專利名稱：革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法及專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種微生物的鑒定方法，本發(fā)明也涉及一種培養(yǎng)基。
在醫(yī)學(xué)臨床、衛(wèi)生防疫、科研細菌實驗等活動中，檢出革蘭氏陰性桿菌的頻度最大，要進行菌種鑒定，往往需要檢查許多生物學(xué)特征，這種工作的程序比較繁雜，要求工作人員必須有較豐富的細菌學(xué)分類鑒定理論知識和實踐經(jīng)驗，而且很難得到準(zhǔn)確的結(jié)果。隨著電子計算機技術(shù)的飛速發(fā)展，出現(xiàn)了借助生物信息編碼鑒定細菌的新方法。1994年以徐迪誠為主編的《革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定手冊》出版，并提出了相應(yīng)的革蘭氏陰性桿菌七位編碼鑒定方法及其培養(yǎng)基，使細菌實驗變的簡便易行，并且準(zhǔn)確性大為提高。但是七位編碼鑒定方法的應(yīng)用還是比較麻煩。
本發(fā)明的目的在于提供一種使用簡便，準(zhǔn)確率高的革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法及專用培養(yǎng)基。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的將未知的被測菌接種于培養(yǎng)基上，檢測尿素、IPA、硫化氫、氣體、乳糖、賴氨酸、鳥氨酸、動力、靛基質(zhì)、檸檬酸鹽、V-P、DNA十二項指標(biāo)，這十二項指標(biāo)按自左至右順序每三項分為一組，每一組中第一項賦予數(shù)值4、第二項賦予數(shù)值2、第三項賦予數(shù)值1，該未知被測菌在培養(yǎng)基上的那項指標(biāo)為陰(-)性，則該項指標(biāo)的數(shù)值為0，為陽(+)性，則該項指標(biāo)為所賦予的數(shù)值，將每組的三項指標(biāo)相加得一個數(shù)值，四個數(shù)字按順序排列組成一個四位編碼，從編碼工具書中找出相同的編碼得出未知被測菌的菌種。
本發(fā)明的鑒定方法的專用培養(yǎng)基包括I、II兩個系列，I系列由分裝的尿素、SIM(IPA)、克氏雙糖、賴氨酸、鳥氨酸、檸檬鹽酸、V-P、DNA八種培養(yǎng)基組成，II系列由O-F、氧化酶、檸檬鹽酸、麥芽糖、精氨酸、甘露醇、木糖、硝酸鹽、DNA、乙酰胺十種培養(yǎng)基組成。每種培養(yǎng)基的組成分別為尿素培養(yǎng)基的組成為蛋白胨1克、氯化鈉5克、磷酸二氫鉀2克、葡萄糖1克、瓊脂20克、尿素2克、0.6％酚紅溶液2毫升、蒸餾水1000毫升；SIM培養(yǎng)基的組成為肉膏3克、蛋白胨30克、次亞硫酸鈉0.05克、鹽酸胱氨酸0.2克、檸檬酸鐵銨0.5克、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升；克氏雙糖培養(yǎng)基的組成為肉膏4克、蛋白胨15克、乳糖10克、葡萄糖1克、氯化鈉5克、次亞硫酸鈉0.08克、亞硫酸鈉0.4克、硫酸亞鐵0.2克、酚紅0.02克、瓊脂10克、蒸餾水1000毫升；賴氨酸或鳥氨酸培養(yǎng)基的組成為蛋白胨5克、肉膏5克、葡萄糖0.5克、吡哆醛0.005克、蒸餾水1000毫升2％溴甲酚紫5毫升、2％酚紅2.5毫升及每100毫升標(biāo)基培養(yǎng)基內(nèi)加入L-賴氨酸或L-鳥氨酸；檸檬酸鹽培養(yǎng)基的組成為磷酸氫二鉀1克、磷酸二氫鉀1克、檸檬酸鈉2克、硫酸鎂0.2克、氯化鈉5克、蒸餾水1000毫升、澳麝香草酚蘭0.024克；V-P培養(yǎng)基的組成為酵母膏1克、胰胨7克、大豆蛋白胨5克、葡萄糖10克、氯化鈉5克、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升DNA培養(yǎng)基的組成為酪胨15克、大豆胨5克、氯化鈉5克、DNA2克、甲苯胺蘭0.1克、瓊脂15克、蒸餾水1000毫升；O-F培養(yǎng