具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及茶飲料技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種具有抗氧化協(xié)同增效作用最佳配 比的桂花茶及其制法和用途-用于抗衰老、抗癌、降血糖。
【背景技術(shù)】
[0002] 桂花，又名木樨、巖桂，是中國傳統(tǒng)十大花卉之一，原產(chǎn)于中國西南喜馬拉雅山東 段?，F(xiàn)廣泛栽種于淮河流域及以南地區(qū)，其適合生長的區(qū)域北可抵黃河下游，南可至兩廣、 海南等地。桂花品種繁多，大約有152個品種，可分為四個品系，即四季桂、丹桂、銀桂、金 桂。桂花除了觀賞美化以外，還具有較高的營養(yǎng)和藥用價值。對于桂花的成分研究已經(jīng)具 備一定的基礎(chǔ)，其主要活性成分為黃酮類化合物、三萜類化合物、苯乙醇苷類化合物等。桂 花提取物具有抗氧化及清除自由基、抗炎、降血糖、降血脂及抑菌等生理作用。茶葉作為我 國重要經(jīng)濟作物，在中國已經(jīng)有3000余年的歷史，民間素有"不可一日無茶"之說，而對它 的成分研究也是比較成熟。茶葉中所含的生物活性成分主要有生物堿、茶多酚、多糖等，在 抗癌、抗衰老、降血脂等方面也有重要的作用。
[0003] 以桂花和茶葉做原料制作的桂花茶是中國特產(chǎn)茶，它香氣柔和、味道可口，為大眾 所喜愛。桂花茶是時下比較受歡迎的飲品，在我國的消費市場已具有一定的規(guī)模。它是兩 種單品的復(fù)合物，而它們各自所含的部分化學(xué)成分都有清除自由基的作用。然而，迄今為止 人們對桂花茶混合物中兩種單品相互作用的研究非常少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在 制備抗癌保健品或食品中的應(yīng)用。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶 在制備抗癌保健品或食品中的應(yīng)用，該桂花茶由桂花干：茶葉=3~5:1的質(zhì)量比混合而 得。
[0006] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的改進：桂花為四季桂、丹桂、金桂、銀桂。
[0007] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的進一步改進：茶葉為西湖龍井、祁門紅茶、安溪鐵觀音、普洱茶。
[0008] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的進一步改進：桂花干：茶葉=4:1的質(zhì)量比。
[0009] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的進一步改進，該桂花茶的制備方法包括以下步驟：
[0010](a)、利用凍干-真空微波聯(lián)合干燥技術(shù)制備桂花干：
[0011] 先進行真空冷凍干燥：將桂花在_55~-65°C(較佳為-60°C)的超低溫中速凍 2. 5~3. 5h(較佳為3h)后，于冷講溫度0°C、真空度IPa的條件下干燥，直至桂花中的水分 含量為35~45% (質(zhì)量％，例如為37%);
[0012] 然后將上述真空冷凍干燥處理后的桂花進行真空微波干燥，直至所得的桂花干中 的水分含量為9~11 % (質(zhì)量％ );
[0013] 該桂花干作為加工桂花茶的原料；
[0014] (b)、加工桂花茶：將桂花干和茶葉按相應(yīng)質(zhì)量比（即桂花干：茶葉=3~5:1，較 佳為4:1)拼和后，先于48~52°C (較佳為50°C )加溫窨制22~28min (較佳為25min)， 然后于8~12°C冷卻25~50分鐘（從而實現(xiàn)快速充分冷卻），最后置于密閉的環(huán)境中做 后續(xù)的吸香處理18~22天（較佳為20天）；得桂花茶。
[0015] 備注說明：上述吸香處理能讓茶葉更加充分吸收花香和實現(xiàn)更加牢固的吸附作 用，從而獲得作為成品的桂花茶。
[0016] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的進一步改進，所述步驟（a)中真空微波干燥為：真空度為0. 095MPa，微波功率 2ff/g〇
[0017] 作為本發(fā)明的具有最佳抗氧化協(xié)同增效作用的桂花茶在制備抗癌保健品或食品 中的應(yīng)用的進一步改進，所述步驟（b)中吸香處理時的密閉環(huán)境的溫度為25~35°C。
[0018] 在本發(fā)明中，茶葉均是通過市購的方式獲得，其含水量< 5%。
[0019] 本發(fā)明為選擇抗氧化協(xié)同最佳配比，曾采用等高線圖解分析法比較桂花茶的抗氧 化能力，以下為具體的實驗步驟：
[0020] 一、檢測桂花茶葉抗氧化能力的方法如下：
