duì)[3H]R-環(huán)戊苯吡酮結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)為未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)劑的PDE4抑制劑的功效提供了獨(dú)立的證據(jù)。該測(cè)定在30℃進(jìn)行了1小時(shí)，使用的0.5μl緩沖液含有(最終濃度)50mM Tris-HCl，pH7.5，5mM MgCl2，0.05％牛血清白蛋白，2nM[3H]R-環(huán)戊苯吡酮(5.7×104dpm/pmol)和各種濃度的非放射性標(biāo)記的抑制劑。該反應(yīng)是通過(guò)加入2.5ml的冰冷反應(yīng)緩沖液(不含[3H]R-環(huán)戊苯吡酮)停止的并且通過(guò)在0.3％聚乙烯亞胺浸泡過(guò)的WhatmanGF/B過(guò)濾器快速真空過(guò)濾(Brandel細(xì)胞收獲器)。用另外7.5ml的冰冷緩沖液沖洗過(guò)濾器，干燥并通過(guò)液體閃爍譜計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。
實(shí)施例2-控制釋放片的制備用表1中所列成分制備控制釋放劑。
表1
混合和壓制技術(shù)混合將賦型劑和藥物放于混合機(jī)中并混合。然后加入硬脂酸鎂并再混合3分鐘。在混合工藝中，將賦型劑和藥物混合，過(guò)篩，然后再混合。
壓制將每個(gè)混合物大約350mg壓制成片。使用10kp強(qiáng)度的目標(biāo)片。
將Opadry White懸浮于純水中并使用懸浮液包裹片劑；在包衣過(guò)程中除去水分并不形成部分最終產(chǎn)品。
實(shí)施例3-中度釋放片的制備用標(biāo)準(zhǔn)方法制備中度釋放片，它含有表2中所列成分。
表2中度釋放片
實(shí)施例4-關(guān)節(jié)炎的治療給診斷為關(guān)節(jié)炎并由于關(guān)節(jié)炎癥經(jīng)受疼痛的患者每日兩次給藥實(shí)施例2中所制備的含有30mg Ariflo的控制釋放片和500mg Relafen(萘丁美酮)片。持續(xù)治療直到炎癥減輕。
權(quán)利要求
1.一種治療炎性疾病的方法，包括向需要這種治療的患者以共同形式、分開(kāi)形式或分開(kāi)并相繼形式給藥有效量的PDE4抑制劑和非甾族抗炎藥(NSAID)，相繼給藥時(shí)間接近或較遠(yuǎn)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中PDE4抑制劑是順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸，NSAID選自于下列藥組成的組中阿斯匹林、卡絡(luò)芬、膽堿水楊酸鹽、酮絡(luò)酚、水楊酸鎂、水楊酰胺、雙水楊酸酯、水楊酸鈉、硫代水楊酸鈉、甲氯滅酸鈉、羥基保泰松、保泰松、吲哚美辛、吡羅昔康、舒林酸、托美丁、甲苯酰吡酸鈉、甲滅酸、苯酰吡酸鈉、布洛芬、非諾洛芬、萘普生、萘普生鈉、雙氯酚酸、氟比洛芬、酮洛芬、酮絡(luò)酸、氨基丁三醇、celecoxib、二氟尼酸和萘丁美酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及將磷酸二酯酶4抑制劑與前列腺素合成抑制劑例如NSAIDs共同使用治療炎性疾病。
文檔編號(hào)A61K31/275GK1398181SQ01804708
公開(kāi)日2003年2月19日 申請(qǐng)日期2001年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月8日
發(fā)明者伊麗莎白·T·基廷, 詹姆斯·M·卡納吉 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司