)基的組成為蛋白胨2.7克、葡萄糖10克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、1％澳麝香草酚蘭3毫升、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升；每100張氧化酶紙條的組成為二氯四甲基對苯撐二胺或鹽酸二甲基對苯撐二胺20毫克、抗壞血酸2毫克；糖培養(yǎng)基因加入的糖的種類不同，包括麥芽糖、甘露醇、木糖培養(yǎng)基，其基礎(chǔ)成份為蛋白胨2克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、瓊脂3克、1％澳麝香草酚蘭3毫升、蒸餾水1000毫升按1％的糖類加入基礎(chǔ)培養(yǎng)內(nèi)，精氨酸培養(yǎng)基的組成為蛋白胨1克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、瓊脂6克、酚紅0.01克、L精氨酸10克、蒸餾水1000毫升；硝酸鹽培養(yǎng)基的組成為蛋白胨水培養(yǎng)基1000毫升、硝酸鉀1克；乙酰胺培養(yǎng)基的組成為酵母膏0.5克、葡萄糖0.2克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀1克、乙酰胺3克、酚紅0.03克、瓊脂15克、蒸餾水1000毫升。將各種培養(yǎng)基分別封裝于安瓶中。
以上所列即構(gòu)成了本發(fā)明的最佳實施方案。
本發(fā)明通過專用培養(yǎng)基測定未知菌的特性，組成一個四位編碼，與相配套的四位編碼鑒定手冊相配合使用，使得革蘭氏陰性桿菌的鑒定更簡便，更快捷，更準(zhǔn)確，普通實驗人員即可進行操作。而且其適用范圍廣泛。本發(fā)明的培養(yǎng)基的品種少，成本低，準(zhǔn)確率高。
將I、II系列培養(yǎng)基編成阿拉佰數(shù)字，根據(jù)未知菌在培養(yǎng)基上的反應(yīng)，判定為陰性或陽性(+、-)，陰性為“0”、陽性為有效數(shù)字，使其每組數(shù)字相加和，就為未知菌的數(shù)字編碼。這數(shù)字再與工具書查找就得出未知菌的名稱。
數(shù)字編碼工具書、包括革蘭氏陰性桿菌、(有發(fā)酵葡萄糖和不發(fā)酵葡萄糖菌)及其類似菌，近89株利用電子計算機求出每種菌的不同性狀，不同組合可能性、符于數(shù)字編碼代號。
例如根據(jù)O-F試驗結(jié)果被確定為腸桿菌科及其類似菌，如果O-F為陽性，使用I系列培養(yǎng)基。
I組 II組 III組 IV組尿I硫 氣乳賴 鳥動靛 檸VDP化 氨 氨 基 檬IN素A氫 體糖酸 酸力質(zhì) 鹽PA(4)(2)(1)(4)(2)(1) (4)(2)(1) (4)(2)(1)- - - + + -+ + -+ + -06 6 6“0666”這四位數(shù)字，即代表分離菌株12個生化性狀結(jié)果。此時，查對編碼工具書，編碼工具書“0666”一欄得到以下答復(fù)陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌再做補充試驗，用精氨酸鑒定，如果是陽性定為陽溝腸桿菌，反之為產(chǎn)氣腸桿菌。
權(quán)利要求
1.一種革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法，其特征是將未知的被測菌接種于培養(yǎng)基上，檢測尿素、IPA、硫化氫、氣體、乳糖、賴氨酸、鳥氨酸、動力、靛基質(zhì)、檸檬酸鹽、V-P、DNA十二項指標(biāo)，這十二項指標(biāo)按自左至右順序每三項分為一組，每一組中第一項賦予數(shù)值4、第二項賦予數(shù)值2、第三項賦予數(shù)值1，該未知被測菌在培養(yǎng)基上的每項指標(biāo)為陰(-)性，則該項指標(biāo)的數(shù)值為0，為陽(+)性，則該項指標(biāo)為所賦予的數(shù)值，將每組的三項指標(biāo)相加得一個數(shù)值，四個數(shù)字按順序排列組成一個四位編碼，從編碼工具書中找出相同的編碼得出未知被測菌的菌種。
