專利名稱：雙歧桿菌微膠囊及其制造方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種含雙歧桿菌(Bifidobacteria)活菌的微膠囊及其制造方法。
國內(nèi)外雙歧桿菌的產(chǎn)品已達70余種，它們包括酸奶、酪乳、酸乳脂、奶粉、速凍點心、片劑和錠劑等。但雙歧桿菌活菌的保存期都很短，在液態(tài)制品中的更短，一般低溫(4-10℃)下保存3-5天活菌數(shù)即低于105個/ml，所以，如何延長液態(tài)制品中雙歧桿菌的活菌保存期是國內(nèi)外爭相解決的難點，采用微膠囊包埋的方法未見報導。
本發(fā)明的目的，就是采用微膠囊技術，將雙歧桿菌包裹在囊材中，與環(huán)境中的酸和氧隔離，微膠囊中加入和劑，中和雙歧桿菌在保藏期中所產(chǎn)生的酸，以達到在含雙歧桿菌產(chǎn)品尤其是液態(tài)產(chǎn)品中保持較高活菌數(shù)的目的。制備微膠囊所用材料對人體均無毒副作用。
本發(fā)明包括以下步驟微膠囊配方(100ml混合膠液中用量)囊材由食用海藻酸鈉和明膠組成，二者之比為1-3∶1(重量比)，二者(之和)加入量為2-5g;碳酸鈣(CaCO3)、山梨醇或甘油為輔材，其中碳酸鈣的加入量為0.2-0.5g，山梨醇或甘油的加入量為2-5g;雙歧桿菌(可在人體腸道定植的雙歧桿菌各個種)活菌1011-1013個，加入方式為加入用100-300ml菌體培養(yǎng)液分離制得的濕菌泥，約2-6g;蒸餾水83.5-93.3ml。氯化鈣(CaCl2)為固化劑，水溶液濃度0.1-0.3mol/l，用量為400-600ml。
微膠囊制備工藝1.雙歧桿菌的培養(yǎng)菌種在固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中經(jīng)2-3次轉(zhuǎn)接活化，然后接種在液體培養(yǎng)基中，37±1℃恒溫培養(yǎng)18-24小時，當活菌數(shù)達到108-1010個/ml時結(jié)束培養(yǎng)，冷卻，無菌條件下4000轉(zhuǎn)/分鐘(或高速離心)15-20分鐘，離心收集菌體，棄去上清液，加無菌生理鹽水懸浮，離心，洗滌菌體2次，得到濕菌泥，充入無菌氮氣保護，備用。
2.囊材溶液的配制及滅菌取欲配混合膠液總量80%的蒸餾水，加稱好的明膠粉，攪拌下加熱(80℃左右，下同)至完全溶解，然后在不斷攪拌下分批加入海藻酸鈉，繼續(xù)加熱攪拌至成為透明膠液，用夾層紗布加防潮紙包扎杯口，于8-15磅壓力下滅菌15-20分鐘，備用。
3.輔料和固化劑的配制及滅菌(純度均為分析純)CaCO3按每百毫升混合膠液含0.2-0.5g量稱取CaCO3粉末，用防潮紙包好。
山梨醇60g山梨醇加50ml蒸餾水溶解，然后定容至100ml，得60%水溶液。
甘油98%原液。
CaCl2用蒸餾水配成0.1-0.3mol/l溶液。
以上用前于8-15磅滅菌15-20分鐘，CaCO3紙包烘干，備用。
4.微膠囊制備按配方量在無菌囊材溶液中分別加入滅菌的CaCO3、山梨醇或甘油，在無菌氮氣保護下攪勻，然后加菌泥，補無菌蒸餾水至終體積，得混合膠液。充分攪勻后，用注射器吸取混合膠液，用5或6號針頭，噴入置于磁力攪拌器上并攪拌著的CaCl2溶液中(無菌氮氣保護)。噴完后，慢速攪拌下固化5-30分鐘，用無菌水洗滌3次，即得濕微膠囊。膠囊直徑為0.5-1mm，活菌數(shù)109-1011個/g。
微膠囊的優(yōu)點1.可以大大延長雙歧桿菌的活菌保存期，在液態(tài)制品中的保存效果最佳。如，用雙歧桿菌發(fā)酵的胡蘿卜汁，初始活菌數(shù)為109個/ml，4℃下保存7-10天，16-20℃下3-5天活菌數(shù)就<105個/ml，添加雙歧桿菌微膠囊后保存期則大大延長，保存期以活菌數(shù)>105個/ml為限，包埋長雙歧桿菌(B.longum)，其保存效果見表1
表1微膠囊中雙歧桿菌的保存效果表
2.加工設備要求低、工藝簡單、成本低。所有設備除造粒設備以外無特殊要求，全部加工過程均在常溫常壓下進行，每100g濕微膠囊的成本約2.80元(1995年2月計算)若按10%加入量加入250ml飲料中增加成本僅0.7元。
3.微膠囊直徑僅0.5-1mm，加入液態(tài)制品中無明顯的不良口感，相反若制成彩色膠囊懸浮于透明液態(tài)制品中，則可增進產(chǎn)品外觀及品種，增強產(chǎn)品競爭力。
該微膠囊也可加入酸乳、冰激凌、點心、糖果等食品中。
本發(fā)明有如下附圖圖1.雙歧桿菌微膠囊制備工藝流程圖


1.囊材溶液配制全過程(2)需加熱，溫度80℃左右，注意充分攪拌。
2.無菌囊材溶液加輔料、菌泥后要充分拌勻，并要無菌氮氣保護。