[0021](a)、清除ABTS自由基能力測定方法
[0022] 分別配置7. 4mMABTS以及2. 6mM過硫酸鉀水溶液，臨用前等體積混合，37°C避光 反應(yīng)12h，配成ABTS貯備液，稀釋45倍后使用，貯備液可保存一周，稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用。取稀釋 一定倍數(shù)的樣品6μL于96孔板，加入180μL稀釋過的ABTS儲備液，37°C避光反應(yīng)60min 后于734nm處測定吸光度，平行三組實驗測定。
[0023](b)、清除DPPH自由基能力測定方法
[0024] 實驗前精確稱取2mgDPPH溶于適量甲醇中，定容至10mL現(xiàn)配現(xiàn)用。取稀釋一定倍 數(shù)的所得6μL樣品，加入234uLDPPH，37°C避光反應(yīng)60min，于515nm波長處測吸光度，平行 三組實驗測定。
[0025] 二、運用等高線圖解分析法對其抗氧化協(xié)同增效作用進行評價，通常包括以下幾 個步驟：
[0026](a)、
[0027] 樣品提取：稱取桂花茶lg于燒杯中，加入45mL沸水后55°C水浴中放置30min，然 后使用紗布過濾，定容到50mL容量瓶中，得桂花提取液；長期保存需置于-20°C冰箱中。
[0028] 在實際中，桂花茶對人體的作用是在經(jīng)過唾液、胃液及腸液的消化吸收之后發(fā)揮 作用，故此，對桂花茶進行模擬消化實驗。根據(jù)人類攝食的特點，將體外消化模型分為三個 階段，分別為口腔消化階段、胃消化階段和腸消化階段，模擬消化液配制見表1。
[0029]表1模擬消化液組成
[0030]
[0031] 提取液的預(yù)處理（即進行模擬消化實驗）：
[0032] 配制完成后，取10mL桂花茶提取液與燒杯中，加入3mL唾液，37°C條件下水浴恒溫 5min，加入6mL胃液37°C條件下避光2h，加6mL腸液于其中搖勾，然后加入到透析袋中并將 其放入500mL大燒杯中，在其中加入約150mL0. 9%NaCl使消化液浸沒，繼續(xù)37°C條件避 光反應(yīng)2h。將透析液在47 °C下旋蒸，并用蒸餾水定容到10mL，分裝后存放在-20 °C冰箱中。 樣品預(yù)處理完成，即，得到桂花茶消化后樣品。
[0033] 備注說明：
[0034] 將上述"桂花茶"相應(yīng)的改成"茶"、"桂花"，如同上文進行樣品提取、提取液的預(yù)處 理（即進行模擬消化實驗），從而相應(yīng)獲得茶消化后樣品、桂花消化后樣品。
[0035] (b)、測定桂花茶在抗氧化實驗中的IC50值，構(gòu)建等高線圖，以桂花的IC50值為橫 坐標，以茶葉的IC50值為縱坐標，連接橫縱坐標的IC50值，構(gòu)成相加線及其95%置信區(qū)間， 各個提取物的IC50以及相連的95%的置信限可以通過各個提取物的對數(shù)劑量-效應(yīng)關(guān)系 線性回歸曲線得出（至少四個劑量）。
[0036] (c)、從理論上選取桂花茶葉的固定比例，固定比例的混合藥物的IC50,add值，可 通過下述公式計算：IC50,add=IC50,AAP1+RXP2)其中，R為兩物質(zhì)單獨應(yīng)用時的效價 比，P1為桂花在混合物中所占比例，P2為茶葉在混合物中所占比例。
[0037]⑷、確定固定桂花茶比例的混合物在實驗中實際得到的IC5Qnux值，1C5。_即由實 驗確定的固定比例的桂花茶獲得50%效應(yīng)時所需的總量，該值可以從桂花茶的劑量-效應(yīng) 曲線上求得。
[0038](e)、采用Studenttest等統(tǒng)計方法對各比例比較。
[0039] (f)、根據(jù)桂花茶的IC5。值位置判斷他們之間的相互作用。當(dāng)理論IC5(]add和各自 的實驗IC5(Mx沒有顯著性差異時，則表明桂花和茶葉相互作用的類型為相加；如果IC5ftM顯 著低于IC5Dadd(在相加線下方）時，則說明桂花和茶葉具有協(xié)同作用；如果IC5Qnux顯著高于 IC5(]add(在相加線上方）時，則說明桂花和茶葉具有拮抗作用。
[0040] 備注說明：圖2和圖3中，CI是指相互作用指數(shù)；
[0041]
[0042]式中，（IC5。，丄1X(IC5。，丄1：!分別為復(fù)合組中A，B兩種抗氧化劑的IC5。值，IC5Q,A，IC5Q,B 分別為AB兩種抗氧化劑單獨作用時的IC50值。
[0043] 本發(fā)明還利用UPLC方法分析了桂花茶（桂花：茶葉配比為3:1~5:1)的主要功 能性成分。
[0044] 具體操作如下：
[0045] (a)、以色譜級甲醇為溶劑，將L-茶氨酸（L-CAS)、沒食子酸（GA)、沒食子兒茶素 (GC)、紅景天苷（SAL)、表沒食子兒茶素（EGC)、兒茶素（C)、咖啡因（CAF)、咖啡酸（CAC)、 表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG)、沒食子兒茶素沒食子酸酯（G