2.一種革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法及其專用培養(yǎng)基，其特征是它包括I、II兩個系列，I系列由分裝的尿素、SIM(IPA)、克氏雙糖、賴氨酸、尿氨酸、檸檬鹽酸、V-P、DNA八種培養(yǎng)基組成，II系列由O-F、氧化酶、檸檬鹽酸、麥芽糖、精氨酸、甘露醇、木糖、硝酸鹽、DNA、乙酰胺十種培養(yǎng)基組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法及其專用培養(yǎng)基，其特征是尿素培養(yǎng)基的組成為蛋白胨1克、氯化鈉5克、磷酸二氫鉀2克、葡萄糖1克、瓊脂20克、尿素2克、0.6％酚紅溶液2毫升、蒸餾水1000毫升。SIM培養(yǎng)基的組成為肉膏3克、蛋白胨30克、次亞硫酸鈉0.05克、鹽酸胱氨酸0.2克、檸檬酸鐵銨0.5克、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升。雙糖鐵培養(yǎng)基的組成為肉膏4克、蛋白胨15克、乳糖1克、氯化鈉5克、次亞硫酸鈉0.08克、亞硫酸鈉0.4克、硫酸亞鐵0.2克酚紅0.02克、瓊脂10克、蒸餾水1000毫升。賴氨酸或鳥氨酸培養(yǎng)基的組成為蛋白胨5克、肉膏5克、葡萄糖0.5克、吡哆醛0.005克、蒸餾水1000毫升。2％溴甲酚紫5毫升、2％酚紅2.5毫升及L-賴氨酸或L-鳥氨酸，檸檬酸鹽培養(yǎng)基的組成為磷酸氫二鉀1克、磷酸二氫鉀1克、檸檬酸鈉2克、硫酸鎂0.2克、氯化鈉5克、蒸餾水1000毫升、澳麝香草酚蘭0.024克，V-P培養(yǎng)基的組成為酵母膏1克、胰胨7克、大豆蛋白胨5克、葡萄糖10克、氯化鈉5克、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升。DNA培養(yǎng)年的組成為酪胨15克、大豆胨5克、氯化鈉5克、DNA2克、甲苯胺蘭0.1克、瓊脂15克、蒸餾水1000毫升，O-F培養(yǎng)基的組成為蛋白胨2.7克、葡萄糖10克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、1％澳麝香草酚蘭3毫升、瓊脂3克、蒸餾水1000毫升。每100張氧化酶紙條的組成為二氯四甲基對苯撐二胺或鹽酸二甲基對苯撐二胺20毫克、抗壞血酸2毫克。糖培養(yǎng)基因加入的糖的種類不同，包括麥芽糖、甘露醇、木糖培養(yǎng)基，其基礎(chǔ)成份為蛋白胨2克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、瓊脂3克、1％澳麝香草酚蘭3毫升、蒸餾水1000毫升按1％的糖類加入基礎(chǔ)培養(yǎng)內(nèi)。精氨酸培養(yǎng)基的組成為蛋白胨1克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀0.3克、瓊脂6克、酚紅0.01克、L精氨酸10克、蒸餾水1000毫升。硝酸鹽培養(yǎng)基的組成為蛋白胨水培養(yǎng)基1000毫升、硝酸鉀1克。乙酰胺培養(yǎng)基的組成為酵母膏0.5克、葡萄糖0.2克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀1克、乙酰胺3克、酚紅0.03克、瓊脂15克、蒸餾水1000毫升。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定方法及專用培養(yǎng)基。它采用專用培養(yǎng)基、檢測尿素、IPA、硫化氫、氣體、乳糖、賴氨酸、鳥氨酸、動力、靛基質(zhì)、檸檬酸鹽、V-P、DNA十二項指標(biāo)，編成四位數(shù)碼，在專用編碼手冊中找出相應(yīng)的菌種。其操作簡便，準(zhǔn)確率較高。
文檔編號C12N1/20GK1162646SQ9710131
公開日1997年10月22日 申請日期1997年1月10日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月10日
發(fā)明者徐鈞, 韓桂榮 申請人:徐鈞, 韓桂榮