3.造粒過程(4)在磁力攪拌器上進行，無菌氮氣保護。
4.全部操作過程需在無菌條件下進行。
本發(fā)明的最佳實施例如下1.產(chǎn)品實施例用100ml混合膠液制備雙歧桿菌微膠囊。所用混合膠液中含有海藻酸鈉和明膠2-5g，海藻酸鈉明膠＝1-3∶1，碳酸鈣0.2-0.5g，甘油2-5g，長雙歧桿菌(B.longum)活菌1011-1013個。
用100ml混合膠液制備雙歧桿菌微膠囊。所用混合膠液中含有海藻酸鈉和明膠2-5g，海藻酸鈉明膠＝1-3∶1，碳酸鈣0.2-0.5g，甘油2-5g，長雙歧桿菌(B.longum)活菌1011-1013個。
2.工藝實施例設欲配混合膠液總體積為100ml。
a.濕菌泥制備菌種在固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中經(jīng)2-3次轉(zhuǎn)接活化，然后接種在100-300ml液體培養(yǎng)基中，37±1℃恒溫培養(yǎng)18-24小時，當活菌數(shù)達到108-1010個/ml時結(jié)束培養(yǎng)，冷卻，無菌條件下4000轉(zhuǎn)/分鐘(或高速)離心15-20分鐘，離心收集菌體，棄去上清液，加無菌生理鹽水懸浮，離心，洗滌菌體2次，得到濕菌泥，充入無菌氮氣保護，備用。
b.囊材溶液的配制及滅菌 稱取1-2g明膠加入80ml蒸餾水中，80℃下加熱溶解，攪拌下分批加入2-3g海藻酸鈉，攪拌并加熱至溶解，夾層紗布加防潮紙包扎杯口，8-15磅高壓滅菌15-20分鐘，備用。
c.輔料和固化劑的配制及滅菌 碳酸鈣粉末0.2-0.5g，用防潮紙包好;60g山梨醇用50ml蒸餾水溶解后加蒸餾水定容至100ml，(甘油為98%原液);用蒸餾水將氯化鈣配成0.1-0.3mol/l溶液，用量為400-600ml。以上于8-15磅下滅菌15-20分鐘，備用。
d.微膠囊的制備無菌囊材溶液中，通入無菌氮氣，加入滅菌的CaCO3、加60%山梨醇或98%甘油2-4ml，攪勻，然后加菌泥，補無菌蒸餾水至100ml，得混合膠液。充分攪勻后，用注射器吸取混合膠液，用5或6號針頭，噴入置于磁力攪拌器上并攪拌著的400-600mlCaCl2溶液中(無菌氮氣保護)。噴完后，慢速攪拌下固化5-30分鐘，用無菌水洗滌3次，即得濕微膠囊。膠囊直徑為0.5-1mm，活菌數(shù)109-1011個/g。制備全過程需無菌操作。
權利要求
1.一種雙歧桿菌微膠囊，其特征在于含有海藻酸鈉、明膠、碳酸鈣、山梨醇或甘油及雙歧桿菌(Bifidobacteria)活菌。
2.根據(jù)權利要求1所述的雙歧桿菌微膠囊，其特征在于制造微膠囊所用的混合膠液每百毫升中含有海藻酸鈉、明膠(二者之和)2-5g，海藻酸鈉與明膠之比為1-3∶1，碳酸鈣0.2-0.5g，山梨醇或甘油2-5g，雙歧桿菌活菌1011-1013個。
3.一種雙歧桿菌微膠囊的制備工藝，它包括雙歧桿菌菌種活化、液體培養(yǎng)、離心分離、洗滌、濕菌泥而制得含雙歧桿菌活菌的微膠囊，其特征在于a.囊材溶液的配比及配制囊材由食用海藻酸鈉和明膠按1-3∶1的比例配制，二者(之和)在每百毫升混合膠液中2-5g。按配方量稱取明膠粉，攪拌下加入欲配混合膠液總體積80%的蒸餾水中，加熱(80℃左右，下同)攪拌至完全溶解，然后攪拌下分批加入海藻酸鈉，繼續(xù)攪拌、加熱至成為透明膠液，于8-15磅壓力下滅菌15-20分鐘，備用。b.輔料和固化劑的配制及用量碳酸鈣粉末(每百毫升混合膠液，下同)的加入量為0.2-0.5g;用蒸餾水將山梨醇配成60%溶液，甘油為98%原液，山梨醇或甘油的加入量為2-5g;用蒸餾水將氯化鈣配成0.1-0.3mol/l溶液，用量為400-600ml。以上用前于8-15磅下滅菌15-20分鐘，備用。c.微膠囊制備滅菌囊材溶液中分別加入滅菌碳酸鈣、山梨醇溶液或甘油，無菌氮氣保護下攪勻后加入菌泥，補無菌蒸餾水至欲配混合膠液總體積，攪勻后，用注射器吸取混合膠液，用5或6號針頭，噴入置于磁力攪拌器上并攪拌著的氯化鈣溶液中(無菌氮氣保護)，噴完后，慢速攪拌固化5-30分鐘，傾出氯化鈣溶液，用無菌水洗膠囊3次即得產(chǎn)品。
全文摘要
一種用于食品、飼料領域延長有益活菌保存期的發(fā)明。本發(fā)明以兩種食用膠為囊材，輔以中和及強化增塑劑添加雙歧桿菌活菌體，噴入固化劑中制得雙歧桿菌微膠囊，膠囊直徑0.5—1mm，含活菌數(shù)＞10
文檔編號C12N11/00GK1113515SQ9510207
公開日1995年12月20日 申請日期1995年3月6日 優(yōu)先權日1995年3月6日
發(fā)明者張, 張蕾, 王占武, 朱彤霞, 鄭海濤, 牛天貴 申請人:北京農(nóng)業(yè)大學